Name: therapeutic evaluation of fecal microbiota transplantation in an interleukin 10-deficient mouse model
Uploaded: 2022-04-06T13:10:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Therapeutic Evaluation of Fecal Microbiota Transplantation in an Interleukin 10-Deficient Mouse Model at JoVE.com

Bu çalışma, kısmen, Ulusal Sağlık Enstitüleri'nden (R01 HL152683 ve R21 AI126097'den Q. Li'ye) ve Amerikan Kalp Derneği Grant-in-Aid 17GRNT33460395 (Q. Li'ye) (heart.org) tarafından desteklenmiştir.

Hayvanlar üzerinde gerçekleştirilen tüm prosedürler, Galveston'daki Teksas Üniversitesi Tıp Şubesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylanmıştır (Protokol # 1512071A).
1. Taze dışkı peletlerinin toplanması
<ol><li>Steril kağıt havlular, künt uçlu forsepsler ve 50 mL konik tüpler hazırlayın.<ol><li>Bazı kağıt havluları ve forsepsleri ayrı otoklav torbalara koyun ve 30 dakika boyunca kuru ısıda 180 °C'de otoklav yapın...

<ol>
	<li>D'Argenio, V., Salvatore, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+the+gut+microbiome+in+the+healthy+adult+status.">The role of the gut microbiome in the healthy adult status.</a> Clinica Chimica Acta. 451, 97-102 (2015).</li><li>Baquero, F., Nombela, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+microbiome+as+a+human+organ.">The microbiome as a human organ.</a> Clinical Microbiology and Infection. 18, 2-4 (2012).</li><li>Hawrelak, J. A., Myers, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+causes+of+intestinal+dysbiosis:+a+review.">The causes of intestinal dysbiosis: a review.</a> Alternative Medcine Review. 9 (2), 180-197 (2004).</li><li>Carding, S., Verbeke, K., Vipond, D. T., Corfe, B. M., Owen, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysbiosis+of+the+gut+microbiota+in+disease.">Dysbiosis of the gut microbiota in disease.</a> Microbial Ecology in Health and Disease. 26 (1), 26191 (2015).</li><li>Ma, H. Q., Yu, T. T., Zhao, X. J., Zhang, Y., Zhang, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fecal+microbial+dysbiosis+in+Chinese+patients+with+inflammatory+bowel+disease.">Fecal microbial dysbiosis in Chinese patients with inflammatory bowel disease.</a> World Journal of Gastroenterology. 24 (13), 1464-1477 (2018).</li><li>Chu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+changes+of+enteric+mycobiota+and+virome+in+inflammatory+bowel+disease.">Specific changes of enteric mycobiota and virome in inflammatory bowel disease.</a> Journal of Digestive Diseases. 19 (1), 2-7 (2018).</li><li>Manichanh, C., Borruel, N., Casellas, F., Guarner, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+gut+microbiota+in+IBD.">The gut microbiota in IBD.</a> Nature reviews Gastroenterology and Hepatology. 9 (10), 599-608 (2012).</li><li>Podolsky, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+bowel+disease.">Inflammatory bowel disease.</a> The New England Journal of Medicine. 347 (6), 417-429 (2002).</li><li>Tamboli, C. P., Neut, C., Desreumaux, P., Colombel, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysbiosis+in+inflammatory+bowel+disease.">Dysbiosis in inflammatory bowel disease.</a> Gut. 53 (1), 1-4 (2004).</li><li>Shi, Y. C., Yang, Y. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fecal+microbiota+transplantation:+Current+status+and+challenges+in+China.">Fecal microbiota transplantation: Current status and challenges in China.</a> JGH Open: An Open Access Journal of Gastroenterology and Hepatology. 2 (4), 114-116 (2018).</li><li>Markley, J. C., Carson, R. P., Holzer, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pseudomembranous+enterocolitis:+A+clinico+pathologic+study+of+fourteen+cases+with+a+common+etiologic+factor.">Pseudomembranous enterocolitis: A clinico pathologic study of fourteen cases with a common etiologic factor.</a> AMA Archives of Surgery. 77 (3), 452-461 (1958).</li><li>Wilcox, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clostridium+difficile+infection+and+pseudomembranous+colitis.">Clostridium difficile infection and pseudomembranous colitis.</a> Best Practice and Research Clinical Gastroenterology. 17 (3), 475-493 (2003).</li><li>Kelly, C. R., de Leon, L., Jasutkar, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fecal+microbiota+transplantation+for+relapsing+Clostridium+difficile+infection+in+26+patients:+methodology+and+results.">Fecal microbiota transplantation for relapsing Clostridium difficile infection in 26 patients: methodology and results.</a> Journal of Clinical Gastroenterology. 46 (2), 145-149 (2012).</li><li>Borody, T. J., Warren, E. F., Leis, S., Surace, R., Ashman, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+ulcerative+colitis+using+fecal+bacteriotherapy.">Treatment of ulcerative colitis using fecal bacteriotherapy.</a> Journal of Clinical Gastroenterology. 37 (1), 42-47 (2003).</li><li>Cheng, F., Huang, Z., Wei, W., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fecal+microbiota+transplantation+for+Crohn's+disease:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Fecal microbiota transplantation for Crohn's disease: a systematic review and meta-analysis.</a> Techniques in Coloproctology. 25 (5), 495-504 (2021).</li><li>Scheinin, T., Butler, D. M., Salway, F., Scallon, B., Feldmann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+the+interleukin-10+knockout+mouse+model+of+colitis:+antitumour+necrosis+factor-antibodies+suppress+the+progression+of+colitis.">Validation of the interleukin-10 knockout mouse model of colitis: antitumour necrosis factor-antibodies suppress the progression of colitis.</a> Clinical and Experimental Immunology. 133 (1), 38-43 (2003).</li><li>Keubler, L. M., Buettner, M., Hager, C., Bleich, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+multihit+model:+Colitis+lessons+from+the+interleukin-10-deficient+mouse.">A multihit model: Colitis lessons from the interleukin-10-deficient mouse.</a> Inflammatory Bowel Diseases. 21 (8), 1967-1975 (2015).</li><li>Kiesler, P., Fuss, I. J., Strober, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+models+of+inflammatory+bowel+diseases.">Experimental models of inflammatory bowel diseases.</a> Cellular and Molecular Gastroenterology and Hepatology. 1 (2), 154-170 (2015).</li><li>Sikka, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin+10+knockout+frail+mice+develop+cardiac+and+vascular+dysfunction+with+increased+age.">Interleukin 10 knockout frail mice develop cardiac and vascular dysfunction with increased age.</a> Experimental Gerontology. 48 (2), 128-135 (2013).</li><li>Fecal microbiota transplantation-standardization study group. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanjing+consensus+on+methodology+of+washed+microbiota+transplantation.">Nanjing consensus on methodology of washed microbiota transplantation.</a> Chinese Medical Journal (Engl). 133 (19), 2330-2332 (2020).</li><li>Kodani, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flexible+colonoscopy+in+mice+to+evaluate+the+severity+of+colitis+and+colorectal+tumors+using+a+validated+endoscopic+scoring+system).">Flexible colonoscopy in mice to evaluate the severity of colitis and colorectal tumors using a validated endoscopic scoring system).</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (80), e50843 (2013).</li><li>Cheng, H. -. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+right+ventricular+structure+and+function+in+mouse+model+of+pulmonary+artery+constriction+by+transthoracic+echocardiography.">Assessment of right ventricular structure and function in mouse model of pulmonary artery constriction by transthoracic echocardiography.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (84), e51041 (2014).</li><li>Tang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+colitis+upregulates+microRNAs+suppressing+brain-derived+neurotrophic+factor+in+the+adult+heart.">Chronic colitis upregulates microRNAs suppressing brain-derived neurotrophic factor in the adult heart.</a> PLoS One. 16 (9), 0257280 (2021).</li><li>Orner, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+tumorigenesis+in+the+Apc(min)+mouse:+down-regulation+of+beta-catenin+signaling+by+a+combination+of+tea+plus+sulindac.">Suppression of tumorigenesis in the Apc(min) mouse: down-regulation of beta-catenin signaling by a combination of tea plus sulindac.</a> Carcinogenesis. 24 (2), 263-267 (2003).</li><li>Kline, K. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+injury+increases+gut+permeability+by+epigenetically+suppressing+E-Cadherin+in+adulthood.">Neonatal injury increases gut permeability by epigenetically suppressing E-Cadherin in adulthood.</a> The Journal of Immunology. 204 (4), 980-989 (2020).</li><li>DeGruttola, A. K., Low, D., Mizoguchi, A., Mizoguchi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+understanding+of+dysbiosis+in+disease+in+human+and+animal+models.">Current understanding of dysbiosis in disease in human and animal models.</a> Inflammatory Bowel Diseases. 22 (5), 1137-1150 (2016).</li><li>Chevalier, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+gut+microbiota+on+depressive-like+behaviors+in+mice+is+mediated+by+the+endocannabinoid+system.">Effect of gut microbiota on depressive-like behaviors in mice is mediated by the endocannabinoid system.</a> Nature Communications. 11 (1), 6363 (2020).</li><li>Kao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+oral+capsule-+vs+colonoscopy-delivered+fecal+microbiota+transplantation+on+recurrent+clostridium+difficile+infection:+A+randomized+clinical+trial.">Effect of oral capsule- vs colonoscopy-delivered fecal microbiota transplantation on recurrent clostridium difficile infection: A randomized clinical trial.</a> JAMA. 318 (20), 1985-1993 (2017).</li><li>Cammarota, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+consensus+conference+on+stool+banking+for+faecal+microbiota+transplantation+in+clinical+practice.">International consensus conference on stool banking for faecal microbiota transplantation in clinical practice.</a> Gut. 68 (12), 2111-2121 (2019).</li><li>Vemuri, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+microgenderome+revealed:+sex+differences+in+bidirectional+interactions+between+the+microbiota,+hormones,+immunity+and+disease+susceptibility.">The microgenderome revealed: sex differences in bidirectional interactions between the microbiota, hormones, immunity and disease susceptibility.</a> Seminar Immunopathology. 41 (2), 265-275 (2019).</li><li>Wilkinson, N. M., Chen, H. -. C., Lechner, M. G., Su, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+differences+in+immunity.">Sex differences in immunity.</a> Annual Review of Immunology. , (2022).</li><li>Lee, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Frozen+vs+fresh+fecal+microbiota+transplantation+and+clinical+resolution+of+diarrhea+in+patients+with+recurrent+clostridium+difficile+infection:+A+randomized+clinical+trial.">Frozen vs fresh fecal microbiota transplantation and clinical resolution of diarrhea in patients with recurrent clostridium difficile infection: A randomized clinical trial.</a> JAMA. 315 (2), 142-149 (2016).</li><li>Hamilton, M. J., Weingarden, A. R., Sadowsky, M. J., Khoruts, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardized+frozen+preparation+for+transplantation+of+fecal+microbiota+for+recurrent+clostridium+difficile+infection.">Standardized frozen preparation for transplantation of fecal microbiota for recurrent clostridium difficile infection.</a> American Journal of Gastroenterology. 107 (5), 761-767 (2012).</li><li>Tang, G., Yin, W., Liu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+frozen+fecal+microbiota+transplantation+as+effective+as+fresh+fecal+microbiota+transplantation+in+patients+with+recurrent+or+refractory+Clostridium+difficile+infection:+A+meta-analysis.">Is frozen fecal microbiota transplantation as effective as fresh fecal microbiota transplantation in patients with recurrent or refractory Clostridium difficile infection: A meta-analysis.</a> Diagnostic Microbiology and Infectious Disease. 88 (4), 322-329 (2017).</li><li>Cui, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fecal+microbiota+transplantation+through+mid-gut+for+refractory+Crohn's+disease:+safety,+feasibility,+and+efficacy+trial+results.">Fecal microbiota transplantation through mid-gut for refractory Crohn's disease: safety, feasibility, and efficacy trial results.</a> Journal of Gastroenterology and Hepatology. 30 (1), 51-58 (2015).</li><li>Li, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Timing+for+the+second+fecal+microbiota+transplantation+to+maintain+the+long-term+benefit+from+the+first+treatment+for+Crohn's+disease.">Timing for the second fecal microbiota transplantation to maintain the long-term benefit from the first treatment for Crohn's disease.</a> Applied Microbiology and Biotechnology. 103 (1), 349-360 (2019).</li><li>Moayyedi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+on+fecal+microbiota+transplantation+in+patients+with+inflammatory+bowel+disease.">Update on fecal microbiota transplantation in patients with inflammatory bowel disease.</a> Gastroenterology and Hepatology. 14 (5), 319 (2018).</li><li>Saha, S., Mara, K., Pardi, D. S., Khanna, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+safety+of+fecal+microbiota+transplantation+for+recurrent+clostridioides+difficile+infection.">Long-term safety of fecal microbiota transplantation for recurrent clostridioides difficile infection.</a> Gastroenterology. 160 (6), 1961-1969 (2021).</li><li>Perler, B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+efficacy+and+safety+of+fecal+microbiota+transplantation+for+treatment+of+recurrent+clostridioides+difficile+infection.">Long-term efficacy and safety of fecal microbiota transplantation for treatment of recurrent clostridioides difficile infection.</a> Journal of Clinical Gastroenterology. 54 (8), 701-706 (2020).</li><li>Safety alert regarding use of fecal microbiota for transplantation and risk of serious adverse events likely due to transmission of pathogenic organisms. FDA Available from: <a target="_blank" href="https://www.fda.gov/vaccines-blood-biologics/safety-availability-biologics/safety-alert-regarding-use-fecal-microbiota-tramsplantation-and-risk-serious-adverse-events-likely">https://www.fda.gov/vaccines-blood-biologics/safety-availability-biologics/safety-alert-regarding-use-fecal-microbiota-tramsplantation-and-risk-serious-adverse-events-likely</a> (2020)</li></ol>

Yenilikçi bir araştırma tedavisi olarak FMT, kommensal mikrobiyotanın disbiyozunun IBD, obezite, diabetes mellitus, otizm, kalp hastalığı ve kanser dahil olmak üzere birçok insan hastalığının patogenezinde rol oynamasından bu yana son yıllarda çeşitli bozuklukların tedavisinde sıcak bir konu haline gelmiştir26. Mekanizma belirlenmemiş olmasına rağmen, FMT'nin yeni bir biyolojik flora oluşturarak ve artık bakteri kaybını önleyerek çalıştığına inanılmaktadır. Bura...

İnsan bağırsak mikro ekosistemi, sağlıklı bir insanın bağırsağında 1000'den fazla bakteri türü ile son derece karmaşıktır1. Bağırsak florası, bağırsağın normal fizyolojik fonksiyonlarının ve bağışıklık tepkisinin korunmasında rol oynar ve insan vücudu ile ayrılmaz bir ilişkiye sahiptir. Biriken kanıtlar, bağırsak mikrobiyomunun sadece bir grup parazit değil, insan vücudunun bir parçası olan son insan organını oluşturduğunu göstermektedir2. Bağırsak mikrobiyotası, metabolitleri ve erken yaşamda kurulan konakçı bağışıklık sistemi arasındaki 'sağlıklı' simbiyotik bir ilişki, bağırsak homeostazını korumak için kritik öneme sahiptir. Kronik inflamasyon gibi bazı anormal durumlarda, vücudun iç ve dış ortamındaki değişiklikler, bağırsak homeostazını ciddi şekilde bozar ve bağırsakların mikrobiyal topluluğunun dysbiosis3 olarak adlandırılan kalıcı bir dengesizliğine neden olur. Aslında, diyet, ilaçlar ve patojenler de dahil olmak üzere birçok çevresel faktöre maruz kalmak, mikrobiyotada değişikliklere yol açabilir.
Disbiyoz, inflamatuar bağırsak hastalığı (IBD), irritabl bağırsak sendromu (IBS) ve psödomembranöz enterit gibi çeşitli bağırsak hastalıklarının patogenezi ve ayrıca kardiyovasküler hastalık, obezite ve alerji dahil olmak üzere artan bir bağırsak dışı bozukluklar listesi ile ilişkilidir4. Mikrobiyota profillemesi, IBD'li hastaların bakteri çeşitliliğinde dramatik bir azalmanın yanı sıra bazı spesifik bakteri suşlarının popülasyonlarında belirgin değişiklikler olduğunu ortaya koymuştur 5,6. Bu çalışmalar, IBD hastalarında daha az Lachnospiraceae ve Bacteroidetes göstermiş, ancak daha fazla Proteobakteri ve Actinobacteria göstermiştir. İBH'nin patogenezinin anormal intestinal flora, düzensiz immün yanıt, çevresel zorluklar ve genetik varyantlar dahil olmak üzere çeşitli patojenik faktörlerle ilişkili olduğuna inanılmaktadır7. Bol miktarda kanıt, bağırsak bakterilerinin IBD 8,9'un başlatılması ve uygulama aşamalarında rol oynadığını ve bağırsak disbiyozunun düzeltilmesinin IBD'nin tedavisi ve / veya idame tedavisi için yeni bir yaklaşımı temsil edebileceğini göstermektedir.
Fekal mikrobiyota transplantasyonunun (FMT) prototipi eski Çin'de başladı10. 1958'de Dr. Eiseman ve meslektaşları, lavman yoluyla sağlıklı donörlerden dışkı maddesi ile dört şiddetli psödomembranöz enterit vakasını başarıyla tedavi ettiler ve modern Batı tıbbında insan hastalıklarını tedavi etmek için insan dışkısını kullanarak yeni bir sayfa açtılar11. Clostridium difficile enfeksiyonu (CDI) psödomembranöz enterit12'nin ana nedeni olarak bulunmuştur ve FMT CDI tedavisinde oldukça etkilidir. Son sekiz yılda, FMT, tekrarlayan CDI13'ün tedavisi için standart bir bakım tedavisi haline gelmiştir ve FMT'nin IBD gibi diğer bozukluklardaki rolünü araştıran daha ileri çalışmalara yol açmıştır. Son yirmi yılda, çok sayıda vaka sunumu ve kohort çalışması, IBD14'lü hastalarda FMT kullanımını belgelemiştir. 12 çalışmayı içeren bir meta-analiz, Crohn hastalığı (CD) olan hastaların% 62'sinin FMT sonrası klinik remisyon sağladığını ve CD hastalarının% 69'unun klinik yanıt aldığını göstermiştir15. Bu cesaret verici bulgulara rağmen, FMT'nin IBD tedavisindeki rolü belirsizliğini korumaktadır ve FMT'nin intestinal inflamasyonu iyileştirdiği mekanizmalar tam olarak anlaşılamamıştır. FMT'nin kliniklerde IBD için mevcut tedavi seçeneklerinin silahlandırılmasına katılabilmesi için daha fazla araştırma yapılması gerekmektedir.
Bu protokolde, sütten kesildikten sonra kendiliğinden kolit gelişen ve IBD 16,17,18'in çok faktörlü doğasını yansıtmak için altın standart görevi gören IL-10-/- farelere FMT uyguladık. IL-10-/- fareleri, İBH etiyolojisini incelemek için yaygın olarak kullanılmıştır, çünkü İBH hastalarına benzer moleküler ve histolojik özellikler gösterirler ve hastalar gibi, hastalık anti-TNFa tedavisi ile iyileştirilebilirler16. Yaşlanan IL10-/− fareler (>9 aylık), yaşa uygun vahşi tip farelere kıyasla kalp boyutunda artış ve bozulmuş kalp fonksiyonuna sahiptir19, bu da onu kolite bağlı kalp hastalıklarını incelemek için mükemmel bir model haline getirir. Bununla birlikte, dekstran sodyum sülfat modeli ve T hücresi kaynaklı kolit modeli gibi diğer murin kolit modelleri de kullanılabilir. Fekal süspansiyonu oral gavaj yoluyla uyguladık, insanlarda lavmandan daha etkili ve daha iyi bir yol olduğu kanıtlandı20.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>BD Syringe, 1 mL</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-829-10F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blunt end forceps</td>
			<td>Knipex</td>
			<td>926443</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain natriuretic peptide EIA kit</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>RAB0386</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6J mice</td>
			<td>Jackson Lab</td>
			<td>000664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5415R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical tubes</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>339650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved feeding Needles</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>FNC-20-1.5-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GLH-115 homogenizer</td>
			<td>Omni International</td>
			<td>GLH-115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>G5516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IL-10 knockout mice</td>
			<td>Jackson Lab</td>
			<td>004366</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Piramal Critical care</td>
			<td>NDC66794-017-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>USP normal saline</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>6280</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vaporizer</td>
			<td>Euthanex Corp.</td>
			<td>EZ-108SA</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

therapeutic evaluation of fecal microbiota transplantation in an interleukin 10-deficient mouse model

Son yıllarda mikroekolojinin gelişmesiyle birlikte, bağırsak bakterileri ile inflamatuar bağırsak hastalığı (İBH) arasındaki ilişki oldukça dikkat çekmiştir. Biriken kanıtlar, disbiyotik mikrobiyotanın İBH'de inflamatuar süreci tetiklemede veya kötüleştirmede aktif bir rol oynadığını ve fekal mikrobiyota transplantasyonunun (FMT) çekici bir terapötik strateji olduğunu, çünkü sağlıklı bir mikrobiyotanın İBH hastasına aktarılmasının uygun konakçı-mikrobiyota iletişimini yeniden kurabileceğini göstermektedir. Bununla birlikte, moleküler mekanizmalar belirsizdir ve FMT'nin etkinliği çok iyi belirlenmemiştir. Bu nedenle, IBD'nin hayvan modellerinde daha ileri çalışmalara ihtiyaç vardır. Bu yöntemde, FMT'yi vahşi tip C57BL / 6J farelerden, yaygın olarak kullanılan bir fare kolit modeli olan IL-10 eksikliği olan farelere uyguladık. Çalışma, donör farelerden dışkı peletlerinin toplanması, dışkı çözeltisinin / süspansiyonunun yapılması, dışkı çözeltisinin uygulanması ve hastalığın izlenmesi üzerinde durmaktadır. FMT'nin IL-10 nakavt farelerinde kardiyak bozukluğu önemli ölçüde azalttığını ve IBD yönetimi için terapötik potansiyelinin altını çizdiğini bulduk.

2 aylık C57BL/6J vahşi tip (WT) ve IL-10 nakavt farelere 3 kez (3 ay boyunca ayda bir kez) sağlıklı donör FMT uyguladık. Yaş uyumlu C57BL / 6J fareler (yaş farkı <2 ay olmalıdır) fekal donör olarak görev yaptı ve her seferinde taze dışkı peletleri kullanıldı. ÇED tahlilleri, IL-10 eksikliği olan farelerin plazmasında BNP'nin belirgin şekilde yükseldiğini ve sağlıklı donör FMT'nin BNP düzeylerindeki artışı önemli ölçüde azalttığını ortaya koymuştur (Şekil 1A...

Watch this Scientific Journal Video about Therapeutic Evaluation of Fecal Microbiota Transplantation in an Interleukin 10-Deficient Mouse Model at JoVE.com

Therapeutic Evaluation of Fecal Microbiota Transplantation in an Interleukin 10-Deficient Mouse Model

Genetik duyarlılık, mukozal bağışıklık ve intestinal mikroekolojik ortamın etkileşimi, inflamatuar barsak hastalığının (İBH) patogenezinde rol oynar. Bu çalışmada, IL-10 eksikliği olan farelere fekal mikrobiyota transplantasyonu uygulanmış ve kolonik inflamasyon ve kalp fonksiyonu üzerine etkisi araştırılmıştır.

Fekal Mikrobiyota Transplantasyonunun İnterlökin 10 Eksikliği Olan Fare Modelinde Terapötik Değerlendirmesi

With the development of microecology in recent years, the relationship between intestinal bacteria and inflammatory bowel disease (IBD) has attracted ...

Üç klinik deney, fekal mikrobiyota transplantasyonunun bir dizi insan hastalığı için terapötik potansiyel taşıdığını göstermiştir. Daha ileri mekanik çalışmalar, FMT'nin tezgahtan başucuna getirilmesine yardımcı olacaktır. Bu yöntem, teslimat yolu için oral gavajı benimseyerek daha hassas hacim dağıtımı ve hızlı emilim sağlar.Sadece ılımlı teknik beceriler gerektirir. Prosedürü gösteren, laboratuvarımızdan kıdemli bir araştırma görevlisi olan Xioying Zhong olacak. Steril kağıt havlular, künt uç forsepsler ve 50 mililitrelik konik tüpler hazırlayarak başlayın.Bazı kağıt havluları ve forsepsleri ayrı otoklav torbalara yerleştirin ve 30 dakika boyunca kuru ısıda 180 santigrat derecede otoklav yapın. Steril konik tüpleri tartın ve ağırlıklarını tüplere yazın. Hayvan odasındaki biyogüvenlik dolabını açın.Herhangi bir yatak takımı olmadan otoklavlanmış temiz bir fare kafesi alın ve biyogüvenlik kabinine yerleştirin. Kapağı ve yiyecek rafını çıkarın ve kabinin içine yerleştirin. Steril kağıt havluları kafesin altına yerleştirin ve metal rafı kafesin üstüne geri yerleştirin.Yaşa uygun dışkı donörlerini tanımlayın ve fare kafesini biyogüvenlik kabinine yerleştirin. Kafesi açın ve kuyruğundan bir donör fareyi yavaşça tutun ve temiz kafesin üstündeki metal rafa yerleştirin. Kafes kapağını rafın üstüne yerleştirin ve hayvanın dışkılamasını bekleyin.Dışkı peletlerini toplayın ve steril 50 mililitrelik konik bir tüpe koyun. Peletleri cinsiyete göre çekin. Tüpü tekrar tartın ve dışkı peletlerinin ağırlığını hesaplayın.Normal saline% 10 gliserol çözeltisi ekleyerek steril bir çözelti hazırlayın. Her gram dışkı peleti için konik tüpe bu çözeltinin 10 mililitresini ekleyin. Dışkıyı yeniden askıya almak için bir duman davlumbazının içindeki tezgah üstü homojenizatör kullanarak bu karışımı 30 saniye boyunca üç kez düşük hızda homojenize edin.Dışkı süspansiyonunu iki kat steril pamuklu gazlı bezden süzün. Filtratın geçici olarak buzdolabında altı saate kadar saklanması veya steril kriyojenik şişelere paketlenmesi ve eksi 80 derecelik bir dondurucuda saklanması. Standart bir prosedürü izleyerek homojenizatörü veya karıştırıcıyı iyice temizleyin.Dondurulmuş numuneler kullanıyorsanız, dondurulmuş dışkı süspansiyonunu buz üzerinde çözün. Çözülmüş dışkı süspansiyonunu vorteks yaparak karıştırın. Taze veya çözülmüş dışkı süspansiyonunu bir mililitrelik şırıngalara aktarın.Fareleri tartın ve doğru gavage iğne boyutunu ve maksimum dozaj hacmini seçin. Farenin burnunun ucundan sternumun dibine kadar olan uzunluğu ölçerek gavage iğnesini test edin. Şırıngayı tuzlu su veya dışkı süspansiyonunda% 10 gliserol ile doldurun ve şırınga ve iğnenin içindeki hava kabarcıklarını çıkarın.Biyogüvenlik kabinine bir fare kafesi yerleştirin. Plastik kafes kapağını çıkarın ve metal rafı yerinde bırakın. Metal rafı tek elle açın.Bir fareyi kuyruğundan tut ve metal rafa koy. Fareyi bir elinizle kuyruğundan tutun ve cildi omuzların üzerinden kavrayarak hayvanı dizginlemek için başka bir elin baş parmağını ve orta parmaklarını kullanın. Hayvanın başını yavaşça geriye doğru uzatın ve kafayı bir elinizle yerinde tutun.Gavage iğnesini ağzın içindeki dilin üstüne yerleştirin. İğne yemek borusuna ulaşana kadar üst palet boyunca yavaşça ilerleyin. İğneyi tek bir hareketle sorunsuz bir şekilde geçirin.İğne düzgün bir şekilde yerleştirildikten ve doğrulandıktan sonra, iğneye bağlı şırıngayı iterek malzemeyi yavaşça uygulayın. Dozlamadan sonra, iğneyi yavaşça dışarı çekin. Fareyi işaretleyin ve ev kafesine geri getirin.Zahmetli solunum veya sıkıntı belirtileri arayarak hayvanı beş ila 10 dakika boyunca izleyin. Fekal mikrobiyota transplantasyonundan 12 ila 24 saat sonra fareleri tekrar izleyin. Enzim immünoassayı, B tipi natriüretik peptidin interlökin 10 eksik farenin plazmasında belirgin şekilde yükseldiğini ortaya koydu.Sağlıklı bir donör fekal mikrobiyota transplantasyonu, B tipi natriüretik peptid seviyelerindeki artışı önemli ölçüde azaltmıştır. Ekokardiyografi, interlökin 10 eksik farede sol ventrikül ejeksiyon fraksiyonunda, vahşi tip farelere kıyasla anlamlı bir azalma tespit etti. Bu azalma fekal mikrobiyota transplantasyonu ile anlamlı olarak azaltıldı.Bu bulgular, sağlıklı donör fekal mikrobiyota transplantasyonunun kolite bağlı kardiyak bozukluğu azalttığını göstermektedir. Protokolü denerken, doğru gavage iğnesini seçmek çok önemlidir. Esnek plastik besleme tüpleri yeni başlayanlar için daha iyi bir seçim olabilir.Gavage'den önce hayvan elleçlemesi uygulamak da önemlidir.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

An In Vitro Batch-culture Model to Estimate the Effects of Interventional Regimens on Human Fecal Microbiota

Bir In vitro Batch-kültür modeli ınsan dışkı microbiota üzerinde girişimsel rejimlerin etkilerini tahmin etmek

The emerging role of the gut microbiome in several human diseases demands a breakthrough of new tools, techniques and technologies. Such improvements are ...

An Immunological Model for Heterotopic Heart and Cardiac Muscle Cell Transplantation in Rats

Sıçanlarda Heterotopik Kalp ve Kardiyak Kas Hücre Nakli için İmmünolojik Model

Heterotopic heart transplantation in rats has been a commonly used model for diverse immunological studies for more than 50 years. Several modifications ...

Optimization of the Cuff Technique for Murine Heart Transplantation

Murin Kalp Nakli için Manşet Tekniğinin Optimizasyonu

Murine cardiac transplantation has been performed for more than 40 years. With advancements in microsurgery, certain new techniques have been used to ...

Experimental Autoimmune Uveitis: An Intraocular Inflammatory Mouse Model

Deneysel Otoimmün Üveit: Göz İçi İnflamatuar Bir Fare Modeli

Experimental Autoimmune Uveitis (EAU) is driven by immune cells responding to self-antigens. Many features of this non-infectious, intraocular ...

Purification and Expansion of Mouse Invariant Natural Killer T Cells for in vitro and in vivo Studies

In vitro ve in vivo Çalışmalar için Fare Değişmez Doğal Öldürücü T Hücrelerinin Saflaştırılması ve Genişlemesi

Invariant Natural Killer T (iNKT) cells are innate-like T Lymphocytes expressing a conserved semi-invariant T cell receptor (TCR) specific for self or ...

Partial Heterotopic Hindlimb Transplantation Model in Rats

Sıçanlarda Kısmi Heterotopik Hindlimb Transplantasyon Modeli

Vascularized composite allotransplantations (VCA) represent the most advanced reconstruction option for patients without autologous surgical possibilities ...

An Intestinal Gut Organ Culture System for Analyzing Host-Microbiota Interactions

Konak-Mikrobiyota Etkileşimlerini Analiz Etmek için Bağırsak Bağırsak Organ Kültürü Sistemi

The structure of the gut tissue facilitates close and mutualistic interactions between the host and the gut microbiota. These cross-talks are crucial for ...

Analysis of Fecal Microbiota Dynamics in Lupus-Prone Mice Using a Simple, Cost-Effective DNA Isolation Method

Lupus Eğilimli Farelerde Fekal Mikrobiyota Dinamiğinin Basit, Uygun Maliyetli Bir DNA İzolasyon Yöntemi Kullanılarak Analizi

Gut microbiota has an important role in educating the immune system. This relationship is extremely important for understanding autoimmune diseases that ...

Evaluation of a Reliable Biomarker in a Cecal Ligation and Puncture-Induced Mouse Model of Sepsis

Sepsisin Çekal Ligasyonu ve Delinmeye Bağlı Fare Modelinde Güvenilir Bir Biyobelirtecin Değerlendirilmesi

Sepsis is a severe life-threatening and rapidly developing disease that causes millions of deaths annually worldwide. Researchers have made tremendous ...

A Mouse Ear Model for Allergic Contact Dermatitis Evaluation

Alerjik Kontakt Dermatit Değerlendirmesi için Fare Kulak Modeli

Skin is the human body&#39;s first line of defense and one of the most exposed organs to environmental chemicals. Allergic contact dermatitis (ACD) is a ...