Name: quantification of subcellular glycogen distribution in skeletal muscle fibers using transmission electron microscopy
Uploaded: 2022-02-07T13:00:00
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이 작업은 스웨덴 올림픽 위원회의 지원을 받았다.

인간 생검된 골격근 샘플을 사용하는 본 프로토콜은 남부 덴마크를 위한 건강 연구 윤리에 관한 지역 위원회(The Regional Committees on Health Research Ethics for Southern Denmark, S-20170198)에 의해 승인되었다. 근육 생검은 국소 마취 후 흡입과 함께 베르그스트롬 바늘을 사용하여 혈관측방 근으로부터 피부 절개를 통해 얻어졌으며 피하로 주어졌다(절개당 리도카인 1-3 mL 2%). 분리된 전체 래트 근육이 사용...

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	<li>Prats, C., Graham, T. E., Shearer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dynamic+life+of+the+glycogen+granule.">The dynamic life of the glycogen granule.</a> Journal of Biological Chemistry. 293 (19), 7089-7098 (2018).</li><li>Gollnick, P. D., Piehl, K., Saltin, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+glycogen+depletion+pattern+in+human+muscle+fibres+after+exercise+of+varying+intensity+and+at+varying+pedalling+rates.">Selective glycogen depletion pattern in human muscle fibres after exercise of varying intensity and at varying pedalling rates.</a> Journal of Physiology. 241 (1), 45-57 (1974).</li><li>James, J. 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Electron microscopic study of the negative stains of particulate glycogen.</a> Journal of Ultrastructure Research. 6, 141-163 (1962).</li><li>Thiery, J. -. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Demonstration+of+polysaccharides+on+thin+sections+by+electron+microscopy.">Demonstration of polysaccharides on thin sections by electron microscopy.</a> Journal of Microscopy. 6, 987-1018 (1967).</li><li>De Bruijn, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glycogen,+its+chemistry+and+morphologic+appearance+in+the+electron+microscope.+I.+A+modified+OsO4+fixative+which+selectively+contrasts+glycogen.">Glycogen, its chemistry and morphologic appearance in the electron microscope. I. A modified OsO4 fixative which selectively contrasts glycogen.</a> Journal of Ultrastructural Research. 42 (1), 29-50 (1973).</li><li>Robinson, J. M., Karnovsky, M. L., Karnovsky, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glycogen+accumulation+in+polymorphonuclear+leukocytes,+and+other+intracellular+alterations+that+occur+during+inflammation.">Glycogen accumulation in polymorphonuclear leukocytes, and other intracellular alterations that occur during inflammation.</a> The Journal of Cell Biology. 95 (3), 933-942 (1982).</li><li>Rybicka, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glycosomes+-+the+organelles+of+glycogen+metabolism.">Glycosomes - the organelles of glycogen metabolism.</a> Tissue and Cell. 28 (3), 253-265 (1996).</li><li>Gadisseux, J. F., Evrard, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glial-neuronal+relationship+in+the+developing+central+nervous+system.+A+histochemical-electron+microscope+study+of+radial+glial+cell+particulate+glycogen+in+normal+and+reeler+mice+and+the+human+fetus.">Glial-neuronal relationship in the developing central nervous system. A histochemical-electron microscope study of radial glial cell particulate glycogen in normal and reeler mice and the human fetus.</a> Developmental Neuroscience. 7 (1), 12-32 (1985).</li><li>Frid&#233;n, J., Seger, J., Ekblom, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implementation+of+periodic+acid-thiosemicarbazide-silver+proteinate+staining+for+ultrastructural+assessment+of+muscle+glycogen+utilization+during+exercise.">Implementation of periodic acid-thiosemicarbazide-silver proteinate staining for ultrastructural assessment of muscle glycogen utilization during exercise.</a> Cell Tissue Research. 242 (1), 229-232 (1985).</li><li>Marchand, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+subcellular+glycogen+in+resting+human+muscle:+granule+size,+number,+and+location.">Quantification of subcellular glycogen in resting human muscle: granule size, number, and location.</a> Journal of Applied Physiology. 93 (5), 1598-1607 (2002).</li><li>Marchand, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assessment+of+human+muscle+glycogen+granules+size+and+number+in+subcellular+locations+during+recovery+from+prolonged+exercise.">Quantitative assessment of human muscle glycogen granules size and number in subcellular locations during recovery from prolonged exercise.</a> Journal of Physiology. 580, 617-628 (2007).</li><li>Sun, R. 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D., Saltin, B., &#216;rtenblad, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+skeletal+muscle+glycogen+utilization+in+exhaustive+exercise:+role+of+subcellular+localization+and+fibre+type.">Human skeletal muscle glycogen utilization in exhaustive exercise: role of subcellular localization and fibre type.</a> Journal of Physiology. 589 (11), 2871-2885 (2011).</li><li>Weibel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Stereological Methods. Vol. 2: Theoretical Foundations. , (1980).</li><li>Gundersen, H. 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D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+depletion+of+glycogen+with+supramaximal+exercise+in+human+skeletal+muscle+fibres.">Local depletion of glycogen with supramaximal exercise in human skeletal muscle fibres.</a> Journal of Physiology. 595 (9), 2809-2821 (2017).</li><li>Stanley, W. C., Recchia, F. A., Lopaschuk, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myocardial+substrate+metabolism+in+the+normal+and+failing+heart.">Myocardial substrate metabolism in the normal and failing heart.</a> Physiological Reviews. 85 (3), 1093-1129 (2005).</li></ol>

이 방법의 중요한 단계는 고정 후 동안 칼륨 페로시아나이드에 의해 환원 된 오스뮴을 사용하는 것입니다. 글리코겐 검출을 위한 이 변형된 고정제의 선택성은 화학에 의해 완전히 설명될 수 없지만, 글리코겐이 없는 것으로 알려진 조직 또는 세포외 공간에서11에서 그러한 입자의 검출이 없음을 입증하는 실험 발견도 포함한다.
중요한 파라미터는 추정치의...

글리코겐 입자는 포도당과 다양한 관련 단백질1의 분지형 중합체로 구성되며 높은 대사 요구시 중요한 연료를 구성합니다2. 널리 인식되지는 않지만, 글리코겐 입자는 또한 국소 연료를 구성하며, 일부 세포 하부 공정은 혈장 글루코스 및 지방산과 같은 다른 더 오래 지속되는 연료의 가용성에도 불구하고 글리코겐을 우선적으로 이용한다3,4.
글리코겐을 세포내 특이적 국부적 연료로서 저장하는 것의 중요성은 여러 리뷰5,6에서 논의되었으며, 주로 투과 전자 현미경(TEM)7,8에 의한 글리코겐의 세포하 분포에 대한 초기 문서 중 일부에 기초한다. 첫 번째 연구는 조직 화학 염색 기술에서 음성 및 양성 염색에 이르기까지 글리코겐의 대비를 높이기 위해 다른 프로토콜을 사용했습니다.9,10. 중요한 방법론 적 개발은 칼륨 페로시아나이드 환원 osmium11,12,13,14를 사용한 정제 된 사후 고정 프로토콜이었으며, 이는 글리코겐 입자의 대비를 크게 향상 시켰습니다. 이 세련된 프로토콜은 운동으로 인한 글리코겐 고갈에 대한 선구적인 연구15에는 사용되지 않았지만 그레이엄과 동료들에 의해 다시 도입되었습니다16,17.
2차원 이미지에 기초하여, 글리코겐의 세포하 분포는 가장 흔히 세 개의 풀에 위치한 글리코겐 입자로서 기술된다: 아사르콜렘말(표면막 바로 아래), 인터미오피브릴라(myofibrils 사이), 또는 근오피브릴라(myofibrils 내). 그러나, 글리코겐 입자는 또한 예를 들어, 사르코플라스마 망상7 또는 nuclei18과 관련된 것으로 기술될 수 있다. 세포내 분포에 더하여, TEM-추정된 글리코겐 함량의 이점은 또한 단일 섬유 수준에서 정량화가 수행될 수 있다는 것이다. 이를 통해 섬유 대 섬유 변동성을 조사하고 미토콘드리아와 지질 방울과 같은 섬유 유형 및 세포 구성 요소와의 상관 관계 분석을 수행 할 수 있습니다.
여기에서, 골격근 섬유에서 TEM-추정된 섬유 유형-특이적 용적 함량에 대한 프로토콜은 골격근 섬유에서 글리코겐의 세 가지 공통 서브 세포 풀(subsarcolemmal, intermyofibrillar, and intramyofibrillar)에 대해 기술된다. 상기 방법은 인간19, rats20, 및 mice21로부터의 골격근에 적용되었다; 새와 물고기뿐만 아니라22; 및 래트로부터의 심근세포23.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1,2-Propylene oxide</td>
			<td>Merck</td>
			<td>75-56-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding 812 resin medium kit</td>
			<td>Taab</td>
			<td>T031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde solution 25%</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.04239.0250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ITEM</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>Imaging software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica EM AC20</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td>Automatic contrasting system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OSIS Veleta digital camera</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmium tetroxide 4% solution</td>
			<td>Polysciences</td>
			<td>0972A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Philips CM 100 Transmission EM</td>
			<td>Philips</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium hexacyanoferrate (II) trihydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>455989-245G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium cacodylatbuffer 0,2 M ph 7.4</td>
			<td>Ampliqon.com</td>
			<td>AMPQ40989.0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra-microtome Leica UC7</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrostain lead citrate 3%, stabilised solution</td>
			<td>Leica</td>
			<td>16707235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uranyl acetate dihydrate</td>
			<td>Polysciences</td>
			<td>6159-44-0</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantification of subcellular glycogen distribution in skeletal muscle fibers using transmission electron microscopy

투과 전자 현미경을 사용하면 개별 근육 섬유를 포함하는 고정 샘플의 고해상도 이미지를 얻을 수 있습니다. 이것은 부피 분율, 표면적 대 부피비, 형태학 및 상이한 아세포 구조의 물리적 접촉 부위와 같은 초구조적 측면의 정량화를 가능하게 한다. 1970년대에는 세포에서 글리코겐의 강화된 염색을 위한 프로토콜이 개발되었고, 투과 전자 현미경을 이용한 글리코겐 및 글리코겐 입자 크기의 세포내 국소화에 관한 일련의 연구를 위한 길을 열었다. 대부분의 분석은 글리코겐이 근육 섬유 내에 균질하게 분포되어 있는 것처럼 해석하고 단 하나의 값(예를 들어, 평균 농도)만을 제공하는 반면, 투과 전자 현미경 검사는 글리코겐이 별개의 세포 하부 구획에 위치한 분리된 글리코겐 입자로서 저장된다는 것을 밝혀냈다. 여기서, 조직 수집으로부터 개별 골격근 섬유의 별개의 세포내 구획에서 글리코겐의 부피 분획 및 입자 직경의 정량적 결정을 위한 단계별 프로토콜이 기재되어 있다. 1) 조직 표본 수집 및 얼룩 방법, 2) 이미지 분석 및 데이터 처리 수행, 3) 추정치의 정밀도 평가, 4) 근섬유 유형 차별, 5) 방법론적 함정 및 한계에 대한 고려 사항이 포함됩니다.

이 프로토콜을 사용하면 글리코겐 입자가 검고 뚜렷하게 나타납니다 (그림 1 및 그림 2). 글리코겐의 정상 값은 도 3에 묘사되어 있다. 이 데이터는 다른 이전 연구에서 수집 된 41 명의 건강한 젊은 남성의 총 362 섬유를 기반으로합니다.19,24,29,30,31.<sup cl...

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Quantification of Subcellular Glycogen Distribution in Skeletal Muscle Fibers using Transmission Electron Microscopy

수정 된 고정 후 절차는 조직에서 글리코겐 입자의 대비를 증가시킵니다. 이 논문은 조직을 처리하고, 이미징을 수행하고, 입체 학적 방법을 사용하여 골격근에서 섬유 유형 별 세포 내 글리코겐 분포에 대한 편향되지 않은 정량적 데이터를 얻는 방법을 설명하는 단계별 프로토콜을 제공합니다.

투과 전자 현미경을 이용한 골격근섬유의 세포하 글리코겐 분포의 정량화

With the use of transmission electron microscopy, high-resolution images of fixed samples containing individual muscle fibers can be obtained. This ...

단일 세포 및 아세포 조직에서 글리코겐 함량의 측정은 대부분의 세포 유형에서 단일 세포가 변화하는 생리적 조건 및 질병에 다르게 적응하기 때문에 중요합니다. 따라서이 기술의 가장 큰 장점은 투과 전자 현미경에서 매우 높은 해상도입니다. 이것은 국소화된 아세포 구조를 가질 가능성을 개선시키고, 또한 여기에서 이 기술에서의 이러한 함량에서, 글리코겐 염색이 항체가 없는 것이 중요하다.따라서 우리는 걱정할 특이성이 없습니다. 글리코겐에 대한 더 나은 대조를 얻으려면 페로시아나이드 칼륨 대신 칼륨 페로시아나이드 1.5 %를 사용하십시오. 2 밀리리터 마이크로 센트레이션 튜브에서 0.1 몰 소듐 카코딜레이트 완충액에 2.5 % 글루타르 알데히드를 첨가하여 1.6 밀리리터의 1 차 고정 용액을 준비하십시오.최대 14 일 동안 섭씨 5도에 보관하십시오. 근육 생검 또는 모든 방향에서 한 밀리미터의 최대 직경을 가지며 단면보다 세로 방향으로 더 긴 전체 근육에서 작은 표본을 분리하십시오. 시편을 차가운 일차 고정 용액이 들어있는 튜브에 넣으십시오.24 시간 동안 섭씨 다섯 도에 보관하십시오. 그런 다음 시편을 0.1몰 소듐 카코딜레이트 완충액으로 네 번 세척한다. 전사 피펫을 사용하여 튜브에서 사용 된 버퍼를 제거하고 시편을 손대지 않은 상태로 유지하고 신선한 버퍼를 추가하십시오.시편을 0.1몰 소듐 카코딜레이트 완충액에 1%오스뮴 테트록사이드와 1.5%칼륨 페로시아나이드로 섭씨 4도에서 120분 동안 고정시킨 후 고정시킨다. 시편을 실온에서 이중 증류수로 두 번 헹구십시오. 실온에서 등급화된 일련의 에탄올에 침수하여 탈수시킨다.언급된 부피비를 사용하여 실온에서 프로필렌 옥사이드 및 에포시드 수지 등급화된 혼합물로 시편을 침윤시킨다. 다음날 시편을 몰드에 100 % 신선한 에포시 성 수지에 넣고 섭씨 60도에서 48 시간 동안 중합하십시오. 초미세 전극 홀더에 시편 블록을 장착하십시오.면도날로 표면의 블록을 트리밍하여 조직 수준에 도달하십시오. 샘플 앞에 다이아몬드 나이프를 장착하고 샘플 표면을 나이프에 평행하게 정렬합니다. 샘플의 방향을 확인하기 위해 다이아몬드 나이프로 한 마이크로 미터 두께의 반 얇은 섹션을 제작하십시오.가벼운 현미경으로 관찰하기 위해 톨루이딘 블루로 반 얇은 부분을 얼룩지게하십시오. 그런 다음 블록을 더 트리밍하여 관심 영역을 줄여 적절한 초박형 섹션을 얻으십시오. 두 번째 다이아몬드 나이프로 60 ~ 70 나노 미터 두께의 초박형 섹션을 자릅니다.완벽한 루프를 사용하여 하나의 전체 구리 그리드에서 하나 ~ 두 개의 섹션을 수집합니다. 섹션을 대조하기 위해 그리드를 우라닐 아세테이트 용액에 20 분 동안 담그고 그리드를 이중 증류수로 세척 한 다음 그리드를 납 시트레이트에 15 분 동안 담근 다음 그리드를 이중 증류수로 다시 세척하십시오. 전송 전자 현미경 컴퓨터 및 이미지 녹화 소프트웨어를 켜고 디지털 슬로우 스캔 CCD 카메라 및 관련 이미징 소프트웨어로 디지털 이미지를 기록하십시오.현미경 단계에서 여러 섹션이있는 그리드를 삽입 한 후 처음에는 낮은 배율로 그리드를 스크린하여 최상의 품질의 섹션을 선택하고 근육 섬유의 방향을 결정합니다. 다음으로, 30, 000 이상의 배율에서 이미지를 단면의 주변 섬유에 중심을 둔 빔과 함께 원하는 배율로 한 초 노출 시간으로 이미지를 기록합니다. 무작위 봇 체계적으로 이미지가 섬유의 길이와 너비에 걸쳐 분포되어 편향되지 않은 결과를 얻고 여섯 ~ 10개의 섬유가 이미징될 때까지 이미징을 반복하십시오.파일을 클릭 한 다음 열어 이미지 J로 이미지를 가져옵니다. 분석을 클릭하여 이미지의 원래 크기와 일치하도록 전역 배율을 설정한 다음 배율을 설정합니다. 100 % 확대하려면 이미지를 클릭하고 확대 / 축소로 이동하여 클릭하십시오.도구 메뉴에서 직선 도구를 사용하여 myofibrillar 공간의 이미지 당 하나의 Z 디스크의 두께를 측정하고 여섯 ~ 10 개의 섬유 각각의 평균 Z 디스크 두께를 계산하십시오. 세그먼트 선 도구를 사용하여 아사르콜렘말 영역 바로 아래에 보이는 최외곽 근피브릴의 길이를 측정합니다. 격자를 삽입하려면 분석을 클릭하고 도구를 선택한 다음 격자를 선택합니다.이제 점 당 면적을 32, 400 평방 나노 미터로 설정하십시오. 십자가가 아사르콜렘말 글리코겐에 부딪히는 12개의 아사르콜렘말 이미지에서 사용 가능한 길이 내의 히트 수를 계산합니다. 분석을 클릭하여 그리드를 삽입 한 다음 도구를 선택한 다음 그리드를 선택하고 점당 면적을 160, 000 평방 나노 미터로 설정합니다.십자가가 myofibrillar 내부 공간에 부딪히는 12 번째 myofibrillar 이미지에서 히트 수를 계산하십시오. 그런 다음 다시 그리드를 삽입하려면 분석을 클릭하고 도구를 선택한 다음 그리드를 선택하십시오. 이제 점 당 면적을 3, 600 평방 나노 미터로 설정하십시오.십자가가 myofibrillar 내 글리코겐에 부딪히는 12번째 myofibrillar 이미지에서 히트의 수를 계산합니다. 분석을 클릭하여 그리드를 삽입 한 다음 도구를 선택한 다음 그리드를 선택하고 점당 면적을 32, 400 평방 나노 미터로 설정합니다. 십자가가 intermyofibrillar 글리코겐에 부딪히는 12번째 myofibrillar 이미지에서 히트의 수를 계산합니다.32, 400 평방 나노 미터 그리드를 사용하여 글리코겐 입자를 무작위로 선택하고 왼쪽 상단 사각형으로 시작하여 필요한 경우 왼쪽으로 이동하십시오. 직선 도구를 사용하여 12개의 이미지 각각에 대해 각 풀의 무작위로 선택된 다섯 개의 글리코겐 입자의 직경을 측정하여 섬유당 풀당 평균 60개의 입자를 얻습니다. 이 그림은 세 개의 글리코겐 풀의 정상 값을 보여줍니다.인터미오피브릴라 글리코겐 값이 정상에 가깝게 분포하는 것을 관찰할 수 있는 반면, 근박근 내 글리코겐과 아사르콜렘말의 글리코겐 둘 다 섬유가 때때로 과도한 양의 글리코겐을 갖는 비뚤어진 분포를 보인다. 모든 단계 중에서 칼륨 페로 시아 나이드를 사용하는 것이 매우 중요합니다. 글리코겐의 분석은 미토콘드리온 및 지질 방울의 분석과 결합 될 수 있으며, 이는 다른 주요 대사 성분이 글리코겐 및 근육 건강과 어떻게 관련되는지에 대한 우리의 이해를 향상시킬 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Method to Visualize and Analyze Membrane Interacting Proteins by Transmission Electron Microscopy

방법은 시각화 및 투과 전자 현미경에 의해 막 상호 작용하는 단백질을 분석하는

Monotopic proteins exert their function when attached to a membrane surface, and such interactions depend on the specific lipid composition and on the ...

연구

생화학

Improved Protocol for Chromatin Immunoprecipitation from Mouse Skeletal Muscle

마우스 골격 근육에서 Chromatin Immunoprecipitation에 대 한 향상 된 프로토콜

We describe an efficient and reproducible protocol for the preparation of chromatin from adult mouse skeletal muscle, a physically resistant tissue with a ...

Analysis of &#946;-Amyloid-induced Abnormalities on Fibrin Clot Structure by Spectroscopy and Scanning Electron Microscopy

Analysis of ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-Amyloid-induced Abnormalities on Fibrin Clot Structure by Spectroscopy and Scanning Electron Microscopy

분광학 그리고 스캐닝 전자 현미경 검사 법에 의해 섬유 소 혈전 구조에 β 아 밀 로이드 유도 비정상의 분석

This article presents methods for generating in vitro fibrin clots and analyzing the effect of beta-amyloid (A&#946;) protein on clot formation and ...

Preparation of Sample Support Films in Transmission Electron Microscopy using a Support Floatation Block

지원 부동 블록을 사용하여 전송 전자 현미경 검사법에서 샘플 지원 필름의 준비

Structure determination by cryo-electron microscopy (cryo-EM) has rapidly grown in the last decade; however, sample preparation remains a significant ...

Micropatterning Transmission Electron Microscopy Grids to Direct Cell Positioning within Whole-Cell Cryo-Electron Tomography Workflows

전세포 극저온-전자 단층 촬영 워크플로우 내의 직접 세포 위치지정에 마이크로패턴 전송 전자 현미경 검사기 그리드

Whole-cell cryo-electron tomography (cryo-ET) is a powerful technology that is used to produce nanometer-level resolution structures of macromolecules ...

Measurement of Protein Import Capacity of Skeletal Muscle Mitochondria

골격 근육 미토콘드리아의 단백질 수입 능력 측정

Mitochondria are key metabolic and regulatory organelles that determine the energy supply as well as the overall health of the cell. In skeletal muscle, ...

Determination of Glucan Chain Length Distribution of Glycogen Using the Fluorophore-Assisted Carbohydrate Electrophoresis (FACE) Method

Determination of Glucan Chain Length Distribution of Glycogen Using the Fluorophore-Assisted Carbohydrate Electrophoresis FACE Method

형광단 보조 탄수화물 전기영동(FACE) 방법을 이용한 글리코겐의 글루칸 사슬 길이 분포 결정

Glycogen particles are branched polysaccharides composed of linear chains of glucosyl units linked by &#945;-1,4 glucoside bonds. The latter are attached ...

Routine Collection of High-Resolution cryo-EM Datasets Using 200 KV Transmission Electron Microscope

200KV 투과 전자 현미경을 사용한 고해상도 cryo-EM 데이터 세트의 일상적인 수집

Cryo-electron microscopy (cryo-EM) has been established as a routine method for protein structure determination during the past decade, taking an ...

High-Throughput Quantification of the Synthesis and Distribution of mtDNA

High-Throughput Image-Based Quantification of Mitochondrial DNA Synthesis and Distribution

High-Throughput Image-Based Quantification of Mitochondrial DNA Synthesis and Distribution (Video) | JoVE 

미토콘드리아 DNA 합성 및 분포의 고처리량 이미지 기반 정량화

The vast majority of cellular processes require a continuous supply of energy, the most common carrier of which is the ATP molecule. Eukaryotic cells ...