Name: isolation of rat adipose tissue mesenchymal stem cells for differentiation into insulin-producing cells
Uploaded: 2022-08-29T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Rat Adipose Tissue Mesenchymal Stem Cells for Differentiation into Insulin-producing Cells at JoVE.com

אנו מודים לד"ר רודה סמיר מוחמד, MSc, מומחית לווטרינריה, הפקולטה לרוקחות, האוניברסיטה הבריטית של מצרים (BUE) על שסייעה בניתוח החולדות.
כמו כן, ברצוננו להודות ולהעריך את מאמציה של הפקולטה לתקשורת המונים, האוניברסיטה הבריטית במצרים (BUE) להפקה ועריכה של הסרטון של כתב יד זה.
ברצוננו להודות למיס פאטמה מסעוד, MSc, עוזרת מרצה לאנגלית, האוניברסיטה הבריטית במצרים (BUE) על התיקון וההגהה בשפה האנגלית של כתב היד.
עבודה זו מומנה בחלקה על ידי המרכז למחקר ופיתוח תרופות (CDRD), הפקולטה לרוקחות, האוניברסיטה הבריטית במצרים (BUE), קהיר, מצרים.

כל הניסויים בוצעו על פי ההנחיות המאושרות, וכל ההליכים אושרו על ידי הוועדה האתית של הפקולטה לרוקחות, האוניברסיטה הבריטית במצרים (BUE), קהיר, מצרים. פרוטוקול הבידוד Ad-MSC אומץ על ידי לופז וספנסר, עם שינויים15.
1. בידוד של Ad-MSCs מרפידות שומן אפידידימליות של חולדות<...

<ol>
	<li>Hmadcha, A., Martin-Montalvo, A., Gauthier, B. R., Soria, B., Capilla-Gonzalez, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+potential+of+mesenchymal+stem+cells+for+cancer+therapy.">Therapeutic potential of mesenchymal stem cells for cancer therapy.</a> Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 8, 43 (2020).</li><li>Kamal, M., Kassem, D., Haider, K. H., Haider, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sources+and+therapeutic+strategies+of+mesenchymal+stem+cells+in+regenerative+medicine.">Sources and therapeutic strategies of mesenchymal stem cells in regenerative medicine.</a> Handbook of Stem Cell Therapy. , 1-28 (2022).</li><li>Jiang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pluripotency+of+mesenchymal+stem+cells+derived+from+adult+marrow.">Pluripotency of mesenchymal stem cells derived from adult marrow.</a> Nature. 418 (6893), 41-49 (2002).</li><li>De Ugarte, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+expression+of+stem+cell+mobilization-associated+molecules+on+multi-lineage+cells+from+adipose+tissue+and+bone+marrow.">Differential expression of stem cell mobilization-associated molecules on multi-lineage cells from adipose tissue and bone marrow.</a> Immunology Letters. 89 (2-3), 267-270 (2003).</li><li>Mosna, F., Sensebe, L., Krampera, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+bone+marrow+and+adipose+tissue+mesenchymal+stem+cells:+A+user's+guide.">Human bone marrow and adipose tissue mesenchymal stem cells: A user's guide.</a> Stem Cells and Development. 19 (10), 1449-1470 (2010).</li><li>Camara, B. O. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+canine+adipose+mesenchymal+stem+cells+into+insulin-producing+cells:+Comparison+of+different+culture+medium+compositions.">Differentiation of canine adipose mesenchymal stem cells into insulin-producing cells: Comparison of different culture medium compositions.</a> Domestic Animal Endocrinology. 74, 106572 (2021).</li><li>Ren, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+expansion,+and+differentiation+of+goat+adipose-derived+stem+cells.">Isolation, expansion, and differentiation of goat adipose-derived stem cells.</a> Research in Veterinary Science. 93 (1), 404-411 (2012).</li><li>Vallee, M., Cote, J. F., Fradette, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose-tissue+engineering:+Taking+advantage+of+the+properties+of+human+adipose-derived+stem/stromal+cells.">Adipose-tissue engineering: Taking advantage of the properties of human adipose-derived stem/stromal cells.</a> Pathologie Biologie. 57 (4), 309-317 (2009).</li><li>Dominici, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimal+criteria+for+defining+multipotent+mesenchymal+stromal+cells.+The+International+Society+for+Cellular+Therapy+position+statement.">Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement.</a> Cytotherapy. 8 (4), 315-317 (2006).</li><li>Gong, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cells+stimulate+intestinal+stem+cells+to+repair+radiation-induced+intestinal+injury.">Mesenchymal stem cells stimulate intestinal stem cells to repair radiation-induced intestinal injury.</a> Cell Death &amp; Disease. 7 (9), 2387 (2016).</li><li>Dai, R., Wang, Z., Samanipour, R., Koo, K. I., Kim, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose-derived+stem+cells+for+tissue+engineering+and+regenerative+medicine+applications.">Adipose-derived stem cells for tissue engineering and regenerative medicine applications.</a> Stem Cells International. 2016, 6737345 (2016).</li><li>Ceccarelli, S., Pontecorvi, P., Anastasiadou, E., Napoli, C., Marchese, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunomodulatory+effect+of+adipose-derived+stem+cells:+The+cutting+edge+of+clinical+application.">Immunomodulatory effect of adipose-derived stem cells: The cutting edge of clinical application.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 8, 236 (2020).</li><li>Karp, J., Leng Teo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cell+homing:+The+devil+is+in+the+details.">Mesenchymal stem cell homing: The devil is in the details.</a> Cell Stem Cell. 4 (3), 206-216 (2009).</li><li>Andaloussi, S., Mager, I., Breakefield, X. O., Wood, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicles:+Biology+and+emerging+therapeutic+opportunities.">Extracellular vesicles: Biology and emerging therapeutic opportunities.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 12 (5), 347-357 (2013).</li><li>Lopez, M. J., Spencer, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+adult+rat+adipose+tissue-derived+stromal+cell+isolation+and+differentiation.">In vitro adult rat adipose tissue-derived stromal cell isolation and differentiation.</a> Methods in Molecular Biology. 702, 37-46 (2011).</li><li>Karnieli, O., Izhar-Prato, Y., Bulvik, S., Efrat, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+insulin-producing+cells+from+human+bone+marrow+mesenchymal+stem+cells+by+genetic+manipulation.">Generation of insulin-producing cells from human bone marrow mesenchymal stem cells by genetic manipulation.</a> Stem Cells. 25 (11), 2837-2844 (2007).</li><li>Yang, Y. K., Ogando, C. R., Wang See, C., Chang, T. Y., Barabino, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+phenotype+and+differentiation+potential+of+human+mesenchymal+stem+cells+aging+in+vitro.">Changes in phenotype and differentiation potential of human mesenchymal stem cells aging in vitro.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 9 (1), 131 (2018).</li><li>Lee, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multipotent+stromal+cells+from+human+marrow+home+to+and+promote+repair+of+pancreatic+islets+and+renal+glomeruli+in+diabetic+NOD/scid+mice.">Multipotent stromal cells from human marrow home to and promote repair of pancreatic islets and renal glomeruli in diabetic NOD/scid mice.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (46), 17438-17443 (2006).</li><li>Gao, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overexpression+of+apelin+in+Wharton's+jelly+mesenchymal+stem+cell+reverses+insulin+resistance+and+promotes+pancreatic+&#946;+cell+proliferation+in+type+2+diabetic+rats.">Overexpression of apelin in Wharton's jelly mesenchymal stem cell reverses insulin resistance and promotes pancreatic &#946; cell proliferation in type 2 diabetic rats.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 9 (1), 339 (2018).</li><li>Ghoneim, M. A., Refaie, A. F., Elbassiouny, B. L., Gabr, M. M., Zakaria, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+mesenchymal+stromal/stem+cells+to+insulin-producing+cells:+Progress+and+challenges.">From mesenchymal stromal/stem cells to insulin-producing cells: Progress and challenges.</a> Stem Cell Reviews and Reports. 16 (6), 1156-1172 (2020).</li><li>Kassem, D. H., Kamal, M. M., El-Kholy, A. E. -. L. G., El-Mesallamy, H. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exendin-4+enhances+the+differentiation+of+Wharton's+jelly+mesenchymal+stem+cells+into+insulin-producing+cells+through+activation+of+various+&#946;-cell+markers.">Exendin-4 enhances the differentiation of Wharton's jelly mesenchymal stem cells into insulin-producing cells through activation of various &#946;-cell markers.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 7, 108 (2016).</li><li>Yang, Z., Li, K., Yan, X., Dong, F., Zhao, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amelioration+of+diabetic+retinopathy+by+engrafted+human+adipose-derived+mesenchymal+stem+cells+in+streptozotocin+diabetic+rats.">Amelioration of diabetic retinopathy by engrafted human adipose-derived mesenchymal stem cells in streptozotocin diabetic rats.</a> Graefe's Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 248 (10), 1415-1422 (2010).</li><li>Zhang, N., Li, J., Luo, R., Jiang, J., Wang, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+marrow+mesenchymal+stem+cells+induce+angiogenesis+and+attenuate+the+remodeling+of+diabetic+cardiomyopathy.">Bone marrow mesenchymal stem cells induce angiogenesis and attenuate the remodeling of diabetic cardiomyopathy.</a> Experimental and Clinical Endocrinology &amp; Diabetes. 116 (2), 104-111 (2008).</li><li>Zhao, A. G., Shah, K., Freitag, J., Cromer, B., Sumer, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+potential+of+early-+and+late-passage+adipose-derived+mesenchymal+stem+cells+cultured+under+hypoxia+and+normoxia.">Differentiation potential of early- and late-passage adipose-derived mesenchymal stem cells cultured under hypoxia and normoxia.</a> Stem Cells International. 2020, 8898221 (2020).</li><li>Krishnamurthy, H., Cram, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basics+of+flow+cytometry.">Basics of flow cytometry.</a> Applications of Flow Cytometry in Stem Cell Research and Tissue. , 1-12 (2010).</li><li>Habib, S. A., Kamal, M. M., El-Maraghy, S. A., Senousy, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exendin-4+enhances+osteogenic+differentiation+of+adipose+tissue+mesenchymal+stem+cells+through+the+receptor+activator+of+nuclear+factor-kappa+B+and+osteoprotegerin+signaling+pathway.">Exendin-4 enhances osteogenic differentiation of adipose tissue mesenchymal stem cells through the receptor activator of nuclear factor-kappa B and osteoprotegerin signaling pathway.</a> Journal of Cellular Biochemistry. , (2022).</li><li>Qi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose-derived+mesenchymal+stem+cells+from+obese+mice+prevent+body+weight+gain+and+hyperglycemia.">Adipose-derived mesenchymal stem cells from obese mice prevent body weight gain and hyperglycemia.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 12 (1), 277 (2021).</li><li>Tiryaki, T., Conde-Green, A., Cohen, S. R., Canikyan, S., Kocak, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+3-step+mechanical+digestion+method+to+harvest+adipose-derived+stromal+vascular+fraction.">A 3-step mechanical digestion method to harvest adipose-derived stromal vascular fraction.</a> Plastic and Reconstructive Surgery - Global Open. 8 (2), 2652 (2020).</li><li>Alstrup, T., Eijken, M., Bohn, A. B., Moller, B., Damsgaard, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+adipose+tissue-derived+stem+cells:+Enzymatic+digestion+in+combination+with+mechanical+distortion+to+increase+adipose+tissue-derived+stem+cell+yield+from+human+aspirated+fat.">Isolation of adipose tissue-derived stem cells: Enzymatic digestion in combination with mechanical distortion to increase adipose tissue-derived stem cell yield from human aspirated fat.</a> Current Protocols in Stem Cell Biology. 48 (1), 68 (2019).</li><li>Taghizadeh, R. R., Cetrulo, K. J., Cetrulo, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagenase+impacts+the+quantity+and+quality+of+native+mesenchymal+stem/stromal+cells+derived+during+processing+of+umbilical+cord+tissue.">Collagenase impacts the quantity and quality of native mesenchymal stem/stromal cells derived during processing of umbilical cord tissue.</a> Cell Transplantation. 27 (1), 181-193 (2018).</li><li>Kamal, M. M., Kassem, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+potential+of+Wharton's+jelly+mesenchymal+stem+cells+for+diabetes:+Achievements+and+challenges.">Therapeutic potential of Wharton's jelly mesenchymal stem cells for diabetes: Achievements and challenges.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 8, 16 (2020).</li><li>Gabr, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+human+mesenchymal+stem+cells+to+insulin-producing+cells:+Comparison+between+bone+marrow-+and+adipose+tissue-derived+cells.">From human mesenchymal stem cells to insulin-producing cells: Comparison between bone marrow- and adipose tissue-derived cells.</a> BioMed Research International. 2017, 3854232 (2017).</li><li>Xin, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin-producing+cells+differentiated+from+human+bone+marrow+mesenchymal+stem+cells+in+vitro+ameliorate+streptozotocin-induced+diabetic+hyperglycemia.">Insulin-producing cells differentiated from human bone marrow mesenchymal stem cells in vitro ameliorate streptozotocin-induced diabetic hyperglycemia.</a> PLoS One. 11 (1), 0145838 (2016).</li><li>Kassem, D. H., Kamal, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+efficacy+of+umbilical+cord-derived+stem+cells+for+diabetes+mellitus:+A+meta-analysis+study.">Therapeutic efficacy of umbilical cord-derived stem cells for diabetes mellitus: A meta-analysis study.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 11 (1), 484 (2020).</li><li>El-Demerdash, R. F., Hammad, L. N., Kamal, M. M., El Mesallamy, H. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+Wharton's+jelly+and+cord+blood+as+a+source+of+mesenchymal+stem+cells+for+diabetes+cell+therapy.">A comparison of Wharton's jelly and cord blood as a source of mesenchymal stem cells for diabetes cell therapy.</a> Regenerative Medicine. 10 (7), 841-855 (2015).</li><li>Kassem, D. H., Kamal, M. M., El-Kholy, A. E. -. L. G., El-Mesallamy, H. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+expression+levels+of+pluripotency/stem+cell+markers+with+the+differentiation+outcome+of+Wharton's+jelly+mesenchymal+stem+cells+into+insulin+producing+cells.">Association of expression levels of pluripotency/stem cell markers with the differentiation outcome of Wharton's jelly mesenchymal stem cells into insulin producing cells.</a> Biochimie. 127, 187-195 (2016).</li><li>El-Asfar, R. K., Kamal, M. M., Abd El-Razek, R. S., El-Demerdash, E., El-Mesallamy, H. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obestatin+can+potentially+differentiate+Wharton's+jelly+mesenchymal+stem+cells+into+insulin-producing+cells.">Obestatin can potentially differentiate Wharton's jelly mesenchymal stem cells into insulin-producing cells.</a> Cell and Tissue Research. 372 (1), 91-98 (2018).</li><li>Gabr, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin-producing+cells+from+adult+human+bone+marrow+mesenchymal+stromal+cells+could+control+chemically+induced+diabetes+in+dogs:+A+preliminary+study.">Insulin-producing cells from adult human bone marrow mesenchymal stromal cells could control chemically induced diabetes in dogs: A preliminary study.</a> Cell Transplantation. 27 (6), 937-947 (2018).</li></ol>

בפרוטוקול זה, הצלחנו להציג פרוטוקול מפורט לבידוד של Ad-MSCs משומן אפידידימלי של חולדות ולהבחנה של Ad-MSCs אלה ל- IPCs. למעשה, שומן אפידידימלי של חולדות הוא מקור קל להשגה של רקמת שומן לקבלת Ad-MSCs ואינו דורש כל ציוד מיוחד, לא לאיסוף ולא לעיבוד 15,26,27. ה-Ad-...

תאי גזע מזנכימליים (MSCs), הידועים גם בשם תאים סטרומליים מזנכימליים, הם בין סוגי התאים הנפוצים ביותר לרפואה רגנרטיבית 1,2. הם מסווגים כתאי גזע בוגרים ומאופיינים בפוטנציאל התמיינות רב-קווית וביכולת התחדשות עצמית3. ניתן לבודד MSCs ולקבל ממקורות שונים, כולל רקמת שומן, מח עצם, דם היקפי, רקמת חבל הטבור ודם, זקיקי שיער ושיניים 4,5.
הבידוד של תאי גזע מרקמת השומן נתפס כמושך ומבטיח כאחד בשל גישתם הקלה, התפשטותם המהירה במבחנה ותפוקה גבוהה6. תאי גזע מזנכימליים שמקורם ברקמת השומן (Ad-MSCs) ניתנים לבודד ממינים שונים כגון בני אדם, בובינים, עכברים, חולדות, ולאחרונה גם עזים7. הוכח כי Ad-MSCs הם כעת מועמדים פוטנציאליים להנדסת רקמות ולטיפול גנטי/תאי שניתן אפילו להשתמש בהם כדי לפתח חלופה אוטולוגית לתיקון ארוך טווח של פגיעה ברקמות רכות או פגמים 7,8.
האגודה הבינלאומית לריפוי תאים וגנים (ISCT) הגדירה שלושה קריטריונים מינימליים שחייבים להיות מוצגים על ידי MSCs לאפיון מלא9. ראשית, הם חייבים להיות חסידי פלסטיק. שנית, MSCs צריכים לבטא סמני פני שטח של תאי גזע מזנכימליים כגון CD73, CD90 ו- CD105 וחוסר ביטוי של הסמנים ההמטופוייטיים CD45, CD34, CD14 או CD11b, CD79α או CD19 ו- HLA-DR. לבסוף, MSCs צריכים להפגין את היכולת להבדיל לשלוש שושלות מזנכימליות: אדיפוציטים, אוסטוציטים וכונדרוציטים. באופן מעניין, MSCs יכולים גם להתמיין לשושלות אחרות כגון תאים עצביים, קרדיומיוציטים, הפטוציטים ותאי אפיתל 10,11.
למעשה, ל-MSCs יש תכונות ייחודיות המאפשרות ליישם אותם כסוכנים טיפוליים פוטנציאליים בטיפול רגנרטיבי במחלות שונות. MSCs יכולים להפריש גורמים מסיסים כדי לגרום לסביבה אימונומודולטורית המספקת יתרונות טיפוליים12. בנוסף, MSCs יכולים לנדוד לעבר אתרים של פציעה ומיקרו-סביבה של גידולים כדי לספק טיפול ממוקד; עם זאת, המנגנונים אינם מובהרים במלואם13. בנוסף, ל-MSCs יש את היכולת להפריש אקסוזומים, שלפוחיות חוץ-תאיות בקנה מידה ננומטרי הנושאות מטען של רנ"א, חלבונים וגורמים מסיסים שאינם מקודדים, אשר התגלו לאחרונה כמנגנון חדשני של הפוטנציאל הטיפולי של ה-MSCs במחלות שונות14.
חשוב מכך, MSCs עוררו תשומת לב רבה לפוטנציאל שלהם להתמיין לתאים מייצרי אינסולין (IPCs), בין אם על ידי שינוי גנטי 15,16 או באמצעות שימוש בגורמים חיצוניים שונים הגורמים לתרבית במבחנה17. תקופת האינדוקציה של IPC משתנה מאוד, מכיוון שהיא תלויה בפרוטוקול האינדוקציה המשומש ובגורמים החיצוניים המנוצלים. תהליך הבידול יכול להימשך בין ימים לחודשים, והוא דורש שילוב של גורמים מעוררי אקסוגניות שיש להוסיף ו/או למשוך בשלבים שונים. רבים מהגורמים הללו ששימשו להתמיינות לבלב אנדוקרינית הם תרכובות פעילות ביולוגית שהוכחו כמקדמות את התפשטות או התמיינות/ניאוגנזה של תאי β מפרישי אינסולין ו/או מגדילות את תכולת האינסולין של IPCs 18,19,20,21. ראוי לציין כאן כי MSCs דווחו גם כבעלי השפעות טיפוליות בסוכרת ובסיבוכיה באמצעות מספר מנגנונים, כולל secretome שלהם, כמו גם מגוון רחב של פעולות ויסות חיסוני 22,23,24.
בפרוטוקול זה, אנו מציגים פרוטוקול מפורט של שלבים לבידוד ואפיון של Ad-MSCs משומן אפידידימלי של חולדות, ואחריו פרוטוקול פשוט וקצר יחסית ליצירת IPCs מ- Ad-MSCs.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Albumin, bovine serum Fraction V</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcian Blue 8GX</td>
			<td>Sigma-Aldrich, USA</td>
			<td>A3157</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alizarin Red S</td>
			<td>Sigma-Aldrich, USA</td>
			<td>A5533</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium hydroxide</td>
			<td>Fisher Scientific, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibody for Rat CD90, FITC</td>
			<td>Stem Cell Technologies</td>
			<td>60024FI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A3912</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride</td>
			<td>Fisher Scientific, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD105 Monoclonal Antibody, FITC</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Invitrogen, USA</td>
			<td>MA1-19594</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD34 Polyclonal Antibody</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Invitrogen, USA</td>
			<td>PA5-85917</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Fisher Scientific, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase type I, powder</td>
			<td>Gibco, Thermo Fisher, USA</td>
			<td>17018029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Glucose anhydrous, extra pure</td>
			<td>Fisher Scientific, Germany</td>
			<td>G/0450/53</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Fisher Scientific, Germany</td>
			<td>BP231-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dithizone staining</td>
			<td>Sigma-Aldrich, USA</td>
			<td>D5130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM - High Glucose 4.5 g/L</td>
			<td>Lonza, Switzerland</td>
			<td>12-604F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM - Low Glucose 1 g/L</td>
			<td>Lonza, Switzerland</td>
			<td>12-707F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12 medium</td>
			<td>Lonza, Switzerland</td>
			<td>BE12-719F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNAse/RNAse free water</td>
			<td>Gibco Thermo Fisher, USA</td>
			<td>10977-035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute, Molecular biology grade</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Germany</td>
			<td>24103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Exendin-4</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Germany</td>
			<td>E7144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Gibco Thermo Fisher, Brazil</td>
			<td>10270-106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde 37%</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric acid (HCl)</td>
			<td>Fisher Scientific, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol, Molecular biology grade</td>
			<td>Fisher Scientific, USA</td>
			<td>BP2618500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Gibco Thermo Fisher, USA</td>
			<td>25030-024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Chloride (Anhydrous)</td>
			<td>Fisher Scientific, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mesenchymal Stem Cell Functional identification kit</td>
			<td>R&#38;D systems Inc., MN, USA</td>
			<td>SC006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nicotinamide</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Germany</td>
			<td>N0636</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oil Red Stain</td>
			<td>Sigma-Aldrich, USA</td>
			<td>O0625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin-Amphotericin</td>
			<td>Gibco Thermo Fisher, USA</td>
			<td>15240062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline, 1X, without Ca/Mg</td>
			<td>Lonza, Switzerland</td>
			<td>BE17-516F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>Fisher Scientific, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat Insulin ELISA Kit</td>
			<td>Cloud-Clone Corp., USA</td>
			<td>CEA682Ra</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate</td>
			<td>Fisher Scientific, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Fisher Scientific, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate Dibasic (Anhydrous)</td>
			<td>Fisher Scientific, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate Monobasic (Anhydrous)</td>
			<td>Fisher Scientific, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SYBR Green Maxima</td>
			<td>Thermo Scientific, USA</td>
			<td>K0221</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe filter, 0.2 micron</td>
			<td>Corning, USA</td>
			<td>431224</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRIzol</td>
			<td>Thermo Scientific, USA</td>
			<td>15596026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan blue</td>
			<td>Gibco Thermo Fisher, USA</td>
			<td>15250061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-Versene-EDTA, 1X</td>
			<td>Lonza, Switzerland</td>
			<td>CC-5012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Verso cDNA synthesis kit</td>
			<td>Thermo Scientific, USA</td>
			<td>AB-1453/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Germany</td>
			<td>M3148</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of rat adipose tissue mesenchymal stem cells for differentiation into insulin-producing cells

תאי גזע מזנכימליים (MSCs) - במיוחד אלה שבודדו מרקמת השומן (Ad-MSCs) - זכו לתשומת לב מיוחדת כמקור מתחדש ושופע של תאי גזע שאינם מהווים חששות אתיים כלשהם. עם זאת, השיטות הנוכחיות לבידוד Ad-MSCs אינן סטנדרטיות ומשתמשות בפרוטוקולים מסובכים הדורשים ציוד מיוחד. בודדנו את ה-Ad-MSCs מהשומן האפידידימלי של חולדות ספראג-דאולי בשיטה פשוטה הניתנת לשחזור. ה-Ad-MSCs המבודדים מופיעים בדרך כלל תוך 3 ימים לאחר הבידוד, שכן התאים הדבקים מציגים מורפולוגיה פיברובלסטית. תאים אלה מגיעים למפגש של 80% תוך שבוע מבידוד. לאחר מכן, במעבר 3-5 (P3-5), בוצע אפיון מלא עבור Ad-MSCs המבודדים על ידי אימונופנוטיפ עבור אשכול MSC אופייני של סמני פני שטח התמיינות (CD) כגון CD90, CD73 ו- CD105, כמו גם גרימת התמיינות של תאים אלה לאורך השושלות האוסטאוגניות, האדיפוגניות והכונדרוגניות. זה, בתורו, מרמז על multipotency של התאים המבודדים. יתר על כן, אנו גורמים להתמיינות של ה-Ad-MSCs המבודדים לעבר שושלת התאים המייצרים אינסולין (IPCs) באמצעות פרוטוקול פשוט וקצר יחסית על ידי שילוב של מדיום הנשר המהונדס של דולבקו עתיר גלוקוז (HG-DMEM), β-מרקפטואתנול, ניקוטינמיד ואקסנדין-4. התמיינות ה-IPCs הוערכה גנטית, ראשית, באמצעות מדידת רמות הביטוי של סמנים ספציפיים של תאי β כגון MafA, NKX6.1, Pdx-1 ו-Ins1, כמו גם צביעת דיתזון עבור ה-IPCs שנוצרו. שנית, ההערכה בוצעה גם באופן פונקציונלי על ידי בדיקת הפרשת אינסולין מגורה גלוקוז (GSIS). לסיכום, ניתן לבודד בקלות Ad-MSCs, ולהציג את כל הקריטריונים לאפיון MSC, והם אכן יכולים לספק מקור שופע ומתחדש של IPCs במעבדה לחקר הסוכרת.

בידוד ואפיון של Ad-MSCs כפי שניתן לראות באיור 2, התאים המבודדים מרקמת השומן הראו אוכלוסייה הטרוגנית של תאים מעוגלים דמויי פיברובלסטים החל מיום הבידוד שלמחרת (איור 2A). 4 ימים לאחר הבידוד, התאים הפיברובלסטים החלו לגדול במספרם ובגודלם ולגדול כאוכלוסייה...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Rat Adipose Tissue Mesenchymal Stem Cells for Differentiation into Insulin-producing Cells at JoVE.com

Isolation of Rat Adipose Tissue Mesenchymal Stem Cells for Differentiation into Insulin-producing Cells

תאי גזע מזנכימליים שמקורם ברקמת השומן (Ad-MSCs) יכולים להיות מקור פוטנציאלי של MSCs המתמיינים לתאים המייצרים אינסולין (IPCs). בפרוטוקול זה, אנו מספקים שלבים מפורטים לבידוד ואפיון של Ad-MSCs אפידידימליים של חולדות, ולאחר מכן פרוטוקול פשוט וקצר ליצירת IPCs מאותם Ad-MSCs של חולדה.

בידוד של תאי גזע מזנכימליים של רקמת שומן חולדה לצורך התמיינות לתאים המייצרים אינסולין

Mesenchymal stem cells (MSCs)-especially those isolated from adipose tissue (Ad-MSCs)-have gained special attention as a renewable, abundant source of ...

המטרה הכללית של פרוטוקול זה היא לבודד ולאפיין רקמת שומן אדומה, תאי גזע מזנכימליים מיובשים ולהבדיל אותם לעבר תאים המייצרים אינסולין בשיטות פשוטות. תאי גזע מזנכימליים מצאו את הדרכים בתחום הגנטיקה. ניתן לבודד אותם ממקורות שונים כגון מח עצם, רקמת שומן ורקמה פרינטלית.הם מקבלים מאפיינים תרבותיים מצוינים. הם רב עוצמה ויכולים לטפל במחלות שונות. רקמת השומן מספקת מקור עשיר לתאי גזע מזנכימליים.ניתן לבודד את השומן MSCs האלה מליפו-שואפים בקלות עם תפוקה גבוהה בהשוואה למקורות אחרים כמו מח עצם. והם יכולים לספק מקור טוב הן להשתלה אוטולוגית והן להשתלה אלוגנית. בסרטון זה מציגים פרוטוקול פשוט לבידוד ואפיון של תאי גזע מזנכימליים בשומן משומן אפידידימלי של חולדה.הליך זה הוא שיטה פשוטה ויעילה ביותר לבידוד. לאחר הבידוד, נסבול את ההתמיינות של תאי גזע מזנכימליים אלה בשומן לתאים המייצרים אינסולין באמצעות פרוטוקול פשוט וקצר יחסית. נתחיל בבידוד של תאי גזע מזנכימליים בשומן על ידי עיכול קולגן של שומן אפידידימלי כדי להשיג שבר כלי דם חזק יותר.לאחר מכן תאי גזע מזנכימליים יתאפיינו בהיצמדות הפלסטית שלהם, כמו גם בביטוי של סמני CD והתמיינות לשושלות מזודרמליות מרובות. להרדים את החיה, ולאחר מכן להרדים באמצעות פריקה צוואר הרחם. מרססים בכל הגוף עם 70% אתנול ומתחילים בכריתה של העור והשרירים בחלק התחתון של הבטן.לאחר מכן חשוף את האשכים עם השומן האפידידימלי. חותכים בעדינות את השומן האפידידימלי. היזהרו לא לחתוך את כלי הדם עם השומנים.בארון בטיחות ביולוגי, חותכים את רקמת השומן לחתיכות קטנות באמצעות מלקחיים ואזמל. העבר את רקמת השומן לצינור צנטריפוגה המכיל 10 מיליליטרים PBS סטריליים. התחילו לשטוף על ידי הטיית צינור הפלקון למשך 45 שניות.לאחר מכן שמור את הצינור עומד במשך חמש דקות כדי להפריד לשתי שכבות. הסר את ה- PBS האינפראנאטי באמצעות מזרק 10 מיליליטר. חזור על שלבי שטיפה אלה ארבע עד חמש פעמים עד ש- PBS יהיה ברור.לאחר שטיפה, להשעות מחדש את רקמת השומן בתמיסה קולגן, ולאחר מכן לדגירה באמבט מים רועדים עד שהרקמה כמעט הומוגנית. לאחר מכן, מערבלים את תערובת הקולגן של הרקמה במשך 15 שניות, ואז צנטריפוגה לאחר מכן במשך חמש דקות. לאחר צנטריפוגה, יהיו לך שלוש שכבות.יש להשליך בזהירות את ה-supernatant מעל שבר כלי הדם הסטרומי. תחילה השליכו את שכבת השמן בחלקה העליון בזהירות, ולאחר מכן את שכבת ההדים מבלי להפריע לכדור שבר כלי הדם הסטרומי. להשעות מחדש את שבר כלי הדם הסטרומיים ב- BSA סטרילי ולצנטריפוגה מחדש למשך חמש דקות.צנטריפוגה שלמה, מקם את המדיה המלאה של DMEM F-12 בבקבוקון מרובע של 25 סנטימטרים. לאחר צנטריפוגה, השליכו את הסופרנטנט והשעו מחדש את גלולת כלי הדם הסטרומיים במדיית DMEM F-12 מלאה. ולהעביר לבקבוקון התרבות.מקום בחממת פחמן דו חמצני 37 מעלות 5%. למחרת, הסר תאים לא מחוברים והחלף את המדיה במדיה טרייה. החל מיום הבידוד הבא, התאים דמויי הפיברובלסט יתחילו להופיע.ואז בהדרגה ככל שיעבור הזמן הם יגדלו במספרם ובגודלם. על ידי מעבר, התאים יהפכו להומוגניים יותר. תאים אלה מציגים את כל הקריטריונים לאפיון תאי גזע מזנכימליים.תאים אלה התמינו לעבר תאים המייצרים אינסולין באמצעות פרוטוקול פשוט זה המכיל ניקוטין-אמיד בטא מרקפטואתנול ואקסנדין-4. לאורך שלבי ההתמיינות, התאים מתחילים לאבד את הצורה הפיברובלסטית שלהם ולדעתי אשכול כמו מורפולוגיה. כאשר משתמשים בתאים המייצרים אינסולין, הם מראים צביעה חיובית של דיסיתון אדום ארגמן, ולאחר מכן משתמשים בתאים המייצרים אינסולין ומבטאים סמנים שונים של תאי בטא כמו Pdx-1, mafA ואינסולין.בנוסף, תאים המושרים המייצרים אינסולין מפרישים רמות גבוהות יותר של אינסולין בסופרנטנט כאשר הם מאותגרים עם ריכוז גלוקוז גבוה יותר. סיפקנו פרוטוקול מפורט וצעדי לבידוד ואפיון של תאי גזע מזנכימליים בשומן. אנו גם מספקים כאן פרוטוקול קצר, פשוט ויעיל יחסית להתמיינות של תאי גזע מזנכימליים בשומן לתאים המייצרים אינסולין.זה מספק שער לחוקר להיכנס לתחום תאי הגזע המזנכימליים ולחקור את התמיינותם לתאים המייצרים אינסולין.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Isolation and Enrichment of Human Adipose-derived Stromal Cells for Enhanced Osteogenesis

בידוד וההעשרה של אדם שומן המופק מתאי סטרומה לOsteogenesis משופר

Bone marrow-derived mesenchymal stromal cells (BM-MSCs) are considered the gold standard for stem cell-based tissue engineering applications. However, the ...

Isolation and Differentiation of Adipose-Derived Stem Cells from Porcine Subcutaneous Adipose Tissues

בידוד ובידול של תאי גזע נגזר שומן מרקמות שומן תת עורי בשר חזירים

Obesity is an unconstrained worldwide epidemic. Unraveling molecular controls in adipose tissue development holds promise to treat obesity or diabetes. ...

Isolation and Expansion of Mesenchymal Stem/Stromal Cells Derived from Human Placenta Tissue

בידוד הרחבת גזע mesenchymal / תאי סטרומה נגזרו רקמה אנושית שליה

Mesenchymal stem/stromal cells (MSC) are promising candidates for use in cell-based therapies. In most cases, therapeutic response appears to be cell-dose ...

Chondrogenic Differentiation Induction of Adipose-derived Stem Cells by Centrifugal Gravity

Chondrogenic בידול האינדוקציה של תאי גזע שמקורם שומן על ידי הכביד צנטריפוגלי

Impaired cartilage cannot heal naturally. Currently, the most advanced therapy for defects in cartilage is the transplantation of chondrocytes ...

In Vitro Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Trophoblastic Cells

In Vitro Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Trophoblastic Cells

במבחנה בידול של האדם pluripotent בתאי גזע לתאי Trophoblastic

The placenta is the first organ to develop during embryogenesis and is required for the survival of the developing embryo. The placenta is comprised of ...

In Vitro Differentiation of Human Mesenchymal Stem Cells into Functional Cardiomyocyte-like Cells

In Vitro Differentiation of Human Mesenchymal Stem Cells into Functional Cardiomyocyte-like Cells

במבחנה הבידול של גזע Mesenchymal אנושי לתוך תאים דמויי Cardiomyocyte תפקודית

Myocardial infarction and the subsequent ischemic cascade result in the extensive loss of cardiomyocytes, leading to congestive heart failure, the leading ...

Horizontal Whole Mount: A Novel Processing and Imaging Protocol for Thick, Three-dimensional Tissue Cross-sections of Skin

אופקי הר שלם: עיבוד רומן פרוטוקול הדמיה על רקמה עבה, תלת מימדי חתכים של העור

Processing a tissue of interest to generate a microscopic image that supports a scientific argument can be challenging. The acquisition of high-quality ...

Single-cell Photoconversion in Living Intact Zebrafish

Photoconversion תא בודד בהמחיה שלם דג זברה

Animal and plant tissue is composed of distinct populations of cells. These cells interact over time to build and maintain the tissue and can cause ...

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

ניתוח חישובית של Germline Caenorhabditis elegans ללמוד הפצה של גרעינים, חלבונים ו את שלד התא

The Caenorhabditis elegans (C. elegans) germline is used to study several biologically important processes including stem cell development, apoptosis, and ...

Derivation and Differentiation of Canine Ovarian Mesenchymal Stem Cells

גזירת ובידול של הכלבים השחלות בתאי גזע Mesenchymal

Interest in mesenchymal stem cells (MSCs) has increased over the past decade due to their ease of isolation, expansion, and culture. Recently, studies ...