Name: dynamic monitoring of seroconversion using a multianalyte immunobead assay for covid-19
Uploaded: 2022-02-16T15:00:00
Duration: 8 min 48 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dynamic Monitoring of Seroconversion using a Multianalyte Immunobead Assay for Covid-19 at JoVE.com

लेखक अपनी सुविधाओं के उपयोग के लिए रश बायोमार्कर डेवलपमेंट कोर, विषय नामांकन और बायोस्पेशीमेन प्रसंस्करण के लिए रश बायोरिपोजिटरी, और वाल्डर फाउंडेशन के शिकागो कोरोनावायरस असेसमेंट नेटवर्क (शिकागो कैन) इनिशिएटिव अनुदान संख्या एससीआई 16 (जेआरएस और जेएबी) और 21-00147 (जेआरएस और जेएबी) और स्विम एक्रॉस अमेरिका फाउंडेशन (जेएबी) से एक पुरस्कार का शुक्रिया अदा करना चाहते हैं।

<ol>
	<li>Tighe, P. J., Ryder, R. R., Todd, I., Fairclough, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ELISA+in+the+multiplex+era:+potentials+and+pitfalls.">ELISA in the multiplex era: potentials and pitfalls.</a> Proteomics - Clinical Applications. 9, 406-422 (2015).</li><li>Baker, H. N., Murphy, R., Lopez, E., Garcia, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conversion+of+a+capture+ELISA+to+a+Luminex+xMAP+assay+using+a+multiplex+antibody+screening+method.">Conversion of a capture ELISA to a Luminex xMAP assay using a multiplex antibody screening method.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (65), e4084 (2012).</li><li>Powell, R. 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M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+a+rapid+immunochromatographic+test+with+a+chemiluminescence+immunoassay+for+detection+of+anti-SARS-CoV-2+IgM+and+IgG.">Comparison of a rapid immunochromatographic test with a chemiluminescence immunoassay for detection of anti-SARS-CoV-2 IgM and IgG.</a> Biochemia Medica (Zagreb). 30 (3), 030901 (2020).</li><li>Algaissi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SARS-CoV-2+S1+and+N-based+serological+assays+reveal+rapid+seroconversion+and+induction+of+specific+antibody+response+in+COVID-19+patients.">SARS-CoV-2 S1 and N-based serological assays reveal rapid seroconversion and induction of specific antibody response in COVID-19 patients.</a> Scientific Reports. 10, 16561 (2020).</li><li>Chiereghin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+the+evaluation+of+serological+assays+for+the+diagnosis+of+SARS-CoV-2+infection+and+COVID-19.">Recent advances in the evaluation of serological assays for the diagnosis of SARS-CoV-2 infection and COVID-19.</a> Frontiers in Public Health. 8, 620222 (2020).</li><li>Nicol, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+SARS-CoV-2+serological+tests+for+the+diagnosis+of+COVID-19+through+the+evaluation+of+three+immunoassays:+Two+automated+immunoassays+(Euroimmun+and+Abbott)+and+one+rapid+lateral+flow+immunoassay+(NG+Biotech).">Assessment of SARS-CoV-2 serological tests for the diagnosis of COVID-19 through the evaluation of three immunoassays: Two automated immunoassays (Euroimmun and Abbott) and one rapid lateral flow immunoassay (NG Biotech).</a> Journal of Clinical Virology: The Official Publication of the Pan American Society for Clinical Virology. 129, 104511 (2020).</li><li>Butt, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+multiplex+serology+to+serolomics-A+novel+approach+to+the+antibody+response+against+the+SARS-CoV-2+proteome.">From multiplex serology to serolomics-A novel approach to the antibody response against the SARS-CoV-2 proteome.</a> Viruses. 13 (5), 749 (2021).</li><li>Byrum, J. 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S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+validation+of+a+multiplex+microsphere+immunoassay+using+dried+blood+spots+for+SARS-CoV-2+seroprevalence:+Application+in+first+responders+in+first+responders+in+Colorado,+USA.">Development and validation of a multiplex microsphere immunoassay using dried blood spots for SARS-CoV-2 seroprevalence: Application in first responders in first responders in Colorado, USA.</a> Journal of Clinical Microbiology. 59 (6), 00290 (2021).</li><li>Beavis, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+EUROIMMUN+anti-SARS-CoV-2+ELISA+assay+for+detection+of+IgA+and+IgG+antibodies.">Evaluation of the EUROIMMUN anti-SARS-CoV-2 ELISA assay for detection of IgA and IgG antibodies.</a> Journal of Clinical Virology: The Official Publication of the Pan Americal Society for Clinical Virology. 129, 104468 (2020).</li><li>Jung, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+performance+of+a+semi-quantitative+assay+for+SARS-CoV2+IgG+and+SARS-CoV2+IgM+antibodies.">Clinical performance of a semi-quantitative assay for SARS-CoV2 IgG and SARS-CoV2 IgM antibodies.</a> Clinica Chimica Acta: International Journal of Clinical Chemistry. 510, 790-795 (2020).</li></ol>

बोर्गिया इस पांडुलिपि में उपयोग किए जाने वाले सीरोलॉजिकल परीक्षण के आविष्कारक हैं जो पेटेंट लंबित है। लेख केवल वर्णनात्मक तरीके से प्रस्तुत किया गया है जिसमें लेखक संघर्ष द्वारा पेश किए गए संभावित पूर्वाग्रह से बचने के लिए कोई सांख्यिकीय विश्लेषण प्रस्तुत नहीं किया गया है।

संक्रमण की स्थिति की आरटी-पीसीआर-आधारित निगरानी के साथ सार्स-सीओवी-2 एक्सपोजर के लिए प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की सराहना को कोविड-19 से वसूली के पाठ्यक्रम को स्पष्ट करने, संभावित चिकित्सीय मूल्य के साथ प्लाज्मा की पहचान करने के साधन के रूप में काम करने और जनसंख्या-पैमाने के आधार पर10,11 पर संक्रमण दर का सर्वेक्षण करने के लिए एक नुस्खे के रूप में अच्छी तरह से वर्णित किया गया है। मानव विषयों में सीरोकनवर्जन को समझने के विभिन्न उदाहरणों में प्रोटीन (एंटीजन) सरणियां12, इम्यूनोब्लॉट्स13, रैपिड इम्यूनोक्रोमैटोग्राफिक निर्माण14, और एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोसॉर्बेंट परख (एलिसा) 15,16,17 शामिल हैं। इनमें से प्रत्येक उपरोक्त तकनीक मामूली संशोधनों के साथ व्यक्तिगत रूप से कई इम्युनोग्लोबुलिन आइसोटाइप का आकलन कर सकती है। हालांकि, ये प्रक्रियाएं व्यावहारिक रूप से कई आइसोटाइप के समानांतर विश्लेषण की अनुमति देने में सक्षम नहीं हैं, जैसा कि इस पांडुलिपि में प्रस्तुत किया गया है, जनसंख्या-आधारित पैमाने पर परीक्षण रणनीति पर उनके प्रशासन के लिए सीमाओं के रूप में लागत और थ्रूपुट कारकों का प्रतिपादन। इनमें से कई अनुप्रयोग समानांतर में कई एंटीजन के स्तर को या तो प्रस्तुत या परिवर्तित प्रारूपों में संयोजित करने का अवसर प्रदान करते हैं, जैसे कि मल्टीप्लेक्स एलिसा18,19। अंत में, इम्यूनोबीड प्लेटफ़ॉर्म समानांतर20,21 में कई एंटीजन के स्तर का मूल्यांकन करने की संभावना की आपूर्ति करता है, लेकिन प्रति परख एक एकल एपिटोप (यानी, इम्युनोग्लोबुलिन आइसोटाइप) तक सीमित है, हालांकि, 'दोहरे चैनल' परख क्षमताओं के साथ हालिया उपकरण नियोजित नहीं किया जाता है।
इस रिपोर्ट में, प्रोटोकॉल की गणना की गई है जो कोविड-19-टीकाकरण वाले व्यक्तियों के सीरोकनवर्जन के केस स्टडी में 'डुअल-चैनल' मोड में उपकरण का उपयोग करके इम्यूनोबीड परख में कई एपिटोप्स के विश्वसनीय माप को स्थापित करते हैं। विधि ने प्रयोगशाला स्वचालित प्रणालियों के एकीकरण के साथ सुधार किया जा सकता है कि मैनुअल परख डिजाइन का उपयोग कर उत्कृष्ट परिशुद्धता (% सीवी मूल्यों आमतौर पर <20%) का प्रदर्शन किया। सभी चयनित विश्लेषणों और एपिटोप्स के लिए परख संवेदनशीलता और गतिशील रेंज नियमित मूल्यांकन के लिए उपयुक्त थे। यद्यपि व्यावसायिक रूप से उपलब्ध एंटी-एंटीजन आईजीए और आईजीएम इम्यूनोरेजेंट की कमी आईजीजी आइसोटाइप के लिए सीमित मात्रा में है, इस तरह का प्रतिबंध एक विशिष्ट नमूने के सापेक्ष अर्ध-मात्रात्मक आकलन या आकलन की पेशकश करने की क्षमता को बाधित नहीं करता है।
मान्य इम्यूनोबीड परख को कोविड -19 वैक्सीन के साथ प्रतिरक्षित व्यक्तियों के एक समूह में सीरोकनवर्जन की जांच के लिए आवंटित किया गया था। अन्य समान प्लेटफार्मों के विपरीत, इंस्ट्रूमेंटेशन का परिवार मैनुअल वर्कफ़्लो में प्रति दिन सैकड़ों व्यक्तियों में और एक स्वचालित योजना में प्रति दिन हजारों लोगों में सीरोकनवर्जन की पूर्वेक्षण की अनुमति देता है। कुल मिलाकर, ये निष्कर्ष पुष्टि करते हैं कि 'दोहरे चैनल' दृष्टिकोण में समान परख के लिए समानांतर में कई एपिटोप के विवरण के लिए उपयुक्त संवेदनशीलता है और एक बहुविश्लेषण संदर्भ में व्यवहार्य है। चैनल 1 और चैनल 2 के प्रति संवेदनशीलता में अंतर, जैसा कि क्रमशः फाइकोएरिथ्रिन और सुपर ब्राइट 436 फ्लोरोफोरस के साथ किया जाता है, यह सुनिश्चित करने के लिए एक विशिष्ट प्रयोग के डिजाइन को वारंट कर सकता है कि किसी दिए गए प्रयोग के लिए व्यवहार्य विश्लेषणात्मक परिणाम प्राप्त किए जाते हैं। यही है, कम प्रसार के एपिटोप्स या विश्लेषण के लिए चैनल 1 का आरक्षण परख की एक गतिशील सीमा को बनाए रखने के लिए आवश्यक हो सकता है जिसमें अज्ञात के देखे गए मूल्य शामिल हैं। इस विचार से परे, परख डिजाइन स्पष्ट था और सीमित विश्लेषणात्मक क्षमताओं के साथ प्रयोगशालाओं के लिए आसानी से सुलभ होना चाहिए। निश्चित रूप से, चैनल 1 से चैनल 2 हस्तक्षेप पर विचार करते समय इस विचार को तौला जाना चाहिए, जैसा कि हमने चित्रा 5 के लिए नोट किया है, जिससे उच्च बहुतायत आइसोटाइप से हस्तक्षेप दोहरे चैनल प्रारूप में मापा जाने पर बहुत कम बहुतायत में उन लोगों के लिए भ्रामक विश्लेषणात्मक त्रुटियों का कारण बन सकता है। अत्यधिक अलग विश्लेषण सांद्रता के साथ स्थितियों के साथ हस्तक्षेप के लिए इस क्षमता दृष्टिकोण के लिए एक महत्वपूर्ण सीमा का प्रतिनिधित्व कर सकते हैं अगर परख डिजाइन चरण में ठीक से संभाला नहीं है।
अंत में, कोविड -19 संक्रमण या टीकाकरण के लिए प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया से जुड़े प्रमुख इम्युनोग्लोबुलिन आइसोटाइप से एंटीबॉडी टाइटर्स को तेजी से मापने की एक विधि प्रस्तुत की गई थी। सीरोकनवर्जन का आकलन करने के लिए अनुदैर्ध्य फैशन में इस दृष्टिकोण को लागू करने से अंतर्दृष्टि प्रदान की जा सकती है जिसका उपयोग बीमारी के पाठ्यक्रम का प्रबंधन और / या निगरानी करने के लिए बेहतर तरीके से किया जा सकता है या वैकल्पिक रूप से, संभावित कोविड -19 बूस्टर वैक्सीन कार्यक्रमों का मार्गदर्शन किया जा सकता है।

जैविक नमूनों में कई रोग से संबंधित बायोमार्करों का एक साथ माप रोग प्रक्रियाओं में वर्णनात्मक और भविष्य कहनेवाला अंतर्दृष्टि की अनुमति देता है। जबकि पारंपरिक एकल विश्लेषण इम्यूनोलॉजिकल प्रक्रियाएं, जैसे एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोसोरबेंट परख (एलिसा), नैदानिक और अनुसंधान दोनों सेटिंग्स में मात्रात्मक विश्लेषण की आधारशिला रही हैं, इन तकनीकों में थ्रूपुट, प्रत्येक माप के लिए आवश्यक नमूने की मात्रा और लागत-प्रभावशीलता के बारे में पर्याप्त सीमाएं हो सकती हैं जो कई जैविक तत्वों के अध्ययन को बहुत सीमित करती हैं जो अक्सर पूरे रोग पाठ्यक्रम में परस्पर जुड़ीहोती हैं 1 . माइक्रोस्फीयर-आधारित मल्टीप्लेक्सिंग तकनीक प्रयोगशाला थ्रूपुट को बढ़ाने, नमूना कमी को कम करने और लागत बचत 1,2,3,4 को अधिकतम करने के लिए दोहराए जाने वाले परीक्षण को कम करने के लिए परखको संयोजित करने की क्षमता के लिए नैदानिक और अनुसंधान सुविधाओं दोनों के लिए एक अनिवार्य मंच बन गई है। हाल ही में, दोहरी रिपोर्टर क्षमताओं वाले उपकरणों के साथ इस मल्टीप्लेक्सिंग पावर का और संवर्धन पेश किया गया है। दोहरी रिपोर्टर सुविधा का पता लगाने के लिए दो फ्लोरोसेंट चैनलों को लागू करता है, मल्टीप्लेक्सिंग के एक और आयाम की आपूर्ति करता है, जिससे एक ही विश्लेषण पर कई एपिटोप का पता लगाने की अनुमति मिलती है।
सीवियर एक्यूट रेस्पिरेटरी सिंड्रोम कोरोनावायरस 2 (सार्स-सीओवी-2) वर्तमान कोरोनोवायरस बीमारी 2019 (सीओवीआईडी -19) महामारी5 के लिए जिम्मेदार रोगज़नक़ है। जबकि रोग पाठ्यक्रम की शुरुआत में संक्रमण की पुष्टि के लिए आरटी-पीसीआर परीक्षण महत्वपूर्ण है, एंटीबॉडी टाइटर्स की सीरोलॉजिकल परीक्षाएं पिछले जोखिम या वसूली के बारे में व्यक्तियों की सटीक और पूर्ण आलोचना के लिए अनिवार्य साबित हुई हैं; टीकाकरण के लिए एक प्रतिक्रिया; और / या कोविद -19 टीकाकरण प्रभावकारिता 6,7 का मूल्यांकन।
यह रिपोर्ट कई सार्स-सीओवी-2 वायरल एंटीजन के लिए सीरोकनवर्जन का आकलन करने के तरीकों को चित्रित करती है जो प्रवाह-आधारित, मल्टीप्लेक्स रीडर दोहरी-रिपोर्टिंग प्रणाली का उपयोग करते हैं। विशेष रूप से, 3-प्लेक्स सार्स-सीओवी-2 एंटीजन पैनल के लिए दो एंटीबॉडी उपप्रकारों (आईजीजी / आईजीएम या आईजीए / आईजीएम के रूप में कॉन्फ़िगर किया गया) का समवर्ती पता लगाना जिसमें स्पाइक एस 1, न्यूक्लियोकैप्सिड और मेम्ब्रेन (उर्फ मैट्रिक्स) ग्लाइकोप्रोटीन के लिए परख शामिल हैं, का वर्णन किया गया है। यह दृष्टिकोण अनुदैर्ध्य सीरोकनवर्जन पर कब्जा करने के लिए एक आदर्श उद्यम प्रदान करता है और कोविद -19 महामारी के खिलाफ शस्त्रागार में एक मूल्यवान उपकरण का योगदान देता है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>384-well black side polystyrene microtiter plates</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>12-565-346</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Activation buffer (0.1 M NaH2PO4, pH 6.2)</td>
			<td>Prepared in house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Assay buffer (PBS, 1% Bovine Serum Albumin, 0.01% Polysorbate-20)</td>
			<td>Prepared in house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin, heat shock fraction</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>A-7888-50G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coupling buffer (50 mM MES, pH 5.0)</td>
			<td>Prepared in house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>COVID 19 M Coronavirus Recombinant Matrix Protein (6xHis tag)</td>
			<td>MyBioSource</td>
			<td>MBS8574735</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable pipette tips</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDC (1-Ethyl-3-[3-dimethylaminopropyl]carbodiimide hydrochloride)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>PIA35391</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat Albumin, Fraction V Powder</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>A2514-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgA Goat anti-Human, R-PE, Polyclonal</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>OB205009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgG Goat anti-Human, R-PE, Polyclonal</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>OB204009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgG Goat anti-Rabbit, R-PE, Polyclonal</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>OB403009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgM Goat anti-Human, R-PE, Polyclonal</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>OB202009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgM Mouse anti-Human, SB 436, Clone SA-DA4</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>62999842</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Instrument Analyzer</td>
			<td>Luminex Corp.</td>
			<td>INTELLIFLEX-RUO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low-Bind microcentrifuge tubes (1.5 mL)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>13-698-794</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MagPlex-C Microspheres, Region XXX</td>
			<td>Luminex Corp.</td>
			<td>MC10XXX-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MES hydrate (2-(N-Morpholino) ethane sulfonic acid hydrate)</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>M2933</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate aluminum sealing tape</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>07-200-683</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polysorbate-20</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>BP337-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quality Biological Inc. PBS, pH 7.2</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>50-751-7328</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quench buffer (PBS, 1% Goat Serum Albumin, 0.01% Polysorbate-20)</td>
			<td>Prepared in house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Nucleocapsid Protein (His tag)</td>
			<td>Sino Biologicals</td>
			<td>40588-V08B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Spike Protein (S1 Subunit, His tag)</td>
			<td>Sino Biologicals</td>
			<td>40591-V08H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Spike RBD Antibody, Rabbit pAb</td>
			<td>Sino Biologicals</td>
			<td>40592-T62</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Nucleocapsid Antibody, Rabbit mAb</td>
			<td>Sino Biologicals</td>
			<td>40588-R0004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SARS-CoV-2 (COVID-19) Membrane Antibody (IN), Rabbit pAb</td>
			<td>ProSci</td>
			<td>10-516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sulfo-NHS (N-hydroxysulfosuccinimide)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>PIA39269</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wash Buffer (PBS, 0.01% Polysorbate-20)</td>
			<td>Prepared in house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water, LC/MS grade</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>W-64</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dynamic monitoring of seroconversion using a multianalyte immunobead assay for covid-19

कॉन्सर्ट में कई बायोमार्करों से पूछताछ के लिए मल्टीप्लेक्स प्रौद्योगिकियां कई दशकों से मौजूद हैं; हालाँकि, एक ही विश्लेषण पर कई एपिटोप्स का मूल्यांकन करने के तरीके सीमित रहते हैं। यह रिपोर्ट सार्स-सीओवी-2 संक्रमण या टीकाकरण के लिए प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया से जुड़े सामान्य इम्युनोग्लोबुलिन आइसोटाइप (जैसे, आईजीए, आईजीएम और आईजीजी) के सीरोलॉजिकल परीक्षण के लिए मल्टीप्लेक्स इम्यूनोबीड परख के विकास और अनुकूलन का वर्णन करती है। परख दोहरे चैनल क्षमता के साथ एक प्रवाह-आधारित, मल्टीप्लेक्स फ्लोरोसेंट रीडर का उपयोग करके पूरा किया गया था। अनुकूलन विश्लेषण कैप्चर समय, एंटीबॉडी एकाग्रता का पता लगाने और समय इनक्यूबेशन एंटीबॉडी का पता लगाने पर केंद्रित है। विश्लेषणात्मक परख प्रदर्शन विशेषताओं (जैसे, परख रेंज (मात्रात्मकता की निचली और ऊपरी सीमा सहित); और इंट्रा- और अंतर-परख परिशुद्धता) को 'दोहरी चैनल' मोड का उपयोग करके अग्रानुक्रम में आईजीजी / आईजीएम या आईजीएम सीरोटाइप संयोजन के लिए स्थापित किया गया था। आईजीजी के लिए 30 मिनट, आईजीएम के लिए 60 मिनट और आईजीए के लिए 120 मिनट के विश्लेषण कैप्चर समय अधिकांश अनुप्रयोगों के लिए उपयुक्त थे, जो परख प्रदर्शन और थ्रूपुट का संतुलन प्रदान करते थे। एमएल पर इष्टतम पहचान एंटीबॉडी ऊष्मायन मनाया गया था और सामान्य अनुप्रयोगों के लिए सिफारिश की जाती है, समग्र उत्कृष्ट परिशुद्धता (विचरण का प्रतिशत गुणांक (% सीवी) ≤ 20%) और संवेदनशीलता मूल्यों को देखते हुए। आईजीजी आइसोटाइप के लिए गतिशील रेंज प्रत्येक परख (स्पाइक एस 1, न्यूक्लियोकैप्सिड और मेम्ब्रेन ग्लाइकोप्रोटीन) के लिए परिमाण के कई आदेशों को फैलाती है, जो नैदानिक अनुप्रयोगों के लिए 1: 500 कमजोर पड़ने वाले कारक पर मजबूत टिटर मूल्यांकन का समर्थन करती है। अंत में, अनुकूलित प्रोटोकॉल को सार्स-सीओवी-2 वैक्सीन आहार को पूरा करने वाले विषयों (एन = 4) के लिए स्पाइक एस 1 सीरोकनवर्जन की निगरानी के लिए लागू किया गया था। इस पलटन के भीतर, स्पाइक एस 1 आईजीजी स्तर दूसरी खुराक प्रशासन के बाद 14 दिनों में अधिकतम टाइटर्स तक पहुंचने के लिए मनाया गया था, आईजीएम या आईजीए आइसोटाइप की तुलना में बहुत अधिक (~ 40 गुना) सिग्नल तीव्रता पर। दिलचस्प बात यह है कि हमने अत्यधिक परिवर्तनशील स्पाइक एस 1 आईजीजी टिटर क्षय दरों को देखा जो काफी हद तक विषय-निर्भर थे, जो भविष्य के अध्ययनों का विषय होगा।

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Dynamic Monitoring of Seroconversion using a Multianalyte Immunobead Assay for Covid-19

यह लेख सार्स-सीओवी-2 संक्रमण या टीकाकरण के लिए प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के परिणामस्वरूप समवर्ती रूप से दो इम्युनोग्लोबुलिन आइसोटाइप (या तो आईजीए, आईजीएम, या आईजीजी) के लिए एंटीबॉडी टाइटर्स में गतिशील परिवर्तनों की निगरानी के लिए एक सुविधाजनक विधि का वर्णन करता है। यह 'मल्टीएनालाइट कोविड-19 इम्यून रिस्पांस पैनल' कोडित माइक्रोस्फीयर पर निर्मित तीन अप्रत्यक्ष इम्यूनोसेस को नियोजित करता है जिन्हें 'डुअल-चैनल' क्षमता वाले प्रवाह-आधारित मल्टीप्लेक्स रीडर का उपयोग करके पढ़ा जाता है।

कोविड-19 के लिए मल्टीएनालाइट इम्यूनोबीड परख का उपयोग करके सीरोकनवर्जन की गतिशील निगरानी

Multiplex technologies for interrogating multiple biomarkers in concert have existed for several decades; however, methods to evaluate multiple epitopes ...

आज हम जिस पद्धति का प्रदर्शन कर रहे हैं, वह नियमित विश्लेषण के लिए कोविड-19 संक्रमण या टीकाकरण से जुड़े एंटीबॉडी के सीरो-रूपांतरण का मूल्यांकन करने के लिए एक उच्च-थ्रूपुट समाधान प्रदान करता है। दिलचस्प बात यह है कि यह दृष्टिकोण हमें एक ही विश्लेषण पर कई एपिटोपका मूल्यांकन करने की अनुमति देता है। जैविक विज्ञान में इसके कई अनुप्रयोग हैं, जिनमें सेल सिग्नलिंग अध्ययन और प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं की निगरानी शामिल है।आज आपके लिए इस तकनीक का प्रदर्शन करते हुए मेरी प्रयोगशाला में पोस्ट-डॉक्टरल फेलो डॉ. इमाद तारोनी होंगे। शुरू करने के लिए, अद्वितीय मनका क्षेत्रों के साथ चुंबकीय माइक्रोस्फीयर के तीन अलग-अलग शीशियों का चयन करें और उपयोग की जाने वाली प्रत्येक शीशी के लिए मनका आईडी और बहुत सारी जानकारी रिकॉर्ड करें। फिर, 60 सेकंड के लिए चयनित माइक्रोस्फीयर स्टॉक को भंवर करें और पांच मिनट के लिए सोनिकेट करें।1.5 मिलीलीटर कम प्रोटीन बाध्यकारी माइक्रोसेंट्रिफ्यूज ट्यूब में छह मोतियों के लिए 1.0 गुना 10 स्थानांतरित करें और ट्यूब को चुंबकीय विभाजक में डालें। 60 सेकंड के लिए जुदाई की अनुमति देने के लिए। चुंबकीय विभाजक में अभी भी ट्यूब के साथ, मनका गोली परेशान किए बिना सतह पर तैरनेवाला को सावधानीपूर्वक हटा दें।चुंबकीय विभाजक से ट्यूब निकालें, फिर 30 सेकंड के लिए एचपीएलसी-ग्रेड पानी और भंवर के 100 माइक्रोलीटर के साथ मोतियों को फिर से निलंबित करें। फिर, ट्यूब को 60 सेकंड के लिए चुंबकीय विभाजक में वापस रखें और बाद में सतह पर तैरनेवाला हटा दें। धोने के प्रोटोकॉल को दो बार दोहराएं।अंतिम धोने के बाद, चुंबकीय विभाजक से ट्यूब को हटा दें और 30 सेकंड के लिए भंवर द्वारा सक्रियण बफर, पीएच 6.2 के 90 माइक्रोलीटर में धोए गए माइक्रोस्फीयर को फिर से निलंबित करें। इसके बाद, क्रमिक रूप से 50 मिलीग्राम प्रति मिलीलीटर एनहाइड्रॉक्सी-सल्फोसुकिनामाइड के 10 माइक्रोलीटर और 10 सेकंड के लिए भंवर द्वारा 50 मिलीग्राम प्रति मिलीलीटर ईडीसी समाधान के 10 माइक्रोलीटर के साथ माइक्रोस्फीयर का इलाज करें। बाद में, हर 10 मिनट में एक कोमल भंवर के साथ कमरे के तापमान पर 20 मिनट के लिए माइक्रोस्फीयर सेते हैं।इनक्यूबेशन बाद, माइक्रोस्फीयर को 50-मिलीमोलर एमईएस या युग्मन बफर, पीएच 5.0 के साथ दो बार धोएं, जैसा कि पहले वर्णित है। धोने को दो बार दोहराएं। एक बार हो जाने के बाद, चुंबकीय विभाजक से ट्यूब को हटा दें और 30 सेकंड के लिए भंवर द्वारा युग्मन बफर के 100 माइक्रोलीटर के साथ मोतियों को फिर से निलंबित कर दें, इसके तुरंत बाद ट्यूब में प्रोटीन की वांछित मात्रा जोड़ें।युग्मन बफर के साथ 150 माइक्रोलीटर करने के लिए कुल मात्रा लाओ और 30 सेकंड के लिए भंवर द्वारा प्रतिक्रिया मिश्रण। फिर, कमरे के तापमान पर रोटेशन द्वारा दो घंटे के लिए ट्यूब सेते हैं। इनक्यूबेशन के बाद, पीबीएस बुझाने बफर के साथ माइक्रोस्फीयर को दो बार धो लें और 30 सेकंड के लिए भंवर द्वारा 0.05% सोडियम एजाइड युक्त बुझाने वाले बफर के 100 माइक्रोलीटर में धोए गए माइक्रोस्फीयर को फिर से निलंबित करें।एक स्वचालित सेल काउंटर का उपयोग कर बरामद माइक्रोस्फीयर की संख्या की गणना करें और मनाया मनका एकाग्रता रिकॉर्ड करें। परख प्रदर्शन के लिए, 30 सेकंड के लिए भंवर द्वारा युग्मित माइक्रोस्फीयर को फिर से निलंबित करें और 60 से 90 सेकंड के लिए सोनिकेट करें। फिर, संबंधित ट्यूब से प्रत्येक मनका कोलाइड की आवश्यक मात्रा को हटा दें और मनका कोलाइड्स को एक नए 1.5-मिलीलीटर माइक्रोसेंट्रिफ्यूज ट्यूब में मिलाएं।अगला, ट्यूब को चुंबकीय विभाजक में डालें और 60 सेकंड के लिए पृथक्करण की अनुमति दें। चुंबकीय विभाजक में अभी भी ट्यूब के साथ, मनका गोली परेशान किए बिना सतह पर तैरनेवाला हटा दें। विभाजक से मोती को हटाने के बाद, परख बफर के 100 माइक्रोलीटर में मोतियों को फिर से निलंबित कर दिया।मोतियों को अलग करने के लिए 60 सेकंड के लिए एक चुंबकीय विभाजक में ट्यूब रखने से पहले 30 सेकंड के लिए भंवर। धोने को दो बार दोहराएं। अगला, प्रत्येक लक्ष्य के लिए प्रति एक माइक्रोलीटर 100 माइक्रोस्फीयर की अंतिम एकाग्रता उत्पन्न करने के लिए परख बफर की एक उपयुक्त मात्रा जोड़कर तीन-प्लेक्स काम करने वाले माइक्रोस्फीयर मिश्रण की एकाग्रता को समायोजित करें।96-अच्छी तरह से प्लेट के प्रत्येक कुएं में माइक्रोस्फीयर मिश्रण के 25 माइक्रोलीटर विभाज्य। परख बफर में प्लाज्मा या सीरम नमूनों को 500 गुना पतला करें और वांछित अनुमापन के अनुसार मानक नमूने तैयार करें। खाली नमूने के रूप में परख बफर के 25 माइक्रोलीटर जोड़ें और एक 96 अच्छी तरह से नमूना प्लेट के प्रत्येक नामित अच्छी तरह से में पतला नमूने या मानक में से प्रत्येक जोड़ें।जब किया जाता है, तो प्लेट को एल्यूमीनियम सील या पन्नी के साथ कवर करें ताकि प्रति मिनट 700 घूर्णन पर सेट प्लेट शेकर पर कमरे के तापमान पर एक घंटे के लिए सेते रहें। पांडुलिपि में वर्णित परख बफर के साथ चार माइक्रोग्राम प्रति माइक्रोलीटर पर एंटी-ह्यूमन डिटेक्शन एंटीबॉडी या माध्यमिक एंटीबॉडी समाधान का समाधान तैयार करें। प्लेट को तेजी से धोने के लिए चुंबकीय विभाजक पर रखें और फिर कुओं से तरल निकालने के लिए एक बायोहाज़र्ड कंटेनर पर प्लेट को जबरदस्ती उल्टा करें।प्लेट के साथ अभी भी उल्टा है, जबरदस्ती कागज की मोटी गड्डी के खिलाफ प्लेट नल। फिर, परख बफर के 100 माइक्रोलीटर के साथ प्रत्येक अच्छी तरह से धो लें और एक बायोहाज़र्ड कंटेनर पर बलपूर्वक उलटा द्वारा तरल को हटा दें। इसे दो बार दोहराएं।अंतिम धोने के बाद, कागज के सभी उपयोग किए गए वाडों को बायोहाज़र्ड कंटेनर में फेंक दें। अगला, 96-अच्छी तरह से प्लेट के प्रत्येक कुएं में माध्यमिक एंटीबॉडी कामकाजी समाधान के 25 माइक्रोलीटर जोड़ें और प्रति मिनट 700 घूर्णन पर प्लेट शेकर पर इनक्यूबेट करने के लिए एल्यूमीनियम पन्नी के साथ प्लेट को कवर करें। इनक्यूबेशन के 30 मिनट के बाद, परख बफर के साथ दो बार प्लेट के कुओं को धो लें जैसा कि पहले दिखाया गया था।फिर, 96-अच्छी तरह से प्लेट के प्रत्येक कुएं में परख बफर के 100 माइक्रोलीटर जोड़ें। एल्यूमीनियम पन्नी के साथ प्लेट को कवर करें और कमरे के तापमान पर प्लेट शेकर पर पांच मिनट के लिए सेते हैं। सिस्टम मैनुअल के अनुसार साधन विश्लेषक के माध्यम से एक 60 माइक्रोलीटर नमूना का विश्लेषण करें।नमूना कैप्चर इनक्यूबेशन समय के अनुकूलन के लिए, प्लेटों को 30, 60 और 120 मिनट की अवधि के लिए सेते हैं। इनक्यूबेशन के बाद, विश्लेषक पर परख मिश्रण के 60 माइक्रोलीटर का विश्लेषण करें। स्पाइक एस 1, झिल्ली एंटीबॉडी और न्यूक्लियोकैप्सिड के लिए 1: 5 धारावाहिक कमजोर पड़ने की श्रृंखला के आधार पर सात-बिंदु मानक वक्र का मूल्यांकन किया गया था।अंतर परख परिशुद्धता परीक्षण भिन्नता, मानक विचलन, और औसत के प्रतिशत गुणांक के रूप में गणना परख परिशुद्धता का मूल्यांकन करने के लिए प्लेट पर प्रदर्शन किया गया था। अंतर परख परिशुद्धता के लिए, मनका सेट के तीन अलग-अलग बैचों प्रत्येक परख के लिए तैयार किए गए थे। मानक और मानव प्लाज्मा नमूनों के साथ परख के सटीक चर की गणना की गई थी।इनक्यूबेशन के 120 मिनट में औसत औसत फ्लोरोसेंट तीव्रता मूल्य स्पाइक एस 1, झिल्ली और न्यूक्लियोकैप्सिड एंटीबॉडी के लिए आईजीजी टाइटर्स के लिए इष्टतम थे, जो एक तेज प्राथमिक एंटीबॉडी बाध्यकारी कैनेटीक्स का संकेत देते हैं। दोहरी चैनल प्रदर्शन में माध्यमिक एंटीबॉडी एकाग्रता अनुकूलन ने सभी सांद्रता के लिए रैखिक माप में संकेतों की एक विस्तृत श्रृंखला का प्रदर्शन किया। माध्यमिक एंटीबॉडी के अलग-अलग समय ऊष्मायन से देखे गए संकेत और सभी इनक्यूबेशन समय के लिए सिग्नल परिवर्तनों पर विवरण यहां दिखाए गए हैं।दोहरी चैनल परख के लिए विशिष्टता आकलन में, रिक्त और एकल रिपोर्टर चैनल के बीच नगण्य क्रॉस सिग्नल संदूषण देखा गया था। कोविड-19 टीकाकरण के बाद सीरो-रूपांतरण की घटनाओं के उदाहरण में, मनाया गया स्पाइक एस 1 आईजीए और आईजीएम मान आईजीजी आइसोटाइप टाइटर्स की तुलना में लगभग 40 गुना कम थे। इम्यूनोकॉम्प्रोमाइज्ड व्यक्तियों में टीकों की प्रतिक्रिया की निगरानी के लिए इस पद्धति के महत्वपूर्ण निहितार्थ हैं।यह हमें यह निर्धारित करने की अनुमति देगा कि क्या ये रोगी वास्तव में उन टीकाकरणों द्वारा संरक्षित हो रहे हैं।

Research

JoVE Journal

Medicine

Quantitative Visualization and Detection of Skin Cancer Using Dynamic Thermal Imaging

मात्रात्मक विज़ुअलाइज़ेशन और गतिशील थर्मल इमेजिंग का प्रयोग त्वचा कैंसर की जांच

In 2010 approximately 68,720 melanomas will be diagnosed in the US alone, with around 8,650 resulting in death 1. To date, the only effective treatment ...

Computerized Dynamic Posturography for Postural Control Assessment in Patients with Intermittent Claudication

Computerized dynamic posturography with the EquiTest is an objective technique for measuring postural strategies under challenging static and dynamic ...

Dynamic Lung Tumor Tracking for Stereotactic Ablative Body Radiation Therapy

स्टीरियोटैक्टिक पंचमी विभक्ति शरीर विकिरण थेरेपी के लिए गतिशील फेफड़े के ट्यूमर ट्रैकिंग

Physicians considering stereotactic ablative body radiation therapy (SBRT) for the treatment of extracranial cancer targets must be aware of the sizeable ...

A Detailed Protocol for Perspiration Monitoring Using a Novel, Small, Wireless Device

पसीना निगरानी के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल एक उपन्यास का प्रयोग, छोटे, वायरलेस डिवाइस

Perspiration monitoring can be utilized for the detection of certain diseases, such as thermoregulation and mental disorders, particularly when the ...

Identifying Inhibitors of the HBx-DDB1 Interaction Using a Split Luciferase Assay System

एक स्प्लिट लूसिफ़ेरेज़ परख सिस्टम का उपयोग करके एचबीएक्स-डीडीबी1 इंटरैक्शन के अवरोधकों की पहचान करना

There is an urgent need for novel therapeutic agents for hepatitis B virus (HBV) infection. Although currently available nucleos(t)ide analogs potently ...

Evaluation of Capnography Sampling Line Compatibility and Accuracy when Used with a Portable Capnography Monitor

पोर्टेबल कैपनोग्राफी मॉनिटर के साथ उपयोग किए जाने पर कैपनोग्राफी सैंपलिंग लाइन अनुकूलता और सटीकता का मूल्यांकन

Capnography is commonly used to monitor patient&#8217;s ventilatory status. While sidestream capnography has been shown to provide a reliable assessment ...

Real-Time Dynamic Navigation System for the Precise Quad-Zygomatic Implant Placement in a Patient with a Severely Atrophic Maxilla

गंभीर रूप से एट्रोफिक मैक्सिला वाले रोगी में सटीक क्वाड-जाइगोमैटिक इम्प्लांट प्लेसमेंट के लिए रियल-टाइम डायनामिक नेविगेशन सिस्टम

Zygomatic implants (ZIs) are an ideal way to address cases of a severely atrophic edentulous maxilla and maxilla defects because they replace extensive ...

Dynamic Navigation for Dental Implant Placement

डेंटल इम्प्लांट प्लेसमेंट के लिए डायनेमिक नेविगेशन

In modern implantology, the application of surgical navigation systems is becoming increasingly important. In addition to static surgical navigation ...

A Surgical Model of Heart Failure with Preserved Ejection Fraction in Tibetan Minipigs

तिब्बती मिनीपिग्स में संरक्षित इजेक्शन अंश के साथ दिल की विफलता का एक सर्जिकल मॉडल

More than half of heart failure (HF) cases are classified as heart failure with preserved ejection fraction (HFpEF) worldwide. Large animal models are ...

Dynamic Navigation in Endodontics: Guided Access Cavity Preparation by Means of a Miniaturized Navigation System

एंडोडोंटिक्स में गतिशील नेविगेशन: एक लघु नेविगेशन सिस्टम के माध्यम से निर्देशित एक्सेस कैविटी तैयारी

In the case of teeth with pulp canal calcification (PCC) and apical pathology or pulpitis, root canal treatment can be very challenging. PCC are common ...