Name: modeling neonatal intraventricular hemorrhage through intraventricular injection of hemoglobin
Uploaded: 2022-08-25T12:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Modeling Neonatal Intraventricular Hemorrhage Through Intraventricular Injection of Hemoglobin at JoVE.com

JMS, NIH / NINDS R01 NS110793 ve K12'den (Beyin Cerrahı Araştırma Kariyer Geliştirme Programı) finansman aldı. BAM, NIH / NINDS K08 NS112580-01A1, Kentucky Üniversitesi Sinirbilim Araştırma Öncelikli Alan Ödülü ve bir Hidrosefali Derneği Yenilikçi Ödülü'nden fon aldı.

NOT: Tüm hayvan protokolleri, kurumların Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylanmıştır. Bu protokolde kullanılan tüm malzemeler, reaktifler, ekipman ve yazılımlar hakkında ayrıntılar için Malzeme Tablosu'na bakın.
1. Hemoglobin ve BOS çözeltilerinin hazırlanması
<ol><li>1,5 mL'lik bir mikrotüpe 500 μL aCSF çözeltisi ekleyerek steril bir yapay CSF (aCSF) çözeltisi hazırlayın ve buz üzerinde saklayın.</li>
	<li>1...

<ol>
	<li>Robinson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+posthemorrhagic+hydrocephalus+from+prematurity:+Pathophysiology+and+current+treatment+concepts:+A+review.">Neonatal posthemorrhagic hydrocephalus from prematurity: Pathophysiology and current treatment concepts: A review.</a> Journal of Neurosurgery: Pediatrics. 9 (3), (2012).</li><li>Hasselager, A. B., B&#248;rch, K., Pryds, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improvement+in+perinatal+care+for+extremely+premature+infants+in+Denmark+from.">Improvement in perinatal care for extremely premature infants in Denmark from.</a> Danish Medical Journal. 63 (1), (1994).</li><li>Johnston, P. G., Gillam-Krakauer, M., Fuller, M. P., Reese, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence-Based+Use+of+Indomethacin+and+Ibuprofen+in+the+Neonatal+Intensive+Care+Unit.">Evidence-Based Use of Indomethacin and Ibuprofen in the Neonatal Intensive Care Unit.</a> Clinics in Perinatology. 39 (1), (2012).</li><li>Mahaney, K. B., Buddhala, C., Paturu, M., Morales, D., Limbrick, D. D., Strahle, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraventricular+Hemorrhage+Clearance+in+Human+Neonatal+Cerebrospinal+Fluid:+Associations+with+Hydrocephalus.">Intraventricular Hemorrhage Clearance in Human Neonatal Cerebrospinal Fluid: Associations with Hydrocephalus.</a> Stroke. , (2020).</li><li>Strahle, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longitudinal+CSF+Iron+Pathway+Proteins+in+Posthemorrhagic+Hydrocephalus:+Associations+with+Ventricle+Size+and+Neurodevelopmental+Outcomes.">Longitudinal CSF Iron Pathway Proteins in Posthemorrhagic Hydrocephalus: Associations with Ventricle Size and Neurodevelopmental Outcomes.</a> Annals of Neurology. 90 (2), (2021).</li><li>Strahle, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Hemoglobin+and+Iron+in+hydrocephalus+after+neonatal+intraventricular+hemorrhage.">Role of Hemoglobin and Iron in hydrocephalus after neonatal intraventricular hemorrhage.</a> Neurosurgery. 75 (6), (2014).</li><li>Garton, T. P., He, Y., Garton, H. J. L., Keep, R. F., Xi, G., Strahle, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemoglobin-induced+neuronal+degeneration+in+the+hippocampus+after+neonatal+intraventricular+hemorrhage.">Hemoglobin-induced neuronal degeneration in the hippocampus after neonatal intraventricular hemorrhage.</a> Brain Research. 1635, (2016).</li><li>Goulding, D. S., Caleb Vogel, ., Gensel, R., Morganti, J. C., Stromberg, J. M., Miller, A. J., A, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+brain+inflammation,+white+matter+oxidative+stress,+and+myelin+deficiency+in+a+model+of+neonatal+intraventricular+hemorrhage.">Acute brain inflammation, white matter oxidative stress, and myelin deficiency in a model of neonatal intraventricular hemorrhage.</a> Journal of Neurosurgery: Pediatrics. 26 (6), (2020).</li><li>Strahle, J., Garton, H. J. L., Maher, C. O., Muraszko, K. M., Keep, R. F., Xi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+Hydrocephalus+After+Neonatal+and+Adult+Intraventricular+Hemorrhage.">Mechanisms of Hydrocephalus After Neonatal and Adult Intraventricular Hemorrhage.</a> Translational Stroke Research. 3, (2012).</li><li>Jinnai, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Model+of+Germinal+Matrix+Hemorrhage+in+Preterm+Rat+Pups.">A Model of Germinal Matrix Hemorrhage in Preterm Rat Pups.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 14, (2020).</li><li>Georgiadis, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+acute+brain+injuries+and+neurobehavioral+profiles+in+a+rabbit+model+of+germinal+matrix+hemorrhage.">Characterization of acute brain injuries and neurobehavioral profiles in a rabbit model of germinal matrix hemorrhage.</a> Stroke. 39 (12), (2008).</li><li>Cherian, S. S., Love, S., Silver, I. A., Porter, H. J., Whitelaw, A. G. L., Thoresen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Posthemorrhagic+ventricular+dilation+in+the+neonate:+Development+and+characterization+of+a+rat+model.">Posthemorrhagic ventricular dilation in the neonate: Development and characterization of a rat model.</a> Journal of Neuropathology and Experimental Neurology. 62 (3), (2003).</li><li>Balasubramaniam, J., Xue, M., Buist, R. J., Ivanco, T. L., Natuik, S., del Bigio, ., R, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistent+motor+deficit+following+infusion+of+autologous+blood+into+the+periventricular+region+of+neonatal+rats.">Persistent motor deficit following infusion of autologous blood into the periventricular region of neonatal rats.</a> Experimental Neurology. (1), (2006).</li><li>Volpe, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+injury+in+premature+infants:+a+complex+amalgam+of+destructive+and+developmental+disturbances.">Brain injury in premature infants: a complex amalgam of destructive and developmental disturbances.</a> The Lancet Neurology. 8 (1), (2009).</li><li>Dobbing, J., Sands, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+aspects+of+the+brain+growth+spurt.">Comparative aspects of the brain growth spurt.</a> Early Human Development. 3 (1), (1979).</li><li>Craig, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+analysis+of+perinatal+rodent+oligodendrocyte+lineage+progression+and+its+correlation+with+human.">Quantitative analysis of perinatal rodent oligodendrocyte lineage progression and its correlation with human.</a> Experimental Neurology. 181 (2), (2003).</li><li>Lodygensky, G. A., Vasung, L., Sv Sizonenko, ., H&#252;ppi, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroimaging+of+cortical+development+and+brain+connectivity+in+human+newborns+and+animal+models.">Neuroimaging of cortical development and brain connectivity in human newborns and animal models.</a> Journal of Anatomy. 217 (4), (2010).</li><li>Dean, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strain-specific+differences+in+perinatal+rodent+oligodendrocyte+lineage+progression+and+its+correlation+with+human.">Strain-specific differences in perinatal rodent oligodendrocyte lineage progression and its correlation with human.</a> Developmental Neuroscience. 33 (34), (2011).</li><li>Engelhardt, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+blood-brain+barrier.">Development of the blood-brain barrier.</a> Cell and Tissue Research. 314 (1), (2003).</li><li>Daneman, R., Zhou, L., Kebede, A. A., Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pericytes+are+required+for+blood&#285;&#8364;&amp;#34;brain+barrier+integrity+during+embryogenesis.">Pericytes are required for blood&#285;&#8364;&amp;#34;brain barrier integrity during embryogenesis.</a> Nature. 468 (7323), (2010).</li><li>Alles, Y. C. J., Greggio, S., Alles, R. M., Azevedo, P. N., Xavier, L. L., DaCosta, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+preclinical+rodent+model+of+collagenase-induced+germinal+matrix/intraventricular+hemorrhage.">A novel preclinical rodent model of collagenase-induced germinal matrix/intraventricular hemorrhage.</a> Brain Research. 1356, (2010).</li><li>Christian, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trends+in+hospitalization+of+preterm+infants+with+intraventricular+hemorrhage+and+hydrocephalus+in+the+United+States.">Trends in hospitalization of preterm infants with intraventricular hemorrhage and hydrocephalus in the United States.</a> Journal of Neurosurgery: Pediatrics. 17 (3), 2000-2010 (2016).</li></ol>

Hemoglobin enjeksiyonunu kullanan bu IVH modeli, özellikle hemoglobinin aracılık ettiği IVH patolojisinin incelenmesine izin verir. Tamamlayıcı çalışmalar için, hemoglobin in vitro olarak da kolayca verilebilir ve tam kanda bulunan mikroglia / makrofajlar tarafından yapılan proteinler için biyokimyasal tahlilleri karıştırmaz.
IVH-PHH'nin önde gelen teorileri arasında BOS dolaşımının mekanik olarak tıkanması, ependimal duvarları kaplayan kirpiklerin bozulması,...

Yenidoğan IVH, gelişmekte olan beynin lateral ventriküllerine bitişik olan hızlı hücre bölünmesi bölgesi olan germinal matriksten kaynaklanır. Bu yüksek vasküler yapı, erken doğuma bağlı hemodinamik instabiliteye karşı savunmasızdır. Germinal matriks kanamasında (GMH)-IVH'de germinal matriks rüptürü içindeki kırılgan kan damarları olduğunda lateral ventriküllere kan salınır. Derece IV IVH durumunda, periventriküler hemorajik enfarktüs de beyindeki kan ürünlerinin salınımına katkıda bulunabilir. 1 GMH-IVH kombinasyonu, özellikle yüksek dereceli kanamadan sonra (derece III ve IV) PHH'ye neden olabilir1. PHH, ventriküloperitoneal şantın yerleştirilmesiyle tedavi edilebilir, ancak şant yerleşimi IVH'den kaynaklanabilecek beyin hasarını tersine çevirmez. Modern yenidoğan yoğun bakımı IVH2, 3 oranlarını düşürmüş olsa da, IVH'nin neden olduğu beyin hasarı veya hidrosefali için spesifik bir tedavi yoktur. IVH kaynaklı beyin hasarı ve PHH için önleyici tedavilerin geliştirilmesinde önemli bir sınırlama, IVH patofizyolojisinin tam olarak anlaşılamamasıdır.
Son zamanlarda, anahtar kan parçalanma ürünü hemoglobinin erken BOS seviyelerinin, yüksek dereceli IVH4'lü yenidoğanlarda daha sonra PHH gelişimi ile ilişkili olduğu gösterilmiştir. Ayrıca, demir işleme yolu proteinlerinin BOS seviyeleri - hemoglobin, ferritin ve bilirubin - yenidoğan IVH'de ventrikül boyutu ile ilişkilidir. Bu aynı zamanda, daha yüksek ventriküler BOS ferritin düzeylerinin daha büyük ventrikül boyutu5 ile ilişkili olduğu preterm PHH'li bebeklerin çok merkezli bir kohortunda da gösterilmiştir.
Bu çalışmada, beyin hasarı ve PHH'nin nicelleştirilmesine ve yeni terapötik stratejilerin test edilmesine olanak tanıyan beyin ventriküllerine hemoglobin enjeksiyonunu kullanarak IVH kaynaklı beyin hasarı ve hidrosefalinin klinik olarak ilgili bir modelini geliştirdik (Şekil 1) 6, 7. Bu IVH modeli, prosedür süresince genel anestezi altına alınan yenidoğan sıçan yavrularını kullanır. Kafa derisinde bir orta hat insizyonu yapılır ve kafatası işaretlerinden (bregma veya lambda) türetilen koordinatlar, enjeksiyon için lateral ventrikülleri hedeflemek için kullanılır. Bir infüzyon pompası kullanılarak yapılan yavaş enjeksiyon, hemoglobini ventriküle iletir. Bu protokolün kullanımı kolaydır, çok yönlüdür ve IVH'nin PHH ile sonuçlanan farklı bileşenlerini modelleyebilir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >0.3 mL insulin syringe</td>
			<td >BD Microfine + Insulin Syringe</td>
			<td >230-4533</td>
			<td >0.3-0.5 mL synringes will work</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >1.5 mL microtube</td>
			<td >USA Scientific</td>
			<td >1615-5500</td>
			<td>Lot No. K194642H -3 511</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >4.7T MRI</td>
			<td >Agilent/Varian</td>
			<td >4.7T/33 cm</td>
			<td>Agilent/Varian DirectDrive 4.7-T (200-MHz) MRI system</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >6-0 monofilament suture</td>
			<td >ETHICON</td>
			<td >667G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >9.4T MRI</td>
			<td >Bruker</td>
			<td >BioSpec 94/20</td>
			<td>Used in this protocol without the cryoprobe</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Analytical balance</td>
			<td >CCURIS Instruments</td>
			<td >W3200-320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Artificial CSF (aCSF)</td>
			<td >Tocris Bioscience</td>
			<td >3525</td>
			<td>Batch No: 72A</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Betadine</td>
			<td >Purdue Products L.P.</td>
			<td >301005-00</td>
			<td >NDC 67618-150-09</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Carprofen (injectable)</td>
			<td >Zoetis Inc.&#160;</td>
			<td>PI 4019448</td>
			<td>Rimadyl</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ethanol</td>
			<td >Decon Laboratories</td>
			<td >2701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Heating pad</td>
			<td >Sunbeam</td>
			<td >E12107-819</td>
			<td>UL 612A, Z-1228-001</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Hemoglobin</td>
			<td >MP Biomedicals</td>
			<td >100714</td>
			<td>LOT NO. SR02321</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Isoflurane</td>
			<td >Piramal Critical Care</td>
			<td >NDC 66794-017-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Isoflurane vaporizer</td>
			<td >VETEQUIP</td>
			<td >911103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Light for stereotactic insturment</td>
			<td >Dolan-Jenner industries</td>
			<td >Fiber-Lite MI-150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Microinjection syringe pump</td>
			<td >World Precision Instruments</td>
			<td >MICRO21</td>
			<td>Serial 184034 T08K</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >MRI software</td>
			<td >Bruker BioSpin</td>
			<td >Paravision 360 3.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Oxygen</td>
			<td >Airgas Healthcare</td>
			<td >UN1072</td>
			<td>LOT NUMBER S1432080XA02</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sprague Dawley rats</td>
			<td >Charles River Laboratories</td>
			<td >Strain code: 001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Stereotactic instrument</td>
			<td >KOPF Instuments</td>
			<td >Model 900LS Lazy Susan</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sterile cotton tipped applicator</td>
			<td >Fischerbrand</td>
			<td >23-400-118</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Surgical blade</td>
			<td >covetrus</td>
			<td >#10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Topical triple antibiotic</td>
			<td >Triple Antibiotic Ointment</td>
			<td >NDC 51672-2120-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ventricle volume quantification software</td>
			<td >ITK-SNAP</td>
			<td >ITK-SNAP 4.0.0 beta</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling neonatal intraventricular hemorrhage through intraventricular injection of hemoglobin

Yenidoğan intraventriküler kanaması (IVH) erken doğumun yaygın bir sonucudur ve beyin hasarına, posthemorajik hidrosefaliye (PHH) ve yaşam boyu nörolojik defisitlere yol açar. PHH geçici ve kalıcı beyin omurilik sıvısı (BOS) saptırma prosedürleri (sırasıyla ventriküler rezervuar ve ventriküloperitoneal şant) ile tedavi edilebilirken, IVH kaynaklı beyin hasarı ve hidrosefaliyi önlemek veya tedavi etmek için farmakolojik stratejiler yoktur. IVH'nin patofizyolojisini daha iyi anlamak ve farmakolojik tedavileri test etmek için hayvan modellerine ihtiyaç vardır. Mevcut yenidoğan IVH modelleri olsa da, güvenilir bir şekilde hidrosefali ile sonuçlananlar genellikle patolojinin modellenmesini zorlaştırabilecek veya gözlemlenen klinik fenotipte değişkenlik yaratabilecek büyük hacimli enjeksiyonların gerekliliği ile sınırlıdır.
Son klinik çalışmalar, hemoglobin ve ferritinin IVH sonrası ventrikül genişlemesine neden olduğunu göstermiştir. Burada, kan parçalanma ürünü hemoglobinin küçük hacimli intraventriküler enjeksiyonlarını kullanarak PHH'nin klinik fenotipini taklit eden basit bir hayvan modeli geliştiriyoruz. Ventriküler genişleme ve hidrosefaliyi güvenilir bir şekilde indüklemenin yanı sıra, bu model periventriküler ve beyaz cevher bölgelerinde beyaz cevher hasarı, inflamasyon ve immün hücre infiltrasyonu ile sonuçlanır. Bu yazıda, intraventriküler enjeksiyon kullanılarak yenidoğan sıçanlarda IVH-PHH modellemesi için klinik olarak alakalı, basit bir yöntem açıklanmakta ve enjeksiyon sonrası ventrikül boyutunun ölçülmesi için yöntemler sunulmaktadır.

Enjeksiyonun başarısı radyolojik ve immünohistokimyasal yollarla doğrulandı. Hemoglobin enjeksiyonu yapılan hayvanlar, MRG ile değerlendirildiğinde orta derecede akut ventrikülomegali geliştirdi (Şekil 2A), aCSF enjekte edilen hayvanlara kıyasla hemoglobin enjeksiyonundan 24 saat ve 72 saat sonra anlamlı derecede daha büyük lateral ventriküller ile (Şekil 2B, C). Enjeksiyondan 38 gün sonra hemoglobin enjekte edilen ve aCSF enj...

Watch this Scientific Journal Video about Modeling Neonatal Intraventricular Hemorrhage Through Intraventricular Injection of Hemoglobin at JoVE.com

Modeling Neonatal Intraventricular Hemorrhage Through Intraventricular Injection of Hemoglobin

Bu yazıda, insanlarda görülen patolojiyi taklit eden sıçan yavrularının kullanıldığı bir yenidoğan intraventriküler kanama modeli sunulmuştur.

İntraventriküler Hemoglobin Enjeksiyonu ile Yenidoğan İntraventriküler Kanamasının Modellenmesi

Neonatal intraventricular hemorrhage (IVH) is a common consequence of premature birth and leads to brain injury, posthemorrhagic hydrocephalus (PHH), and ...

Bu protokol önemlidir, çünkü IVH ile indüklenen beyin hasarı ve hidrosefalinin klinik olarak ilgili bir modelini geliştiriyoruz, ventriküllere hemoglobin enjeksiyonunu kullanıyoruz, bu da uygulamada ventrikül hacimlerinin daha sonra ölçülmesine izin veriyor, yeni terapötik stratejileri test etmek için. Bu tekniğin temel avantajı, özellikle hemoglobin ve demir yolu kan parçalanma ürünlerinin aracılık ettiği IVH patolojisinin incelenmesine izin vermesidir. Bu tekniğin kullanımı da kolaydır ve çok yönlüdür.Bu tekniğin etkileri, IVH patofizyolojisinin daha iyi anlaşılmasına ve IVH sonrası nörolojik sekellerin önlenmesi için klinik olarak ilgili tedavi stratejilerinin değerlendirilmesine olanak tanıdığından, hemorajik hidrosefali için tedavilerin geliştirilmesine doğru uzanmaktadır. Prosedürü gösteren, Avustralya Laboratuvarı'ndan bir Yardımcı Post-doc olan Sruthi Ramagiri olacak. Anestezi uygulanan sıçanı, burnu anestezi adaptöründe konumlandırılmış olarak stereotaktik aparata eğilimli olarak yerleştirmeye başlamak için.Ardından, dış işitsel meatus üzerindeki yırtılmayan kulak çubuklarını sıkarak kafayı sabitleyin. Kafayı temizlemek için, önce başın ortasındaki Betadine'e batırılmış steril pamuklu uçlu bir aplikatöre dokunun ve Betadine'i daireler halinde yaymak için dışa doğru hareket edin. Daha sonra işlemi% 70 etanol içine batırılmış bir aplikatör ile tekrarlayın.Daha sonra, bir neşter kullanarak, kafatasının bregmasını ortaya çıkarmak için başın ortasından dikey olarak aşağı doğru 0.3 santimetrelik bir kesi yapın. Daha sonra pamuklu uçlu bir aplikatör kullanarak alanı kurulayın. Stereotaktik enjektörü kurmak için, önceden hazırlanmış hemoglobin çözeltisini 0.3 veya 0.5 mililitrelik bir şırıngaya çekin ve şırıngayı stereotaktik enjektör sistemine yerleştirin.Ardından, stereotaktik enjektör arayüzünü açın ve enjeksiyon hacmini ve hız ayarlarını girmek için yapılandırma düğmesine tıklayın. Ses seviyesine tıklayın ve hacmi 20.000 nanolitre olarak ayarlayın. Ardından infüzyon hızına tıklayın ve hızı dakikada 8.000 nanolitre olarak ayarlayın.Yapılandırmadan çıkmak için konumu sıfırla düğmesine tıklayın. İğne ucunda küçük bir hemoglobin boncuğu görünene kadar demleme düğmesine tıklayarak iğne ucunu yıkayın, ardından boncuğu nazikçe çıkarmak için pamuk uçlu bir aplikatör kullanın. Hayvan enjeksiyonuna başlamak için, şırınganın mediolateral ve anteroposterior pozisyonlarını ayarlayarak stereotaktik enjeksiyon sisteminde bregmayı sıfır olarak ayarlayın.Daha sonra bregmadaki kafatasına hafifçe dokunmak için şırınga iğnesini indirin. Seçilen koordinatları belirledikten sonra, kafa derisini temizlemek için şırınga iğnesini kafatasının bir santimetre yukarısına kaldırın. Mediolateral ve anteroposterior koordinatları ayarlayın.Ardından, iğnenin kafatasına hafifçe dokunması için şırıngayı indirin ve dorsoventral koordinatı 30 saniyenin üzerine ayarlayın. Koordinatlar ayarlandıktan sonra, stereotaktik enjektör arayüzündeki çalıştır düğmesine tıklayarak enjeksiyona başlayın. Enjeksiyon bittikten sonra, çözeltinin geri akışını en aza indirmek için iğneyi iki dakika yerinde bırakın.Daha sonra, iğne ucu kafa derisinin iki santimetre yukarısında olana kadar şırıngayı dorsoventral koordinat boyunca iki dakika boyunca yavaşça çekin. Daha sonra stereotaktik enjektör kolunu ameliyat alanından uzağa döndürün ve kafa derisini 6-O monofilament sütür ile kapatın. MRG için, T2 ağırlıklı hızlı spin yankı dizisi seçerek T2 ağırlıklı görüntüleme gerçekleştirin.MRI parametrelerini metinde açıklandığı gibi ayarladıktan sonra, diziyi başlatmak için devam düğmesine tıklayın. Görüntü işleme ve beyin hacmi analizi için, segmentasyon yazılımında yerel T2 ağırlıklı verileri açın. Yanal ventrikülleri manuel olarak tanımlamak için boya fırçası moduna tıklayın ve kare fırça stilini seçin, ardından fırça boyutunu bir olarak ayarlayın.Ardından, düzen denetçisi'ne tıklayın, eksenel görünümü seçin ve sığdırmak için yakınlaştır'a tıklayın. Ardından imleci görüntünün üzerine yerleştirin ve lateral ventrikül boşluğunu izleyin ve doldurun. Son olarak, araç çubuğundaki segmentasyona tıklayın, ardından segmentlere ayrılmış hacimleri görüntülemek için hacim ve istatistiklere tıklayın.Hemoglobin enjeksiyonu yapılan hayvanlar, MRG ile değerlendirildiğinde orta derecede ventrikülomegali geliştirdi. ACSF enjekte edilen hayvanlara kıyasla, 24 saatte ve hemoglobin enjeksiyonundan 72 saat sonra önemli ölçüde daha büyük lateral ventriküllerle. İki sıçan grubu arasındaki lateral ventrikül hacmindeki fark 38 gün sonra anlamlı olmamasına rağmen, MRI taramaları hemoglobin alan sıçanların% 44'ünün hala çözülmemiş ventrikülomegali olduğunu göstermiştir.Ayrıca, ACSF ile karşılaştırıldığında, hemoglobin enjeksiyonu 38 gün sonra beyaz cevher hacminde önemli bir azalmaya neden olmuştur. Hemoglobin ayrıca, hemoglobin enjekte edildikten sonra pro-inflamatuar sitokin tümör nekroz faktörü alfanın önemli ölçüde daha yüksek seviyesinden açıkça görüldüğü gibi, in vivo bir enflamatuar yanıtı teşvik etti, ancak salin veya tam kan değil. Ayrıca, glial fibriller asidik proteinin immünohistokimyasal boyanması, hemoglobin enjeksiyonundan sonra, ACSF enjeksiyonundan sonra astrositlerin aktivasyonunun önemli ölçüde daha yüksek olduğunu ortaya koymuştur.Bu prosedürü denerken hatırlanması gereken en önemli şey, lateral ventriküllere hemoglobin verilmesini sağlamak için doğru enjeksiyon koordinatlarını ayarlamaktır. Bu prosedürü takiben, BOS izleyicileri, BOS dolaşımındaki değişiklikleri ve IVH'yi takip eden efflux modellerini değerlendirmek için BOS boşluğuna teslim edilebilir. Bu ek yöntem, IVH PHH'de BOS akışının nasıl değiştirildiğini ele almaktadır.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Autologous Blood Injection to Model Spontaneous Intracerebral Hemorrhage in Mice

Farelerde Spontan İntraserebral Kanama Model Otolog Kan Enjeksiyon

Investigation of the pathophysiology of injury after intracerebral
hemorrhage (ICH) requires a reproducible animal model.  While ICH
accounts for 10-15% ...

Neonatal Subventricular Zone Electroporation

Yenidoğan subventricular Bölge Elektroporasyon

Neural stem cells (NSCs) line the postnatal lateral ventricles and give rise to multiple cell types which include neurons, astrocytes, and ependymal ...

Direct Intraventricular Delivery of Drugs to the Rodent Central Nervous System

Kemirgen Merkezi Sinir Sistemi İlaçların doğrudan Intraventriküler teslim

Due to an inability to cross the blood brain barrier, certain drugs need to be directly delivered into the central nervous system (CNS). Our lab focuses ...

Neonatal Pial Surface Electroporation

Yenidoğan Pial Yüzey Elektroporasyon

Over the past several years the pial surface has been identified as a germinal niche of importance during embryonic, perinatal and adult neuro- and ...

Intracerebroventricular Viral Injection of the Neonatal Mouse Brain for Persistent and Widespread Neuronal Transduction

Kalıcı ve yaygın Nöronal İletim için Yenidoğan Fare Beyin intraserooroventriküler Viral Enjeksiyon

With the pace of scientific advancement accelerating rapidly, new methods are needed for experimental neuroscience to quickly and easily manipulate gene ...

Intracerebroventricular and Intravascular Injection of Viral Particles and Fluorescent Microbeads into the Neonatal Brain

Yenidoğan Beyin içine Viral Parçacıklar ve Floresan mikro boncuklar intraserebroventriküler ve İntravasküler Enjeksiyon

In the study on the pathogenesis of viral encephalitis, the infection method is critical. The first of the two main infectious routes to the brain is the ...

Establishing Mouse Models for Zika Virus-induced Neurological Disorders Using Intracerebral Injection Strategies: Embryonic, Neonatal, and Adult

İntraserebral enjeksiyon stratejileri kullanarak Zika virüs kaynaklı nörolojik bozukluklar için fare modelleri oluşturma: embriyonik, Yenidoğan ve yetişkin

The Zika virus (ZIKV) is a flavivirus currently endemic in North, Central, and South America. It is now established that the ZIKV can cause microcephaly ...

A Volumetric Method for Quantification of Cerebral Vasospasm in a Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage

Subaraknoid kanama, bir fare modeli serebral Vasospasm miktar hacimsel bir yöntemi

Subarachnoid hemorrhage (SAH) is a subtype of hemorrhagic stroke. Cerebral vasospasm that occurs in the aftermath of the bleeding is an important factor ...

Minimally Invasive Endoscopic Intracerebral Hemorrhage Evacuation

Minimal İnvaziv Endoskopik İntraserebral Kanama Tahliyesi

Intracerebral hemorrhage (ICH) is a subtype of stroke with high mortality and poor functional outcomes, largely because there are no evidence-based ...

Double Direct Injection of Blood into the Cisterna Magna as a Model of Subarachnoid Hemorrhage

Subaraknoid Kanama Modeli olarak Cisterna Magna içine Kan Çift Doğrudan Enjeksiyon

Among strokes, subarachnoid hemorrhage (SAH) consecutive to the rupture of a cerebral arterial aneurysm represents 5-9% but is responsible for about 30% ...