Name: dynamic monitoring of seroconversion using a multianalyte immunobead assay for covid-19
Uploaded: 2022-02-16T15:00:00
Duration: 8 min 48 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dynamic Monitoring of Seroconversion using a Multianalyte Immunobead Assay for Covid-19 at JoVE.com

Forfatterne ønsker at takke Rush Biomarker Development Core for brugen af deres faciliteter, Rush Biorepository til emneindskrivning og biospecimenbehandling og Walder Foundations Chicago Coronavirus Assessment Network (Chicago CAN) Initiative tilskudsnumre SCI16 (J.R.S. og J.A.B.) og 21-00147 (J.R.S. og J.A.B.) og en pris fra Swim Across America Foundation (J.A.B.).

Alle forsøgspersoner blev indskrevet med skriftligt informeret samtykke med fuld Institutional Review Board (IRB) godkendelse af Rush University Medical Center under protokol ORA 20101207 med alle institutionelle retningslinjer for etisk forskningspraksis overholdt. Blod blev opsamlet via konventionel flebotomi i lavendelvakutainere (K2EDTA) og behandlet med anbefalede protokoller. Det resulterende plasma blev arkiveret ved -80 °C, indtil vurderingerne blev udført.
1. Fremstilling af antigenkonjugerede mikrosfærer
<ol><li>Vælg tre forskellige hætteglas med magnetiske mikrosfærer med unikke perleområder, registrering af perle-ID og partioplysninger for hvert anvendt hætteglas. BEMÆRK: Følgende trin vil blive fulgt for hvert særskilt mikrosfæreområde. Mikrosfærer er lysfølsomme og bør beskyttes mod langvarig udsættelse for lys. Under vasketrin skal du passe på ikke at forstyrre mikrosfærerne. Hvis forstyrret, tillade en anden 60 s adskillelse.</li>
	<li>Vortex mikrosfærebestanden i 60 s og sonikere i 5 minutter før brug for at dissociere aggregerede perler.</li>
	<li>Overfør 1,0 x 106 perler til et 1,5 ml lavproteinbindende mikrocentrifugerør.</li>
	<li>Indsæt røret i en magnetisk separator, og lad adskillelse forekomme i 60 s. Når røret stadig er i den magnetiske separator, skal du forsigtigt fjerne supernatanten uden at forstyrre perlepellet.</li>
	<li>Fjern røret fra den magnetiske separator, resuspend perlerne med 100 μL HPLC-grade vand og hvirvel i 30 s. Anbring røret tilbage i den magnetiske separator i 60 s, og fjern derefter supernatanten. Gentag denne vaskeprotokol to gange.</li>
	<li>Røret fjernes fra den magnetiske separator, og de vaskede mikrosfærer resuspenderes i 90 μL 100 mM monobasisk natriumphosphat, pH 6,2 (aktiveringsbuffer) med hvirvel i 30 s.</li>
	<li>Der tilsættes 10 μL 50 mg/ml sulfo-NHS (fortyndet med aktiveringsbuffer) til mikrosfærerne og hvirvel forsigtigt i 10 s. Der tilsættes 10 μL 50 mg/ml EDC-opløsning (fortyndet med aktiveringsbuffer) og hvirvel forsigtigt i 10 s. Inkuber mikrosfærer i 20 minutter ved stuetemperatur (RT) med en blid hvirvel hvert 10. minut.</li>
	<li>Gentag vasketrin 1,4-1,5 med 50 mM MES, pH 5,0 (koblingsbuffer) i stedet for vand af LC/MS-kvalitet i alt to vaske.</li>
	<li>Røret fjernes fra den magnetiske separator, og perlerne resuspenderes med 100 μL koblingsbuffer med hvirvel i 30 s efterfulgt straks af tilsætning af den ønskede mængde protein.</li>
	<li>Det samlede volumen bringes op på 150 μL med koblingsbuffer. Bland koblingsreaktion med hvirvel i 30 s og inkuberes i 2 timer ved rotation ved RT. BEMÆRK: For assays defineret heri blev konjugationer udført med følgende proteinkoncentrationer: Spike S1: 5 μg; Nucleocapsid: 5 μg; Membran: 12,5 μg.</li>
	<li>Gentag vasketrin 1.4 med fosfatbufferet saltvand (PBS)-1% gedeserumalbumin, 0,01% polysorbat-20 (slukkebuffer) i stedet for vand af LC/MS-kvalitet i alt to vaske. Resuspend de vaskede mikrosfærer i 100 μL Quench Buffer indeholdende 0,05% natriumazid med hvirvel i 30 s. BEMÆRK: Lad perlerne slukke helt i mindst 6 timer, før du går videre til en anden procedure.</li>
	<li>Tæl antallet af genvundne mikrosfærer ved hjælp af en automatiseret celletæller eller et hæmocytometer. Registrer den observerede perlekoncentration.</li>
	<li>De koblede mikrosfærer opbevares på køl ved 4 °C i mørke.</li>
</ol>2. Procedurer
<ol><li>Assay ydeevne (Basisprotokol)<ol>
<li>Resuspend de koblede mikrosfærer med hvirvel i 30 s og sonikere i ~ 60-90 s.</li>
		<li>Fjern den krævede mængde af hvert perlekolloid fra det respektive rør, og kombiner perlekolloider i et nyt 1,5 ml mikrocentrifugerør.</li>
		<li>Indsæt røret i en magnetisk separator, og lad adskillelse forekomme i 60 sek. Når røret stadig er i den magnetiske separator, skal du forsigtigt fjerne supernatanten uden at forstyrre perlepellet.</li>
		<li>Fjern perlerne fra separatoren, resuspend perlerne med 100 μL PBS-1% bovint serumalbumin, 0,01% polysorbat-20 (Assay Buffer) og hvirvel i 30 s. Anbring røret i en magnetisk separator, og lad adskillelse forekomme i 60 s. Gentag denne vaskeprotokol (dvs. trin 2.1.3-2.1.4) to gange</li>
		<li>Koncentrationen af den 3-plex arbejdende mikrosfæreblanding justeres ved at tilsætte et passende volumen Assay Buffer for at generere en slutkoncentration på 100 mikrosfærer pr. 1 μL for hvert mål.</li>
		<li>Aliquot 12,5 μL af mikrosfæreblandingen fremstillet i trin 2.1.5 i hver brønd af en 384-brøndplade eller 25 μL i hver brønd i en 96-brøndplade.</li>
		<li>Plasma-/serumprøverne fortyndes 500 gange i Assay Buffer. Forbered standardprøver i henhold til den ønskede titrering.</li>
		<li>Der tilsættes 12,5 μL Assay Buffer som blindprøve, og hver af de fortyndede prøver eller standardkomponenter tilsættes i hver af de udpegede brønde i en prøveplade med 384 brønde eller 25 μL af blindprøven eller standarden i hver brønd i en prøveplade med 96 brønde.</li>
		<li>Dæk pladen med en aluminiumsforsegling eller folie, og inkuber i 1 time ved RT på en pladeryster indstillet til 700 o / min. BEMÆRK: Skematisk for fortyndingskurverne findes i tabel 1.</li>
		<li>Der fremstilles en opløsning af anti-humane detektionsantistoffer (sekundære antistofopløsninger) ved 4 μg/ml med assaybuffer som specificeret i trin 2.1.11.</li>
		<li>Forbered gede-anti-human IgM, konjugeret med Super Bright 436 (SB)/Goat-anti-human IgA, Phycoerythrin (PE) Konjugerede detektionsantistoffer ved 4 μg/ml; eller Gede-anti-human IgM, SB Konjugat/Ged-anti-human IgG, PE Konjugerede detektioner antistoffer ved 4 μg/ml. BEMÆRK: For et 384-brønds pladeformat kræves 12,5 μL/brønd af den fremstillede sekundære antistofopløsning, og for et 96-brønd pladeformat kræves 25 μL/brønd.</li>
		<li>Placer pladen på en magnetisk separator, vask hurtigt og vend kraftigt over en biologisk farlig beholder for at fjerne væske fra brøndene. Med pladen stadig omvendt, bank pladen kraftigt mod en tyk papirklat.</li>
		<li>Hver brønd vaskes med 100 μL Assay Buffer, og væsken fjernes ved kraftig inversion over en biohazard beholder, som tidligere beskrevet. Disse trin gentages (2.1.12-2.1.13) for i alt to vaske. Kassér alle brugte papirskiver i en biohazard beholder.</li>
		<li>Der tilsættes 12,5 μL af den sekundære antistofarbejdsopløsning til hver brønd i en 384-brøndplade eller 25 μL til hver brønd i en 96-brøndplade. Dæk pladen med en aluminiumsforsegling eller folie, og inkuber i 30 minutter ved RT på en pladeryster indstillet til 700 o / min.</li>
		<li>Gentag vasketrin 2.1.12-2.1.13</li>
		<li>Der tilsættes 75 μL Assay Buffer i hver brønd i en 384-brøndplade eller 100 μL i hver brønd i en 96-brøndplade. Dæk pladen med en aluminiumsforsegling eller folie, og inkuber i 5 minutter ved RT på en pladeryster indstillet til 700 o / min.</li>
		<li>Analysér 60 μL via instrumentanalysatoren i henhold til systemmanualen.</li>
	</ol></li>
	<li>Optimering af inkubationstid for prøvefangst<ol>
<li>Trinene i punkt 2.1 udføres ved hjælp af inkubationstiden på 30 minutter, 60 minutter og 120 minutter i trin 2.1.9. BEMÆRK: Inkubationer kan udføres enten med forskellige plader eller ved at holde pause i trin 2.1.6, indtil tiden går videre til trin 2.1.9. for at opnå de ønskede inkubationstider.</li>
		<li>Fortsæt med pladeaflæsningen på analysatoren ved hjælp af 60 μL af assayblandingen i henhold til producentens anbefalinger.</li>
	</ol></li>
	<li>Optimering af sekundær antistofkoncentration<ol>
<li>Denne procedure udføres som beskrevet i punkt 2.1, med undtagelse af de endelige koncentrationer af reagenser i den sekundære antistofarbejdsopløsning (fremstillet i trin 2.1.10-2.1.11), modificeret som følger: Gede-humane (eller kanin) IgM, SB-konjugerede detektionsantistoffer ved 8, 4, 2, 1 og 0,5 μg/ml. Gede-humane (eller kanin) IgA, PE-konjugerede detektionsantistoffer ved 8, 4, 2, 1 og 0,5 μg/ml. Gede-anti-humane (eller kanin) IgG, PE-konjugerede detektionsantistoffer ved 8, 4, 2, 1 og 0,5 μg/ml. Gede-menneske-menneske (eller kanin) IgG, PE-konjugat/ged-menneskefjendsk (eller kanin) IgM, SB-konjugeret detektionsantistoffer ved 8, 4, 2, 1 og 0,5 μg/ml. Gede-menneskefjendske (eller kanin)IgA, PE-konjugat/gede-menneske-menneske (eller kanin) IgM, SB-konjugerede detektionsantistoffer ved 8, 4, 2, 1 og 0,5 μg/ml.</li>
		<li>Fortsæt med pladeaflæsningen på analysatoren ved hjælp af 60 μL af assayblandingen i henhold til producentens anbefalinger.</li>
	</ol></li>
	<li>Optimering af sekundær antistof inkubationstid<ol>
<li>Denne procedure udføres som beskrevet i punkt 2.1 med 15 min, 30 min, 60 min og 120 min inkubationsvarighed som defineret i trin 2.1.14.</li>
		<li>Fortsæt med pladeaflæsningen på analysatoren ved hjælp af 60 μL af assayblandingen i henhold til producentens anbefalinger.</li>
	</ol></li>
	<li>Evaluering af emneprøver med optimerede dobbeltkanalassays<ol>
<li>Indsaml forsøgspersoner plasmaprøver (n = 4) på dage -21, -11, -1/0, +14, +28, +60, +90 og +120 i forhold til afslutningen af Covid-19 vaccine (dvs. anden dosis) administration. BEMÆRK: Dag 0 repræsenterer det tidspunkt, hvor vaccinationen blev afsluttet.</li>
		<li>Udfør alle assays ved hjælp af basisprotokollen (afsnit 2.1.) som enten et IgG/IgM- eller IgA/IgM-dobbeltkanalassay.</li>
		<li>Normaliser resultaterne til den maksimale observerede MFI-værdi (Median Fluorescent Intensity) for hvert specifikt immunglobulin og assay.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol>
	<li>Tighe, P. J., Ryder, R. R., Todd, I., Fairclough, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ELISA+in+the+multiplex+era:+potentials+and+pitfalls.">ELISA in the multiplex era: potentials and pitfalls.</a> Proteomics - Clinical Applications. 9, 406-422 (2015).</li><li>Baker, H. N., Murphy, R., Lopez, E., Garcia, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conversion+of+a+capture+ELISA+to+a+Luminex+xMAP+assay+using+a+multiplex+antibody+screening+method.">Conversion of a capture ELISA to a Luminex xMAP assay using a multiplex antibody screening method.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (65), e4084 (2012).</li><li>Powell, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+multiplex+microsphere-based+immunoassay+increases+the+sensitivity+of+siv-specific+antibody+detection+in+serum+samples+and+mucosal+specimens+collected+from+rhesus+macaques+infected+with+SIVmac239.">A multiplex microsphere-based immunoassay increases the sensitivity of siv-specific antibody detection in serum samples and mucosal specimens collected from rhesus macaques infected with SIVmac239.</a> BioResearch Open Access. 2 (3), 171-178 (2013).</li><li>Volpetti, F., Garcia-Cordero, J., Maerkl, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microfluidic+platform+for+high-throughput+multiplexed+protein+quantitation.">A microfluidic platform for high-throughput multiplexed protein quantitation.</a> PLoS One. 10 (2), 0117744 (2015).</li><li>Rabi, F. A., Al Zoubi, M. S., Kasasbeh, G. A., Salameh, D. M., Al-Nasser, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SARS-CoV-2+and+coronavirus+disease+2019:+What+we+know+so+far.">SARS-CoV-2 and coronavirus disease 2019: What we know so far.</a> Pathogens. 9 (3), 231 (2020).</li><li>Asif, M., Xu, Y., Xiao, F., Sun, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+of+COVID-19,+vitality+of+emerging+technologies+and+preventive+measures.">Diagnosis of COVID-19, vitality of emerging technologies and preventive measures.</a> Chemical Engineering Journal. 423, 130189 (2021).</li><li>La Marca, A., Capuzzo, M., Paglia, T., Roli, L., Trenti, T., Nelson, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testing+for+SARS-CoV-2+(COVID-19):+a+systematic+review+and+clinical+guide+to+molecular+and+serological+in-vitro+diagnostic+assays.">Testing for SARS-CoV-2 (COVID-19): a systematic review and clinical guide to molecular and serological in-vitro diagnostic assays.</a> Reproductive Biomedicine Online. 41 (3), 483-499 (2020).</li><li>Armbruster, D. A., Pry, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limit+of+blank,+limit+of+detection+and+limit+of+quantitation.">Limit of blank, limit of detection and limit of quantitation.</a> The Clinical Biochemist. Reviews. 29, 49-52 (2008).</li><li>Tarhoni, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+between+circulating+tumor-associated+autoantibodies+and+clinical+outcomes+in+advanced-stage+NSCLC+patients+receiving+PD-1/-L1+directed+immune+checkpoint+inhibition.">Relationship between circulating tumor-associated autoantibodies and clinical outcomes in advanced-stage NSCLC patients receiving PD-1/-L1 directed immune checkpoint inhibition.</a> Journal of Immunological Methods. 490, 112956 (2021).</li><li>Deeks, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibody+tests+for+identification+of+current+and+past+infection+with+SARS-CoV-2.">Antibody tests for identification of current and past infection with SARS-CoV-2.</a> The Cochrane Database of Systematic Reviews. 6, 013652 (2020).</li><li>Mahalingam, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Landscape+of+humoral+immune+responses+against+SARS-CoV-2+in+patients+with+COVID-19+disease+and+the+value+of+antibody+testing.">Landscape of humoral immune responses against SARS-CoV-2 in patients with COVID-19 disease and the value of antibody testing.</a> Heliyon. 7 (4), 06836 (2021).</li><li>Ruano-Gallego, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+multiplex+antigen+microarray+for+simultaneous+IgG+and+IgM+detection+against+SARS-CoV-2+reveals+higher+seroprevalence+than+reported.">A multiplex antigen microarray for simultaneous IgG and IgM detection against SARS-CoV-2 reveals higher seroprevalence than reported.</a> Microbial Biotechnology. 14 (3), 1228-1236 (2021).</li><li>Shah, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IgG+and+IgM+antibody+formation+to+spike+and+nucleocapsid+proteins+in+COVID-19+characterized+by+multiplex+immunoblot+assays.">IgG and IgM antibody formation to spike and nucleocapsid proteins in COVID-19 characterized by multiplex immunoblot assays.</a> BMC Infectious Diseases. 21 (1), 325 (2021).</li><li>Gambino, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+a+rapid+immunochromatographic+test+with+a+chemiluminescence+immunoassay+for+detection+of+anti-SARS-CoV-2+IgM+and+IgG.">Comparison of a rapid immunochromatographic test with a chemiluminescence immunoassay for detection of anti-SARS-CoV-2 IgM and IgG.</a> Biochemia Medica (Zagreb). 30 (3), 030901 (2020).</li><li>Algaissi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SARS-CoV-2+S1+and+N-based+serological+assays+reveal+rapid+seroconversion+and+induction+of+specific+antibody+response+in+COVID-19+patients.">SARS-CoV-2 S1 and N-based serological assays reveal rapid seroconversion and induction of specific antibody response in COVID-19 patients.</a> Scientific Reports. 10, 16561 (2020).</li><li>Chiereghin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+the+evaluation+of+serological+assays+for+the+diagnosis+of+SARS-CoV-2+infection+and+COVID-19.">Recent advances in the evaluation of serological assays for the diagnosis of SARS-CoV-2 infection and COVID-19.</a> Frontiers in Public Health. 8, 620222 (2020).</li><li>Nicol, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+SARS-CoV-2+serological+tests+for+the+diagnosis+of+COVID-19+through+the+evaluation+of+three+immunoassays:+Two+automated+immunoassays+(Euroimmun+and+Abbott)+and+one+rapid+lateral+flow+immunoassay+(NG+Biotech).">Assessment of SARS-CoV-2 serological tests for the diagnosis of COVID-19 through the evaluation of three immunoassays: Two automated immunoassays (Euroimmun and Abbott) and one rapid lateral flow immunoassay (NG Biotech).</a> Journal of Clinical Virology: The Official Publication of the Pan American Society for Clinical Virology. 129, 104511 (2020).</li><li>Butt, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+multiplex+serology+to+serolomics-A+novel+approach+to+the+antibody+response+against+the+SARS-CoV-2+proteome.">From multiplex serology to serolomics-A novel approach to the antibody response against the SARS-CoV-2 proteome.</a> Viruses. 13 (5), 749 (2021).</li><li>Byrum, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=multiSero:+open+multiplex-ELISA+platform+for+analyzing+antibody+responses+to+SARS-CoV-2+infection.">multiSero: open multiplex-ELISA platform for analyzing antibody responses to SARS-CoV-2 infection.</a> medRxiv. , (2021).</li><li>Dobano, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+sensitive+and+specific+multiplex+antibody+assays+to+quantify+immunoglobulins+m,+a,+and+g+against+SARS-CoV-2+antigens.">Highly sensitive and specific multiplex antibody assays to quantify immunoglobulins m, a, and g against SARS-CoV-2 antigens.</a> Journal of Clinical Microbiology. 59 (2), 01731 (2021).</li><li>Schultz, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+validation+of+a+multiplex+microsphere+immunoassay+using+dried+blood+spots+for+SARS-CoV-2+seroprevalence:+Application+in+first+responders+in+first+responders+in+Colorado,+USA.">Development and validation of a multiplex microsphere immunoassay using dried blood spots for SARS-CoV-2 seroprevalence: Application in first responders in first responders in Colorado, USA.</a> Journal of Clinical Microbiology. 59 (6), 00290 (2021).</li><li>Beavis, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+EUROIMMUN+anti-SARS-CoV-2+ELISA+assay+for+detection+of+IgA+and+IgG+antibodies.">Evaluation of the EUROIMMUN anti-SARS-CoV-2 ELISA assay for detection of IgA and IgG antibodies.</a> Journal of Clinical Virology: The Official Publication of the Pan Americal Society for Clinical Virology. 129, 104468 (2020).</li><li>Jung, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+performance+of+a+semi-quantitative+assay+for+SARS-CoV2+IgG+and+SARS-CoV2+IgM+antibodies.">Clinical performance of a semi-quantitative assay for SARS-CoV2 IgG and SARS-CoV2 IgM antibodies.</a> Clinica Chimica Acta: International Journal of Clinical Chemistry. 510, 790-795 (2020).</li></ol>

Dr. Borgia er opfinderen af den serologiske test, der anvendes i dette manuskript, som er patentanmeldt. Artiklen præsenteres kun på en beskrivende måde uden statistiske analyser præsenteret for at undgå potentiel bias introduceret af forfatterkonflikt.

Værdsættelsen af et immunrespons på SARS-CoV-2-eksponering i forbindelse med RT-PCR-baseret overvågning af infektionsstatus er blevet godt beskrevet som en recept til at afklare forløbet af genopretning fra Covid-19, til at tjene som et middel til at identificere rekonvalescerende plasma med potentiel terapeutisk værdi og til at undersøge infektionsrater påbefolkningsskalabasis 10,11. Forskellige eksempler på forståelse af serokonversion hos mennesker inkluderer protein (antigen) arrays12, immunoblots13, hurtige immunokromatografiske konstruktioner14 og enzymbundne immunosorbentassays (ELISA'er)15,16,17. Hver af disse ovennævnte teknikker kan vurdere flere immunoglobulinisotyper individuelt med mindre ændringer. Disse procedurer kan imidlertid ikke anvendes i praksis til at muliggøre parallel analyse af flere isotyper, som præsenteret i dette manuskript, hvilket gør omkostnings- og gennemstrømningsfaktorer til begrænsninger for deres administration på en befolkningsbaseret teststrategi. Flere af disse applikationer giver også mulighed for at sammenkæde niveauer af flere antigener parallelt enten som præsenteret eller i ændrede formater, såsom en multiplex ELISA18,19. Endelig giver immunobead-platformen mulighed for at evaluere niveauer af flere antigener parallelt20,21, men er blevet begrænset til en enkelt epitop (dvs. immunoglobulinisotype) pr. assay, medmindre det nylige instrument med 'dual-channel' assayfunktioner imidlertid anvendes.
I denne rapport opregnes protokoller, der etablerer pålidelig måling af flere epitoper i et immunobead-assay ved hjælp af instrumentet i 'dual-channel' -tilstand i et casestudie af serokonversion af Covid-19-vaccinerede individer. Metoden demonstrerede fremragende præcision (% CV-værdier typisk <20%) ved hjælp af manuelle analysedesign, der kan forbedres med integrationen af laboratorieautomatiserede systemer. Assayfølsomhed og dynamisk område for alle udvalgte analytter og epitoper var egnede til rutinemæssige evalueringer. Selv om manglen på kommercielt tilgængelige antiantigen-IgA- og IgM-immunoreagenter begrænsede kvantificeringen til IgG-isotypen, udelukker en sådan begrænsning ikke muligheden for at tilbyde semikvantitative vurderinger eller vurderinger i forhold til en specifik prøve som kalibrant22,23.
Det validerede immunobead-assay blev tildelt til at undersøge serokonversion i en kohorte af personer immuniseret med Covid-19-vaccinen. I modsætning til andre lignende platforme tillader instrumentfamilien prospektering af serokonversion hos hundreder af individer om dagen i en manuel arbejdsgang og tusinder om dagen i en automatiseret ordning. Samlet set bekræfter disse resultater, at "dual channel"-metoden har passende følsomhed til beskrivelse af flere epitoper parallelt for det identiske assay og er levedygtig i en multianalytkontekst. En forskel i følsomhed over for kanal 1 og kanal 2, som udført med henholdsvis phycoerythrin og Super Bright 436 fluorophorer, kan berettige design af et specifikt eksperiment for at sikre, at der opnås levedygtige analyseresultater for et givet eksperiment. Det vil sige, at reservationen af kanal 1 for epitoper eller analytter med en lavere prævalens kan være nødvendig for at opretholde et dynamisk område af analysen, der inkluderer de observerede værdier af ukendte. Ud over denne overvejelse var analysedesign indlysende og bør være let tilgængeligt for laboratorier med begrænset analytisk kapacitet. Denne overvejelse bør bestemt afvejes, når man overvejer kanal 1 til kanal 2-interferens, som vi bemærkede for figur 5, hvorved interferens fra isotyper med højere forekomst kan forårsage vildledende analytiske fejl for dem i meget lavere forekomst, når de måles i et dobbeltkanalformat. Dette potentiale for interferens i situationer med meget forskellige analysandkoncentrationer kan udgøre en betydelig begrænsning af tilgangen, hvis den ikke håndteres korrekt i analysedesignfasen.
Afslutningsvis blev der præsenteret en metode til hurtigt at måle antistoftitre fra de vigtigste immunoglobulinisotyper forbundet med et immunrespons på Covid-19-infektion eller vaccination. Anvendelse af denne tilgang på en langsgående måde til vurdering af serokonversion kan give indsigt, der bedre kan bruges til at styre og / eller overvåge sygdomsforløbet eller alternativt guide potentielle Covid-19 boostervaccineprogrammer.

Samtidig måling af flere sygdomsrelaterede biomarkører i biologiske prøver tillader beskrivende og forudsigelig indsigt i patologiske processer. Mens konventionelle enkeltanalytiske immunologiske procedurer, såsom enzymbundne immunosorbentassays (ELISA'er), har været hjørnestenen i kvantitative analyser i både kliniske og forskningsmiljøer, kan disse teknikker have betydelige begrænsninger med hensyn til gennemstrømning, mængden af prøver, der kræves til hver måling, og omkostningseffektivitet, der i høj grad begrænser undersøgelsen af flere biologiske elementer, der ofte er sammenflettet gennem sygdomsforløbet1 . Mikrosfærebaseret multiplexingteknologi er blevet en uundværlig platform for både diagnostiske og forskningsfaciliteter for sin evne til at kombinere assays for at forbedre laboratoriegennemstrømningen, afbøde prøveknaphed og reducere gentagne test for at maksimere omkostningsbesparelser 1,2,3,4. For nylig er yderligere forstærkning af denne multiplexingkraft blevet introduceret med instrumenter, der har dual-reporter-kapaciteter. Dual-reporter-funktionen implementerer to fluorescerende kanaler til detektion, der leverer en anden dimension af multiplexing, hvilket gør det muligt at detektere flere epitoper på den samme analyt.
Alvorligt akut respiratorisk syndrom coronavirus 2 (SARS-CoV-2) er det patogen, der er ansvarlig for den nuværende coronavirus sygdom 2019 (COVID-19) pandemi5. Mens RT-PCR-test er afgørende for infektionsbekræftelse i begyndelsen af sygdomsforløbet, har serologiske undersøgelser af antistoftitre vist sig at være afgørende for nøjagtig og fuldstændig kritik af enkeltpersoner vedrørende en tidligere eksponering eller genopretning; et svar på immunisering og/eller en evaluering af Covid-19-vaccinationseffektivitet 6,7.
Denne rapport afgrænser metoder til måling af serokonversion for flere SARS-CoV-2 virale antigener, der anvender et flowbaseret, multiplexlæser dobbeltrapporteringssystem. Specifikt beskrives samtidig påvisning af to antistofundertyper (konfigureret som IgG / IgM eller IgA / IgM) til et 3-plex SARS-CoV-2 antigenpanel, der inkluderer assays for Spike S1, Nucleocapsid og Membrane (aka Matrix) glycoproteiner. Denne tilgang giver en ideel virksomhed til indfangning af langsgående serokonversion og bidrager med et værdifuldt værktøj i arsenalet mod Covid-19-pandemien.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>384-well black side polystyrene microtiter plates</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>12-565-346</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Activation buffer (0.1 M NaH2PO4, pH 6.2)</td>
			<td>Prepared in house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Assay buffer (PBS, 1% Bovine Serum Albumin, 0.01% Polysorbate-20)</td>
			<td>Prepared in house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin, heat shock fraction</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>A-7888-50G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coupling buffer (50 mM MES, pH 5.0)</td>
			<td>Prepared in house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>COVID 19 M Coronavirus Recombinant Matrix Protein (6xHis tag)</td>
			<td>MyBioSource</td>
			<td>MBS8574735</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable pipette tips</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDC (1-Ethyl-3-[3-dimethylaminopropyl]carbodiimide hydrochloride)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>PIA35391</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat Albumin, Fraction V Powder</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>A2514-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgA Goat anti-Human, R-PE, Polyclonal</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>OB205009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgG Goat anti-Human, R-PE, Polyclonal</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>OB204009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgG Goat anti-Rabbit, R-PE, Polyclonal</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>OB403009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgM Goat anti-Human, R-PE, Polyclonal</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>OB202009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgM Mouse anti-Human, SB 436, Clone SA-DA4</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>62999842</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Instrument Analyzer</td>
			<td>Luminex Corp.</td>
			<td>INTELLIFLEX-RUO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low-Bind microcentrifuge tubes (1.5 mL)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>13-698-794</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MagPlex-C Microspheres, Region XXX</td>
			<td>Luminex Corp.</td>
			<td>MC10XXX-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MES hydrate (2-(N-Morpholino) ethane sulfonic acid hydrate)</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>M2933</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate aluminum sealing tape</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>07-200-683</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polysorbate-20</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>BP337-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quality Biological Inc. PBS, pH 7.2</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>50-751-7328</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quench buffer (PBS, 1% Goat Serum Albumin, 0.01% Polysorbate-20)</td>
			<td>Prepared in house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Nucleocapsid Protein (His tag)</td>
			<td>Sino Biologicals</td>
			<td>40588-V08B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Spike Protein (S1 Subunit, His tag)</td>
			<td>Sino Biologicals</td>
			<td>40591-V08H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Spike RBD Antibody, Rabbit pAb</td>
			<td>Sino Biologicals</td>
			<td>40592-T62</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Nucleocapsid Antibody, Rabbit mAb</td>
			<td>Sino Biologicals</td>
			<td>40588-R0004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SARS-CoV-2 (COVID-19) Membrane Antibody (IN), Rabbit pAb</td>
			<td>ProSci</td>
			<td>10-516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sulfo-NHS (N-hydroxysulfosuccinimide)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>PIA39269</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wash Buffer (PBS, 0.01% Polysorbate-20)</td>
			<td>Prepared in house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water, LC/MS grade</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>W-64</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dynamic monitoring of seroconversion using a multianalyte immunobead assay for covid-19

Multiplexteknologier til forhør af flere biomarkører i koncert har eksisteret i flere årtier; Metoder til evaluering af flere epitoper på samme analysand er dog fortsat begrænsede. Denne rapport beskriver udviklingen og optimeringen af et multiplekset immunobead-assay til serologisk test af almindelige immunoglobulinisotyper (f.eks. IgA, IgM og IgG) forbundet med et immunrespons på SARS-CoV-2-infektion eller vaccination. Assays blev udført ved hjælp af en flowbaseret, multiplex fluorescerende læser med dual-channel kapacitet. Optimeringer fokuserede på analytfangsttid, detektionsantistofkoncentration og detektionsantistofinkubationstid. Analytiske assay-ydeevnekarakteristika (f.eks. assayområde (herunder nedre og øvre grænser for kvantificering) og intra- og interassaypræcision) blev fastlagt for enten IgG/IgM- eller IgA/IgM-serotypekombinationen i tandem ved hjælp af »dual channel«-tilstanden. Analyteoptagelsestider på 30 minutter for IgG, 60 minutter for IgM og 120 minutter for IgA var egnede til de fleste applikationer, hvilket gav en balance mellem analyseydelse og gennemstrømning. Optimale detektionsantistofinkubationer ved 4 μg /ml i 30 minutter blev observeret og anbefales til generelle anvendelser i betragtning af den generelt fremragende præcision (procentvis varianskoefficient (% CV) ≤ 20%) og observerede følsomhedsværdier. Det dynamiske område for IgG-isotypen strakte sig over flere størrelsesordener for hvert assay (Spike S1, Nucleocapsid og Membrane glycoproteiner), hvilket understøtter robuste titerevalueringer ved en fortyndingsfaktor på 1:500 til kliniske anvendelser. Endelig blev den optimerede protokol anvendt til overvågning af Spike S1-serokonversion til forsøgspersoner (n = 4), der gennemførte et SARS-CoV-2-vaccineregime. Inden for denne kohorte blev Spike S1 IgG-niveauer observeret for at nå maksimale titere 14 dage efter administration af anden dosis ved en meget højere (~ 40 gange) signalintensitet end enten IgM- eller IgA-isotyper. Interessant nok observerede vi meget variable Spike S1 IgG titer henfaldshastigheder, der stort set var emneafhængige, blev observeret, hvilket vil være emnet for fremtidige undersøgelser.

Watch this Scientific Journal Video about Dynamic Monitoring of Seroconversion using a Multianalyte Immunobead Assay for Covid-19 at JoVE.com

Dynamic Monitoring of Seroconversion using a Multianalyte Immunobead Assay for Covid-19

Denne artikel beskriver en bekvem metode til overvågning af dynamiske ændringer i antistoftitre for to immunoglobulinisotyper samtidigt (enten IgA, IgM eller IgG) som følge af et immunrespons på SARS-CoV-2-infektion eller vaccination. Dette 'Multianalyte Covid-19 Immune Response Panel' anvender tre indirekte immunassays bygget på kodede mikrosfærer, der læses ved hjælp af en flowbaseret multiplexlæser med 'dual-channel' kapacitet.

Dynamisk overvågning af serokonversion ved hjælp af et multianalyt immunobead-assay for Covid-19

Multiplex technologies for interrogating multiple biomarkers in concert have existed for several decades; however, methods to evaluate multiple epitopes ...

Den metode, vi demonstrerer i dag, giver en løsning med høj kapacitet til evaluering af serokonvertering af antistoffer forbundet med enten COVID-19-infektioner eller vaccination til rutinemæssige analyser. Interessant nok giver denne tilgang os mulighed for at evaluere flere epitoper på samme analyt. Dette har adskillige anvendelser inden for biologiske videnskaber, herunder cellesignaleringsundersøgelser og overvågning af immunresponser.Demonstrerer denne teknik for dig i dag vil være Dr.Imad Tarhoni, en postdoktor i mit laboratorium. Til at begynde med skal du vælge tre forskellige hætteglas i de magnetiske mikrosfærer med unikke perleområder og registrere perle-ID og partioplysninger for hvert anvendt hætteglas. Derefter hvirvel den valgte mikrosfærebestand i 60 sekunder og sonikere i fem minutter.Overfør 1,0 gange 10 til de seks perler til et 1,5 ml mikrocentrifugerør med lavt proteinindhold, og indsæt røret i en magnetisk separator. for at tillade adskillelsen i 60 sekunder. Når røret stadig er i den magnetiske separator, skal du forsigtigt fjerne supernatanten uden at forstyrre perlepellet.Fjern røret fra den magnetiske separator, og resuspend derefter perlerne med 100 mikroliter HPLC-kvalitet vand og hvirvel i 30 sekunder. Igen placeres røret tilbage i den magnetiske separator i 60 sekunder, og fjern derefter supernatanten. Gentag vaskeprotokollen to gange.Efter den sidste vask fjernes røret fra den magnetiske separator og genoplives de vaskede mikrosfærer i 90 mikroliter aktiveringsbuffer, pH 6,2, med hvirvel i 30 sekunder. Dernæst behandles mikrosfærerne sekventielt med 10 mikroliter på 50 milligram pr. milliliter anhydroxy-sulfosuccinamid og 10 mikroliter på 50 milligram pr. milliliter EDC-opløsning med hvirvel i 10 sekunder. Senere inkuberes mikrosfærerne i 20 minutter ved stuetemperatur med en blid hvirvel hvert 10. minut.Efter inkubation vaskes mikrosfærerne to gange med 50-millimolar MES eller koblingsbuffer, pH 5,0, som beskrevet tidligere. Gentag vasken to gange. Når det er gjort, fjernes røret fra den magnetiske separator og resuspender perlerne med 100 mikroliter koblingsbuffer med hvirvel i 30 sekunder, efterfulgt straks ved at tilføje den ønskede mængde protein til røret.Bring det samlede volumen til 150 mikroliter med koblingsbuffer og bland reaktionen med hvirvel i 30 sekunder. Derefter inkuberes røret i to timer ved rotation ved stuetemperatur. Efter inkubation vaskes mikrosfærerne to gange med PBS-slukningsbuffer, og de vaskede mikrosfærer resuspenderes i 100 mikroliter slukningsbuffer indeholdende 0,05% natriumazid med hvirvel i 30 sekunder.Tæl antallet af genvundne mikrosfærer ved hjælp af en automatiseret celletæller, og registrer den observerede perlekoncentration. For assay ydeevne, resuspend de koblede mikrosfærer med hvirvel i 30 sekunder og sonikere i 60 til 90 sekunder. Fjern derefter den nødvendige mængde af hvert perlekolloid fra det respektive rør og kombiner perlekolloider i et nyt 1,5 ml mikrocentrifugerør.Indsæt derefter røret i en magnetisk separator og tillad adskillelse i 60 sekunder. Når røret stadig er i den magnetiske separator, skal du fjerne supernatanten uden at forstyrre perlepillen. Når perlerne er fjernet fra separatoren, skal perlerne resuspenderes i 100 mikroliter assaybuffer.Vortex i 30 sekunder, før røret placeres i en magnetisk separator i 60 sekunder for at adskille perlerne. Gentag vasken to gange. Derefter justeres koncentrationen af den tre-plex arbejdende mikrosfæreblanding ved at tilsætte et passende volumen assaybuffer for at generere en endelig koncentration på 100 mikrosfære pr. Mikroliter for hvert mål.Aliquot 25 mikroliter af mikrosfæreblandingen i hver brønd af en 96-brøndplade. Fortynd plasma- eller serumprøver 500 gange i analysebuffer, og tilbered standardprøver i henhold til den ønskede titrering. Der tilsættes 25 mikroliter analysebuffer som blindprøve, og hver af de fortyndede prøver eller standard tilsættes i hver udpeget brønd i en prøveplade med 96 brønde.Når du er færdig, skal du dække pladen med en aluminiumforsegling eller folie for at inkubere i en time ved stuetemperatur på en pladeryster indstillet til 700 rotationer i minuttet. Der fremstilles en opløsning af anti-humane detektionsantistoffer eller sekundære antistofopløsninger ved fire mikrogram pr. mikroliter med analysebuffer som beskrevet i manuskriptet. Placer pladen på en magnetisk separator for at vaske hurtigt, og vend derefter pladen kraftigt over en biofarlig beholder for at fjerne væske fra brøndene.Med pladen stadig omvendt, bank pladen kraftigt mod en tyk papirklat. Vask derefter hver brønd med 100 mikroliter analysebuffer og fjern væsken ved kraftig inversion over en biohazardbeholder. Gentag vasken to gange.Efter den sidste vask kasseres alle brugte papirskiver i en biohazardbeholder. Derefter tilsættes 25 mikroliter sekundær antistofarbejdsopløsning til hver brønd i en 96-brøndplade og dækker pladen med aluminiumsfolie for at inkubere på en pladerosker ved 700 rotationer pr. Minut. Efter 30 minutters inkubation vaskes pladens brønde to gange med analysebuffer som vist tidligere.Derefter tilsættes 100 mikroliter analysebuffer i hver brønd på pladen med 96 brønde. Dæk pladen med aluminiumsfolie og inkuber i fem minutter på en tallerkenryster ved stuetemperatur. Analyser en prøve på 60 mikroliter via instrumentanalysatoren i henhold til systemmanualen.For optimering af prøvefangstinkubationstiden inkuberes pladerne i en varighed på 30, 60 og 120 minutter. Efter inkubation analyseres 60 mikroliter af assayblandingen på analysatoren. En syv-punkts standardkurve baseret på en 1: 5 seriel fortyndingsserie blev evalueret for spike S1, membranantistofferne og nucleocapsid.Intra-assay præcisionstesten blev udført på pladen for at evaluere assaypræcision beregnet som procent variationskoefficient, standardafvigelse og gennemsnit. For inter-assay præcision blev der forberedt tre forskellige partier af perlesættene til hvert assay. Præcisionsvariabler af assayet med standard- og humane plasmaprøver blev beregnet.De gennemsnitlige median fluorescerende intensitetsværdier ved 120 minutter af inkubationen var optimale for IgG-titre for spike S1, membranen og nukleocapsidantistofferne, hvilket indikerer en hurtig primær antistofbindende kinetik. Sekundære antistofkoncentrationsoptimeringer i dobbeltkanalydelse demonstrerede en bred vifte af signaler i lineær måling for alle koncentrationer. De observerede signaler fra forskellige tidsinkubationer af de sekundære antistoffer og detaljerne om signalændringerne for alle inkubationstiderne er vist her.I specificitetsvurderingerne for dobbeltkanalsassays blev der observeret ubetydelig krydssignalforurening mellem den tomme og den enkelte reporterkanal. I illustrationen af serokonverteringshændelser efter COVID 19-vaccinationen var de observerede spike S1 IgA- og IgM-værdier ca. 40 gange lavere end IgG-isotypetitrene. Denne metode har vigtige konsekvenser for overvågning af respons på vacciner hos immunkompromitterede individer.Det vil give os mulighed for at afgøre, om disse patienter virkelig bliver beskyttet af disse vaccinationer.

Research

JoVE Journal

Medicine

Quantitative Visualization and Detection of Skin Cancer Using Dynamic Thermal Imaging

In 2010 approximately 68,720 melanomas will be diagnosed in the US alone, with around 8,650 resulting in death 1. To date, the only effective treatment ...

Computerized Dynamic Posturography for Postural Control Assessment in Patients with Intermittent Claudication

Computerized dynamic posturography with the EquiTest is an objective technique for measuring postural strategies under challenging static and dynamic ...

Dynamic Lung Tumor Tracking for Stereotactic Ablative Body Radiation Therapy

Dynamisk Lung Tumor Tracking for Stereotaktisk ablative Krop strålebehandling

Physicians considering stereotactic ablative body radiation therapy (SBRT) for the treatment of extracranial cancer targets must be aware of the sizeable ...

A Detailed Protocol for Perspiration Monitoring Using a Novel, Small, Wireless Device

En detaljeret protokol for Sved Overvågning Ved hjælp af en roman, Small, trådløs enhed

Perspiration monitoring can be utilized for the detection of certain diseases, such as thermoregulation and mental disorders, particularly when the ...

Identifying Inhibitors of the HBx-DDB1 Interaction Using a Split Luciferase Assay System

Identificering af hæmmere af HBx-DDB1-interaktionen ved hjælp af et split luciferase-analyse system

There is an urgent need for novel therapeutic agents for hepatitis B virus (HBV) infection. Although currently available nucleos(t)ide analogs potently ...

Evaluation of Capnography Sampling Line Compatibility and Accuracy when Used with a Portable Capnography Monitor

Evaluering af capnografi samplinglinje kompatibilitet og nøjagtighed, når de anvendes med en bærbar Capnography Monitor

Capnography is commonly used to monitor patient&#8217;s ventilatory status. While sidestream capnography has been shown to provide a reliable assessment ...

Real-Time Dynamic Navigation System for the Precise Quad-Zygomatic Implant Placement in a Patient with a Severely Atrophic Maxilla

Dynamisk navigationssystem i realtid til præcis quad-zygomatisk implantatplacering hos en patient med en alvorligt atrofisk maxilla

Zygomatic implants (ZIs) are an ideal way to address cases of a severely atrophic edentulous maxilla and maxilla defects because they replace extensive ...

Dynamic Navigation for Dental Implant Placement

Dynamisk navigation til placering af tandimplantater

In modern implantology, the application of surgical navigation systems is becoming increasingly important. In addition to static surgical navigation ...

A Surgical Model of Heart Failure with Preserved Ejection Fraction in Tibetan Minipigs

En kirurgisk model af hjertesvigt med bevaret udstødningsfraktion hos tibetanske minigrise

More than half of heart failure (HF) cases are classified as heart failure with preserved ejection fraction (HFpEF) worldwide. Large animal models are ...

Dynamic Navigation in Endodontics: Guided Access Cavity Preparation by Means of a Miniaturized Navigation System

Dynamisk navigation i endodonti: Guidet adgang hulrum forberedelse ved hjælp af et miniaturiseret navigationssystem

In the case of teeth with pulp canal calcification (PCC) and apical pathology or pulpitis, root canal treatment can be very challenging. PCC are common ...