Name: dynamic monitoring of seroconversion using a multianalyte immunobead assay for covid-19
Uploaded: 2022-02-16T15:00:00
Duration: 8 min 48 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dynamic Monitoring of Seroconversion using a Multianalyte Immunobead Assay for Covid-19 at JoVE.com

De auteurs willen de Rush Biomarker Development Core bedanken voor het gebruik van hun faciliteiten, de Rush Biorepository voor onderwerpinschrijving en biospecimenverwerking, en de Walder Foundation's Chicago Coronavirus Assessment Network (Chicago CAN) Initiative subsidienummers SCI16 (J.R.S. en J.A.B.) en 21-00147 (J.R.S. en J.A.B.) en een prijs van de Swim Across America Foundation (J.A.B.).

Alle proefpersonen werden ingeschreven met schriftelijke geïnformeerde toestemming met volledige goedkeuring van de Institutional Review Board (IRB) van Rush University Medical Center onder protocol ORA 20101207 met alle institutionele richtlijnen voor ethisch onderzoeksgedrag in acht genomen. Bloed werd verzameld via conventionele flebotomie in lavendel vacutainers (K2EDTA) en verwerkt met aanbevolen protocollen. Het resulterende plasma werd gearchiveerd bij -80 °C totdat beoordelingen werden uitgevoerd.
1. Bereiding van antigeen-geconjugeerde microsferen
<ol><li>Selecteer drie verschillende injectieflacons met magnetische microsferen met unieke kraalgebieden, waarbij de kraal-ID en partij-informatie voor elke gebruikte injectieflacon worden geregistreerd. OPMERKING: De volgende stappen worden gevolgd voor elk afzonderlijk microsfeergebied. Microsferen zijn lichtgevoelig en moeten worden beschermd tegen langdurige blootstelling aan licht. Let tijdens wasstappen op dat je de microsferen niet verstoort. Als u gestoord bent, laat dan een tweede scheiding van 60 s toe.</li>
	<li>Vortex de microsfeervoorraad voor 60 s en sonicate gedurende 5 minuten voorafgaand aan gebruik om geaggregeerde kralen te dissociëren.</li>
	<li>Breng 1,0 x 106 kralen over naar een 1,5 ml eiwitarm bindende microcentrifugebuizen.</li>
	<li>Steek de buis in een magnetische separator en laat scheiding gedurende 60 s plaatsvinden. Met de buis nog in de magnetische separator, verwijdert u voorzichtig het supernatant zonder de kraalkorrel te verstoren.</li>
	<li>Verwijder de buis uit de magnetische afscheider, resuspenseer de kralen met 100 μL HPLC-water en vortex gedurende 30 s. Plaats de buis terug in de magnetische separator gedurende 60 s en verwijder vervolgens het supernatant. Herhaal dit wasprotocol twee keer.</li>
	<li>Verwijder de buis uit de magnetische afscheider en resuspenseer de gewassen microsferen in 90 μL van 100 mM monobasisch natriumfosfaat, pH 6,2 (activeringsbuffer) door vortex gedurende 30 s.</li>
	<li>Voeg 10 μL 50 mg/ml Sulfo-NHS (verdund met activeringsbuffer) toe aan de microsferen en vortex voorzichtig gedurende 10 s. Voeg 10 μL 50 mg/ml EDC-oplossing (verdund met activeringsbuffer) en vortex voorzichtig toe gedurende 10 s. Incubeer microsferen gedurende 20 minuten bij kamertemperatuur (RT) met een zachte vortex om de 10 minuten.</li>
	<li>Herhaal wasstappen 1.4-1.5 met 50 mM MES, pH 5.0 (Koppelingsbuffer) in plaats van water van LC/MS-kwaliteit voor in totaal twee wasbeurten.</li>
	<li>Verwijder de buis uit de magnetische separator en resuspendeer de kralen met 100 μL koppelingsbuffer door vortex gedurende 30 s, onmiddellijk gevolgd door de toevoeging van de gewenste hoeveelheid eiwit.</li>
	<li>Breng het totale volume op 150 μL met koppelingsbuffer. Meng de koppelingsreactie per vortex gedurende 30 s en incubeer gedurende 2 uur door rotatie bij RT. OPMERKING: Voor de hierin gedefinieerde testen werden conjugaties uitgevoerd met de volgende eiwitconcentraties: Spike S1: 5 μg; Nucleoside: 5 μg; Membraan: 12,5 μg.</li>
	<li>Herhaal wasstap 1.4 met Phosphate Buffered Saline (PBS)-1% Goat Serum Albumin, 0,01% Polysorbate-20 (Quench Buffer) in plaats van LC/MS-grade water voor een totaal van twee wasbeurten. Resuspendeer de gewassen microsferen in 100 μL Quench Buffer met 0,05% natriumazide door vortex gedurende 30 s. OPMERKING: Laat de kralen ten minste 6 uur volledig doven voordat u doorgaat met een andere procedure.</li>
	<li>Tel het aantal herstelde microsferen met behulp van een geautomatiseerde celteller of een hemocytometer. Noteer de waargenomen kraalconcentratie.</li>
	<li>Koel de gekoppelde microsferen in het donker op 4 °C.</li>
</ol>2. Procedures
<ol><li>Testprestaties (basisprotocol)<ol>
<li>Resuspendeer de gekoppelde microsferen door vortex gedurende 30 s en soniceer gedurende ~ 60-90 s.</li>
		<li>Verwijder de vereiste hoeveelheid van elk kraalcolloïde uit de betreffende buis en combineer de kralencolloïden in een nieuwe microcentrifugebuis van 1,5 ml.</li>
		<li>Steek de buis in een magnetische afscheider en laat de scheiding gedurende 60 seconden plaatsvinden. Met de buis nog in de magnetische separator, verwijdert u voorzichtig het supernatant zonder de kraalkorrel te verstoren.</li>
		<li>Verwijder de kralen uit de separator, resuspeneer de kralen met 100 μL PBS-1% runderserumalbumine, 0,01% polysorbaat-20 (assaybuffer) en vortex gedurende 30 s. Plaats de buis in een magnetische separator en laat 60 s scheiden. Herhaal dit wasprotocol (d.w.z. stappen 2.1.3-2.1.4) tweemaal</li>
		<li>Pas de concentratie van het 3-plex werkende microsfeermengsel aan door een geschikt volume assaybuffer toe te voegen om een uiteindelijke concentratie van 100 microsferen per 1 μL voor elk doelwit te genereren.</li>
		<li>Aliquot 12,5 μL van het in stap 2.1.5 bereide microsfeermengsel in elke put van een 384-well plaat of 25 μL in elke put van een 96-well plaat.</li>
		<li>Verdun de plasma-/serummonsters 500-voudig in Assay Buffer. Bereid standaardmonsters volgens de gewenste titratie.</li>
		<li>Voeg 12,5 μL assaybuffer toe als blanco monster en voeg elk van het verdunde monster of de standaard toe aan elke aangewezen put van een monsterplaat met 384 putten of 25 μL van het blanco, verdunde monster of de standaard in elke put van een monsterplaat met 96 putten.</li>
		<li>Bedek de plaat met een aluminium afdichting of folie en incubeer gedurende 1 uur bij RT op een platenschudder ingesteld op 700 rpm. OPMERKING: Schematisch voor de verdunningscurven is opgenomen in tabel 1.</li>
		<li>Bereid een oplossing van anti-humane detectieantistoffen (secundaire antilichaamoplossingen) bij 4 μg/ml met assaybuffer zoals gespecificeerd in stap 2.1.11.</li>
		<li>Bereid Geit-anti-humane IgM, geconjugeerd met Super Bright 436 (SB) / Goat-anti-human IgA, Phycoerythrin (PE) Conjugaat detectie antilichamen bij 4 μg / ml; of Goat-anti-human IgM, SB Conjugate/Goat-anti-human IgG, PE Conjugate detecties antilichamen bij 4 μg/ml. OPMERKING: Voor een plaatformaat met 384 putten is 12,5 μL/put van de bereide secundaire antilichaamoplossing vereist en voor een plaatformaat met 96 putten is 25 μL/put vereist.</li>
		<li>Plaats de plaat op een magnetische afscheider, was snel en keer met kracht om over een biohazard-container om vloeistof uit de putten te verwijderen. Met de plaat nog steeds omgekeerd, tik je de plaat krachtig tegen een dikke wad papier.</li>
		<li>Was elk putje met 100 μL Assay Buffer en verwijder de vloeistof door krachtige inversie over een biohazard container, zoals eerder beschreven. Herhaal deze stappen (2.1.12-2.1.13) voor een totaal van twee wasbeurten. Gooi alle gebruikte plakken papier weg in een biohazard-container.</li>
		<li>Voeg 12,5 μL van de secundaire antilichaamwerkoplossing toe aan elk putje van een 384-well plaat of 25 μL aan elke put van een 96-well plaat. Bedek de plaat met een aluminium afdichting of folie en incubeer gedurende 30 minuten bij RT op een platenschudder ingesteld op 700 rpm.</li>
		<li>Herhaal de wasstappen 2.1.12-2.1.13</li>
		<li>Voeg 75 μL assaybuffer toe aan elke put van een 384-well plaat of 100 μL in elke put van een 96-well plaat. Bedek de plaat met een aluminium afdichting of folie en incubeer gedurende 5 minuten bij RT op een platenschudder ingesteld op 700 rpm.</li>
		<li>Analyseer 60 μL via de instrumentanalysator volgens de systeemhandleiding.</li>
	</ol></li>
	<li>Optimalisatie van de incubatietijd voor het vastleggen van specimens<ol>
<li>Voer de stappen in paragraaf 2.1 uit met een incubatietijd van 30 min, 60 min en 120 min in stap 2.1.9. OPMERKING: Incubaties kunnen worden uitgevoerd met afzonderlijke platen of door te pauzeren bij stap 2.1.6 tot het tijdstip om door te gaan naar stap 2.1.9. om de gewenste incubatietijden te bereiken.</li>
		<li>Ga verder met de plaataflezing op de analysator met behulp van 60 μL van het testmengsel volgens de aanbevelingen van de fabrikant.</li>
	</ol></li>
	<li>Optimalisatie van secundaire antilichaamconcentratie<ol>
<li>Voer deze procedure uit zoals beschreven in punt 2.1, met uitzondering van de eindconcentraties van reagentia in de secundaire oplossing voor het werken van antilichamen (bereid in stap 2.1.10-2.1.11), als volgt gewijzigd: Geiten-anti-mens (of konijn) IgM, SB-geconjugeerde detectie antilichamen bij 8, 4, 2, 1 en 0,5 μg/ml. Geiten-anti-mens (of konijn) IgA, PE-geconjugeerde detectie antilichamen bij 8, 4, 2, 1 en 0,5 μg/ml. Geiten-anti-mens (of konijn) IgG, PE-geconjugeerde detectie antilichamen bij 8, 4, 2, 1 en 0,5 μg/ml. Goat-anti-human (of konijn) IgG, PE-conjugaat/Goat-anti-human (of konijn) IgM, SB-geconjugeerde detectie antilichamen bij 8, 4, 2, 1 en 0,5 μg/ml. Goat-anti-human (of konijn) IgA, PE-conjugaat/Goat-anti-human (of konijn) IgM, SB-geconjugeerde detectie antilichamen bij 8, 4, 2, 1 en 0,5 μg/ml.</li>
		<li>Ga verder met de plaataflezing op de analysator met behulp van 60 μL van het testmengsel volgens de aanbevelingen van de fabrikant.</li>
	</ol></li>
	<li>Optimalisatie van de incubatietijd van secundaire antilichamen<ol>
<li>Voer deze procedure uit zoals beschreven in rubriek 2.1 met 15 minuten, 30 minuten, 60 minuten en 120 minuten incubatietijd zoals gedefinieerd in stap 2.1.14.</li>
		<li>Ga verder met de plaataflezing op de analysator met behulp van 60 μL van het testmengsel volgens de aanbevelingen van de fabrikant.</li>
	</ol></li>
	<li>Evaluatie van proefnemingsmonsters met geoptimaliseerde dual-channel assays<ol>
<li>Verzamel plasmamonsters (n = 4) op dagen -21, -11, -1/0, +14, +28, +60, +90 en +120 met betrekking tot de voltooiing van de toediening van het Covid-19-vaccin (d.w.z. tweede dosis). OPMERKING: Dag 0 vertegenwoordigt het tijdstip waarop de vaccinatie is voltooid.</li>
		<li>Voer alle testen uit met behulp van het basisprotocol (paragraaf 2.1.) als een IgG/IgM- of IgA/IgM-dual-channel assay.</li>
		<li>Normaliseer de resultaten tot de maximale waargenomen mediane fluorescentie-intensiteit (MFI) waarde voor elke specifieke immunoglobuline en assay.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol>
	<li>Tighe, P. J., Ryder, R. R., Todd, I., Fairclough, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ELISA+in+the+multiplex+era:+potentials+and+pitfalls.">ELISA in the multiplex era: potentials and pitfalls.</a> Proteomics - Clinical Applications. 9, 406-422 (2015).</li><li>Baker, H. N., Murphy, R., Lopez, E., Garcia, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conversion+of+a+capture+ELISA+to+a+Luminex+xMAP+assay+using+a+multiplex+antibody+screening+method.">Conversion of a capture ELISA to a Luminex xMAP assay using a multiplex antibody screening method.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (65), e4084 (2012).</li><li>Powell, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+multiplex+microsphere-based+immunoassay+increases+the+sensitivity+of+siv-specific+antibody+detection+in+serum+samples+and+mucosal+specimens+collected+from+rhesus+macaques+infected+with+SIVmac239.">A multiplex microsphere-based immunoassay increases the sensitivity of siv-specific antibody detection in serum samples and mucosal specimens collected from rhesus macaques infected with SIVmac239.</a> BioResearch Open Access. 2 (3), 171-178 (2013).</li><li>Volpetti, F., Garcia-Cordero, J., Maerkl, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microfluidic+platform+for+high-throughput+multiplexed+protein+quantitation.">A microfluidic platform for high-throughput multiplexed protein quantitation.</a> PLoS One. 10 (2), 0117744 (2015).</li><li>Rabi, F. A., Al Zoubi, M. S., Kasasbeh, G. A., Salameh, D. M., Al-Nasser, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SARS-CoV-2+and+coronavirus+disease+2019:+What+we+know+so+far.">SARS-CoV-2 and coronavirus disease 2019: What we know so far.</a> Pathogens. 9 (3), 231 (2020).</li><li>Asif, M., Xu, Y., Xiao, F., Sun, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+of+COVID-19,+vitality+of+emerging+technologies+and+preventive+measures.">Diagnosis of COVID-19, vitality of emerging technologies and preventive measures.</a> Chemical Engineering Journal. 423, 130189 (2021).</li><li>La Marca, A., Capuzzo, M., Paglia, T., Roli, L., Trenti, T., Nelson, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testing+for+SARS-CoV-2+(COVID-19):+a+systematic+review+and+clinical+guide+to+molecular+and+serological+in-vitro+diagnostic+assays.">Testing for SARS-CoV-2 (COVID-19): a systematic review and clinical guide to molecular and serological in-vitro diagnostic assays.</a> Reproductive Biomedicine Online. 41 (3), 483-499 (2020).</li><li>Armbruster, D. A., Pry, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limit+of+blank,+limit+of+detection+and+limit+of+quantitation.">Limit of blank, limit of detection and limit of quantitation.</a> The Clinical Biochemist. Reviews. 29, 49-52 (2008).</li><li>Tarhoni, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+between+circulating+tumor-associated+autoantibodies+and+clinical+outcomes+in+advanced-stage+NSCLC+patients+receiving+PD-1/-L1+directed+immune+checkpoint+inhibition.">Relationship between circulating tumor-associated autoantibodies and clinical outcomes in advanced-stage NSCLC patients receiving PD-1/-L1 directed immune checkpoint inhibition.</a> Journal of Immunological Methods. 490, 112956 (2021).</li><li>Deeks, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibody+tests+for+identification+of+current+and+past+infection+with+SARS-CoV-2.">Antibody tests for identification of current and past infection with SARS-CoV-2.</a> The Cochrane Database of Systematic Reviews. 6, 013652 (2020).</li><li>Mahalingam, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Landscape+of+humoral+immune+responses+against+SARS-CoV-2+in+patients+with+COVID-19+disease+and+the+value+of+antibody+testing.">Landscape of humoral immune responses against SARS-CoV-2 in patients with COVID-19 disease and the value of antibody testing.</a> Heliyon. 7 (4), 06836 (2021).</li><li>Ruano-Gallego, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+multiplex+antigen+microarray+for+simultaneous+IgG+and+IgM+detection+against+SARS-CoV-2+reveals+higher+seroprevalence+than+reported.">A multiplex antigen microarray for simultaneous IgG and IgM detection against SARS-CoV-2 reveals higher seroprevalence than reported.</a> Microbial Biotechnology. 14 (3), 1228-1236 (2021).</li><li>Shah, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IgG+and+IgM+antibody+formation+to+spike+and+nucleocapsid+proteins+in+COVID-19+characterized+by+multiplex+immunoblot+assays.">IgG and IgM antibody formation to spike and nucleocapsid proteins in COVID-19 characterized by multiplex immunoblot assays.</a> BMC Infectious Diseases. 21 (1), 325 (2021).</li><li>Gambino, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+a+rapid+immunochromatographic+test+with+a+chemiluminescence+immunoassay+for+detection+of+anti-SARS-CoV-2+IgM+and+IgG.">Comparison of a rapid immunochromatographic test with a chemiluminescence immunoassay for detection of anti-SARS-CoV-2 IgM and IgG.</a> Biochemia Medica (Zagreb). 30 (3), 030901 (2020).</li><li>Algaissi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SARS-CoV-2+S1+and+N-based+serological+assays+reveal+rapid+seroconversion+and+induction+of+specific+antibody+response+in+COVID-19+patients.">SARS-CoV-2 S1 and N-based serological assays reveal rapid seroconversion and induction of specific antibody response in COVID-19 patients.</a> Scientific Reports. 10, 16561 (2020).</li><li>Chiereghin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+the+evaluation+of+serological+assays+for+the+diagnosis+of+SARS-CoV-2+infection+and+COVID-19.">Recent advances in the evaluation of serological assays for the diagnosis of SARS-CoV-2 infection and COVID-19.</a> Frontiers in Public Health. 8, 620222 (2020).</li><li>Nicol, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+SARS-CoV-2+serological+tests+for+the+diagnosis+of+COVID-19+through+the+evaluation+of+three+immunoassays:+Two+automated+immunoassays+(Euroimmun+and+Abbott)+and+one+rapid+lateral+flow+immunoassay+(NG+Biotech).">Assessment of SARS-CoV-2 serological tests for the diagnosis of COVID-19 through the evaluation of three immunoassays: Two automated immunoassays (Euroimmun and Abbott) and one rapid lateral flow immunoassay (NG Biotech).</a> Journal of Clinical Virology: The Official Publication of the Pan American Society for Clinical Virology. 129, 104511 (2020).</li><li>Butt, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+multiplex+serology+to+serolomics-A+novel+approach+to+the+antibody+response+against+the+SARS-CoV-2+proteome.">From multiplex serology to serolomics-A novel approach to the antibody response against the SARS-CoV-2 proteome.</a> Viruses. 13 (5), 749 (2021).</li><li>Byrum, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=multiSero:+open+multiplex-ELISA+platform+for+analyzing+antibody+responses+to+SARS-CoV-2+infection.">multiSero: open multiplex-ELISA platform for analyzing antibody responses to SARS-CoV-2 infection.</a> medRxiv. , (2021).</li><li>Dobano, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+sensitive+and+specific+multiplex+antibody+assays+to+quantify+immunoglobulins+m,+a,+and+g+against+SARS-CoV-2+antigens.">Highly sensitive and specific multiplex antibody assays to quantify immunoglobulins m, a, and g against SARS-CoV-2 antigens.</a> Journal of Clinical Microbiology. 59 (2), 01731 (2021).</li><li>Schultz, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+validation+of+a+multiplex+microsphere+immunoassay+using+dried+blood+spots+for+SARS-CoV-2+seroprevalence:+Application+in+first+responders+in+first+responders+in+Colorado,+USA.">Development and validation of a multiplex microsphere immunoassay using dried blood spots for SARS-CoV-2 seroprevalence: Application in first responders in first responders in Colorado, USA.</a> Journal of Clinical Microbiology. 59 (6), 00290 (2021).</li><li>Beavis, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+EUROIMMUN+anti-SARS-CoV-2+ELISA+assay+for+detection+of+IgA+and+IgG+antibodies.">Evaluation of the EUROIMMUN anti-SARS-CoV-2 ELISA assay for detection of IgA and IgG antibodies.</a> Journal of Clinical Virology: The Official Publication of the Pan Americal Society for Clinical Virology. 129, 104468 (2020).</li><li>Jung, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+performance+of+a+semi-quantitative+assay+for+SARS-CoV2+IgG+and+SARS-CoV2+IgM+antibodies.">Clinical performance of a semi-quantitative assay for SARS-CoV2 IgG and SARS-CoV2 IgM antibodies.</a> Clinica Chimica Acta: International Journal of Clinical Chemistry. 510, 790-795 (2020).</li></ol>

Dr. Borgia is de uitvinder van de serologische test die wordt gebruikt in dit manuscript dat patent is aangevraagd. Het artikel wordt alleen op een beschrijvende manier gepresenteerd zonder statistische analyses om mogelijke vooringenomenheid te voorkomen die door auteursconflicten wordt geïntroduceerd.

De waardering van een immuunrespons op SARS-CoV-2-blootstelling, in combinatie met RT-PCR-gebaseerde surveillance van de infectiestatus, is goed beschreven als een recept om het verloop van herstel van Covid-19 te verduidelijken, om te dienen als een middel om herstellend plasma met potentiële therapeutische waarde te identificeren, en om infectiepercentages op populatieschaal te onderzoeken10,11. Verschillende voorbeelden van het begrijpen van seroconversie bij menselijke proefpersonen zijn eiwit (antigeen) arrays12, immunoblots13, snelle immunochromatografische constructen14 en enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA's)15,16,17. Elk van deze bovengenoemde technieken kan meerdere immunoglobuline-isotypen afzonderlijk beoordelen met kleine wijzigingen. Deze procedures kunnen echter niet praktisch worden hergebruikt om parallelle analyse van meerdere isotypen mogelijk te maken, zoals gepresenteerd in dit manuscript, waarbij kosten- en doorvoerfactoren worden weergegeven als beperkingen voor hun administratie op een populatiegebaseerde teststrategie. Verschillende van deze toepassingen bieden ook de mogelijkheid om niveaus van meerdere antigenen parallel te concomteren, hetzij zoals gepresenteerd of in gewijzigde formaten, zoals een multiplex ELISA18,19. Ten slotte biedt het immunobead-platform de mogelijkheid om niveaus van meerdere antigenen parallel20,21 te evalueren, maar is beperkt tot een enkel epitoop (d.w.z. immunoglobuline-isotype) per test, tenzij echter het recente instrument met 'dual-channel' testmogelijkheden wordt gebruikt.
In dit rapport worden protocollen opgesomd die de betrouwbare meting van meerdere epitopen in een immunokraantest vaststellen met behulp van het instrument in de 'dual-channel' modus in een casestudy van seroconversie van Covid-19-gevaccineerde personen. De methode toonde een uitstekende precisie (%CV-waarden meestal <20%) met behulp van handmatige testontwerpen die kunnen worden verbeterd met de integratie van geautomatiseerde laboratoriumsystemen. Testgevoeligheid en dynamisch bereik voor alle geselecteerde analyten en epitopen waren geschikt voor routine-evaluaties. Hoewel het ontbreken van in de handel verkrijgbare anti-antigeen IgA- en IgM-immunoreagentia de kwantificering tot het IgG-isotype beperkte, sluit een dergelijke beperking niet uit dat semikwantitatieve beoordelingen of beoordelingen met betrekking tot een specifiek specimen als kalibrant22,23 kunnen worden aangeboden.
De gevalideerde immunokraantest werd toegewezen om seroconversie te onderzoeken in een cohort van personen die zijn geïmmuniseerd met het Covid-19-vaccin. In tegenstelling tot andere vergelijkbare platforms, maakt de familie van instrumentatie de prospectie van seroconversie mogelijk bij honderden personen per dag in een handmatige workflow en duizenden per dag in een geautomatiseerd schema. Over het algemeen bevestigen deze bevindingen dat de 'dual-channel'-benadering voldoende gevoeligheid heeft voor de beschrijving van meerdere epitopen parallel voor de identieke assay en levensvatbaar is in een multianalytische context. Een verschil in gevoeligheden voor kanaal 1 en kanaal 2, zoals uitgevoerd met respectievelijk fycoerythrin en Super Bright 436 fluoroforen, kan het ontwerp van een specifiek experiment rechtvaardigen om ervoor te zorgen dat levensvatbare analytische resultaten worden verkregen voor een bepaald experiment. Dat wil zeggen, de reservering van kanaal 1 voor epitopen of analyten met een lagere prevalentie kan nodig zijn om een dynamisch bereik van de test te behouden dat de waargenomen waarden van onbekenden omvat. Afgezien van deze overweging was het ontwerp van de test duidelijk en zou het gemakkelijk toegankelijk moeten zijn voor laboratoria met beperkte analytische mogelijkheden. Zeker, deze overweging moet worden gewogen bij het overwegen van kanaal 1 tot kanaal 2 interferentie, zoals we opmerkten voor figuur 5, waarbij interferentie van isotypen met een hogere abundantie misleidende analytische fouten kan veroorzaken voor degenen in een veel lagere abundantie wanneer gemeten in een dual-channel formaat. Dit potentieel voor interferentie met situaties met zeer verschillende analytconcentraties kan een aanzienlijke beperking van de aanpak vormen als het niet correct wordt behandeld in de ontwerpfase van de test.
Tot slot werd een methode gepresenteerd om snel antilichaamtiters te meten van de belangrijkste immunoglobuline-isotypen geassocieerd met een immuunrespons op Covid-19-infectie of vaccinatie. Het toepassen van deze aanpak op een longitudinale manier om seroconversie te beoordelen, kan inzichten opleveren die beter kunnen worden gebruikt om het verloop van de ziekte te beheren en / of te volgen of, afwisselend, toekomstige Covid-19-boostervaccinprogramma's te begeleiden.

Gelijktijdige meting van meerdere ziektegerelateerde biomarkers in biologische monsters maakt beschrijvende en voorspellende inzichten in pathologische processen mogelijk. Hoewel conventionele immunologische procedures met één analyt, zoals enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA's), de hoeksteen zijn geweest van kwantitatieve analyses in zowel klinische als onderzoeksomgevingen, kunnen deze technieken aanzienlijke beperkingen hebben met betrekking tot de doorvoer, de hoeveelheid specimen die nodig is voor elke meting en de kosteneffectiviteit die de studie van meerdere biologische elementen die vaak met elkaar verweven zijn gedurende het ziekteverloop sterk beperken1 . Microsphere-gebaseerde multiplexing-technologie is een onmisbaar platform geworden voor zowel diagnostische als onderzoeksfaciliteiten vanwege de mogelijkheid om assays te combineren om de laboratoriumdoorvoer te verbeteren, monsterschaarste te verminderen en repetitieve tests te verminderen om kostenbesparingen te maximaliseren 1,2,3,4. Onlangs is een verdere uitbreiding van deze multiplexing-kracht geïntroduceerd met instrumenten die over dual-reporter-mogelijkheden beschikken. De dual-reporter-functie implementeert twee fluorescerende kanalen voor detectie, waardoor een andere dimensie van multiplexing wordt geleverd, waardoor de detectie van meerdere epitopen op dezelfde analyt mogelijk is.
Ernstig acuut respiratoir syndroom coronavirus 2 (SARS-CoV-2) is de ziekteverwekker die verantwoordelijk is voor de huidige coronavirusziekte 2019 (COVID-19) pandemie5. Hoewel RT-PCR-testen cruciaal zijn voor infectiebevestiging aan het begin van het ziekteverloop, zijn serologische onderzoeken van antilichaamtiters noodzakelijk gebleken voor de nauwkeurige en volledige kritiek van individuen met betrekking tot een eerdere blootstelling of herstel; een reactie op immunisatie; en/of een evaluatie van de werkzaamheid van de Covid-19-vaccinatie 6,7.
Dit rapport schetst methoden voor het meten van seroconversie voor meerdere SARS-CoV-2 virale antigenen die gebruik maken van een flow-based, multiplex reader dual-reporting systeem. In het bijzonder wordt gelijktijdige detectie van twee antilichaamsubtypen (geconfigureerd als IgG / IgM of IgA / IgM) voor een 3-plex SARS-CoV-2-antigenenpaneel dat assays bevat voor Spike S1, Nucleocapsid en Membrane (aka Matrix) glycoproteïnen, beschreven. Deze aanpak biedt een ideale onderneming voor het vastleggen van longitudinale seroconversie en draagt bij aan een waardevol hulpmiddel in het arsenaal tegen de Covid-19-pandemie.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>384-well black side polystyrene microtiter plates</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>12-565-346</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Activation buffer (0.1 M NaH2PO4, pH 6.2)</td>
			<td>Prepared in house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Assay buffer (PBS, 1% Bovine Serum Albumin, 0.01% Polysorbate-20)</td>
			<td>Prepared in house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin, heat shock fraction</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>A-7888-50G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coupling buffer (50 mM MES, pH 5.0)</td>
			<td>Prepared in house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>COVID 19 M Coronavirus Recombinant Matrix Protein (6xHis tag)</td>
			<td>MyBioSource</td>
			<td>MBS8574735</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable pipette tips</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDC (1-Ethyl-3-[3-dimethylaminopropyl]carbodiimide hydrochloride)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>PIA35391</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat Albumin, Fraction V Powder</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>A2514-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgA Goat anti-Human, R-PE, Polyclonal</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>OB205009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgG Goat anti-Human, R-PE, Polyclonal</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>OB204009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgG Goat anti-Rabbit, R-PE, Polyclonal</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>OB403009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgM Goat anti-Human, R-PE, Polyclonal</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>OB202009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgM Mouse anti-Human, SB 436, Clone SA-DA4</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>62999842</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Instrument Analyzer</td>
			<td>Luminex Corp.</td>
			<td>INTELLIFLEX-RUO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low-Bind microcentrifuge tubes (1.5 mL)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>13-698-794</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MagPlex-C Microspheres, Region XXX</td>
			<td>Luminex Corp.</td>
			<td>MC10XXX-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MES hydrate (2-(N-Morpholino) ethane sulfonic acid hydrate)</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>M2933</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate aluminum sealing tape</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>07-200-683</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polysorbate-20</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>BP337-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quality Biological Inc. PBS, pH 7.2</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>50-751-7328</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quench buffer (PBS, 1% Goat Serum Albumin, 0.01% Polysorbate-20)</td>
			<td>Prepared in house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Nucleocapsid Protein (His tag)</td>
			<td>Sino Biologicals</td>
			<td>40588-V08B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Spike Protein (S1 Subunit, His tag)</td>
			<td>Sino Biologicals</td>
			<td>40591-V08H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Spike RBD Antibody, Rabbit pAb</td>
			<td>Sino Biologicals</td>
			<td>40592-T62</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Nucleocapsid Antibody, Rabbit mAb</td>
			<td>Sino Biologicals</td>
			<td>40588-R0004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SARS-CoV-2 (COVID-19) Membrane Antibody (IN), Rabbit pAb</td>
			<td>ProSci</td>
			<td>10-516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sulfo-NHS (N-hydroxysulfosuccinimide)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>PIA39269</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wash Buffer (PBS, 0.01% Polysorbate-20)</td>
			<td>Prepared in house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water, LC/MS grade</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>W-64</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dynamic monitoring of seroconversion using a multianalyte immunobead assay for covid-19

Multiplextechnologieën voor het gezamenlijk ondervragen van meerdere biomarkers bestaan al tientallen jaren; methoden om meerdere epitopen op dezelfde analyt te evalueren blijven echter beperkt. Dit rapport beschrijft de ontwikkeling en optimalisatie van een multiplexed immunobead assay voor serologisch testen van gemeenschappelijke immunoglobuline isotypes (bijv. IgA, IgM en IgG) geassocieerd met een immuunrespons op SARS-CoV-2 infectie of vaccinatie. Assays werden uitgevoerd met behulp van een flow-gebaseerde, multiplex fluorescerende lezer met dual-channel mogelijkheden. Optimalisaties gericht op de opnametijd van analyten, de concentratie van detectieantilichamen en de incubatietijd van detectieantilichamen. Analytische prestatiekenmerken van de test (bv. testbereik (inclusief onder- en bovengrenzen van kwantificering); en intra- en intertestprecisie) werden vastgesteld voor IgG/IgM of IgA/IgM serotype combinatie in tandem met behulp van de "dual channel" modus. Analytopnametijden van 30 minuten voor IgG, 60 minuten voor IgM en 120 minuten voor IgA waren geschikt voor de meeste toepassingen, waardoor een balans tussen testprestaties en doorvoer werd geboden. Optimale detectie antilichaam incubaties bij 4 μg /ml gedurende 30 minuten werd waargenomen en worden aanbevolen voor algemene toepassingen, gezien de algehele uitstekende precisie (procentuele variantiecoëfficiënt (% CV) ≤ 20%) en waargenomen gevoeligheidswaarden. Het dynamisch bereik voor het IgG-isotype besloeg verschillende ordes van grootte voor elke test (Spike S1, Nucleocapsid en Membrane glycoproteins), die robuuste titerevaluaties ondersteunt bij een verdunningsfactor van 1:500 voor klinische toepassingen. Ten slotte werd het geoptimaliseerde protocol toegepast op het monitoren van Spike S1-seroconversie voor proefpersonen (n = 4) die een SARS-CoV-2-vaccinregime voltooiden. Binnen dit cohort werden Spike S1 IgG-niveaus waargenomen om maximale titers te bereiken 14 dagen na toediening van de tweede dosis, bij een veel hogere (~ 40-voudige) signaalintensiteit dan IgM- of IgA-isotypen. Interessant is dat we zeer variabele Spike S1 IgG-titervervalsnelheden waarnamen die grotendeels afhankelijk waren van de proefpersoon, wat het onderwerp zal zijn van toekomstige studies.

Watch this Scientific Journal Video about Dynamic Monitoring of Seroconversion using a Multianalyte Immunobead Assay for Covid-19 at JoVE.com

Dynamic Monitoring of Seroconversion using a Multianalyte Immunobead Assay for Covid-19

Dit artikel beschrijft een handige methode voor het gelijktijdig monitoren van dynamische veranderingen in antilichaamtiters voor twee immunoglobuline-isotypen (IgA, IgM of IgG) als gevolg van een immuunrespons op SARS-CoV-2-infectie of vaccinatie. Dit 'Multianalyte Covid-19 Immune Response Panel' maakt gebruik van drie indirecte immunoassays gebouwd op gecodeerde microsferen die worden gelezen met behulp van een flow-gebaseerde multiplexlezer met 'dual-channel' mogelijkheid.

Dynamische monitoring van seroconversie met behulp van een multianalyt immunokraaltest voor Covid-19

Multiplex technologies for interrogating multiple biomarkers in concert have existed for several decades; however, methods to evaluate multiple epitopes ...

De methode die we vandaag zullen demonstreren, biedt een high-throughput oplossing voor het evalueren van de sero-conversie van antilichamen geassocieerd met COVID-19-infecties of vaccinatie voor routineanalyses. Interessant is dat deze benadering ons in staat stelt om meerdere epitopen op dezelfde analyt te evalueren. Dit heeft tal van toepassingen in de biologische wetenschappen, waaronder celsignaleringsstudies en het monitoren van immuunresponsen.Dr. Imad Tarhoni demonstreert deze techniek vandaag voor u, een postdoctorale fellow in mijn laboratorium. Selecteer om te beginnen drie verschillende injectieflacons van de magnetische microsferen met unieke kraalgebieden en noteer de kraal-ID en partij-informatie voor elke gebruikte injectieflacon. Vortex vervolgens de geselecteerde microsfeervoorraad gedurende 60 seconden en soniceer gedurende vijf minuten.Breng 1,0 maal 10 keer 10 over op de zes kralen in een 1,5 milliliter laag eiwit bindende microcentrifugebuis en plaats de buis in een magnetische separator. om de scheiding gedurende 60 seconden toe te staan. Met de buis nog in de magnetische separator, verwijdert u voorzichtig het supernatant zonder de kraalkorrel te verstoren.Verwijder de buis uit de magnetische afscheider en resuspenseer de kralen vervolgens met 100 microliter HPLC-water en vortex gedurende 30 seconden. Plaats de buis opnieuw gedurende 60 seconden terug in de magnetische separator en verwijder vervolgens het supernatant. Herhaal het wasprotocol twee keer.Verwijder na de laatste wasbeurt de buis uit de magnetische separator en resuspenseer de gewassen microsferen in 90 microliter activeringsbuffer, pH 6,2, door vortex gedurende 30 seconden. Behandel vervolgens achtereenvolgens de microsferen met 10 microliter 50 milligram per milliliter anhydroxy-sulfosuccinamide en 10 microliter 50 milligram per milliliter EDC-oplossing per vortex gedurende 10 seconden. Incubeer later de microsferen gedurende 20 minuten bij kamertemperatuur met elke 10 minuten een zachte vortex.Was na incubatie de microsferen tweemaal met 50-millimolair MES of koppelingsbuffer, pH 5,0, zoals eerder beschreven. Herhaal het wassen twee keer. Als u klaar bent, verwijdert u de buis uit de magnetische separator en resuspenseert u de kralen met 100 microliter koppelingsbuffer per vortex gedurende 30 seconden, onmiddellijk gevolgd door het toevoegen van de gewenste hoeveelheid eiwit aan de buis.Breng het totale volume op 150 microliter met koppelingsbuffer en meng de reactie per vortex gedurende 30 seconden. Incubeer vervolgens de buis gedurende twee uur door rotatie bij kamertemperatuur. Was na incubatie de microsferen tweemaal met PBS blusbuffer en resuspenseer de gewassen microsferen in 100 microliter blusbuffer met 0,05% natriumazide door vortex gedurende 30 seconden.Tel het aantal herstelde microsferen met behulp van een geautomatiseerde celteller en noteer de waargenomen kraalconcentratie. Voor testprestaties resuspenseert u de gekoppelde microsferen gedurende 30 seconden door vortex en soniceert u gedurende 60 tot 90 seconden. Verwijder vervolgens de vereiste hoeveelheid van elk kraalcolloïde uit de respectieve buis en combineer de kralencolloïden in een nieuwe microcentrifugebuis van 1,5 milliliter.Steek vervolgens de buis in een magnetische separator en laat scheiding gedurende 60 seconden toe. Met de buis nog in de magnetische afscheider, verwijdert u het supernatant zonder de kraalkorrel te verstoren. Nadat u de kralen uit de separator hebt verwijderd, resuspenseert u de kralen in 100 microliter testbuffer.Vortex gedurende 30 seconden voordat u de buis gedurende 60 seconden in een magnetische separator plaatst om de kralen te scheiden. Herhaal het wassen twee keer. Pas vervolgens de concentratie van het drie-plex werkende microsfeermengsel aan door een geschikt volume testbuffer toe te voegen om een uiteindelijke concentratie van 100 microsfeer per microliter voor elk doelwit te genereren.Aliquot 25 microliter van het microsfeermengsel in elke put van een 96-well plaat. Verdun plasma- of serummonsters 500-voudig in testbuffer en bereid standaardmonsters volgens de gewenste titratie. Voeg 25 microliter testbuffer toe als blanco monster en voeg elk van de verdunde monsters of standaard toe aan elk aangewezen putje van een monsterplaat met 96 putten.Als u klaar bent, bedekt u de plaat met een aluminium afdichting of folie om gedurende een uur bij kamertemperatuur te incuberen op een platenschudder die is ingesteld op 700 rotaties per minuut. Bereid een oplossing van anti-humane detectieantistoffen of secundaire antilichaamoplossingen op vier microgram per microliter met testbuffer zoals beschreven in het manuscript. Plaats de plaat op een magnetische afscheider om snel te wassen en keer de plaat vervolgens krachtig om over een biohazard-container om vloeistof uit de putten te verwijderen.Met de plaat nog steeds omgekeerd, tik je de plaat krachtig tegen een dikke wad papier. Was vervolgens elke put met 100 microliter testbuffer en verwijder de vloeistof door krachtige inversie over een biohazard-container. Herhaal de was twee keer.Gooi na de laatste wasbeurt alle gebruikte klodders papier weg in een biohazard-container. Voeg vervolgens 25 microliter secundaire antilichaamwerkoplossing toe aan elke put van een 96-wellsplaat en bedek de plaat met aluminiumfolie om te incuberen op een platenschudder met 700 rotaties per minuut. Was na 30 minuten incubatie de putjes van de plaat tweemaal met testbuffer zoals eerder aangetoond.Voeg vervolgens 100 microliter testbuffer toe aan elk putje van de 96-wellplaat. Dek de plaat af met aluminiumfolie en incubeer gedurende vijf minuten op een platenschudder bij kamertemperatuur. Analyseer een monster van 60 microliter via de instrumentanalysator volgens de systeemhandleiding.Voor optimalisatie van de incubatietijd van het monstervangst, incubeer de platen voor een duur van 30, 60 en 120 minuten. Analyseer na incubatie 60 microliter van het testmengsel op de analysator. Een zevenpunts standaardcurve op basis van een 1:5 seriële verdunningsreeks werd geëvalueerd voor de spike S1, de membraanantistoffen en de nucleocapside.De intra-assay precisietest werd uitgevoerd op de plaat om de assayprecisie te evalueren, berekend als procentuele variatiecoëfficiënt, standaarddeviatie en gemiddelde. Voor inter-assay precisie werden drie verschillende batches van de kralensets voorbereid voor elke assay. Precisievariabelen van de test met de standaard en de menselijke plasmamonsters werden berekend.De gemiddelde mediane fluorescentie-intensiteitswaarden na 120 minuten van de incubatie waren optimaal voor IgG-titers voor de spike S1, het membraan en de nucleocapside-antilichamen, wat wijst op een snelle primaire antilichaambindingkinetiek. Secundaire antilichaamconcentratie-optimalisaties in dual channel-prestaties toonden een breed scala aan signalen in lineaire meting voor alle concentraties. De waargenomen signalen van verschillende tijdincubaties van de secundaire antilichamen en de details over de signaalveranderingen voor alle incubatietijden worden hier weergegeven.In de specificiteitsbeoordelingen voor dual-channel assays werd een verwaarloosbare kruissignaalverontreiniging waargenomen tussen het lege en het enkele reporterkanaal. In de illustratie van seroconversiegebeurtenissen na de COVID 19-vaccinatie waren de waargenomen piek S1 IgA- en IgM-waarden ongeveer 40 keer lager dan de IgG-isotypetiters. Deze methode heeft belangrijke implicaties voor het monitoren van de respons op vaccins bij immuungecompromitteerde personen.Het zal ons in staat stellen om te bepalen of deze patiënten echt beschermd worden door die vaccinaties.

Research

JoVE Journal

Medicine

Quantitative Visualization and Detection of Skin Cancer Using Dynamic Thermal Imaging

Kwantitatieve Visualisatie en detectie van huidkanker Met behulp van Dynamic Thermal Imaging

In 2010 approximately 68,720 melanomas will be diagnosed in the US alone, with around 8,650 resulting in death 1. To date, the only effective treatment ...

Computerized Dynamic Posturography for Postural Control Assessment in Patients with Intermittent Claudication

Computerized dynamic posturography with the EquiTest is an objective technique for measuring postural strategies under challenging static and dynamic ...

Dynamic Lung Tumor Tracking for Stereotactic Ablative Body Radiation Therapy

Dynamic Lung Tumor Tracking voor stereotactische Ablatieve Body Radiation Therapy

Physicians considering stereotactic ablative body radiation therapy (SBRT) for the treatment of extracranial cancer targets must be aware of the sizeable ...

A Detailed Protocol for Perspiration Monitoring Using a Novel, Small, Wireless Device

Een gedetailleerd protocol voor het Zweet Monitoring Met behulp van een roman, Kleine, draadloze apparaten

Perspiration monitoring can be utilized for the detection of certain diseases, such as thermoregulation and mental disorders, particularly when the ...

Identifying Inhibitors of the HBx-DDB1 Interaction Using a Split Luciferase Assay System

Identificeren van remmers van de HBx-DDB1 interactie met behulp van een split Luciferase assay systeem

There is an urgent need for novel therapeutic agents for hepatitis B virus (HBV) infection. Although currently available nucleos(t)ide analogs potently ...

Evaluation of Capnography Sampling Line Compatibility and Accuracy when Used with a Portable Capnography Monitor

Evaluatie van compatibiliteit en nauwkeurigheid van capnografiebemonsteringslijn bij gebruik met een draagbare capnografiemonitor

Capnography is commonly used to monitor patient&#8217;s ventilatory status. While sidestream capnography has been shown to provide a reliable assessment ...

Real-Time Dynamic Navigation System for the Precise Quad-Zygomatic Implant Placement in a Patient with a Severely Atrophic Maxilla

Real-time dynamisch navigatiesysteem voor de nauwkeurige plaatsing van quad-zygomatische implantaten bij een patiënt met een ernstig atrofische Maxilla

Zygomatic implants (ZIs) are an ideal way to address cases of a severely atrophic edentulous maxilla and maxilla defects because they replace extensive ...

Dynamic Navigation for Dental Implant Placement

Dynamische navigatie voor het plaatsen van tandheelkundige implantaten

In modern implantology, the application of surgical navigation systems is becoming increasingly important. In addition to static surgical navigation ...

A Surgical Model of Heart Failure with Preserved Ejection Fraction in Tibetan Minipigs

Een chirurgisch model van hartfalen met behouden ejectiefractie bij Tibetaanse minivarkens

More than half of heart failure (HF) cases are classified as heart failure with preserved ejection fraction (HFpEF) worldwide. Large animal models are ...

Dynamic Navigation in Endodontics: Guided Access Cavity Preparation by Means of a Miniaturized Navigation System

Dynamische navigatie in endodontie: begeleide voorbereiding van de toegangsholte door middel van een geminiaturiseerd navigatiesysteem

In the case of teeth with pulp canal calcification (PCC) and apical pathology or pulpitis, root canal treatment can be very challenging. PCC are common ...