Name: dynamic monitoring of seroconversion using a multianalyte immunobead assay for covid-19
Uploaded: 2022-02-16T15:00:00
Duration: 8 min 48 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dynamic Monitoring of Seroconversion using a Multianalyte Immunobead Assay for Covid-19 at JoVE.com

Авторы хотели бы поблагодарить Rush Biomarker Development Core за использование своих объектов, Rush Biorepository для регистрации субъектов и обработки биообразцев, а также Гранты Чикагской сети оценки коронавируса (Chicago CAN) Фонда Уолдера (Chicago CAN) Initiative SCI16 (J.R.S. и J.A.B.) и 21-00147 (J.R.S. и J.A.B.) и награду от Swim Across America Foundation (J.A.B.).

Все субъекты были зачислены с письменного информированного согласия с полным одобрением Институционального наблюдательного совета (IRB) Медицинского центра Университета Раша в соответствии с протоколом ORA 20101207 со всеми институциональными руководящими принципами для этического проведения исследований. Кровь собирали с помощью обычной флеботомии в лавандовые вакутайнеры (K2EDTA) и обрабатывали по рекомендуемым протоколам. Полученную плазму архивировали при -80 °C до тех пор, пока не были проведены оценки.
1. Подготовка антиген-конъюгированных микросфер
<ol><li>Выберите три различных флакона магнитных микросфер с уникальными областями бусин, записывая идентификатор бусины и информацию о партии для каждого используемого флакона. ПРИМЕЧАНИЕ: Для каждого отдельного микросферного региона будут выполнены следующие шаги. Микросферы чувствительны к свету и должны быть защищены от длительного воздействия света. Во время этапов стирки будьте осторожны, чтобы не нарушить микросферы. При нарушении разрешите второе расстояние в 60 секунд.</li>
	<li>Вихрь микросферы в течение 60 с и обработка ультразвуком в течение 5 мин перед использованием для диссоциации агрегированных шариков.</li>
	<li>Переложите 1,0 х 106 шариков в 1,5 мл низкобелковых связывающих микроцентрифужных пробирок.</li>
	<li>Вставьте трубку в магнитный сепаратор и позвольте отделению происходить в течение 60 с. Когда трубка все еще находится в магнитном сепараторе, осторожно удалите супернатант, не нарушая гранулу шарика.</li>
	<li>Извлеките трубку из магнитного сепаратора, повторно суспендируйте шарики 100 мкл воды класса ВЭЖХ и вихрь в течение 30 с. Поместите трубку обратно в магнитный сепаратор на 60 с, а затем удалите супернатант. Повторите этот протокол стирки дважды.</li>
	<li>Извлеките трубку из магнитного сепаратора и повторно суспендируйте промытые микросферы в 90 мкл моноосновного фосфата натрия 100 мМ, рН 6,2 (буфер активации) вихрем в течение 30 с.</li>
	<li>Добавьте 10 мкл 50 мг/мл Sulfo-NHS (разбавленное буфером активации) в микросферы и осторожно вихрь в течение 10 с. Добавьте 10 мкл 50 мг/мл раствора EDC (разбавленного буфером активации) и осторожно вихрь в течение 10 с. Насиживайте микросферы в течение 20 мин при комнатной температуре (RT) с помощью мягкого вихря каждые 10 мин.</li>
	<li>Повторите этапы промывки 1,4-1,5 с 50 мМ MES, рН 5,0 (буфер связи) вместо воды класса LC/MS в общей сложности для двух промывок.</li>
	<li>Извлеките трубку из магнитного сепаратора и повторно суспендируйте шарики со 100 мкл буфера связи вихрем в течение 30 с с последующим добавлением нужного количества белка.</li>
	<li>Доведите общий объем до 150 мкл с помощью буфера связи. Смешайте реакцию соединения вихрем в течение 30 с и инкубируйте в течение 2 ч путем вращения при РТ. ПРИМЕЧАНИЕ: Для анализов, определенных в настоящем описании, конъюгации проводили со следующими концентрациями белка: Spike S1: 5 мкг; Нуклеокапсид: 5 мкг; Мембрана: 12,5 мкг.</li>
	<li>Повторите этап промывки 1.4 с фосфатным буферизованным физиологическим раствором (PBS)-1% альбумином козьей сыворотки, 0,01% полисорбатом-20 (буфер закалки) вместо воды класса LC / MS в общей сложности две промывки. Повторно суспендировать промытые микросферы в 100 мкл буфера закалки, содержащего 0,05% азида натрия, вихрем в течение 30 с. ПРИМЕЧАНИЕ: Позвольте бусинам полностью закалиться в течение не менее 6 часов, прежде чем приступать к любой другой процедуре.</li>
	<li>Подсчитайте количество восстановленных микросфер с помощью автоматизированного счетчика клеток или гемоцитометра. Запишите наблюдаемую концентрацию шариков.</li>
	<li>Охлаждайте связанные микросферы при 4 °C в темноте.</li>
</ol>2. Процедуры
<ol><li>Производительность анализа (базовый протокол)<ol>
<li>Повторное суспендирование связанных микросфер вихрем в течение 30 с и ультразвуком в течение ~60-90 с.</li>
		<li>Извлеките необходимое количество каждого шарикового коллоида из соответствующей трубки и объедините шариковые коллоиды в новую микроцентрифужную трубку объемом 1,5 мл.</li>
		<li>Вставьте трубку в магнитный сепаратор и позвольте отделению происходить в течение 60 секунд. Когда трубка все еще находится в магнитном сепараторе, осторожно удалите супернатант, не нарушая гранулу шарика.</li>
		<li>Извлеките шарики из сепаратора, повторно суспендируйте шарики со 100 мкл PBS-1% бычьего сывороточного альбумина, 0,01% полисорбата-20 (буфер анализа) и вихря в течение 30 с. Поместите трубку в магнитный сепаратор и позвольте отделению произойти в течение 60 с. Повторите этот протокол стирки (т.е. шаги 2.1.3-2.1.4) дважды</li>
		<li>Отрегулируйте концентрацию 3-ступенчатой рабочей микросферной смеси, добавив соответствующий объем буфера анализа для получения конечной концентрации 100 микросфер на 1 мкл для каждой цели.</li>
		<li>Аликвота 12,5 мкл микросферной смеси, приготовленной на стадии 2,1,5 в каждую скважину 384-луночной плиты или 25 мкл в каждую скважину 96-луночной плиты.</li>
		<li>Разбавьте образцы плазмы/сыворотки в 500 раз в буфере анализа. Подготовьте стандартные образцы в соответствии с желаемым титрованием.</li>
		<li>Добавить 12,5 мкл пробного буфера в качестве заготовительного образца и добавить каждый разбавленный образец или стандарт в каждую обозначенную скважину из 384-луночной пробной пластины или 25 мкл заготовки, разбавленного образца или стандарта в каждую скважину пластины образца из 96 скважин.</li>
		<li>Накройте пластину алюминиевым уплотнением или фольгой и инкубируйте в течение 1 ч при RT на пластинчатом шейкере, установленном на 700 об/мин. ПРИМЕЧАНИЕ: Схема кривых разрежения приведена в таблице 1.</li>
		<li>Готовят раствор античеловеческих детектирующих антител (вторичные растворы антител) при 4 мкг/мл с помощью буфера анализа, как указано на этапе 2.1.11.</li>
		<li>Получают козий античеловеческий IgM, конъюгированный с Super Bright 436 (SB)/Goat-anti-human IgA, Phycoerythrin (PE) конъюгатные антитела при 4 мкг/мл; или Коза-анти-человек IgM, SB Конъюгат/Коза-анти-человек IgG, ПЭ Конъюгат обнаруживает антитела при 4 мкг/мл. ПРИМЕЧАНИЕ: Для формата пластины с 384 лунками требуется 12,5 мкл/лунка приготовленного раствора вторичных антител, а для пластинчатого формата с 96 лунками требуется 25 мкл/лунка.</li>
		<li>Поместите пластину на магнитный сепаратор, быстро промывайте и принудительно переворачивайте над контейнером биологической опасности, чтобы удалить жидкость из скважин. Когда пластина все еще перевернута, силой постучите по тарелке о толстый кусок бумаги.</li>
		<li>Промыть каждую лунку 100 мкл пробирного буфера и удалить жидкость путем принудительной инверсии над контейнером биологической опасности, как описано ранее. Повторите эти шаги (2.1.12-2.1.13) в общей сложности для двух промывок. Выбросьте все использованные пачки бумаги в контейнер с биологической опасностью.</li>
		<li>Добавьте 12,5 мкл рабочего раствора вторичного антитела в каждую лунку пластины из 384 лунок или 25 мкл в каждую лунку из 96-луночной пластины. Накройте пластину алюминиевым уплотнением или фольгой и инкубируйте в течение 30 мин при RT на пластинчатом шейкере, установленном на 700 об/мин.</li>
		<li>Повторите этапы промывки 2.1.12-2.1.13</li>
		<li>Добавьте 75 мкл пробирного буфера в каждую скважину 384-луночной пластины или 100 мкл в каждую скважину 96-луночной пластины. Накройте пластину алюминиевым уплотнением или фольгой и инкубируйте в течение 5 мин при RT на пластинчатом шейкере, установленном на 700 об/мин.</li>
		<li>Анализ 60 мкл с помощью приборного анализатора в соответствии с системным руководством.</li>
	</ol></li>
	<li>Оптимизация времени инкубации при отлове образцов<ol>
<li>Выполните шаги, описанные в разделе 2.1, используя продолжительность инкубации 30 мин, 60 мин и 120 мин на шаге 2.1.9. ПРИМЕЧАНИЕ: Инкубация может проводиться либо с отдельными пластинами, либо путем паузы на этапе 2.1.6 до момента перехода к этапу 2.1.9. для достижения желаемого времени инкубации.</li>
		<li>Приступают к чтению пластин на анализаторе, используя 60 мкл пробирной смеси в соответствии с рекомендациями производителя.</li>
	</ol></li>
	<li>Оптимизация концентрации вторичных антител<ol>
<li>Выполните эту процедуру, как описано в разделе 2.1, за исключением конечных концентраций реагентов во вторичном рабочем растворе антител (приготовленном на этапе 2.1.10-2.1.11), измененных следующим образом: Коза-античеловеческая (или кроличья) IgM, SB-конъюгатная детектирующая антитела при 8, 4, 2, 1 и 0,5 мкг/мл. Козье античеловеческое (или кроличье) IgA, PE-конъюгатное обнаружение антител при 8, 4, 2, 1 и 0,5 мкг/мл. Козье античеловеческое (или кроличье) IgG, PE-конъюгатное обнаружение антител при 8, 4, 2, 1 и 0,5 мкг/мл. Коза-античеловеческая (или кроличья) IgG, PE-конъюгатная/Коза-античеловеческая (или кроличья) IgM, SB-конъюгированные антитела обнаружения при 8, 4, 2, 1 и 0,5 мкг/мл. Коза-античеловеческая (или кроличья) IgA, PE-конъюгатная/Коза-античеловеческая (или кроличья) IgM, SB-конъюгированные антитела обнаружения при 8, 4, 2, 1 и 0,5 мкг/мл.</li>
		<li>Приступают к чтению пластин на анализаторе, используя 60 мкл пробирной смеси в соответствии с рекомендациями производителя.</li>
	</ol></li>
	<li>Оптимизация времени инкубации вторичных антител<ol>
<li>Выполните эту процедуру, как описано в разделе 2.1, с 15 мин, 30 мин, 60 мин и 120 мин продолжительности инкубации, определенной в шаге 2.1.14.</li>
		<li>Приступают к чтению пластин на анализаторе, используя 60 мкл пробирной смеси в соответствии с рекомендациями производителя.</li>
	</ol></li>
	<li>Оценка испытуемых образцов с помощью оптимизированных двухканальных анализов<ol>
<li>Сбор образцов плазмы субъекта (n = 4) в дни -21, -11, -1/0, +14, +28, +60, +90 и +120 относительно завершения введения вакцины против Covid-19 (т.е. второй дозы). ПРИМЕЧАНИЕ: День 0 представляет собой точку времени, в течение которого вакцинация была завершена.</li>
		<li>Выполните все анализы с использованием базового протокола (раздел 2.1.) в качестве двухканального анализа IgG/IgM или IgA/IgM.</li>
		<li>Нормализуйте результаты до максимально наблюдаемого значения медианной флуоресцентной интенсивности (MFI) для каждого конкретного иммуноглобулина и анализа.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol>
	<li>Tighe, P. J., Ryder, R. R., Todd, I., Fairclough, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ELISA+in+the+multiplex+era:+potentials+and+pitfalls.">ELISA in the multiplex era: potentials and pitfalls.</a> Proteomics - Clinical Applications. 9, 406-422 (2015).</li><li>Baker, H. N., Murphy, R., Lopez, E., Garcia, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conversion+of+a+capture+ELISA+to+a+Luminex+xMAP+assay+using+a+multiplex+antibody+screening+method.">Conversion of a capture ELISA to a Luminex xMAP assay using a multiplex antibody screening method.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (65), e4084 (2012).</li><li>Powell, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+multiplex+microsphere-based+immunoassay+increases+the+sensitivity+of+siv-specific+antibody+detection+in+serum+samples+and+mucosal+specimens+collected+from+rhesus+macaques+infected+with+SIVmac239.">A multiplex microsphere-based immunoassay increases the sensitivity of siv-specific antibody detection in serum samples and mucosal specimens collected from rhesus macaques infected with SIVmac239.</a> BioResearch Open Access. 2 (3), 171-178 (2013).</li><li>Volpetti, F., Garcia-Cordero, J., Maerkl, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microfluidic+platform+for+high-throughput+multiplexed+protein+quantitation.">A microfluidic platform for high-throughput multiplexed protein quantitation.</a> PLoS One. 10 (2), 0117744 (2015).</li><li>Rabi, F. A., Al Zoubi, M. S., Kasasbeh, G. A., Salameh, D. M., Al-Nasser, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SARS-CoV-2+and+coronavirus+disease+2019:+What+we+know+so+far.">SARS-CoV-2 and coronavirus disease 2019: What we know so far.</a> Pathogens. 9 (3), 231 (2020).</li><li>Asif, M., Xu, Y., Xiao, F., Sun, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+of+COVID-19,+vitality+of+emerging+technologies+and+preventive+measures.">Diagnosis of COVID-19, vitality of emerging technologies and preventive measures.</a> Chemical Engineering Journal. 423, 130189 (2021).</li><li>La Marca, A., Capuzzo, M., Paglia, T., Roli, L., Trenti, T., Nelson, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testing+for+SARS-CoV-2+(COVID-19):+a+systematic+review+and+clinical+guide+to+molecular+and+serological+in-vitro+diagnostic+assays.">Testing for SARS-CoV-2 (COVID-19): a systematic review and clinical guide to molecular and serological in-vitro diagnostic assays.</a> Reproductive Biomedicine Online. 41 (3), 483-499 (2020).</li><li>Armbruster, D. A., Pry, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limit+of+blank,+limit+of+detection+and+limit+of+quantitation.">Limit of blank, limit of detection and limit of quantitation.</a> The Clinical Biochemist. Reviews. 29, 49-52 (2008).</li><li>Tarhoni, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+between+circulating+tumor-associated+autoantibodies+and+clinical+outcomes+in+advanced-stage+NSCLC+patients+receiving+PD-1/-L1+directed+immune+checkpoint+inhibition.">Relationship between circulating tumor-associated autoantibodies and clinical outcomes in advanced-stage NSCLC patients receiving PD-1/-L1 directed immune checkpoint inhibition.</a> Journal of Immunological Methods. 490, 112956 (2021).</li><li>Deeks, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibody+tests+for+identification+of+current+and+past+infection+with+SARS-CoV-2.">Antibody tests for identification of current and past infection with SARS-CoV-2.</a> The Cochrane Database of Systematic Reviews. 6, 013652 (2020).</li><li>Mahalingam, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Landscape+of+humoral+immune+responses+against+SARS-CoV-2+in+patients+with+COVID-19+disease+and+the+value+of+antibody+testing.">Landscape of humoral immune responses against SARS-CoV-2 in patients with COVID-19 disease and the value of antibody testing.</a> Heliyon. 7 (4), 06836 (2021).</li><li>Ruano-Gallego, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+multiplex+antigen+microarray+for+simultaneous+IgG+and+IgM+detection+against+SARS-CoV-2+reveals+higher+seroprevalence+than+reported.">A multiplex antigen microarray for simultaneous IgG and IgM detection against SARS-CoV-2 reveals higher seroprevalence than reported.</a> Microbial Biotechnology. 14 (3), 1228-1236 (2021).</li><li>Shah, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IgG+and+IgM+antibody+formation+to+spike+and+nucleocapsid+proteins+in+COVID-19+characterized+by+multiplex+immunoblot+assays.">IgG and IgM antibody formation to spike and nucleocapsid proteins in COVID-19 characterized by multiplex immunoblot assays.</a> BMC Infectious Diseases. 21 (1), 325 (2021).</li><li>Gambino, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+a+rapid+immunochromatographic+test+with+a+chemiluminescence+immunoassay+for+detection+of+anti-SARS-CoV-2+IgM+and+IgG.">Comparison of a rapid immunochromatographic test with a chemiluminescence immunoassay for detection of anti-SARS-CoV-2 IgM and IgG.</a> Biochemia Medica (Zagreb). 30 (3), 030901 (2020).</li><li>Algaissi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SARS-CoV-2+S1+and+N-based+serological+assays+reveal+rapid+seroconversion+and+induction+of+specific+antibody+response+in+COVID-19+patients.">SARS-CoV-2 S1 and N-based serological assays reveal rapid seroconversion and induction of specific antibody response in COVID-19 patients.</a> Scientific Reports. 10, 16561 (2020).</li><li>Chiereghin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+the+evaluation+of+serological+assays+for+the+diagnosis+of+SARS-CoV-2+infection+and+COVID-19.">Recent advances in the evaluation of serological assays for the diagnosis of SARS-CoV-2 infection and COVID-19.</a> Frontiers in Public Health. 8, 620222 (2020).</li><li>Nicol, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+SARS-CoV-2+serological+tests+for+the+diagnosis+of+COVID-19+through+the+evaluation+of+three+immunoassays:+Two+automated+immunoassays+(Euroimmun+and+Abbott)+and+one+rapid+lateral+flow+immunoassay+(NG+Biotech).">Assessment of SARS-CoV-2 serological tests for the diagnosis of COVID-19 through the evaluation of three immunoassays: Two automated immunoassays (Euroimmun and Abbott) and one rapid lateral flow immunoassay (NG Biotech).</a> Journal of Clinical Virology: The Official Publication of the Pan American Society for Clinical Virology. 129, 104511 (2020).</li><li>Butt, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+multiplex+serology+to+serolomics-A+novel+approach+to+the+antibody+response+against+the+SARS-CoV-2+proteome.">From multiplex serology to serolomics-A novel approach to the antibody response against the SARS-CoV-2 proteome.</a> Viruses. 13 (5), 749 (2021).</li><li>Byrum, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=multiSero:+open+multiplex-ELISA+platform+for+analyzing+antibody+responses+to+SARS-CoV-2+infection.">multiSero: open multiplex-ELISA platform for analyzing antibody responses to SARS-CoV-2 infection.</a> medRxiv. , (2021).</li><li>Dobano, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+sensitive+and+specific+multiplex+antibody+assays+to+quantify+immunoglobulins+m,+a,+and+g+against+SARS-CoV-2+antigens.">Highly sensitive and specific multiplex antibody assays to quantify immunoglobulins m, a, and g against SARS-CoV-2 antigens.</a> Journal of Clinical Microbiology. 59 (2), 01731 (2021).</li><li>Schultz, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+validation+of+a+multiplex+microsphere+immunoassay+using+dried+blood+spots+for+SARS-CoV-2+seroprevalence:+Application+in+first+responders+in+first+responders+in+Colorado,+USA.">Development and validation of a multiplex microsphere immunoassay using dried blood spots for SARS-CoV-2 seroprevalence: Application in first responders in first responders in Colorado, USA.</a> Journal of Clinical Microbiology. 59 (6), 00290 (2021).</li><li>Beavis, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+EUROIMMUN+anti-SARS-CoV-2+ELISA+assay+for+detection+of+IgA+and+IgG+antibodies.">Evaluation of the EUROIMMUN anti-SARS-CoV-2 ELISA assay for detection of IgA and IgG antibodies.</a> Journal of Clinical Virology: The Official Publication of the Pan Americal Society for Clinical Virology. 129, 104468 (2020).</li><li>Jung, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+performance+of+a+semi-quantitative+assay+for+SARS-CoV2+IgG+and+SARS-CoV2+IgM+antibodies.">Clinical performance of a semi-quantitative assay for SARS-CoV2 IgG and SARS-CoV2 IgM antibodies.</a> Clinica Chimica Acta: International Journal of Clinical Chemistry. 510, 790-795 (2020).</li></ol>

Доктор Борджиа является изобретателем серологического теста, используемого в этой рукописи, которая находится на рассмотрении патента. Статья представлена в описательной форме только без статистического анализа, чтобы избежать потенциальной предвзятости, вызванной конфликтом авторов.

Оценка иммунного ответа на воздействие SARS-CoV-2 в сочетании с эпиднадзором за статусом инфекции на основе ОТ-ПЦР была хорошо описана как рецепт для уточнения хода выздоровления от Covid-19, чтобы служить средством для выявления реконвалесцентной плазмы с потенциальной терапевтической ценностью и для обследования показателей инфицирования на популяционной основе10,11. Различные примеры понимания сероконверсии у людей включают белковые (антигенные) массивы12, иммуноблоты13, быстрые иммунохроматографические конструкции14 и иммуноферментные анализы (ИФА)15,16,17. Каждый из этих вышеупомянутых методов может оценивать несколько изотипов иммуноглобулина индивидуально с незначительными изменениями. Эти процедуры, однако, не могут быть практически перепрофилированы, чтобы позволить параллельный анализ нескольких изотипов, как это представлено в этой рукописи, что делает факторы стоимости и пропускной способности ограничениями для их администрирования в стратегии тестирования на основе популяционного масштаба. Некоторые из этих приложений также предоставляют возможность объединять уровни нескольких антигенов параллельно либо в представленном виде, либо в измененных форматах, таких как мультиплексная ИФА 18,19. Наконец, платформа иммуногранул обеспечивает возможность оценки уровней нескольких антигенов параллельно20,21, но была ограничена одним эпитопом (т.е. изотипом иммуноглобулина) за анализ, если, однако, не используется недавний инструмент с возможностями «двухканального» анализа.
В этом отчете перечислены протоколы, которые устанавливают надежное измерение нескольких эпитопов в анализе иммуногранулы с использованием инструмента в «двухканальном» режиме в тематическом исследовании сероконверсии людей, вакцинированных covid-19. Метод продемонстрировал отличную точность (% значений CV обычно <20%) с использованием конструкций ручного анализа, которые могут быть улучшены с интеграцией лабораторных автоматизированных систем. Чувствительность анализа и динамический диапазон для всех выбранных аналитов и эпитопов были пригодны для рутинных оценок. Хотя отсутствие коммерчески доступных иммунореагентов антиантигена IgA и IgM ограничивало количественное определение изотипа IgG, такое ограничение не исключает возможности предлагать полуколичественные оценки или оценки относительно конкретного образца в качестве калибранта22,23.
Подтвержденный анализ иммуногранулы был выделен для исследования сероконверсии в когорте людей, иммунизированных вакциной против Covid-19. В отличие от других подобных платформ, семейство приборов позволяет искать сероконверсию у сотен людей в день в ручном рабочем процессе и тысяч в день в автоматизированной схеме. В целом, эти результаты подтверждают, что «двухканальный» подход имеет соответствующую чувствительность для описания нескольких эпитопов параллельно для идентичного анализа и является жизнеспособным в многоаналитном контексте. Разница в чувствительности к каналу 1 и каналу 2, выполненная с флуорофорами фикоэритрина и Super Bright 436 соответственно, может оправдать разработку конкретного эксперимента для обеспечения получения жизнеспособных аналитических результатов для данного эксперимента. То есть резервирование канала 1 для эпитопов или аналитов более низкой распространенности может быть необходимо для поддержания динамического диапазона анализа, включающего наблюдаемые значения неизвестных. Помимо этого соображения, дизайн анализа был очевиден и должен быть легко доступен для лабораторий с ограниченными аналитическими возможностями. Конечно, это соображение следует взвешивать при рассмотрении помех канала 1 к каналу 2, как мы отметили на рисунке 5, в результате чего помехи от изотипов с более высокой плотностью могут вызывать вводящие в заблуждение аналитические ошибки для тех, кто находится в гораздо меньшем изобилии при измерении в двухканальном формате. Этот потенциал для вмешательства в ситуации с сильно отличающимися концентрациями анализируемого вещества может представлять собой значительное ограничение для подхода, если он не будет должным образом обработан на этапе проектирования анализа.
В заключение был представлен метод быстрого измерения титров антител из основных изотипов иммуноглобулина, связанных с иммунным ответом на инфекцию Covid-19 или вакцинацию. Применение этого подхода продольным образом для оценки сероконверсии может дать представление, которое можно было бы лучше использовать для управления и / или мониторинга течения заболевания или, в качестве альтернативы, руководства перспективными программами бустерной вакцины против Covid-19.

Одновременное измерение нескольких связанных с заболеванием биомаркеров в биологических образцах позволяет описательно и прогнозно понять патологические процессы. В то время как обычные иммунологические процедуры с одним анализом, такие как иммуноферментные анализы (ИФА), были краеугольным камнем количественного анализа как в клинических, так и в исследовательских условиях, эти методы могут иметь существенные ограничения в отношении пропускной способности, количества образцов, необходимых для каждого измерения, и экономической эффективности, которые значительно ограничивают изучение нескольких биологических элементов, которые часто переплетаются на протяжении всего течения заболевания1. . Технология мультиплексирования на основе микросферы стала незаменимой платформой как для диагностических, так и для исследовательских учреждений благодаря своей способности комбинировать анализы для повышения пропускной способности лаборатории, смягчения дефицита образцов и сокращения повторяющихся испытаний для максимальной экономии средств 1,2,3,4. В последнее время было введено дальнейшее увеличение этой мультиплексирующей мощности с помощью инструментов, обладающих возможностями двойного репортера. Функция двойного репортера реализует два флуоресцентных канала для обнаружения, обеспечивая еще одно измерение мультиплексирования, позволяя обнаруживать несколько эпитопов на одном анализируемом объекте.
Коронавирус тяжелого острого респираторного синдрома 2 (SARS-CoV-2) является возбудителем, ответственным за текущую пандемию коронавирусной болезни 2019 года (COVID-19)5. В то время как тестирование ОТ-ПЦР имеет решающее значение для подтверждения инфекции в начале течения заболевания, серологические исследования титров антител оказались необходимыми для точной и полной критики людей в отношении предыдущего воздействия или выздоровления; ответные меры на иммунизацию; и/или оценка эффективности вакцинации против Covid-19 6,7.
В этом отчете описываются методы измерения сероконверсии для нескольких вирусных антигенов SARS-CoV-2, которые используют систему двойной отчетности мультиплексного считывателя на основе потока. В частности, описано одновременное обнаружение двух подтипов антител (сконфигурированных как IgG/IgM или IgA/IgM) для 3-плексной панели антигенов SARS-CoV-2, которая включает анализы для гликопротеинов Spike S1, Nucleocapsid и Membrane (aka Matrix). Такой подход обеспечивает идеальное предприятие для захвата продольной сероконверсии и вносит ценный инструмент в арсенал против пандемии Covid-19.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>384-well black side polystyrene microtiter plates</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>12-565-346</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Activation buffer (0.1 M NaH2PO4, pH 6.2)</td>
			<td>Prepared in house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Assay buffer (PBS, 1% Bovine Serum Albumin, 0.01% Polysorbate-20)</td>
			<td>Prepared in house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin, heat shock fraction</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>A-7888-50G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coupling buffer (50 mM MES, pH 5.0)</td>
			<td>Prepared in house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>COVID 19 M Coronavirus Recombinant Matrix Protein (6xHis tag)</td>
			<td>MyBioSource</td>
			<td>MBS8574735</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable pipette tips</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDC (1-Ethyl-3-[3-dimethylaminopropyl]carbodiimide hydrochloride)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>PIA35391</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat Albumin, Fraction V Powder</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>A2514-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgA Goat anti-Human, R-PE, Polyclonal</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>OB205009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgG Goat anti-Human, R-PE, Polyclonal</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>OB204009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgG Goat anti-Rabbit, R-PE, Polyclonal</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>OB403009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgM Goat anti-Human, R-PE, Polyclonal</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>OB202009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgM Mouse anti-Human, SB 436, Clone SA-DA4</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>62999842</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Instrument Analyzer</td>
			<td>Luminex Corp.</td>
			<td>INTELLIFLEX-RUO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low-Bind microcentrifuge tubes (1.5 mL)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>13-698-794</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MagPlex-C Microspheres, Region XXX</td>
			<td>Luminex Corp.</td>
			<td>MC10XXX-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MES hydrate (2-(N-Morpholino) ethane sulfonic acid hydrate)</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>M2933</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate aluminum sealing tape</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>07-200-683</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polysorbate-20</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>BP337-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quality Biological Inc. PBS, pH 7.2</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>50-751-7328</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quench buffer (PBS, 1% Goat Serum Albumin, 0.01% Polysorbate-20)</td>
			<td>Prepared in house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Nucleocapsid Protein (His tag)</td>
			<td>Sino Biologicals</td>
			<td>40588-V08B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Spike Protein (S1 Subunit, His tag)</td>
			<td>Sino Biologicals</td>
			<td>40591-V08H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Spike RBD Antibody, Rabbit pAb</td>
			<td>Sino Biologicals</td>
			<td>40592-T62</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Nucleocapsid Antibody, Rabbit mAb</td>
			<td>Sino Biologicals</td>
			<td>40588-R0004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SARS-CoV-2 (COVID-19) Membrane Antibody (IN), Rabbit pAb</td>
			<td>ProSci</td>
			<td>10-516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sulfo-NHS (N-hydroxysulfosuccinimide)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>PIA39269</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wash Buffer (PBS, 0.01% Polysorbate-20)</td>
			<td>Prepared in house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water, LC/MS grade</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>W-64</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dynamic monitoring of seroconversion using a multianalyte immunobead assay for covid-19

Мультиплексные технологии для совместного опроса нескольких биомаркеров существуют уже несколько десятилетий; однако методы оценки нескольких эпитопов на одном и том же анализируемом веществе остаются ограниченными. В этом отчете описывается разработка и оптимизация мультиплексированного иммунобусирного анализа для серологического тестирования общих изотипов иммуноглобулинов (например, IgA, IgM и IgG), связанных с иммунным ответом на инфекцию SARS-CoV-2 или вакцинацию. Анализы были выполнены с использованием проточного мультиплексного флуоресцентного считывателя с двухканальной функцией. Оптимизация была сосредоточена на времени захвата анализируемого вещества, концентрации антител обнаружения и времени инкубации антител обнаружения. Эксплуатационные характеристики аналитического анализа (например, диапазон анализа (включая нижний и верхний пределы квантования); а также внутри- и межпробирная точность) были установлены для комбинации серотипов IgG/IgM или IgA/IgM в тандеме с использованием двухканального режима. Время захвата аналита 30 мин для IgG, 60 мин для IgM и 120 мин для IgA было подходящим для большинства применений, обеспечивая баланс производительности анализа и пропускной способности. Наблюдалось оптимальное обнаружение инкубаций антител при 4 мкг/мл в течение 30 мин и рекомендуется для общих применений, учитывая общую отличную точность (процентный коэффициент дисперсии (%CV) ≤ 20%) и наблюдаемые значения чувствительности. Динамический диапазон для изотипа IgG охватывал несколько порядков величины для каждого анализа (Spike S1, Nucleocapsid и Мембранные гликопротеины), что поддерживает надежные оценки титра при коэффициенте разбавления 1:500 для клинических применений. Наконец, оптимизированный протокол был применен для мониторинга сероконверсии Spike S1 для субъектов (n = 4), которые завершили схему вакцинации против SARS-CoV-2. В этой когорте наблюдалось, что уровни Spike S1 IgG достигают максимальных титров через 14 дней после введения второй дозы при гораздо более высокой (~ 40-кратной) интенсивности сигнала, чем изотипы IgM или IgA. Интересно, что мы наблюдали очень изменчивые скорости распада титра Spike S1 IgG, которые в значительной степени зависели от субъекта, что станет темой будущих исследований.

Watch this Scientific Journal Video about Dynamic Monitoring of Seroconversion using a Multianalyte Immunobead Assay for Covid-19 at JoVE.com

Dynamic Monitoring of Seroconversion using a Multianalyte Immunobead Assay for Covid-19

В данной статье описан удобный метод мониторинга динамических изменений титров антител для двух изотипов иммуноглобулина одновременно (IgA, IgM или IgG) в результате иммунного ответа на инфекцию SARS-CoV-2 или вакцинацию. Эта «Мультианалитическая панель иммунного ответа Covid-19» использует три косвенных иммуноанализа, построенных на закодированных микросферах, которые считываются с помощью мультиплексного считывателя на основе потока с возможностью «двухканального».

Динамический мониторинг сероконверсии с использованием мультианалитного иммуногранулного анализа на Covid-19

Multiplex technologies for interrogating multiple biomarkers in concert have existed for several decades; however, methods to evaluate multiple epitopes ...

Метод, который мы продемонстрируем сегодня, обеспечивает высокопроизводительное решение для оценки серопреобразования антител, связанных либо с инфекциями COVID-19, либо с вакцинацией для рутинных анализов. Интересно, что такой подход позволяет оценить несколько эпитопов на одном и том же анализируемом веществе. Это имеет многочисленные применения в биологических науках, включая исследования клеточной сигнализации и мониторинг иммунных реакций.Продемонстрировать эту технику для вас сегодня будет доктор Имад Тархони, постдокторант в моей лаборатории. Для начала выберите три разных флакона магнитных микросфер с уникальными областями бусин и запишите идентификатор бусины и информацию о партии для каждого используемого флакона. Затем вихрьте выбранный запас микросферы в течение 60 секунд и обработайте ультразвуком в течение пяти минут.Переложите 1,0 раза по 10 на шесть шариков в 1,5-миллилитровую микроцентрифужную трубку с низким содержанием белка и вставьте трубку в магнитный сепаратор. , чтобы обеспечить разделение в течение 60 секунд. Когда трубка все еще находится в магнитном сепараторе, осторожно удалите супернатант, не нарушая гранулу шарика.Извлеките трубку из магнитного сепаратора, затем повторно суспендируйте шарики 100 микролитрами воды класса ВЭЖХ и вихрем в течение 30 секунд. Опять же, поместите трубку обратно в магнитный сепаратор на 60 секунд и затем удалите супернатант. Повторите протокол стирки дважды.После последней промывки извлеките трубку из магнитного сепаратора и повторно суспендируйте промытые микросферы в 90 микролитрах буфера активации, рН 6,2, вихрем в течение 30 секунд. Далее последовательно обрабатывают микросферы 10 микролитрами по 50 миллиграммов на миллилитр ангидроксисульфосукунамида и 10 микролитрами по 50 миллиграммов на миллилитр раствора EDC вихрем в течение 10 секунд. Позже насиживайте микросферы в течение 20 минут при комнатной температуре с помощью нежного вихря каждые 10 минут.После инкубации дважды промывайте микросферы 50-миллимолярным MES или буфером связи, pH 5,0, как описано ранее. Повторите стирку дважды. После этого извлеките трубку из магнитного сепаратора и повторно суспендируйте шарики со 100 микролитрами буфера связи вихрем в течение 30 секунд с последующим добавлением нужного количества белка в трубку.Доведите общий объем до 150 микролитров с буфером связи и перемешайте реакцию вихрем в течение 30 секунд. Затем инкубируют трубку в течение двух часов путем вращения при комнатной температуре. После инкубации дважды промывайте микросферы буфером закалки PBS и повторно суспендируйте промытые микросферы в 100 микролитрах буфера закалки, содержащего 0,05% азида натрия, вихрем в течение 30 секунд.Подсчитайте количество восстановленных микросфер с помощью автоматизированного счетчика клеток и запишите наблюдаемую концентрацию шариков. Для выполнения анализа повторно суспендируйте связанные микросферы вихрем в течение 30 секунд и обрабатывайте ультразвуком в течение 60-90 секунд. Затем удалите необходимое количество коллоида каждого шарика из соответствующей трубки и объедините шариковые коллоиды в новую 1,5-миллилитровую микроцентрифужную трубку.Затем вставьте трубку в магнитный сепаратор и разрешите отделение в течение 60 секунд. Когда трубка все еще находится в магнитном сепараторе, удалите супернатант, не нарушая гранулу шарика. После извлечения шариков из сепаратора повторно суспендируйте бусины в 100 микролитрах буфера анализа.Вихрь в течение 30 секунд перед помещением трубки в магнитный сепаратор на 60 секунд, чтобы отделить шарики. Повторите стирку дважды. Затем отрегулируйте концентрацию трехплексной рабочей микросферной смеси, добавив соответствующий объем буфера анализа для получения конечной концентрации 100 микросфер на один микролитр для каждой цели.Aliquot 25 микролитров микросферы смешиваются в каждую лунку 96-луночной плиты. Разбавьте образцы плазмы или сыворотки в 500 раз в буфере анализа и подготовьте стандартные образцы в соответствии с желаемым титрованием. Добавьте 25 микролитров буфера для анализа в качестве пустого образца и добавьте каждый из разбавленных образцов или стандарт в каждую обозначенную скважину пластины образца из 96 скважин.Когда это будет сделано, накройте пластину алюминиевым уплотнением или фольгой, чтобы инкубировать в течение одного часа при комнатной температуре на пластинчатом шейкере, установленном на 700 оборотов в минуту. Готовят раствор античеловеческих детектирующих антител или вторичных растворов антител по четыре мкграмма на микролитр с буфером анализа, как описано в рукописи. Поместите пластину на магнитный сепаратор для быстрой промывки, а затем принудительно переверните пластину над контейнером с биологической опасностью, чтобы удалить жидкость из скважин.Когда пластина все еще перевернута, силой постучите по тарелке о толстый кусок бумаги. Затем промыть каждую лунку 100 микролитрами буфера для анализа и удалить жидкость путем принудительной инверсии над контейнером для биологической опасности. Повторите стирку дважды.После последней стирки выбросьте все использованные пачки бумаги в контейнер с биологической опасностью. Затем добавляют 25 микролитров вторичного рабочего раствора антител в каждую лунку 96-луночной пластины и покрывают пластину алюминиевой фольгой для инкубации на пластинчатом шейкере со скоростью 700 оборотов в минуту. После 30 минут инкубации дважды промыть колодцы тарелки пробирным буфером, как показано ранее.Затем добавьте 100 микролитров пробирного буфера в каждую скважину 96-луночной пластины. Накройте пластину алюминиевой фольгой и высиживайте в течение пяти минут на шейкере пластины при комнатной температуре. Анализ 60-микролитрового образца с помощью приборного анализатора в соответствии с системным руководством.Для оптимизации инкубационного времени захвата образца инкубируют пластины в течение 30, 60 и 120 минут. После инкубации анализируют 60 микролитров пробирной смеси на анализаторе. Семиточечная стандартная кривая, основанная на последовательной серии разбавления 1:5, была оценена для спайка S1, мембранных антител и нуклеокапсида.Тест на точность внутри анализа проводился на пластине для оценки точности анализа, рассчитанной как процентный коэффициент вариации, стандартное отклонение и среднее значение. Для межпробирной точности для каждого анализа были подготовлены три отдельные партии наборов бусин. Были рассчитаны прецизионные переменные анализа со стандартными образцами плазмы и образцами плазмы человека.Средние значения средней интенсивности флуоресцентной жидкости через 120 минут инкубации были оптимальными для титров IgG для спайка S1, мембраны и антител к нуклеокапсиду, что указывает на быструю кинетику связывания первичных антител. Оптимизация концентрации вторичных антител в двухканальной производительности продемонстрировала широкий диапазон сигналов в линейном измерении для всех концентраций. Здесь показаны наблюдаемые сигналы от различных временных инкубаций вторичных антител и подробности об изменениях сигнала за все время инкубации.В оценках специфики двухканальных анализов наблюдалось незначительное загрязнение перекрестного сигнала между пустым и одиночным репортерным каналами. На иллюстрации событий сероконверсии после вакцинации против COVID-19 наблюдаемые значения всплеска S1 IgA и IgM были примерно в 40 раз ниже, чем титры изотипа IgG. Этот метод имеет важное значение для мониторинга реакции на вакцины у людей с ослабленным иммунитетом.Это позволит нам определить, действительно ли эти пациенты защищены этими прививками.

Research

JoVE Journal

Medicine

Quantitative Visualization and Detection of Skin Cancer Using Dynamic Thermal Imaging

Количественная визуализация и обнаружение рака кожи с использованием динамических Тепловизор

In 2010 approximately 68,720 melanomas will be diagnosed in the US alone, with around 8,650 resulting in death 1. To date, the only effective treatment ...

Computerized Dynamic Posturography for Postural Control Assessment in Patients with Intermittent Claudication

Компьютерный Динамический постурография по оценке управления постуральной у больных с перемежающейся хромотой

Computerized dynamic posturography with the EquiTest is an objective technique for measuring postural strategies under challenging static and dynamic ...

Dynamic Lung Tumor Tracking for Stereotactic Ablative Body Radiation Therapy

Динамический легких Отслеживание опухоли для стереотаксической АБЛЯЦИОННОГО Body радиационной терапии

Physicians considering stereotactic ablative body radiation therapy (SBRT) for the treatment of extracranial cancer targets must be aware of the sizeable ...

A Detailed Protocol for Perspiration Monitoring Using a Novel, Small, Wireless Device

Подробный протокол потоотделения мониторинга с использованием нового, Малый, беспроводное устройство

Perspiration monitoring can be utilized for the detection of certain diseases, such as thermoregulation and mental disorders, particularly when the ...

Identifying Inhibitors of the HBx-DDB1 Interaction Using a Split Luciferase Assay System

Выявление ингибиторов взаимодействия HBx-DDB1 с помощью системы сплит-люциферазы

There is an urgent need for novel therapeutic agents for hepatitis B virus (HBV) infection. Although currently available nucleos(t)ide analogs potently ...

Evaluation of Capnography Sampling Line Compatibility and Accuracy when Used with a Portable Capnography Monitor

Оценка совместимости и точности капнографии при использовании с помощью портативного монитора capnography

Capnography is commonly used to monitor patient&#8217;s ventilatory status. While sidestream capnography has been shown to provide a reliable assessment ...

Real-Time Dynamic Navigation System for the Precise Quad-Zygomatic Implant Placement in a Patient with a Severely Atrophic Maxilla

Динамическая навигационная система в режиме реального времени для точной установки четырехсугматического имплантата у пациента с сильно атрофической верхней челюстью

Zygomatic implants (ZIs) are an ideal way to address cases of a severely atrophic edentulous maxilla and maxilla defects because they replace extensive ...

Dynamic Navigation for Dental Implant Placement

Динамическая навигация для установки зубных имплантатов

In modern implantology, the application of surgical navigation systems is becoming increasingly important. In addition to static surgical navigation ...

A Surgical Model of Heart Failure with Preserved Ejection Fraction in Tibetan Minipigs

Хирургическая модель сердечной недостаточности с сохраненной фракцией выброса у тибетских минипигов

More than half of heart failure (HF) cases are classified as heart failure with preserved ejection fraction (HFpEF) worldwide. Large animal models are ...

Dynamic Navigation in Endodontics: Guided Access Cavity Preparation by Means of a Miniaturized Navigation System

Динамическая навигация в эндодонтии: подготовка полости управляемого доступа с помощью миниатюрной навигационной системы

In the case of teeth with pulp canal calcification (PCC) and apical pathology or pulpitis, root canal treatment can be very challenging. PCC are common ...