Name: dynamic monitoring of seroconversion using a multianalyte immunobead assay for covid-19
Uploaded: 2022-02-16T15:00:00
Duration: 8 min 48 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dynamic Monitoring of Seroconversion using a Multianalyte Immunobead Assay for Covid-19 at JoVE.com

Forfatterne ønsker å takke Rush Biomarker Development Core for bruken av deres fasiliteter, Rush Biorepository for emnepåmelding og biospecimen-behandling, og Walder Foundations Chicago Coronavirus Assessment Network (Chicago CAN) Initiative gir tall SCI16 (J.R.S. og J.A.B.) og 21-00147 (J.R.S. og J.A.B.) og en pris fra Swim Across America Foundation (J.A.B.).

Alle ble påmeldt med skriftlig informert samtykke med full institutional review board (IRB) godkjenning av Rush University Medical Center under protokoll ORA 20101207 med alle institusjonelle retningslinjer for etisk forskningsatferd observert. Blod ble samlet inn via konvensjonell phlebotomy i lavendel vacutainers (K2EDTA) og behandlet med anbefalte protokoller. Det resulterende plasmaet ble arkivert ved -80 °C til vurderinger ble utført.
1. Fremstilling av antigenkonjugede mikrosfærer
<ol><li>Velg tre forskjellige hetteglass med magnetiske mikrosfærer med unike perleregioner, opptak av perle-ID og partiinformasjon for hvert hetteglass som brukes. MERK: Følgende trinn vil bli fulgt for hver distinkte mikrosfæreregion. Mikrosfærer er lysfølsomme og bør beskyttes mot langvarig eksponering for lys. Under vasketrinnene, vær forsiktig så du ikke forstyrrer mikrosfærene. Hvis forstyrret, la en annen 60 s separasjon.</li>
	<li>Virvel mikrosfæren lager for 60 s og sonikere i 5 min før bruk for å dissosiere aggregerte perler.</li>
	<li>Overfør 1,0 x 106 perler til en 1,5 ml lavproteinbindende mikrocentrifugerør.</li>
	<li>Sett røret inn i en magnetisk separator og la separasjon skje i 60 s. Med røret fortsatt i magnetseparatoren, fjern forsiktig supernatanten uten å forstyrre perlepellet.</li>
	<li>Fjern røret fra magnetseparatoren, resuspend perlene med 100 μL HPLC-klasse vann og virvel i 30 s. Plasser røret tilbake i magnetseparatoren i 60 s, og fjern deretter supernatanten. Gjenta denne vaskeprotokollen to ganger.</li>
	<li>Fjern røret fra magnetseparatoren og resuspend de vaskede mikrosfærene i 90 μL 100 mM monobasisk natriumfosfat, pH 6.2 (Aktiveringsbuffer) med virvel i 30 s.</li>
	<li>Tilsett 10 μL 50 mg/ml Sulfo-NHS (fortynnet med aktiveringsbuffer) til mikrosfærene og virvelen forsiktig i 10 s. Tilsett 10 μL 50 mg/ml EDC-oppløsning (fortynnet med aktiveringsbuffer) og virvel forsiktig i 10 s. Inkuber mikrosfærer i 20 min ved romtemperatur (RT) med en mild virvel hvert 10.</li>
	<li>Gjenta vasketrinnene 1,4-1,5 med 50 mM MES, pH 5,0 (koblingsbuffer) i stedet for LC/MS-grade vann i totalt to vasker.</li>
	<li>Fjern røret fra magnetseparatoren og resuspend perlene med 100 μL koblingsbuffer med virvel i 30 s etterfulgt umiddelbart av tilsetning av ønsket mengde protein.</li>
	<li>Bring det totale volumet til 150 μL med koblingsbuffer. Bland koblingsreaksjonen med virvel i 30 s og inkuber i 2 timer ved rotasjon ved RT. MERK: For analyser definert heri ble det utført konjugeringer med følgende proteinkonsentrasjoner: Spike S1: 5 μg; Nukleocapsid: 5 μg; Membran: 12,5 μg.</li>
	<li>Gjenta vasketrinnet 1,4 med fosfatbufret saltvann (PBS)-1% geitserum albumin, 0,01% polysorbat-20 (quench buffer) i stedet for LC / MS-grade vann for totalt to vasker. Resuspend de vaskede mikrosfærene i 100 μL slukkebuffer som inneholder 0,05% natriumazid med virvel i 30 s. MERK: La perlene slukke helt i minst 6 timer før du går videre til en annen prosedyre.</li>
	<li>Tell antall gjenvunne mikrosfærer ved hjelp av en automatisert celleteller eller et hemocytometer. Registrer den observerte perlekonsentrasjonen.</li>
	<li>Kjøl de koblede mikrosfærene ved 4 °C i mørket.</li>
</ol>2. Prosedyrer
<ol><li>Analyseytelse (basisprotokoll)<ol>
<li>Resuspend de koblede mikrosfærene med virvel i 30 s og soniker for ~ 60-90 s.</li>
		<li>Fjern den nødvendige mengden av hver perlekolloid fra det respektive røret og kombiner perlekolloidene i et nytt 1,5 ml mikrosenterrør.</li>
		<li>Sett røret inn i en magnetisk separator og la separasjon skje i 60 sek. Med røret fortsatt i magnetseparatoren, fjern forsiktig supernatanten uten å forstyrre perlepellet.</li>
		<li>Fjern perlene fra separatoren, resuspend perlene med 100 μL PBS-1% bovint serumalbumin, 0,01% Polysorbat-20 (Analysebuffer) og virvel i 30 s. Plasser røret i en magnetisk separator og la separasjon skje i 60 s. Gjenta denne vaskeprotokollen (dvs. trinn 2.1.3-2.1.4) to ganger</li>
		<li>Juster konsentrasjonen av 3-plex fungerende mikrosfæreblanding ved å legge til et passende volum analysebuffer for å generere en endelig konsentrasjon på 100 mikrosfærer per 1 μL for hvert mål.</li>
		<li>Aliquot 12,5 μL mikrosfæreblanding tilberedt i trinn 2,1,5 i hver brønn på en 384-brønnsplate eller 25 μL i hver brønn på en 96-brønns plate.</li>
		<li>Fortynn plasma/serumprøvene 500 ganger i analysebufferen. Forbered standardprøver i henhold til titrering ønsket.</li>
		<li>Tilsett 12,5 μL analysebuffer som den tomme prøven og tilsett hver av de fortynnede prøvene eller standardene i hver utpekt brønn av en 384-brønns prøveplate eller 25 μL av den tomme, fortynnede prøven eller standarden i hver brønn av en 96-brønns prøveplate.</li>
		<li>Dekk platen med en aluminiumsforsegling eller folie og inkuber i 1 time ved RT på en plate shaker satt til 700 rpm. MERK: Skjematisk for fortynningskurvene er angitt i tabell 1.</li>
		<li>Forbered en løsning av anti-menneskelige deteksjonsantistoffer (sekundære antistoffløsninger) ved 4 μg/ml med analysebuffer som angitt i trinn 2.1.11.</li>
		<li>Forbered geit-anti-menneskelig IgM, konjugert med Super Bright 436 (SB)/Goat-anti-human IgA, Phycoerythrin (PE) Konjugat deteksjon antistoffer ved 4 μg/ml; eller Geit-anti-menneskelig IgM, SB Conjugate/Geit-anti-menneskelig IgG, PE Conjugate påviser antistoffer ved 4 μg/ml. MERK: For et 384-brønns plateformat er det nødvendig med 12,5 μL/brønn av den tilberedte sekundære antistoffløsningen, og for et 96-brønns plateformat er det nødvendig med 25 μL/brønn.</li>
		<li>Plasser platen på en magnetisk separator, vask raskt og inverter kraftig over en biofarebeholder for å fjerne væske fra brønnene. Med platen fortsatt invertert, trykk kraftig på platen mot en tykk vad av papir.</li>
		<li>Vask hver brønn med 100 μL analysebuffer og fjern væsken ved kraftig inversjon over en biofarebeholder, som tidligere beskrevet. Gjenta disse trinnene (2.1.12-2.1.13) for totalt to vasker. Kast alle brukte vads av papir i en biofarebeholder.</li>
		<li>Tilsett 12,5 μL av den sekundære antistoffarbeidsløsningen til hver brønn av en 384-brønnsplate eller 25 μL til hver brønn på en 96-brønns plate. Dekk platen med en aluminiumsforsegling eller folie og inkuber i 30 min på RT på en plate shaker satt til 700 rpm.</li>
		<li>Gjenta vasketrinnene 2.1.12-2.1.13</li>
		<li>Tilsett 75 μL analysebuffer i hver brønn på en 384-brønnsplate eller 100 μL i hver brønn på en 96-brønnsplate. Dekk platen med en aluminiumsforsegling eller folie og inkuber i 5 min på RT på en plate shaker satt til 700 rpm.</li>
		<li>Analyser 60 μL via instrumentanalysatoren i henhold til systemhåndboken.</li>
	</ol></li>
	<li>Optimalisering av inkubasjonstid for prøvefangst<ol>
<li>Utfør trinnene i avsnitt 2.1 med varighet av inkubasjonstider på 30 min, 60 min og 120 min i trinn 2.1.9. MERK: Inkubasjoner kan utføres enten med distinkte plater eller ved å sette den på pause i trinn 2.1.6 til tiden for å gå videre til trinn 2.1.9. for å oppnå de ønskede inkubasjonstidene.</li>
		<li>Fortsett med plateavlesningen på analysatoren ved hjelp av 60 μL av analyseblandingen i henhold til produsentens anbefalinger.</li>
	</ol></li>
	<li>Optimalisering av sekundær antistoffkonsentrasjon<ol>
<li>Utfør denne prosedyren som beskrevet i pkt. 2.1, med unntak av de endelige konsentrasjonene av reagenser i den sekundære antistoffarbeidsløsningen (fremstilt i trinn 2.1.10-2.1.11) modifisert som følger: Geit-anti-menneskelig (eller kanin) IgM, SB-konjugat deteksjon antistoffer ved 8, 4, 2, 1 og 0,5 μg/ ml. Geit-anti-menneskelig (eller kanin) IgA, PE-conjugate deteksjon antistoffer ved 8, 4, 2, 1 og 0,5 μg / ml. Geit-anti-menneskelig (eller kanin) IgG, PE-konjugat deteksjon antistoffer ved 8, 4, 2, 1 og 0,5 μg / ml. Geit-anti-menneskelig (eller kanin) IgG, PE-konjugat/Geit-anti-menneske (eller kanin) IgM, SB-konjugatdeteksjon antistoffer ved 8, 4, 2, 1 og 0,5 μg/ml. Geit-anti-menneskelig (eller kanin) IgA, PE-konjugat/Geit-anti-menneske (eller kanin) IgM, SB-konjugatdeteksjonsantistoffer ved 8, 4, 2, 1 og 0,5 μg/ml.</li>
		<li>Fortsett med plateavlesningen på analysatoren ved hjelp av 60 μL av analyseblandingen i henhold til produsentens anbefalinger.</li>
	</ol></li>
	<li>Optimalisering av sekundær antistoff inkubasjonstid<ol>
<li>Utfør denne prosedyren som beskrevet i avsnitt 2.1 med 15 min, 30 min, 60 min og 120 min inkubasjonsvarighet definert i trinn 2.1.14.</li>
		<li>Fortsett med plateavlesningen på analysatoren ved hjelp av 60 μL av analyseblandingen i henhold til produsentens anbefalinger.</li>
	</ol></li>
	<li>Evaluering av fagprøver med optimaliserte tokanalsanalyser<ol>
<li>Samle inn plasmaprøver (n = 4) på dagene -21, -11, -1/0, +14, +28, +60, +90 og +120 i forhold til fullføring av Covid-19-vaksine (dvs. andre dose) administrasjon. MERK: Dag 0 representerer tidspunktet da vaksinasjonen ble fullført.</li>
		<li>Utfør alle analyser ved hjelp av Base Protocol (avsnitt 2.1.) som enten en IgG/IgM- eller IgA/IgM tokanalsanalyse.</li>
		<li>Normaliser resultatene til den maksimale observerte median fluorescerende intensitetsverdien (MFI) for hver spesifikke immunglobulin og analyse.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol>
	<li>Tighe, P. J., Ryder, R. R., Todd, I., Fairclough, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ELISA+in+the+multiplex+era:+potentials+and+pitfalls.">ELISA in the multiplex era: potentials and pitfalls.</a> Proteomics - Clinical Applications. 9, 406-422 (2015).</li><li>Baker, H. N., Murphy, R., Lopez, E., Garcia, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conversion+of+a+capture+ELISA+to+a+Luminex+xMAP+assay+using+a+multiplex+antibody+screening+method.">Conversion of a capture ELISA to a Luminex xMAP assay using a multiplex antibody screening method.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (65), e4084 (2012).</li><li>Powell, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+multiplex+microsphere-based+immunoassay+increases+the+sensitivity+of+siv-specific+antibody+detection+in+serum+samples+and+mucosal+specimens+collected+from+rhesus+macaques+infected+with+SIVmac239.">A multiplex microsphere-based immunoassay increases the sensitivity of siv-specific antibody detection in serum samples and mucosal specimens collected from rhesus macaques infected with SIVmac239.</a> BioResearch Open Access. 2 (3), 171-178 (2013).</li><li>Volpetti, F., Garcia-Cordero, J., Maerkl, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microfluidic+platform+for+high-throughput+multiplexed+protein+quantitation.">A microfluidic platform for high-throughput multiplexed protein quantitation.</a> PLoS One. 10 (2), 0117744 (2015).</li><li>Rabi, F. A., Al Zoubi, M. S., Kasasbeh, G. A., Salameh, D. M., Al-Nasser, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SARS-CoV-2+and+coronavirus+disease+2019:+What+we+know+so+far.">SARS-CoV-2 and coronavirus disease 2019: What we know so far.</a> Pathogens. 9 (3), 231 (2020).</li><li>Asif, M., Xu, Y., Xiao, F., Sun, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+of+COVID-19,+vitality+of+emerging+technologies+and+preventive+measures.">Diagnosis of COVID-19, vitality of emerging technologies and preventive measures.</a> Chemical Engineering Journal. 423, 130189 (2021).</li><li>La Marca, A., Capuzzo, M., Paglia, T., Roli, L., Trenti, T., Nelson, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testing+for+SARS-CoV-2+(COVID-19):+a+systematic+review+and+clinical+guide+to+molecular+and+serological+in-vitro+diagnostic+assays.">Testing for SARS-CoV-2 (COVID-19): a systematic review and clinical guide to molecular and serological in-vitro diagnostic assays.</a> Reproductive Biomedicine Online. 41 (3), 483-499 (2020).</li><li>Armbruster, D. A., Pry, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limit+of+blank,+limit+of+detection+and+limit+of+quantitation.">Limit of blank, limit of detection and limit of quantitation.</a> The Clinical Biochemist. Reviews. 29, 49-52 (2008).</li><li>Tarhoni, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+between+circulating+tumor-associated+autoantibodies+and+clinical+outcomes+in+advanced-stage+NSCLC+patients+receiving+PD-1/-L1+directed+immune+checkpoint+inhibition.">Relationship between circulating tumor-associated autoantibodies and clinical outcomes in advanced-stage NSCLC patients receiving PD-1/-L1 directed immune checkpoint inhibition.</a> Journal of Immunological Methods. 490, 112956 (2021).</li><li>Deeks, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibody+tests+for+identification+of+current+and+past+infection+with+SARS-CoV-2.">Antibody tests for identification of current and past infection with SARS-CoV-2.</a> The Cochrane Database of Systematic Reviews. 6, 013652 (2020).</li><li>Mahalingam, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Landscape+of+humoral+immune+responses+against+SARS-CoV-2+in+patients+with+COVID-19+disease+and+the+value+of+antibody+testing.">Landscape of humoral immune responses against SARS-CoV-2 in patients with COVID-19 disease and the value of antibody testing.</a> Heliyon. 7 (4), 06836 (2021).</li><li>Ruano-Gallego, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+multiplex+antigen+microarray+for+simultaneous+IgG+and+IgM+detection+against+SARS-CoV-2+reveals+higher+seroprevalence+than+reported.">A multiplex antigen microarray for simultaneous IgG and IgM detection against SARS-CoV-2 reveals higher seroprevalence than reported.</a> Microbial Biotechnology. 14 (3), 1228-1236 (2021).</li><li>Shah, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IgG+and+IgM+antibody+formation+to+spike+and+nucleocapsid+proteins+in+COVID-19+characterized+by+multiplex+immunoblot+assays.">IgG and IgM antibody formation to spike and nucleocapsid proteins in COVID-19 characterized by multiplex immunoblot assays.</a> BMC Infectious Diseases. 21 (1), 325 (2021).</li><li>Gambino, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+a+rapid+immunochromatographic+test+with+a+chemiluminescence+immunoassay+for+detection+of+anti-SARS-CoV-2+IgM+and+IgG.">Comparison of a rapid immunochromatographic test with a chemiluminescence immunoassay for detection of anti-SARS-CoV-2 IgM and IgG.</a> Biochemia Medica (Zagreb). 30 (3), 030901 (2020).</li><li>Algaissi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SARS-CoV-2+S1+and+N-based+serological+assays+reveal+rapid+seroconversion+and+induction+of+specific+antibody+response+in+COVID-19+patients.">SARS-CoV-2 S1 and N-based serological assays reveal rapid seroconversion and induction of specific antibody response in COVID-19 patients.</a> Scientific Reports. 10, 16561 (2020).</li><li>Chiereghin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+the+evaluation+of+serological+assays+for+the+diagnosis+of+SARS-CoV-2+infection+and+COVID-19.">Recent advances in the evaluation of serological assays for the diagnosis of SARS-CoV-2 infection and COVID-19.</a> Frontiers in Public Health. 8, 620222 (2020).</li><li>Nicol, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+SARS-CoV-2+serological+tests+for+the+diagnosis+of+COVID-19+through+the+evaluation+of+three+immunoassays:+Two+automated+immunoassays+(Euroimmun+and+Abbott)+and+one+rapid+lateral+flow+immunoassay+(NG+Biotech).">Assessment of SARS-CoV-2 serological tests for the diagnosis of COVID-19 through the evaluation of three immunoassays: Two automated immunoassays (Euroimmun and Abbott) and one rapid lateral flow immunoassay (NG Biotech).</a> Journal of Clinical Virology: The Official Publication of the Pan American Society for Clinical Virology. 129, 104511 (2020).</li><li>Butt, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+multiplex+serology+to+serolomics-A+novel+approach+to+the+antibody+response+against+the+SARS-CoV-2+proteome.">From multiplex serology to serolomics-A novel approach to the antibody response against the SARS-CoV-2 proteome.</a> Viruses. 13 (5), 749 (2021).</li><li>Byrum, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=multiSero:+open+multiplex-ELISA+platform+for+analyzing+antibody+responses+to+SARS-CoV-2+infection.">multiSero: open multiplex-ELISA platform for analyzing antibody responses to SARS-CoV-2 infection.</a> medRxiv. , (2021).</li><li>Dobano, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+sensitive+and+specific+multiplex+antibody+assays+to+quantify+immunoglobulins+m,+a,+and+g+against+SARS-CoV-2+antigens.">Highly sensitive and specific multiplex antibody assays to quantify immunoglobulins m, a, and g against SARS-CoV-2 antigens.</a> Journal of Clinical Microbiology. 59 (2), 01731 (2021).</li><li>Schultz, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+validation+of+a+multiplex+microsphere+immunoassay+using+dried+blood+spots+for+SARS-CoV-2+seroprevalence:+Application+in+first+responders+in+first+responders+in+Colorado,+USA.">Development and validation of a multiplex microsphere immunoassay using dried blood spots for SARS-CoV-2 seroprevalence: Application in first responders in first responders in Colorado, USA.</a> Journal of Clinical Microbiology. 59 (6), 00290 (2021).</li><li>Beavis, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+EUROIMMUN+anti-SARS-CoV-2+ELISA+assay+for+detection+of+IgA+and+IgG+antibodies.">Evaluation of the EUROIMMUN anti-SARS-CoV-2 ELISA assay for detection of IgA and IgG antibodies.</a> Journal of Clinical Virology: The Official Publication of the Pan Americal Society for Clinical Virology. 129, 104468 (2020).</li><li>Jung, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+performance+of+a+semi-quantitative+assay+for+SARS-CoV2+IgG+and+SARS-CoV2+IgM+antibodies.">Clinical performance of a semi-quantitative assay for SARS-CoV2 IgG and SARS-CoV2 IgM antibodies.</a> Clinica Chimica Acta: International Journal of Clinical Chemistry. 510, 790-795 (2020).</li></ol>

Dr. Borgia er oppfinneren av den serologiske testen som brukes i dette manuskriptet som er patentsøkt. Artikkelen presenteres på en beskrivende måte bare uten statistiske analyser presentert for å unngå potensielle skjevheter introdusert av forfatterkonflikt.

Verdsettelsen av en immunrespons på SARS-CoV-2-eksponering, sammen med RT-PCR-basert overvåking av infeksjonsstatus, har blitt godt beskrevet som en resept for å avklare utvinningsforløpet fra Covid-19, for å tjene som et middel til å identifisere rekonvalesensplasma med potensiell terapeutisk verdi, og å kartlegge infeksjonsrater på befolkningsskala basis10,11. Ulike eksempler på forståelse av serokonversjon hos mennesker inkluderer protein (antigen) matriser12, immunobloter13, raske immunokromatografiske konstruksjoner14, og enzymbundne immunosorbente analyser (ELISAer)15,16,17. Hver av disse nevnte teknikkene kan vurdere flere immunglobulin isotyper individuelt med mindre modifikasjoner. Disse prosedyrene er imidlertid ikke i stand til praktisk talt å bli gjenbrukt for å tillate parallell analyse av flere isotyper, som presentert i dette manuskriptet, og gjengir kostnads- og gjennomstrømningsfaktorer som begrensninger for administrasjonen på en befolkningsbasert skalatestingsstrategi. Flere av disse programmene gir også muligheten til å sette sammen nivåer av flere antigener parallelt enten som presentert eller i endrede formater, for eksempel en multiplex ELISA18,19. Til slutt gir immunobead-plattformen muligheten til å evaluere nivåer av flere antigener parallelt 20,21, men har vært begrenset til en enkelt epitop (dvs. immunoglobulin isotype) per analyse med mindre imidlertid det nylige instrumentet med 'dual-channel' analysefunksjoner brukes.
I denne rapporten er protokoller nummerert som etablerer pålitelig måling av flere epitoper i en immunobeadanalyse ved hjelp av instrumentet i 'dual-channel' modus i en casestudie av serokonversjon av Covid-19-vaksinerte individer. Metoden viste utmerket presisjon (%CV-verdier <20%) vanligvis ved hjelp av manuell analysedesign som kan forbedres med integrering av laboratorieautomatiske systemer. Analysefølsomhet og dynamisk område for alle utvalgte analytter og epitoper var egnet for rutinemessige evalueringer. Selv om mangelen på kommersielt tilgjengelige anti-antigen IgA og IgM immunoreagenser begrenset kvantisering til IgG-isotypen, utelukker en slik begrensning ikke evnen til å tilby semi-kvantitative vurderinger eller vurderinger i forhold til en bestemt prøve som en kalibrant22,23.
Den validerte immunobeadanalysen ble allokert for å undersøke serokonversjon i en kohort av individer immunisert med Covid-19-vaksinen. I motsetning til andre lignende plattformer tillater instrumentfamilien prospektering av serokonversjon hos hundrevis av individer per dag i en manuell arbeidsflyt og tusenvis per dag i en automatisert ordning. Samlet sett bekrefter disse funnene at "dual-channel" tilnærmingen har passende følsomhet for beskrivelsen av flere epitoper parallelt for den identiske analysen og er levedyktig i en multianalyttkontekst. En forskjell i følsomhet til kanal 1 og kanal 2, som utført med henholdsvis fycoerythrin og Super Bright 436 fluoroforer, kan garantere utformingen av et spesifikt eksperiment for å sikre at levedyktige analytiske resultater oppnås for et gitt eksperiment. Det vil si at reservasjonen av kanal 1 for epitoper eller analytter av lavere prevalens kan være nødvendig for å opprettholde et dynamisk område av analysen som inkluderer de observerte verdiene til ukjente. Utover denne vurderingen var analysedesign åpenbart og bør være lett tilgjengelig for laboratorier med begrensede analytiske evner. Dette hensynet bør absolutt veies når man vurderer kanal 1 til kanal 2-interferens, som vi nevnte for figur 5, der forstyrrelser fra høyere overflodsisotyper kan forårsake villedende analytiske feil for de som er i mye lavere overflod når de måles i et tokanalsformat. Dette potensialet for interferens med situasjoner med svært forskjellige analyttkonsentrasjoner kan utgjøre en betydelig begrensning i tilnærmingen hvis den ikke håndteres riktig i analysedesignfasen.
Til slutt ble det presentert en metode for raskt å måle antistofftitre fra de store immunglobulin-isotypene forbundet med en immunrespons på Covid-19-infeksjon eller vaksinasjon. Å bruke denne tilnærmingen på en langsgående måte for å vurdere serokonversjon kan gi innsikt som kan brukes bedre til å administrere og / eller overvåke sykdomsforløpet eller alternativt veilede potensielle Covid-19 boostervaksineprogrammer.

Samtidig måling av flere sykdomsrelaterte biomarkører i biologiske prøver tillater beskrivende og prediktiv innsikt i patologiske prosesser. Mens konvensjonelle enkeltanalyttimmunologiske prosedyrer, som enzymbundne immunosorbente analyser (ELISAer), har vært hjørnesteinen i kvantitative analyser i både kliniske og forskningsmiljøer, kan disse teknikkene ha betydelige begrensninger når det gjelder gjennomstrømning, mengden prøve som kreves for hver måling, og kostnadseffektivitet som i stor grad begrenser studiet av flere biologiske elementer som ofte er sammenflettet gjennom hele sykdomsforløpet1. . Mikrosfærebasert multipleksingsteknologi har blitt en uunnværlig plattform for både diagnostiske og forskningsfasiliteter for sin evne til å kombinere analyser for å forbedre laboratoriegjennomstrømningen, redusere prøvemangel og redusere repeterende testing for å maksimere kostnadsbesparelsene 1,2,3,4. Nylig har ytterligere utvidelse av denne multiplekse kraften blitt introdusert med instrumenter som har dual-reporter evner. Dual-reporter-funksjonen implementerer to fluorescerende kanaler for deteksjon, og leverer en annen dimensjon av multipleksing, slik at deteksjon av flere epitoper på samme analytt.
Alvorlig akutt respiratorisk syndrom coronavirus 2 (SARS-CoV-2) er patogenet som er ansvarlig for den nåværende koronavirussykdommen 2019 (COVID-19) pandemi5. Mens RT-PCR-testing er avgjørende for infeksjonsbekreftelse i begynnelsen av sykdomsforløpet, har serologiske undersøkelser av antistofftitler vist seg å være avgjørende for nøyaktig og fullstendig kritikk av enkeltpersoner angående tidligere eksponering eller gjenoppretting; et svar på immunisering; og/eller en evaluering av covid-19 vaksinasjonseffekt 6,7.
Denne rapporten avgrenser metoder for å måle serokonversjon for flere SARS-CoV-2 virale antigener som bruker et strømningsbasert dobbeltrapporteringssystem med multipleksleser. Nærmere bestemt er samtidig deteksjon av to antistoffundertyper (konfigurert som IgG/IgM eller IgA/IgM) for et 3-plex SARS-CoV-2 antigenpanel som inkluderer analyser for Spike S1, Nucleocapsid og Membrane (aka Matrix) glykoproteiner, beskrevet. Denne tilnærmingen gir en ideell bedrift for fangst av langsgående serokonversjon og bidrar med et verdifullt verktøy i arsenalet mot Covid-19-pandemien.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>384-well black side polystyrene microtiter plates</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>12-565-346</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Activation buffer (0.1 M NaH2PO4, pH 6.2)</td>
			<td>Prepared in house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Assay buffer (PBS, 1% Bovine Serum Albumin, 0.01% Polysorbate-20)</td>
			<td>Prepared in house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin, heat shock fraction</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>A-7888-50G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coupling buffer (50 mM MES, pH 5.0)</td>
			<td>Prepared in house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>COVID 19 M Coronavirus Recombinant Matrix Protein (6xHis tag)</td>
			<td>MyBioSource</td>
			<td>MBS8574735</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable pipette tips</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDC (1-Ethyl-3-[3-dimethylaminopropyl]carbodiimide hydrochloride)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>PIA35391</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat Albumin, Fraction V Powder</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>A2514-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgA Goat anti-Human, R-PE, Polyclonal</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>OB205009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgG Goat anti-Human, R-PE, Polyclonal</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>OB204009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgG Goat anti-Rabbit, R-PE, Polyclonal</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>OB403009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgM Goat anti-Human, R-PE, Polyclonal</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>OB202009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgM Mouse anti-Human, SB 436, Clone SA-DA4</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>62999842</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Instrument Analyzer</td>
			<td>Luminex Corp.</td>
			<td>INTELLIFLEX-RUO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low-Bind microcentrifuge tubes (1.5 mL)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>13-698-794</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MagPlex-C Microspheres, Region XXX</td>
			<td>Luminex Corp.</td>
			<td>MC10XXX-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MES hydrate (2-(N-Morpholino) ethane sulfonic acid hydrate)</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>M2933</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate aluminum sealing tape</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>07-200-683</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polysorbate-20</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>BP337-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quality Biological Inc. PBS, pH 7.2</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>50-751-7328</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quench buffer (PBS, 1% Goat Serum Albumin, 0.01% Polysorbate-20)</td>
			<td>Prepared in house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Nucleocapsid Protein (His tag)</td>
			<td>Sino Biologicals</td>
			<td>40588-V08B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Spike Protein (S1 Subunit, His tag)</td>
			<td>Sino Biologicals</td>
			<td>40591-V08H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Spike RBD Antibody, Rabbit pAb</td>
			<td>Sino Biologicals</td>
			<td>40592-T62</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Nucleocapsid Antibody, Rabbit mAb</td>
			<td>Sino Biologicals</td>
			<td>40588-R0004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SARS-CoV-2 (COVID-19) Membrane Antibody (IN), Rabbit pAb</td>
			<td>ProSci</td>
			<td>10-516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sulfo-NHS (N-hydroxysulfosuccinimide)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>PIA39269</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wash Buffer (PBS, 0.01% Polysorbate-20)</td>
			<td>Prepared in house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water, LC/MS grade</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>W-64</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dynamic monitoring of seroconversion using a multianalyte immunobead assay for covid-19

Multiplex teknologier for avhør av flere biomarkører i konsert har eksistert i flere tiår; Metoder for å evaluere flere epitoper på samme analytt forblir imidlertid begrenset. Denne rapporten beskriver utvikling og optimalisering av en multiplekset immunobeadanalyse for serologisk testing av vanlige immunglobulinisotyper (f.eks. IgA, IgM og IgG) forbundet med immunrespons på SARS-CoV-2 infeksjon eller vaksinasjon. Analyser ble utført ved hjelp av en strømningsbasert, multipleks fluorescerende leser med tokanals evne. Optimaliseringer fokusert på analyttfangsttid, deteksjon av antistoffkonsentrasjon og deteksjon av antistoffinkubasjonstid. Analytiske analyseytelsesegenskaper (f.eks. analyseområde (inkludert nedre og øvre grenser for kvantitet); og intra- og interanalysepresisjon) ble etablert for enten IgG/IgM- eller IgA/IgM-serotypekombinasjonen i tandem ved hjelp av 'dual channel' -modus. Analyte fangsttider på 30 min for IgG, 60 min for IgM og 120 min for IgA var egnet for de fleste applikasjoner, noe som gir en balanse mellom analyseytelse og gjennomstrømning. Optimal deteksjon av antistoffinkubasjoner ved 4 μg/ml i 30 minutter ble observert og anbefales for generelle bruksområder, gitt den generelle utmerkede presisjonen (prosent varianskoeffisient (%CV) ≤ 20%) og følsomhetsverdier observert. Det dynamiske området for IgG-isotypen strakte seg over flere størrelsesordener for hver analyse (Spike S1, Nucleocapsid og Membrane glykoproteiner), som støtter robuste titerevalueringer med en 1:500 fortynningsfaktor for kliniske applikasjoner. Til slutt ble den optimaliserte protokollen brukt til å overvåke Spike S1 serokonversjon for forsøkspersoner (n = 4) som fullførte et SARS-CoV-2 vaksineregime. Innenfor denne kohorten ble Spike S1 IgG-nivåer observert for å nå maksimale titere ved 14 dager etter andre doseadministrasjon, med en mye høyere (~ 40 ganger) signalintensitet enn enten IgM- eller IgA-isotyper. Interessant nok observerte vi svært variable Spike S1 IgG-titerforfallsrater som i stor grad var fagavhengige, noe som vil være tema for fremtidige studier.

Watch this Scientific Journal Video about Dynamic Monitoring of Seroconversion using a Multianalyte Immunobead Assay for Covid-19 at JoVE.com

Dynamic Monitoring of Seroconversion using a Multianalyte Immunobead Assay for Covid-19

Denne artikkelen beskriver en praktisk metode for overvåking av dynamiske endringer i antistofftitler for to immunglobulin-isotyper samtidig (enten IgA, IgM eller IgG) som følge av en immunrespons på SARS-CoV-2-infeksjon eller vaksinasjon. Dette 'Multianalyte Covid-19 Immune Response Panel' bruker tre indirekte immunoassays bygget på kodede mikrosfærer som leses ved hjelp av en strømningsbasert multipleksleser med 'tokanals' evne.

Dynamisk overvåking av serokonversjon ved hjelp av en multianalytt immunobeadanalyse for Covid-19

Multiplex technologies for interrogating multiple biomarkers in concert have existed for several decades; however, methods to evaluate multiple epitopes ...

Metoden vi skal demonstrere i dag gir en høy gjennomstrømningsløsning for evaluering av serokonvertering av antistoffer forbundet med enten COVID-19-infeksjoner eller vaksinasjon for rutinemessige analyser. Interessant nok lar denne tilnærmingen oss evaluere flere epitoper på samme analytt. Dette har mange anvendelser innen biovitenskap, inkludert cellesignaleringsstudier og overvåking av immunresponser.Å demonstrere denne teknikken for deg i dag vil være Dr.Imad Tarhoni, en postdoktor i laboratoriet mitt. Til å begynne med velger du tre forskjellige hetteglass med de magnetiske mikrosfærene med unike perleregioner og registrerer perle-ID-en og partiinformasjonen for hvert hetteglass som brukes. Deretter virveler du den valgte mikrosfæren i 60 sekunder og sonikerer i fem minutter.Overfør 1,0 ganger 10 til de seks perlene til et 1,5 milliliter lavt proteinbindende mikrosenterrør og sett røret inn i en magnetisk separator. for å tillate separasjonen i 60 sekunder. Med røret fortsatt i magnetseparatoren, fjern forsiktig supernatanten uten å forstyrre perlepellet.Fjern røret fra magnetseparatoren, og resuspend deretter perlene med 100 mikroliter HPLC-grade vann og virvel i 30 sekunder. Sett igjen røret tilbake i magnetseparatoren i 60 sekunder og fjern deretter supernatanten. Gjenta vaskeprotokollen to ganger.Etter siste vask fjerner du røret fra magnetseparatoren og bruker de vaskede mikrosfærene på nytt i 90 mikroliter aktiveringsbuffer, pH 6,2, med virvel i 30 sekunder. Deretter behandler mikrosfærene sekvensielt med 10 mikroliter på 50 milligram per milliliter anhydroksy-sulfosuccinamid og 10 mikroliter 50 milligram per milliliter EDC-løsning med virvel i 10 sekunder. Senere inkuber mikrosfærene i 20 minutter ved romtemperatur med en mild virvel hvert 10.Etter inkubasjon, vask mikrosfærene to ganger med 50 millimolar MES eller koblingsbuffer, pH 5.0, som beskrevet tidligere. Gjenta vasken to ganger. Når du er ferdig, fjern røret fra magnetseparatoren og resuspend perlene med 100 mikroliter koblingsbuffer med virvel i 30 sekunder, etterfulgt umiddelbart ved å legge til ønsket mengde protein til røret.Ta det totale volumet til 150 mikroliter med koblingsbuffer og bland reaksjonen med virvel i 30 sekunder. Deretter inkuberer du røret i to timer ved rotasjon ved romtemperatur. Etter inkubasjon, vask mikrosfærene to ganger med PBS slukkebuffer og resuspender de vaskede mikrosfærene i 100 mikroliter slukkebuffer som inneholder 0,05% natriumazid med virvel i 30 sekunder.Tell antall gjenvunne mikrosfærer ved hjelp av en automatisert celleteller og registrer den observerte perlekonsentrasjonen. For analyseytelse, resuspend de koblede mikrosfærene med virvel i 30 sekunder og sonikere i 60 til 90 sekunder. Fjern deretter den nødvendige mengden av hver perlekolloid fra det respektive røret og kombiner perlekolloidene i et nytt mikrosenterrør på 1,5 milliliter.Deretter setter du røret inn i en magnetisk separator og tillater separasjon i 60 sekunder. Med røret fortsatt i magnetseparatoren, fjern supernatanten uten å forstyrre perlepellet. Etter å ha fjernet perlene fra separatoren, resuspend perlene i 100 mikroliter av analysebuffer.Virvel i 30 sekunder før du plasserer røret i en magnetisk separator i 60 sekunder for å skille perlene. Gjenta vasken to ganger. Deretter justerer du konsentrasjonen av den tre-plex fungerende mikrosfæren ved å legge til et passende volum analysebuffer for å generere en endelig konsentrasjon på 100 mikrosfære per en mikroliter for hvert mål.Aliquot 25 mikroliter av mikrosfæren blanding i hver brønn av en 96-brønns plate. Fortynn plasma- eller serumprøver 500 ganger i analysebuffer og lag standardprøver i henhold til ønsket titrering. Tilsett 25 mikroliter analysebuffer som den tomme prøven og tilsett hver av de fortynnede prøvene eller standarden i hver utpekt brønn av en 96-brønns prøveplate.Når du er ferdig, dekk platen med en aluminiumsforsegling eller folie for å inkubere i en time ved romtemperatur på en plate shaker satt til 700 rotasjoner per minutt. Forbered en løsning av anti-menneskelige deteksjonsantistoffer eller sekundære antistoffløsninger ved fire mikrogram per mikroliter med analysebuffer som beskrevet i manuskriptet. Plasser platen på en magnetisk separator for å vaske raskt og deretter kraftig inverter platen over en biofarebeholder for å fjerne væske fra brønnene.Med platen fortsatt invertert, trykk kraftig på platen mot en tykk vad av papir. Vask deretter hver brønn med 100 mikroliter analysebuffer og fjern væsken ved kraftig inversjon over en biofarende beholder. Gjenta vasken to ganger.Etter den siste vasken, kast alle brukte vads av papir i en biofarebeholder. Deretter legger du til 25 mikroliter sekundær antistoff arbeidsløsning til hver brønn av en 96-brønns plate og dekker platen med aluminiumsfolie for å inkubere på en plate shaker ved 700 rotasjoner per minutt. Etter 30 minutter med inkubasjon, vask brønnene på platen to ganger med analysebufferen som vist tidligere.Tilsett deretter 100 mikroliter analysebuffer i hver brønn på 96-brønnsplaten. Dekk platen med aluminiumsfolie og inkuber i fem minutter på en tallerken shaker ved romtemperatur. Analyser en 60-mikroliterprøve via instrumentanalysatoren i henhold til systemhåndboken.For optimalisering av prøven fange inkubasjonstid, inkuber platene i en varighet på 30, 60 og 120 minutter. Etter inkubasjon, analyser 60 mikroliter av analyseblandingen på analysatoren. En syv-punkts standardkurve basert på en 1:5 seriell fortynningsserie ble evaluert for spike S1, membranantistoffene og nukleocapsid.Presisjonstesten for intraanalyse ble utført på platen for å evaluere analysepresisjon beregnet som prosentvariasjonskoeffisient, standardavvik og gjennomsnitt. For presisjon mellom analysene ble det utarbeidet tre forskjellige partier av perlesettene for hver analyse. Presisjonsvariabler av analysen med standarden og de menneskelige plasmaprøvene ble beregnet.De gjennomsnittlige median fluorescerende intensitetsverdiene ved 120 minutter av inkubasjonen var optimale for IgG-titre for piggen S1, membranen og nukleocapsid-antistoffene, noe som indikerer et raskt primært antistoffbindende kinetikk. Sekundære antistoffkonsentrasjonsoptimaliseringer i tokanals ytelse viste et bredt spekter av signaler i lineær måling for alle konsentrasjoner. De observerte signalene fra forskjellige tidsinkubasjoner av sekundære antistoffer og detaljene på signalendringene for alle inkubasjonstidene vises her.I spesifisitetsvurderingene for tokanalsanalyser ble det observert ubetydelig krysssignalforurensning mellom blank- og enkeltreporterkanalen. I illustrasjonen av serokonverteringshendelser etter COVID 19-vaksinasjonen var de observerte piggverdiene S1 IgA og IgM omtrent 40 ganger lavere enn IgG-isotypetitrene. Denne metoden har viktige implikasjoner for overvåking av respons på vaksiner hos immunkompromitterte individer.Det vil tillate oss å avgjøre om disse pasientene virkelig blir beskyttet av disse vaksinasjonene.

Research

JoVE Journal

Medicine

Quantitative Visualization and Detection of Skin Cancer Using Dynamic Thermal Imaging

In 2010 approximately 68,720 melanomas will be diagnosed in the US alone, with around 8,650 resulting in death 1. To date, the only effective treatment ...

Computerized Dynamic Posturography for Postural Control Assessment in Patients with Intermittent Claudication

Computerized dynamic posturography with the EquiTest is an objective technique for measuring postural strategies under challenging static and dynamic ...

Dynamic Lung Tumor Tracking for Stereotactic Ablative Body Radiation Therapy

Dynamic Lung Tumor Tracking for Stereotactic Ablativ Body Stråleterapi

Physicians considering stereotactic ablative body radiation therapy (SBRT) for the treatment of extracranial cancer targets must be aware of the sizeable ...

A Detailed Protocol for Perspiration Monitoring Using a Novel, Small, Wireless Device

En detaljert protokoll for Svette Monitoring Ved hjelp av en roman, Small, Wireless Device

Perspiration monitoring can be utilized for the detection of certain diseases, such as thermoregulation and mental disorders, particularly when the ...

Identifying Inhibitors of the HBx-DDB1 Interaction Using a Split Luciferase Assay System

Identifisere hemmere av HBx-DDB1 interaksjon ved hjelp av en Split luciferase analysen system

There is an urgent need for novel therapeutic agents for hepatitis B virus (HBV) infection. Although currently available nucleos(t)ide analogs potently ...

Evaluation of Capnography Sampling Line Compatibility and Accuracy when Used with a Portable Capnography Monitor

Evaluering av kompatibilitet og nøyaktighet for kapnografiprøvelinje når den brukes med en bærbar kapnografiskjerm

Capnography is commonly used to monitor patient&#8217;s ventilatory status. While sidestream capnography has been shown to provide a reliable assessment ...

Real-Time Dynamic Navigation System for the Precise Quad-Zygomatic Implant Placement in a Patient with a Severely Atrophic Maxilla

Dynamisk navigasjonssystem i sanntid for presis quad-zygomatisk implantatplassering hos en pasient med en alvorlig atrofisk maxilla

Zygomatic implants (ZIs) are an ideal way to address cases of a severely atrophic edentulous maxilla and maxilla defects because they replace extensive ...

Dynamic Navigation for Dental Implant Placement

Dynamisk navigasjon for plassering av tannimplantater

In modern implantology, the application of surgical navigation systems is becoming increasingly important. In addition to static surgical navigation ...

A Surgical Model of Heart Failure with Preserved Ejection Fraction in Tibetan Minipigs

En kirurgisk modell for hjertesvikt med bevart ejeksjonsfraksjon hos tibetanske minigriser

More than half of heart failure (HF) cases are classified as heart failure with preserved ejection fraction (HFpEF) worldwide. Large animal models are ...

Dynamic Navigation in Endodontics: Guided Access Cavity Preparation by Means of a Miniaturized Navigation System

Dynamisk navigasjon i endodonti: Klargjøring av tilgangshulrom ved hjelp av et miniatyrisert navigasjonssystem

In the case of teeth with pulp canal calcification (PCC) and apical pathology or pulpitis, root canal treatment can be very challenging. PCC are common ...