Name: modeling neonatal intraventricular hemorrhage through intraventricular injection of hemoglobin
Uploaded: 2022-08-25T12:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Modeling Neonatal Intraventricular Hemorrhage Through Intraventricular Injection of Hemoglobin at JoVE.com

जेएमएस को एनआईएच/एनआईएनडीएस आर01 एनएस110793 और के12 (न्यूरोसर्जन रिसर्च करियर डेवलपमेंट प्रोग्राम) से फंडिंग मिली। बीएएम को एनआईएच / एनआईएनडीएस के08 एनएस 112580-01 ए 1, केंटकी न्यूरोसाइंस रिसर्च प्रायोरिटी एरिया अवार्ड विश्वविद्यालय और हाइड्रोसिफ़लस एसोसिएशन इनोवेटर अवार्ड से धन प्राप्त हुआ।

नोट: सभी पशु प्रोटोकॉल संस्थानों की पशु देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित किए गए थे। इस प्रोटोकॉल में उपयोग की जाने वाली सभी सामग्रियों, अभिकर्मकों, उपकरणों और सॉफ़्टवेयर के बारे में विवरण के लिए ?...

<ol>
	<li>Robinson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+posthemorrhagic+hydrocephalus+from+prematurity:+Pathophysiology+and+current+treatment+concepts:+A+review.">Neonatal posthemorrhagic hydrocephalus from prematurity: Pathophysiology and current treatment concepts: A review.</a> Journal of Neurosurgery: Pediatrics. 9 (3), (2012).</li><li>Hasselager, A. B., B&#248;rch, K., Pryds, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improvement+in+perinatal+care+for+extremely+premature+infants+in+Denmark+from.">Improvement in perinatal care for extremely premature infants in Denmark from.</a> Danish Medical Journal. 63 (1), (1994).</li><li>Johnston, P. G., Gillam-Krakauer, M., Fuller, M. P., Reese, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence-Based+Use+of+Indomethacin+and+Ibuprofen+in+the+Neonatal+Intensive+Care+Unit.">Evidence-Based Use of Indomethacin and Ibuprofen in the Neonatal Intensive Care Unit.</a> Clinics in Perinatology. 39 (1), (2012).</li><li>Mahaney, K. B., Buddhala, C., Paturu, M., Morales, D., Limbrick, D. D., Strahle, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraventricular+Hemorrhage+Clearance+in+Human+Neonatal+Cerebrospinal+Fluid:+Associations+with+Hydrocephalus.">Intraventricular Hemorrhage Clearance in Human Neonatal Cerebrospinal Fluid: Associations with Hydrocephalus.</a> Stroke. , (2020).</li><li>Strahle, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longitudinal+CSF+Iron+Pathway+Proteins+in+Posthemorrhagic+Hydrocephalus:+Associations+with+Ventricle+Size+and+Neurodevelopmental+Outcomes.">Longitudinal CSF Iron Pathway Proteins in Posthemorrhagic Hydrocephalus: Associations with Ventricle Size and Neurodevelopmental Outcomes.</a> Annals of Neurology. 90 (2), (2021).</li><li>Strahle, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Hemoglobin+and+Iron+in+hydrocephalus+after+neonatal+intraventricular+hemorrhage.">Role of Hemoglobin and Iron in hydrocephalus after neonatal intraventricular hemorrhage.</a> Neurosurgery. 75 (6), (2014).</li><li>Garton, T. P., He, Y., Garton, H. J. L., Keep, R. F., Xi, G., Strahle, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemoglobin-induced+neuronal+degeneration+in+the+hippocampus+after+neonatal+intraventricular+hemorrhage.">Hemoglobin-induced neuronal degeneration in the hippocampus after neonatal intraventricular hemorrhage.</a> Brain Research. 1635, (2016).</li><li>Goulding, D. S., Caleb Vogel, ., Gensel, R., Morganti, J. C., Stromberg, J. M., Miller, A. J., A, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+brain+inflammation,+white+matter+oxidative+stress,+and+myelin+deficiency+in+a+model+of+neonatal+intraventricular+hemorrhage.">Acute brain inflammation, white matter oxidative stress, and myelin deficiency in a model of neonatal intraventricular hemorrhage.</a> Journal of Neurosurgery: Pediatrics. 26 (6), (2020).</li><li>Strahle, J., Garton, H. J. L., Maher, C. O., Muraszko, K. M., Keep, R. F., Xi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+Hydrocephalus+After+Neonatal+and+Adult+Intraventricular+Hemorrhage.">Mechanisms of Hydrocephalus After Neonatal and Adult Intraventricular Hemorrhage.</a> Translational Stroke Research. 3, (2012).</li><li>Jinnai, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Model+of+Germinal+Matrix+Hemorrhage+in+Preterm+Rat+Pups.">A Model of Germinal Matrix Hemorrhage in Preterm Rat Pups.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 14, (2020).</li><li>Georgiadis, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+acute+brain+injuries+and+neurobehavioral+profiles+in+a+rabbit+model+of+germinal+matrix+hemorrhage.">Characterization of acute brain injuries and neurobehavioral profiles in a rabbit model of germinal matrix hemorrhage.</a> Stroke. 39 (12), (2008).</li><li>Cherian, S. S., Love, S., Silver, I. A., Porter, H. J., Whitelaw, A. G. L., Thoresen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Posthemorrhagic+ventricular+dilation+in+the+neonate:+Development+and+characterization+of+a+rat+model.">Posthemorrhagic ventricular dilation in the neonate: Development and characterization of a rat model.</a> Journal of Neuropathology and Experimental Neurology. 62 (3), (2003).</li><li>Balasubramaniam, J., Xue, M., Buist, R. J., Ivanco, T. L., Natuik, S., del Bigio, ., R, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistent+motor+deficit+following+infusion+of+autologous+blood+into+the+periventricular+region+of+neonatal+rats.">Persistent motor deficit following infusion of autologous blood into the periventricular region of neonatal rats.</a> Experimental Neurology. (1), (2006).</li><li>Volpe, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+injury+in+premature+infants:+a+complex+amalgam+of+destructive+and+developmental+disturbances.">Brain injury in premature infants: a complex amalgam of destructive and developmental disturbances.</a> The Lancet Neurology. 8 (1), (2009).</li><li>Dobbing, J., Sands, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+aspects+of+the+brain+growth+spurt.">Comparative aspects of the brain growth spurt.</a> Early Human Development. 3 (1), (1979).</li><li>Craig, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+analysis+of+perinatal+rodent+oligodendrocyte+lineage+progression+and+its+correlation+with+human.">Quantitative analysis of perinatal rodent oligodendrocyte lineage progression and its correlation with human.</a> Experimental Neurology. 181 (2), (2003).</li><li>Lodygensky, G. A., Vasung, L., Sv Sizonenko, ., H&#252;ppi, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroimaging+of+cortical+development+and+brain+connectivity+in+human+newborns+and+animal+models.">Neuroimaging of cortical development and brain connectivity in human newborns and animal models.</a> Journal of Anatomy. 217 (4), (2010).</li><li>Dean, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strain-specific+differences+in+perinatal+rodent+oligodendrocyte+lineage+progression+and+its+correlation+with+human.">Strain-specific differences in perinatal rodent oligodendrocyte lineage progression and its correlation with human.</a> Developmental Neuroscience. 33 (34), (2011).</li><li>Engelhardt, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+blood-brain+barrier.">Development of the blood-brain barrier.</a> Cell and Tissue Research. 314 (1), (2003).</li><li>Daneman, R., Zhou, L., Kebede, A. A., Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pericytes+are+required+for+blood&#285;&#8364;&amp;#34;brain+barrier+integrity+during+embryogenesis.">Pericytes are required for blood&#285;&#8364;&amp;#34;brain barrier integrity during embryogenesis.</a> Nature. 468 (7323), (2010).</li><li>Alles, Y. C. J., Greggio, S., Alles, R. M., Azevedo, P. N., Xavier, L. L., DaCosta, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+preclinical+rodent+model+of+collagenase-induced+germinal+matrix/intraventricular+hemorrhage.">A novel preclinical rodent model of collagenase-induced germinal matrix/intraventricular hemorrhage.</a> Brain Research. 1356, (2010).</li><li>Christian, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trends+in+hospitalization+of+preterm+infants+with+intraventricular+hemorrhage+and+hydrocephalus+in+the+United+States.">Trends in hospitalization of preterm infants with intraventricular hemorrhage and hydrocephalus in the United States.</a> Journal of Neurosurgery: Pediatrics. 17 (3), 2000-2010 (2016).</li></ol>

हीमोग्लोबिन इंजेक्शन का उपयोग करने वाला यह आईवीएच मॉडल विशेष रूप से हीमोग्लोबिन द्वारा मध्यस्थ आईवीएच की विकृति के अध्ययन की अनुमति देता है। पूरक अध्ययनों के लिए, हीमोग्लोबिन को आसानी से विट्रो मे?...

नवजात आईवीएच जर्मिनल मैट्रिक्स से उत्पन्न होता है, जो तेजी से कोशिका विभाजन की एक साइट है जो विकासशील मस्तिष्क के पार्श्व वेंट्रिकल्स से सटा हुआ है। यह अत्यधिक संवहनी संरचना समय से पहले जन्म से संबंधित हेमोडायनामिक अस्थिरता की चपेट में है। जर्मिनल मैट्रिक्स हेमरेज (जीएमएच)-आईवीएच में पार्श्व वेंट्रिकल्स में रक्त जारी किया जाता है जब जर्मिनल मैट्रिक्स के भीतर नाजुक रक्त वाहिकाएं टूट जाती हैं। ग्रेड IV IVH के मामले में, पेरिवेंट्रिकुलर रक्तस्रावी रोधगलन भी मस्तिष्क के भीतर रक्त उत्पादों की रिहाई में योगदान कर सकता है। जीएमएच-आईवीएच का संयोजन पीएचएच का कारण बन सकता है, खासकर उच्च श्रेणी के रक्तस्राव (ग्रेड III और IV) 1 के बाद। पीएचएच का इलाज वेंट्रिकुलोपरिटोनियल शंट के प्लेसमेंट के साथ किया जा सकता है, लेकिन शंट प्लेसमेंट आईवीएच से होने वाली मस्तिष्क की चोट को उलट नहीं देता है। यद्यपि आधुनिक नवजात गहन देखभाल ने आईवीएच2, 3 की दरों को कम कर दिया है, लेकिन आईवीएच के कारण मस्तिष्क की चोट या हाइड्रोसिफ़लस के लिए कोई विशिष्ट उपचार नहीं हैं। आईवीएच-प्रेरित मस्तिष्क की चोट और पीएचएच के लिए निवारक उपचार विकसित करने में एक महत्वपूर्ण सीमा आईवीएच पैथोफिज़ियोलॉजी की अधूरी समझ है।
हाल ही में, प्रमुख रक्त टूटने वाले उत्पाद हीमोग्लोबिन के शुरुआती सीएसएफ स्तरों को उच्च ग्रेड आईवीएच 4 वाले नवजात शिशुओं में पीएचएच के बाद के विकास से जुड़ा हुआ दिखाया गयाहै। इसके अलावा, आयरन-हैंडलिंग मार्ग प्रोटीन के सीएसएफ स्तर- हीमोग्लोबिन, फेरिटिन और बिलीरुबिन- नवजात आईवीएच में वेंट्रिकल आकार से जुड़े होते हैं। यह प्रीटरम पीएचएच वाले शिशुओं के एक बहु-विषयक समूह में भी दिखाया गया था, जहां फेरिटिन के उच्च वेंट्रिकुलर सीएसएफ स्तर बड़े वेंट्रिकल आकार5 से जुड़े थे।
इस अध्ययन में, हमने मस्तिष्क वेंट्रिकल्स में हीमोग्लोबिन इंजेक्शन का उपयोग करके आईवीएच-प्रेरित मस्तिष्क की चोट और हाइड्रोसिफ़लस का एक नैदानिक रूप से प्रासंगिक मॉडल विकसित किया, जो मस्तिष्क की चोट और पीएचएच की मात्रा का परिमाणीकरण और नई चिकित्सीय रणनीतियों के परीक्षण की अनुमति देता है (चित्रा 1)6, 7)। यह आईवीएच मॉडल नवजात चूहे पिल्ले का उपयोग करता है, जिन्हें प्रक्रिया की अवधि के लिए सामान्य संज्ञाहरण के तहत रखा जाता है। खोपड़ी पर एक मध्य रेखा चीरा लगाया जाता है, और खोपड़ी के स्थलों से प्राप्त निर्देशांक- ब्रेग्मा या लैम्ब्डा- का उपयोग इंजेक्शन के लिए पार्श्व वेंट्रिकल्स को लक्षित करने के लिए किया जाता है। एक जलसेक पंप का उपयोग करके धीमा इंजेक्शन वेंट्रिकल में हीमोग्लोबिन पहुंचाता है। यह प्रोटोकॉल उपयोग करने में आसान है, बहुमुखी है, और आईवीएच के विभिन्न घटकों को मॉडल कर सकता है जिसके परिणामस्वरूप पीएचएच होता है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >0.3 mL insulin syringe</td>
			<td >BD Microfine + Insulin Syringe</td>
			<td >230-4533</td>
			<td >0.3-0.5 mL synringes will work</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >1.5 mL microtube</td>
			<td >USA Scientific</td>
			<td >1615-5500</td>
			<td>Lot No. K194642H -3 511</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >4.7T MRI</td>
			<td >Agilent/Varian</td>
			<td >4.7T/33 cm</td>
			<td>Agilent/Varian DirectDrive 4.7-T (200-MHz) MRI system</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >6-0 monofilament suture</td>
			<td >ETHICON</td>
			<td >667G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >9.4T MRI</td>
			<td >Bruker</td>
			<td >BioSpec 94/20</td>
			<td>Used in this protocol without the cryoprobe</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Analytical balance</td>
			<td >CCURIS Instruments</td>
			<td >W3200-320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Artificial CSF (aCSF)</td>
			<td >Tocris Bioscience</td>
			<td >3525</td>
			<td>Batch No: 72A</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Betadine</td>
			<td >Purdue Products L.P.</td>
			<td >301005-00</td>
			<td >NDC 67618-150-09</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Carprofen (injectable)</td>
			<td >Zoetis Inc.&#160;</td>
			<td>PI 4019448</td>
			<td>Rimadyl</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ethanol</td>
			<td >Decon Laboratories</td>
			<td >2701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Heating pad</td>
			<td >Sunbeam</td>
			<td >E12107-819</td>
			<td>UL 612A, Z-1228-001</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Hemoglobin</td>
			<td >MP Biomedicals</td>
			<td >100714</td>
			<td>LOT NO. SR02321</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Isoflurane</td>
			<td >Piramal Critical Care</td>
			<td >NDC 66794-017-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Isoflurane vaporizer</td>
			<td >VETEQUIP</td>
			<td >911103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Light for stereotactic insturment</td>
			<td >Dolan-Jenner industries</td>
			<td >Fiber-Lite MI-150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Microinjection syringe pump</td>
			<td >World Precision Instruments</td>
			<td >MICRO21</td>
			<td>Serial 184034 T08K</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >MRI software</td>
			<td >Bruker BioSpin</td>
			<td >Paravision 360 3.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Oxygen</td>
			<td >Airgas Healthcare</td>
			<td >UN1072</td>
			<td>LOT NUMBER S1432080XA02</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sprague Dawley rats</td>
			<td >Charles River Laboratories</td>
			<td >Strain code: 001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Stereotactic instrument</td>
			<td >KOPF Instuments</td>
			<td >Model 900LS Lazy Susan</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sterile cotton tipped applicator</td>
			<td >Fischerbrand</td>
			<td >23-400-118</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Surgical blade</td>
			<td >covetrus</td>
			<td >#10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Topical triple antibiotic</td>
			<td >Triple Antibiotic Ointment</td>
			<td >NDC 51672-2120-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ventricle volume quantification software</td>
			<td >ITK-SNAP</td>
			<td >ITK-SNAP 4.0.0 beta</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling neonatal intraventricular hemorrhage through intraventricular injection of hemoglobin

नवजात इंट्रावेंट्रिकुलर रक्तस्राव (आईवीएच) समय से पहले जन्म का एक सामान्य परिणाम है और मस्तिष्क की चोट, पोस्टहेमोरेजिक हाइड्रोसिफ़लस (पीएचएच), और आजीवन न्यूरोलॉजिकल घाटे की ओर जाता है। जबकि पीएचएच का इलाज अस्थायी और स्थायी मस्तिष्कमेरु द्रव (सीएसएफ) डायवर्सन प्रक्रियाओं (वेंट्रिकुलर जलाशय और वेंट्रिकुलोपरिटोनियल शंट, क्रमशः) द्वारा किया जा सकता है, आईवीएच-प्रेरित मस्तिष्क की चोट और हाइड्रोसिफ़लस को रोकने या इलाज करने के लिए कोई औषधीय रणनीतिनहीं हैं। आईवीएच के पैथोफिज़ियोलॉजी को बेहतर ढंग से समझने और औषधीय उपचार का परीक्षण करने के लिए पशु मॉडल की आवश्यकता होती है। जबकि नवजात आईवीएच के मौजूदा मॉडल हैं, जो विश्वसनीय रूप से हाइड्रोसिफ़लस में परिणाम देते हैं, वे अक्सर बड़ी मात्रा में इंजेक्शन की आवश्यकता से सीमित होते हैं, जो पैथोलॉजी के मॉडलिंग को जटिल कर सकते हैं या नैदानिक फेनोटाइप में परिवर्तनशीलता पेश कर सकते हैं।
हाल के नैदानिक अध्ययनों ने आईवीएच के बाद वेंट्रिकुलर वृद्धि के कारण हीमोग्लोबिन और फेरिटिन को फंसाया है। यहां, हम एक सीधा पशु मॉडल विकसित करते हैं जो रक्त टूटने वाले उत्पाद हीमोग्लोबिन के छोटे-मात्रा इंट्रावेंट्रिकुलर इंजेक्शन का उपयोग करके पीएचएच के नैदानिक फेनोटाइप की नकल करता है। वेंट्रिकुलर इज़ाफ़ा और हाइड्रोसिफ़लस को मज़बूती से प्रेरित करने के अलावा, इस मॉडल के परिणामस्वरूप पेरिवेंट्रिकुलर और सफेद पदार्थ क्षेत्रों में सफेद पदार्थ की चोट, सूजन और प्रतिरक्षा कोशिका घुसपैठ होती है। यह पेपर इंट्रावेंट्रिकुलर इंजेक्शन का उपयोग करके नवजात चूहों में आईवीएच-पीएचएच मॉडलिंग के लिए इस नैदानिक रूप से प्रासंगिक, सरल विधि का वर्णन करता है और इंजेक्शन के बाद वेंट्रिकल आकार को निर्धारित करने के तरीकों को प्रस्तुत करता है।

इंजेक्शन की सफलता की पुष्टि रेडियोलॉजिकल और इम्यूनोहिस्टोकेमिकल साधनों द्वारा की गई थी। जिन जानवरों को हीमोग्लोबिन इंजेक्शन से गुजरना पड़ा, उन्होंने एमआरआई (चित्रा 2 ए) के माध्यम से मूल्य?...

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Modeling Neonatal Intraventricular Hemorrhage Through Intraventricular Injection of Hemoglobin

हम चूहे पिल्ले का उपयोग करके नवजात इंट्रावेंट्रिकुलर रक्तस्राव का एक मॉडल प्रस्तुत करते हैं जो मनुष्यों में देखी गई विकृति की नकल करता है।

हीमोग्लोबिन के इंट्रावेंट्रिकुलर इंजेक्शन के माध्यम से नवजात इंट्रावेंट्रिकुलर रक्तस्राव मॉडलिंग

Neonatal intraventricular hemorrhage (IVH) is a common consequence of premature birth and leads to brain injury, posthemorrhagic hydrocephalus (PHH), and ...

यह प्रोटोकॉल महत्वपूर्ण है क्योंकि हम आईवीएच प्रेरित मस्तिष्क की चोट और हाइड्रोसिफ़लस का एक नैदानिक रूप से प्रासंगिक मॉडल विकसित करते हैं, जो वेंट्रिकल्स में हीमोग्लोबिन इंजेक्शन का उपयोग करते हैं, जो नई चिकित्सीय रणनीतियों का परीक्षण करने के लिए आवेदन में वेंट्रिकल वॉल्यूम के बाद के परिमाणीकरण की अनुमति देता है। इस तकनीक का मुख्य लाभ यह है कि यह आईवीएच की विकृति के अध्ययन के लिए अनुमति देता है जो विशेष रूप से हीमोग्लोबिन और लौह मार्ग रक्त टूटने वाले उत्पादों द्वारा मध्यस्थता की जाती है। यह तकनीक उपयोग करने में भी आसान है और बहुमुखी है।इस तकनीक के निहितार्थ पोस्ट-रक्तस्रावी हाइड्रोसिफ़लस के लिए उपचार विकसित करने की दिशा में विस्तारित हैं, क्योंकि यह आईवीएच पैथोफिज़ियोलॉजी की आगे की समझ और आईवीएच के बाद न्यूरोलॉजिकल सीक्वेल की रोकथाम के लिए नैदानिक रूप से प्रासंगिक उपचार रणनीतियों के मूल्यांकन की अनुमति देता है। इस प्रक्रिया का प्रदर्शन ऑस्ट्रेलिया प्रयोगशाला की एसोसिएट पोस्ट-डॉक्टर श्रुति रामागिरी करेंगी। शुरू करने के लिए एनेस्थेटाइज्ड चूहे को स्टीरियोटैक्टिक तंत्र में एनेस्थेटाइज्ड चूहे को एनेस्थीसिया एडाप्टर में अपनी नाक के साथ रखा जाता है।फिर बाहरी श्रवण मांस पर गैर-टूटना कान सलाखों को कसकर सिर को सुरक्षित करें। सिर को साफ करने के लिए, पहले सिर के केंद्र में बीटाडीन में भिगोए गए बाँझ कपास के एप्लिकेटर को स्पर्श करें और बीटाडीन को गोलियों में फैलाने के लिए बाहर की ओर बढ़ें। फिर 70% इथेनॉल में भिगोए गए एक एप्लिकेटर के साथ प्रक्रिया को दोहराएं।इसके बाद, एक स्केलपेल का उपयोग करके, खोपड़ी के ब्रेग्मा को उजागर करने के लिए सिर के केंद्र के नीचे लंबवत रूप से 0.3 सेंटीमीटर चीरा लगाएं। फिर कपास के टीप एप्लिकेटर का उपयोग करके क्षेत्र को सुखाएं। स्टीरियोटैक्टिक इंजेक्टर को स्थापित करने के लिए, पहले से तैयार हीमोग्लोबिन समाधान को 0.3 या 0.5 मिलीलीटर सिरिंज में खींचें, और स्टीरियोटैक्टिक इंजेक्टर सिस्टम में सिरिंज रखें।इसके बाद, स्टीरियोटैक्टिक इंजेक्टर इंटरफ़ेस चालू करें, और इंजेक्शन वॉल्यूम और दर सेटिंग्स दर्ज करने के लिए कॉन्फ़िगरेशन बटन पर क्लिक करें। वॉल्यूम पर क्लिक करें, और वॉल्यूम को 20,000 नैनोलीटर पर सेट करें। फिर जलसेक दर पर क्लिक करें, और दर को 8,000 नैनोलीटर प्रति मिनट पर सेट करें।कॉन्फ़िगरेशन से बाहर निकलने के लिए रीसेट स्थिति बटन पर क्लिक करें। जब तक सुई की नोक पर हीमोग्लोबिन का एक छोटा मोती दिखाई न दे, तब तक इंफ्यूज बटन पर क्लिक करके सुई टिप को फ्लश करें, फिर धीरे से मोती को हटाने के लिए एक कपास टिंप एप्लिकेटर का उपयोग करें। पशु इंजेक्शन शुरू करने के लिए, ब्रेग्मा को स्टीरियोटैक्टिक इंजेक्शन सिस्टम पर शून्य के रूप में सेट करें, जिसमें सिरिंज के मेडियोलेटरल और एंटेरोपोस्टरियर स्थितियों को समायोजित किया जाता है।फिर सिरिंज सुई को धीरे से ब्रेग्मा पर खोपड़ी को छूने के लिए कम करें। पसंद के निर्देशांक की पहचान करने के बाद, खोपड़ी को साफ करने के लिए सिरिंज सुई को खोपड़ी से एक सेंटीमीटर ऊपर उठाएं। मेडियोलेटरल और एंटेरोपोस्टीरियर निर्देशांक सेट करें।फिर सुई के लिए सिरिंज को धीरे से खोपड़ी को छूने के लिए कम करें और डोरसोवेंट्रल समन्वय को 30 सेकंड से अधिक सेट करें। एक बार निर्देशांक सेट हो जाने के बाद, स्टीरियोटैक्टिक इंजेक्टर इंटरफ़ेस पर रन बटन पर क्लिक करके इंजेक्शन शुरू करें। इंजेक्शन समाप्त होने के बाद, घोल के बैकफ्लो को कम करने के लिए सुई को दो मिनट के लिए छोड़ दें।इसके बाद, धीरे-धीरे डोरसोवेंट्रल समन्वय के साथ सिरिंज को दो मिनट में वापस लें, जब तक कि सुई की नोक खोपड़ी से दो सेंटीमीटर ऊपर न हो। फिर स्टीरियोटैक्टिक इंजेक्टर आर्म को ऑपरेटिव फील्ड से दूर घुमाएं और 6-ओ मोनोफिलामेंट सीवन के साथ खोपड़ी को बंद करें। एमआरआई के लिए, टी 2 भारित तेज स्पिन इको अनुक्रम का चयन करके टी 2 भारित इमेजिंग करें।पाठ में वर्णित एमआरआई पैरामीटर सेट करने के बाद, अनुक्रम शुरू करने के लिए जारी रखें बटन पर क्लिक करें। छवि प्रसंस्करण और मस्तिष्क की मात्रा विश्लेषण के लिए, विभाजन सॉफ्टवेयर में देशी टी 2 भारित डेटा खोलें। पार्श्व वेंट्रिकल्स को मैन्युअल रूप से चित्रित करने के लिए, पेंटब्रश मोड पर क्लिक करें और स्क्वायर ब्रश शैली का चयन करें, फिर ब्रश के आकार को एक में समायोजित करें।इसके बाद, लेआउट इंस्पेक्टर पर क्लिक करें, अक्षीय दृश्य का चयन करें और फिट होने के लिए ज़ूम पर क्लिक करें। फिर छवि पर कर्सर रखें और पार्श्व वेंट्रिकल स्पेस का पता लगाएं और भरें। अंत में, खंडित वॉल्यूम देखने के लिए टूलबार में विभाजन पर क्लिक करें, इसके बाद वॉल्यूम और आंकड़े।हीमोग्लोबिन इंजेक्शन से गुजरने वाले जानवरों ने एमआरआई के माध्यम से मूल्यांकन किए जाने पर मध्यम वेंट्रिकुलोमेगाली विकसित की। एसीएसएफ इंजेक्शन वाले जानवरों की तुलना में 24 घंटे में काफी बड़े पार्श्व वेंट्रिकल के साथ, और हीमोग्लोबिन इंजेक्शन के 72 घंटे बाद। हालांकि चूहों के दो समूहों के बीच पार्श्व वेंट्रिकुलर मात्रा में अंतर 38 दिनों के बाद महत्वपूर्ण नहीं था, एमआरआई स्कैन से पता चला कि हीमोग्लोबिन प्राप्त करने वाले 44% चूहों में अभी भी अनसुलझे वेंट्रिकुलोमेगाली थे।इसके अलावा, एसीएसएफ की तुलना में, हीमोग्लोबिन के इंजेक्शन के परिणामस्वरूप 38 दिनों के बाद सफेद पदार्थ की मात्रा में उल्लेखनीय कमी आई। हीमोग्लोबिन ने विवो में एक भड़काऊ प्रतिक्रिया को भी बढ़ावा दिया, जैसा कि हीमोग्लोबिन इंजेक्शन के बाद प्रो-भड़काऊ साइटोकिन ट्यूमर नेक्रोसिस फैक्टर अल्फा के काफी उच्च स्तर से स्पष्ट है, लेकिन खारा या पूरे रक्त में नहीं। इसके अलावा, ग्लियल फाइब्रिलर अम्लीय प्रोटीन के इम्यूनोहिस्टोकेमिकल धुंधला होने से एसीएसएफ इंजेक्शन की तुलना में हीमोग्लोबिन इंजेक्शन के बाद एस्ट्रोसाइट्स की काफी अधिक सक्रियता का पता चला।इस प्रक्रिया का प्रयास करते समय याद रखने वाली सबसे महत्वपूर्ण बात पार्श्व वेंट्रिकल्स में हीमोग्लोबिन वितरण सुनिश्चित करने के लिए सही इंजेक्शन निर्देशांक सेट करना है। इस प्रक्रिया के बाद, सीएसएफ ट्रेसर को सीएसएफ परिसंचरण में परिवर्तन का मूल्यांकन करने के लिए सीएसएफ स्पेस में वितरित किया जा सकता है, और आईवीएच के बाद एफ्लक्स पैटर्न। यह अतिरिक्त विधि बताती है कि आईवीएच पीएचएच में सीएसएफ प्रवाह कैसे बदल जाता है।

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Autologous Blood Injection to Model Spontaneous Intracerebral Hemorrhage in Mice

ऑटोलॉगस रक्त चूहे में स्वतःस्फूर्त intracerebral नकसीर मॉडल इंजेक्शन

Investigation of the pathophysiology of injury after intracerebral
hemorrhage (ICH) requires a reproducible animal model.  While ICH
accounts for 10-15% ...

Neonatal Subventricular Zone Electroporation

नवजात subventricular क्षेत्र electroporation

Neural stem cells (NSCs) line the postnatal lateral ventricles and give rise to multiple cell types which include neurons, astrocytes, and ependymal ...

Direct Intraventricular Delivery of Drugs to the Rodent Central Nervous System

कृंतक केन्द्रीय तंत्रिका तंत्र के लिए ड्रग्स का प्रत्यक्ष intraventricular डिलिवरी

Due to an inability to cross the blood brain barrier, certain drugs need to be directly delivered into the central nervous system (CNS). Our lab focuses ...

Neonatal Pial Surface Electroporation

नवजात pial सतह Electroporation

Over the past several years the pial surface has been identified as a germinal niche of importance during embryonic, perinatal and adult neuro- and ...

Intracerebroventricular Viral Injection of the Neonatal Mouse Brain for Persistent and Widespread Neuronal Transduction

लगातार और व्यापक Neuronal पारगमन के लिए नवजात माउस ब्रेन की Intracerebroventricular वायरल इंजेक्शन

With the pace of scientific advancement accelerating rapidly, new methods are needed for experimental neuroscience to quickly and easily manipulate gene ...

Intracerebroventricular and Intravascular Injection of Viral Particles and Fluorescent Microbeads into the Neonatal Brain

नवजात मस्तिष्क में वायरल कणों और फ्लोरोसेंट microbeads की Intracerebroventricular और Intravascular इंजेक्शन

In the study on the pathogenesis of viral encephalitis, the infection method is critical. The first of the two main infectious routes to the brain is the ...

Establishing Mouse Models for Zika Virus-induced Neurological Disorders Using Intracerebral Injection Strategies: Embryonic, Neonatal, and Adult

Zika वायरस के लिए माउस मॉडल की स्थापना-प्रेरित मस्तिष्क संबंधी विकार इंट्रा इंजेक्शन रणनीतियों का उपयोग: भ्रूण, नवजात, और वयस्क

The Zika virus (ZIKV) is a flavivirus currently endemic in North, Central, and South America. It is now established that the ZIKV can cause microcephaly ...

A Volumetric Method for Quantification of Cerebral Vasospasm in a Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage

अवजालतनिका नकसीर के एक Murine मॉडल में सेरेब्रल Vasospasm के ठहराव के लिए एक Volumetric विधि

Subarachnoid hemorrhage (SAH) is a subtype of hemorrhagic stroke. Cerebral vasospasm that occurs in the aftermath of the bleeding is an important factor ...

Minimally Invasive Endoscopic Intracerebral Hemorrhage Evacuation

न्यूनतम इनवेसिव एंडोस्कोपिक इंट्रासैरेब्रल हेमरेज निकासी

Intracerebral hemorrhage (ICH) is a subtype of stroke with high mortality and poor functional outcomes, largely because there are no evidence-based ...

Double Direct Injection of Blood into the Cisterna Magna as a Model of Subarachnoid Hemorrhage

सबराचनॉइड हेमरेज के मॉडल के रूप में सिस्टर्ना मैग्ना में रक्त का डबल डायरेक्ट इंजेक्शन

Among strokes, subarachnoid hemorrhage (SAH) consecutive to the rupture of a cerebral arterial aneurysm represents 5-9% but is responsible for about 30% ...