Name: quantification of reactive oxygen species using 2&#8242;,7&#8242;-dichlorofluorescein diacetate probe and flow-cytometry in m&#252;ller glial cells
Uploaded: 2022-05-13T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Reactive Oxygen Species Using 2Ã¢â‚¬Â²,7Ã¢â‚¬Â²-Dichlorofluorescein Diacetate Probe and Flow-Cytometry in MÃƒÂ¼ller Glial Cells at JoVE.com

著者らは、CIBICI(アルゼンチン、コルドバ、コリセトバ)のマリア・ピラール・クレスポとポーラ・アレハンドラ・アバディに、フローサイトメトリーの支援に、ガブリエラ・フルランとノエリア・マルドナドの細胞培養支援に感謝したい。我々はまた、ビデオ制作と編集のためにビクター・ディアス(FCQの制度コミュニケーション担当長官)にも感謝する。
この記事は、Secretaría de Ciencia y Tecnología、Universidad Nacional de Córdoba (SECyT-UNC) Consolidar 2018-2021、Fondo para la Investigación Científica y Tecnológica (FONCyT)、Proyecto de Investigación en Ciencia y Tecnología (PICT) 2015 N° 1314 (すべてM.C.S.への資金提供を受けたものです。

メモ: バッファーの構成については、 表 1 を参照してください。
細胞培養製剤
注:ここで記載されているのは、自発的に不死化されたヒトミュラーグリア細胞株であるMIO-M1細胞の培養調製である(Moorfield's/Institute of Ophthalmology-Müller 1)。常に適切な無菌技術を使用し、層流フードで作業してください。
<ol><li>ダルベッコの改変...

<ol>
	<li>Hoon, M., Okawa, H., Della Santina, L., Wong, R. O. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+architecture+of+the+retina:+Development+and+disease.">Functional architecture of the retina: Development and disease.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 42, 44-84 (2014).</li><li>Cowan, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+types+of+the+human+retina+and+its+organoids+at+single-cell+resolution.">Cell types of the human retina and its organoids at single-cell resolution.</a> Cell. 182 (6), 1623-1640 (2020).</li><li>Subirada, P. 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J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nrf2+protects+photoreceptor+cells+from+photo-oxidative+stress+induced+by+blue+light.">Nrf2 protects photoreceptor cells from photo-oxidative stress induced by blue light.</a> Experiments in Eye Research. 154, 151-158 (2017).</li><li>Wei, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nrf2+in+ischemic+neurons+promotes+retinal+vascular+regeneration+through+regulation+of+semaphorin+6A.">Nrf2 in ischemic neurons promotes retinal vascular regeneration through regulation of semaphorin 6A.</a> Proceedings of the National Academy of Science of the United States of America. 112 (50), 6927-6936 (2015).</li><li>Wei, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nrf2+has+a+protective+role+against+neuronal+and+capillary+degeneration+in+retinal+ischemia-reperfusion+injury.">Nrf2 has a protective role against neuronal and capillary degeneration in retinal ischemia-reperfusion injury.</a> Free Radical Biology and Medicine. 51 (1), 216-224 (2011).</li><li>Wei, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nrf2+acts+cell-autonomously+in+endothelium+to+regulate+tip+cell+formation+and+vascular+branching.">Nrf2 acts cell-autonomously in endothelium to regulate tip cell formation and vascular branching.</a> Proceedings of the National Academy of Science of the United States of America. 110 (41), 3910-3918 (2013).</li><li>Wei, Y., Gong, J., Xu, Z., Duh, E. 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G., Tigno-Aranjuez, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+measurement+of+ROS+production+in+macrophages+in+response+to+Fc&#947;R+cross-linking.">Flow cytometric measurement of ROS production in macrophages in response to Fc&#947;R cross-linking.</a> Journal of Visualized Experiments. (145), e59167 (2019).</li><li>Wu, D., Yotnda, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+and+detection+of+reactive+oxygen+species+(ROS)+in+cancers.">Production and detection of reactive oxygen species (ROS) in cancers.</a> Journal of Visualized Experiments. (57), e3357 (2011).</li><li>Halliwell, B., Whiteman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+reactive+species+and+oxidative+damage+in+vivo+and+in+cell+culture:+how+should+you+do+it+and+what+do+the+results+mean.">Measuring reactive species and oxidative damage in vivo and in cell culture: how should you do it and what do the results mean.</a> British Journal of Pharmacology. 142 (2), 231-255 (2004).</li><li>Kalyanaraman, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+reactive+oxygen+and+nitrogen+species+with+fluorescent+probes:+challenges+and+limitations.">Measuring reactive oxygen and nitrogen species with fluorescent probes: challenges and limitations.</a> Free Radical Biology and Medicine. 52 (1), 1-6 (2012).</li><li>Fernandes, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+DHE-derived+oxidation+products+by+HPLC+in+the+assessment+of+superoxide+production+and+NADPH+oxidase+activity+in+vascular+systems.">Analysis of DHE-derived oxidation products by HPLC in the assessment of superoxide production and NADPH oxidase activity in vascular systems.</a> American Journal of Physiology and Cell Physiology. 292 (1), 413-422 (2007).</li><li>Zielonka, J., Kalyanaraman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydroethidine-+and+MitoSOX-derived+red+fluorescence+is+not+a+reliable+indicator+of+intracellular+superoxide+formation:+another+inconvenient+truth.">Hydroethidine- and MitoSOX-derived red fluorescence is not a reliable indicator of intracellular superoxide formation: another inconvenient truth.</a> Free Radical Biology and Medicine. 48 (8), 983-1001 (2010).</li><li>Roelofs, B. A., Ge, S. X., Studlack, P. E., Polster, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+micromolar+concentrations+of+the+superoxide+probe+MitoSOX+uncouple+neural+mitochondria+and+inhibit+complex+IV.">Low micromolar concentrations of the superoxide probe MitoSOX uncouple neural mitochondria and inhibit complex IV.</a> Free Radical Biology and Medicine. 86, 250-258 (2015).</li></ol>

癌、炎症性疾患、虚血/再灌流、虚血性心疾患、糖尿病、網膜症などのいくつかの病理学的状態、および老化などの生理学的状況は、ROSの過剰産生6、7、8、9、10、11につながる。したがって、ROSの変調に関与する経路の検出、測定、および理解は...

神経網膜は、明確に定義されたニューロン層を提示する非常に組織化された組織である。これらの中で、ニューロン(神経節、アマクリン、双極性、水平、および視細胞)は、互いに、またミュラーグリア細胞(MGC)およびアストロサイトと相互接続され、適切な光伝達および視覚情報の処理をもたらす1,2。MGCは、網膜部分全体にわたっており、したがって、複数の保護プロセスを調節するすべての細胞型と相互作用することができるため、網膜恒常性の維持に重要な役割を果たすことが知られている。MGCは、ニューロンにエネルギーを供給する解糖系、ニューロン老廃物の除去、神経伝達物質のリサイクル、神経栄養因子の放出など、網膜ニューロンの維持と生存のためにいくつかの重要な機能を有することが報告されている3,4,5。
一方、炎症、酸化ストレスおよびニトロソストレスは、網膜症6、7、8、9、10、11を含む多くのヒト疾患の病因および進行に関与している。細胞内の酸化還元バランスは、ROSレベルの厳密な調節に依存する。ROSは、主に好気呼吸の結果として生理学的条件下で絶えず生成される。ROSファミリーの主要メンバーには、スーパーオキシドアニオン(O2͘͘͘•−)、ヒドロキシルラジカル(•OH)、様々な過酸化物(ROOR')、ヒドロペルオキシド(ROOH)、および無ラジカル過酸化水素(H2O2)12,13などの反応性フリーラジカルが含まれる。ここ数年で、ROSが重要なプロセスを制御することによって細胞内で重要なシグナル伝達役割を果たすことが明らかになりました。MGCは、転写核因子エリスロイド-2関連因子2(Nrf2)の活性化およびその後の抗酸化タンパク質の発現によって強力な抗酸化防御を有し、病理学的条件下でのROSの過剰産生を排除する14、15、16。ROSの誇張された産生またはROSを除去する能力の欠陥のために細胞が酸化還元バランスを失うと、酸化ストレスの蓄積はタンパク質、脂質、およびDNAの有害な修飾を促進し、細胞ストレスまたは死に至る。網膜抗酸化防御系の増加は、ROPおよびRD17、18、19、20、21、22、23、24などの網膜障害の分解能および予防を改善する。したがって、リアルタイムでのROS生産の測定は強力で便利なツールです。
細胞内のROS産生または酸化ストレスを測定するためのいくつかの方法がある。これらの中でも、2',7'-ジクロロフルオレセインジアセテート(DCFH-DA)プローブは、細胞25、26、27、28の酸化還元状態を直接定量するために最も広く使用されている技術の1つである。このプローブは親油性であり、非蛍光性である。細胞膜を横切るこのプローブの拡散は、2つのエステル結合における細胞内エステラーゼによる切断を可能にし、比較的極性が高く細胞膜不透過性の生成物である2',7'-ジクロロフルオレセイン(H2DCF)を生成する。この非蛍光分子は細胞内に蓄積し、その後のROSによる酸化は高蛍光生成物DCFを生成する。プローブの酸化は、フローサイトメトリーまたは共焦点顕微鏡(530nmでの発光および485nmでの励起)によって検出することができる複数のタイプのROS(ペルオキシ亜硝酸塩、ヒドロキシルラジカル、一酸化窒素、または過酸化物)の作用の産物である。この技術の限界は、スーパーオキシドおよび過酸化水素がH2DCF25,29と強く反応しないことである。この記事では、DCFH-DAプローブを使用して、フローサイトメトリーによってROSを測定および定量します。そのため、蛍光プローブを細胞に負荷する前に、MGCをROS誘導剤AまたはBで刺激することにより、ROS産生を誘導します。また、酸化防止剤化合物を使用しています。最後に、このプロトコルを使用して得られた代表的で信頼性の高いデータを示します。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2&#8242;,7&#8242;-DCFH-DA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>35845-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid (HEPES)</td>
			<td>Gibco by life technologies</td>
			<td>15630-080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSCanto II flow cytometer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>FACSCanto</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSDiva software</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Dishes 100x20 mm</td>
			<td>Cell Star- Greiner Bio-One</td>
			<td>664 160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>Sorvall legend micro 17 R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge Tubes (15 ml)</td>
			<td>BIOFIL</td>
			<td>CFT011150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge Tubes (50 ml)</td>
			<td>BIOFIL</td>
			<td>CFT011500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryovial</td>
			<td>CRYO.S - Greiner Bio-One</td>
			<td>126263</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl Sulfoxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>W387520-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disodium-hydrogen-phosphate heptahydrate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>106575</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM without phenol red</td>
			<td>Gibco by life technologies</td>
			<td>31053-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s modified Eagle&#8217;s medium (DMEM)</td>
			<td>Gibco by life technologies</td>
			<td>11995065</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediamine Tetraacetic Acid (EDTA), Disodium Salt, Dihydrate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>324503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Internegocios</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlowJo v10 Software</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Merck</td>
			<td>108337</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hemocytometer, Neubauer chamber</td>
			<td>BOECO,Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar flow hood</td>
			<td>ESCO</td>
			<td>AC2-6E8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine (GlutaMAX)</td>
			<td>Gibco by life technologies</td>
			<td>A12860-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MitoSOX Red</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>&#160;M36008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Gibco by life technologies</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>Merck</td>
			<td>104936</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium-dihydrogen phosphate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>4878</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round polystyrene tubes 5 ml (flow cytometry tubes)</td>
			<td>Falcon - Corning</td>
			<td>BD-352008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Azide</td>
			<td>Merck</td>
			<td>822335</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Merck</td>
			<td>106404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydroxide</td>
			<td>Merck</td>
			<td>106462</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPINWIN Micro Centrifuge Tube 1.5 ml</td>
			<td>Tarson</td>
			<td>500010-N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Culture Plate 6 well</td>
			<td>BIOFIL</td>
			<td>TCP011006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue</td>
			<td>Merck</td>
			<td>111732</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA 0.5% 10X</td>
			<td>Gibco by life technologies</td>
			<td>15400-054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex Mixer</td>
			<td>Labnet International, Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantification of reactive oxygen species using 2&#8242;,7&#8242;-dichlorofluorescein diacetate probe and flow-cytometry in m&#252;ller glial cells

酸化還元バランスは、細胞の恒常性を維持する上で重要な役割を果たしている。活性酸素種(ROS)の生成の増加は、タンパク質、脂質、およびDNAの修飾を促進し、最終的に細胞機能の変化および細胞死につながる可能性がある。したがって、Keap1 / Nrf2のような抗酸化経路を活性化するか、酸化還元捕捉剤(ビタミンA、C、およびE、β-カロチン、およびポリフェノールなど)を改善することによって、有害な侮辱に応答して抗酸化防御を高めることは細胞にとって有益である。炎症および酸化ストレスは、糖尿病性網膜症(DR)および未熟児網膜症(ROP)などの網膜症の病因および進行に関与している。ミュラーグリア細胞(MGC)は神経網膜組織の恒常性維持において重要な役割を果たしているため、これらの細胞保護機構を研究するための理想的なモデルと考えられています。この意味で、再現性のある簡単な方法でROSレベルを定量することは、抗酸化細胞防御機構に関与する経路または分子の寄与を評価するために不可欠である。この記事では、DCFH-DAプローブによるROSの測定とMGCのフローサイトメトリーに必要な手順について詳しく説明します。ソフトウェアによるフローサイトメトリーデータ処理の主要な手順がここに提供されるため、読者はROSレベル(FITCの幾何学的手段)を測定し、蛍光ヒストグラムを分析できます。これらのツールは、細胞侮辱後のROSの増加を評価するだけでなく、細胞に保護効果をもたらすことができる特定の分子の抗酸化効果を研究するのに非常に役立ちます。

プロトコルのセクションで説明したように、我々は、ROS誘導剤AまたはBで刺激されたMIO-M1細胞からの蛍光プローブDCFH-DAによるROS産生のフローサイトメトリー検出を実証する代表的および定量的データを示した。予想通り、我々は、自己蛍光レベルを超える非刺激細胞におけるFITC蛍光の変化を観察した(図1A、「基礎対照」対「自家蛍光制御」の比較、ドットプロットグラ...

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Quantification of Reactive Oxygen Species Using 2ÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã‚Â²,7ÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã‚Â²-Dichlorofluorescein Diacetate Probe and Flow-Cytometry in MÃƒÆ’Ã‚Â¼ller Glial Cells

ここでは、ミュラーグリア細胞(MGC)中の2',7'-ジクロロフルオレセインジアセテートプローブ(DCFH-DA)を用いて細胞活性酸素種(ROS)を検出するための、体系化され、アクセス可能で再現可能なプロトコルを提案する。この方法は、フローサイトメーターを用いて全細胞ROSレベルを定量する。このプロトコルは非常に使いやすく、適切で再現性があります。

ミュラーグリア細胞における2',7'-ジクロロフルオレセインジアセテートプローブとフローサイトメトリーを用いた活性酸素種の定量

The redox balance has an important role in maintaining cellular homeostasis. The increased generation of reactive oxygen species (ROS) promotes the ...

ROS産生、または細胞内の酸化ストレスを測定するためのいくつかの方法があります。これらの中でも、2'7'-ジクロロフルオレセインジアセテートプローブは、酸化還元状態を直接測定するために最も広く用いられている技術の一つである。このプローブは親油性であり、非蛍光性である。細胞膜を横切るこのプローブの拡散は、2つのエステル結合での細胞内エステラーゼ切断を可能にし、比較的極性が高く細胞膜非透過性の生成物を生成する。これらの非蛍光分子は細胞内に蓄積し、その後のROSによる酸化は蛍光性の高い生成物ジクロロフルオレセインを生じる。プローブの酸化は、複数のタイプのROSの作用の産物である。これは、フローサイトメトリーまたは共焦点顕微鏡によって検出することができる。この記事では、ジクロロフルオレセインジアセテートプローブを使用して、フローサイトメトリーによってROSを測定および定量しました。6ウェルプレートをインキュベーターから層流フードに移す。上清を吸引する。細胞をPBSで1回洗浄した。1ウェルあたり2mLの低血清DMEMを加える。6穴プレートをインキュベーター内で2時間インキュベートした。細胞を抗酸化物質で6時間処理する。ROS誘導物質AまたはBで細胞を30分間処理する。上清を吸引する。細胞をPBSで3回洗浄し、全ての刺激を除去した。層流フードの明かりを消し、暗闇の中で作業します。フェノールレッドを含まないDMEMに1mLのジクロロフルオレセインジアセテートプローブを加える。フェノールレッドを含まない1mLのDMEMを対照自家蛍光制御細胞に加える。6ウェルプレートをインキュベーター内で30分間インキュベートする。氷の上のプレートを実験室に移す。1ウェルあたり2mLの冷たいPBSで細胞を3回洗浄する。0.5 mL の冷剥離バッファーを各ウェルに加えます。P1000ピペットを使用して上下に静かにピペッティングして細胞を回収します。ラベルの付いた1.5 mLチューブに集めます。そしてそれらを600 x gで4°Cで5分間遠心分離し、上清を慎重に捨て、そして軽く叩いてペレットを解離させる。1mLのFACSバッファーを加え、細胞を各標識チューブに洗浄する。必要に応じて、ペレットを完全に解離させるために、最も低い強度の渦を使用してください。600 x gで4°Cで5分間遠心分離し、この手順をさらに2回繰り返します。全部で3回の洗浄。細胞ペレットを200LのFACS緩衝液に再懸濁する。渦を用いて各チューブ内のペレットを完全に穏やかに解離させる。標識した5mL用フローサイトメーターチューブに移した。フローサイトメーターで分析するまでチューブを氷上に保管してください。フローサイトメトリーソフトウェアを使用して、新しい実験を作成します。試料をクリックすると、チューブのリストが開きます。ダブルクリックして名前を変更します。自家蛍光制御チューブをアスピレーターアームの上に置き、ベースを左だけ慎重に動かします。「データ集録」をクリックし、「データを記録」をクリックして、目的の停止条件を選択します。目的の細胞の周りにゲートを描き、死んだ細胞と破片を除きます。チューブを取り外します。[次のチューブ] をクリックし、基本対照サンプルを実行します。[データの取得] をクリックし、[データの記録] をクリックします。ソフトウェアを開きます。[サンプルの追加] アクション ボタンを使用してサンプルを追加します。[サンプルの追加] をクリックします。[実験日] フォルダーを選択し、[選択] をクリックします。ワークスペース内の最初のサンプル (この場合は自家蛍光コントロール) をダブルクリックします。ポリゴン ゲートを描画して、目的のセルを分離し、死んだセルと破片を除外します。プロットをヒストグラムに変更します。M 内をダブルクリックします。

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Quantification of Reactive Oxygen Species Using 2&#8242;,7&#8242;-Dichlorofluorescein Diacetate Probe and Flow-Cytometry in M&#252;ller Glial Cells

Determination of Mitochondrial Membrane Potential and Reactive Oxygen Species in Live Rat Cortical Neurons

ライブラット皮質ニューロンのミトコンドリア膜電位と活性酸素種の定量

Mitochondrial membrane potential (&Delta;&Psi;m) is critical for maintaining the physiological function of the respiratory chain to generate ATP.  A ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

無傷の感覚器官の前駆細胞の生細胞イメージングショウジョウバエ蛹

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Isolating LacZ-expressing Cells from Mouse Inner Ear Tissues using Flow Cytometry

フローサイトメトリーを用いてマウスの内耳の組織からのLacZの発現細胞を単離する

Isolation of specific cell types allows one to analyze rare cell populations such as stem/progenitor cells. Such an approach to studying inner ear tissues ...

The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

神経芽細胞アッセイ：フローサイトメトリーを用いて神経幹細胞の子孫を差別から神経前駆細胞の生成と濃縮のためのアッセイ

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

Inducing Plasticity of Astrocytic Receptors by Manipulation of Neuronal Firing Rates

神経発火率を操作することによってアストロサイト受容体の可塑性を誘導すること

Close to two decades of research has established that astrocytes in situ and in vivo express numerous G protein-coupled receptors (GPCRs) that can be ...

Assessment of Neuronal Viability Using Fluorescein Diacetate-Propidium Iodide Double Staining in Cerebellar Granule Neuron Culture

小脳顆粒ニューロン培養におけるFluorescein Diacetate-Propidium Iodide二重染色を用いたニューロン生存率の評価

Primary cultured Cerebellar Granule Neurons (CGNs) have been widely used as an in vitro model in neuroscience and neuropharmacology research. However, the ...

Quantification of Endosome and Lysosome Motilities in Cultured Neurons Using Fluorescent Probes

蛍光プローブを用いた培養ニューロンにおけるエンドソームおよびリソソームの動力学の定量

In the brain, membrane trafficking systems play important roles in regulating neuronal functions, such as neuronal morphology, synaptic plasticity, ...

Analysis of Immune Cells in Single Sciatic Nerves and Dorsal Root Ganglion from a Single Mouse Using Flow Cytometry

単一の坐骨神経とフローサイトメトリーを使用して単一のマウスの後根神経節における免疫系細胞の解析

Nerve-resident immune cells in the peripheral nervous system (PNS) are essential to maintaining neuronal integrity in a healthy nerve. The immune cells of ...

Using Optical Coherence Tomography and Optokinetic Response As Structural and Functional Visual System Readouts in Mice and Rats

マウスおよびラットの視覚系の構造と機能読み出しとして光干渉断層計と動視反応を使用してください。

Optical coherence tomography (OCT) is a fast, non-invasive, interferometric technique allowing high-resolution retinal imaging. It is an ideal tool for ...

A Method for 3D Reconstruction and Virtual Reality Analysis of Glial and Neuronal Cells

グリア細胞と神経細胞の3D再構成とバーチャルリアリティ解析の方法

Serial sectioning and subsequent high-resolution imaging of biological tissue using electron microscopy (EM) allow for the segmentation and reconstruction ...