Name: dynamic monitoring of seroconversion using a multianalyte immunobead assay for covid-19
Uploaded: 2022-02-16T15:00:00
Duration: 8 min 48 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dynamic Monitoring of Seroconversion using a Multianalyte Immunobead Assay for Covid-19 at JoVE.com

Författarna vill tacka Rush Biomarker Development Core för användningen av deras anläggningar, Rush Biorepository för ämnesregistrering och biospecimenbehandling, och Walder Foundations Chicago Coronavirus Assessment Network (Chicago CAN) Initiative bidragsnummer SCI16 (JRS och J.A.B.) och 21-00147 (JRS och J.A.B.) och en utmärkelse från Swim Across America Foundation (J.A.B.).

Alla ämnen registrerades med skriftligt informerat samtycke med fullständigt godkännande från Institutional Review Board (IRB) av Rush University Medical Center enligt protokoll ORA 20101207 med alla institutionella riktlinjer för etiskt forskningsbeteende observerat. Blod samlades in via konventionell flebotomi till lavendelvacutainers (K2EDTA) och bearbetades med rekommenderade protokoll. Den resulterande plasman arkiverades vid -80 °C tills bedömningar utfördes.
1. Beredning av antigenkonjugerade mikrosfärer
<ol><li>Välj tre olika injektionsflaskor med magnetiska mikrosfärer med unika pärlregioner, registrera pärl-ID och partiinformation för varje injektionsflaska som används. OBS: Följande steg kommer att följas för varje distinkt mikrosfärregion. Mikrosfärer är ljuskänsliga och bör skyddas mot långvarig exponering för ljus. Var försiktig så att du inte stör mikrosfärerna under tvättstegen. Om du störs, tillåt en andra 60 s separation.</li>
	<li>Vortex mikrosfärbeståndet för 60 s och ultraljudsbehandling i 5 minuter före användning för att dissociera aggregerade pärlor.</li>
	<li>Överför 1,0 x 106 pärlor till ett 1,5 ml lågproteinbindande mikrocentrifugrör.</li>
	<li>Sätt in röret i en magnetisk separator och låt separation ske i 60 s. Med röret fortfarande i magnetavskiljaren, ta försiktigt bort supernatanten utan att störa pärlpelleten.</li>
	<li>Ta bort röret från magnetavskiljaren, återsuspendera pärlorna med 100 μL HPLC-vatten och virvel i 30 s. Placera röret tillbaka i magnetavskiljaren i 60 s och ta sedan bort supernatanten. Upprepa detta tvättprotokoll två gånger.</li>
	<li>Ta bort röret från magnetavskiljaren och återsuspendera de tvättade mikrosfärerna i 90 μL 100 mM monobasiskt natriumfosfat, pH 6,2 (aktiveringsbuffert) med virvel i 30 s.</li>
	<li>Tillsätt 10 μL 50 mg/ml Sulfo-NHS (utspädd med aktiveringsbuffert) till mikrosfärerna och virveln försiktigt i 10 s. Tillsätt 10 μl 50 mg/ml EDC-lösning (utspädd med aktiveringsbuffert) och virvel försiktigt i 10 s. Inkubera mikrosfärer i 20 min vid rumstemperatur (RT) med en mild virvel var 10: e minut.</li>
	<li>Upprepa tvättsteg 1,4-1,5 med 50 mM MES, pH 5,0 (kopplingsbuffert) i stället för vatten av LC/MS-kvalitet för totalt två tvättar.</li>
	<li>Ta bort röret från magnetavskiljaren och återsuspendera pärlorna med 100 μL kopplingsbuffert med virvel i 30 s följt omedelbart av tillsats av önskad mängd protein.</li>
	<li>Öka den totala volymen till 150 μL med kopplingsbuffert. Blanda kopplingsreaktionen med virvel i 30 s och inkubera i 2 timmar genom rotation vid RT. OBS: För analyser som definieras häri utfördes konjugationer med följande proteinkoncentrationer: Spike S1: 5 μg; Nukleokapsid: 5 μg; Membran: 12,5 μg.</li>
	<li>Upprepa tvättsteg 1.4 med fosfatbuffrad saltlösning (PBS) -1% getserumalbumin, 0.01% polysorbat-20 (släckbuffert) i stället för LC / MS-kvalitet vatten för totalt två tvättar. Resuspendera de tvättade mikrosfärerna i 100 μL Quench Buffer innehållande 0,05% natriumazid med virvel i 30 s. OBS: Låt pärlorna släcka helt i minst 6 timmar innan du fortsätter till något annat förfarande.</li>
	<li>Räkna antalet återvunna mikrosfärer med hjälp av en automatiserad cellräknare eller en hemocytometer. Anteckna den observerade pärlkoncentrationen.</li>
	<li>Kyl de kopplade mikrosfärerna vid 4 °C i mörker.</li>
</ol>2. Förfaranden
<ol><li>Analysprestanda (basprotokoll)<ol>
<li>Resuspend de kopplade mikrosfärerna av virvel i 30 s och sonikat för ~ 60-90 s.</li>
		<li>Ta bort den erforderliga mängden av varje pärlkolloid från respektive rör och kombinera pärlkolloiderna i ett nytt 1,5 ml mikrocentrifugrör.</li>
		<li>Sätt in röret i en magnetisk separator och låt separation ske i 60 sekunder. Med röret fortfarande i magnetavskiljaren, ta försiktigt bort supernatanten utan att störa pärlpelleten.</li>
		<li>Ta bort pärlorna från separatorn, återsuspendera pärlorna med 100 μL PBS-1% bovint serumalbumin, 0,01% Polysorbat-20 (Analysbuffert) och virvel i 30 s. Placera röret i en magnetisk separator och låt separation ske i 60 s. Upprepa detta tvättprotokoll (dvs. steg 2.1.3-2.1.4) två gånger</li>
		<li>Justera koncentrationen av den 3-plex fungerande mikrosfärblandningen genom att tillsätta en lämplig volym analysbuffert för att generera en slutlig koncentration på 100 mikrosfärer per 1 μL för varje mål.</li>
		<li>Alikvot 12,5 μl av mikrosfärblandningen framställd i steg 2.1.5 i varje brunn på en 384-brunnsplatta eller 25 μL i varje brunn på en 96-brunnsplatta.</li>
		<li>Späd plasma-/serumproverna 500 gånger i Analysbuffert. Förbered standardprover enligt önskad titrering.</li>
		<li>Tillsätt 12,5 μl analysbuffert som blindprov och tillsätt var och en av de utspädda provkropparna eller standardproverna i varje bestämd brunn på en provplatta med 384 brunnar eller 25 μl av blindprovet, det utspädda provexemplaret eller standardprovet i varje brunn på en provplatta med 96 brunnar.</li>
		<li>Täck plattan med en aluminiumtätning eller folie och inkubera i 1 timme vid RT på en plattskakare inställd på 700 rpm. ANMÄRKNING: Schematisk beräkning för utspädningskurvorna finns i tabell 1.</li>
		<li>Bered en lösning av antikroppar mot människa (sekundära antikroppslösningar) vid 4 μg/ml med Assay Buffer enligt steg 2.1.11.</li>
		<li>Förbered Get-anti-human IgM, konjugerad med Super Bright 436 (SB)/Goat-anti-human IgA, Phycoerythrin (PE) Konjugatdetektionsantikroppar vid 4 μg/ml; eller Get-anti-human IgM, SB Konjugat / Get-anti-human IgG, PE-konjugatdetektion antikroppar vid 4 μg / ml. OBS: För ett 384-brunnsplattformat krävs 12,5 μL / brunn av den beredda sekundära antikroppslösningen, och för ett 96-brunnsplattformat krävs 25 μL / brunn.</li>
		<li>Placera plattan på en magnetisk separator, tvätta snabbt och vänd kraftigt över en biofarlig behållare för att ta bort vätska från brunnarna. Med plattan fortfarande inverterad, knacka plattan kraftigt mot en tjock pappersmassa.</li>
		<li>Tvätta varje brunn med 100 μL Analysbuffert och avlägsna vätskan genom kraftig inversion över en biofarlig behållare, som tidigare beskrivits. Upprepa dessa steg (2.1.12-2.1.13) för totalt två tvättar. Kasta alla använda pappersmassor i en biohazardbehållare.</li>
		<li>Tillsätt 12,5 μl av den sekundära antikroppsarbetslösningen till varje brunn på en 384-brunnsplatta eller 25 μl till varje brunn på en 96-brunnsplatta. Täck plattan med en aluminiumtätning eller folie och inkubera i 30 minuter vid RT på en plattskakare inställd på 700 rpm.</li>
		<li>Upprepa tvättstegen 2.1.12-2.1.13</li>
		<li>Tillsätt 75 μL analysbuffert i varje brunn på en 384-brunnsplatta eller 100 μl i varje brunn på en 96-brunnsplatta. Täck plattan med en aluminiumtätning eller folie och inkubera i 5 minuter vid RT på en plattskakare inställd på 700 rpm.</li>
		<li>Analysera 60 μL via instrumentanalysatorn enligt systemmanualen.</li>
	</ol></li>
	<li>Optimering av inkubationstiden för provfångst<ol>
<li>Utför stegen i avsnitt 2.1 med inkubationstiderna 30 min, 60 min och 120 min i steg 2.1.9. ANMÄRKNING: Inkubationer kan utföras antingen med distinkta plattor eller genom paus i steg 2.1.6 tills det är dags att gå vidare till steg 2.1.9. för att uppnå de önskade inkubationstiderna.</li>
		<li>Fortsätt med plattavläsningen på analysatorn med 60 μL av analysblandningen enligt tillverkarens rekommendationer.</li>
	</ol></li>
	<li>Optimering av sekundär antikroppskoncentration<ol>
<li>Utför denna procedur enligt beskrivningen i avsnitt 2.1, med undantag för de slutliga koncentrationerna av reagenser i den sekundära antikroppsarbetslösningen (beredd i steg 2.1.10-2.1.11) modifierad enligt följande: Get-anti-human (eller kanin) IgM, SB-konjugatdetektionsantikroppar vid 8, 4, 2, 1 och 0,5 μg / ml. Get-anti-human (eller kanin) IgA, PE-konjugatdetektionsantikroppar vid 8, 4, 2, 1 och 0,5 μg / ml. Get-anti-human (eller kanin) IgG, PE-konjugatdetektionsantikroppar vid 8, 4, 2, 1 och 0,5 μg / ml. Get-anti-human (eller kanin) IgG, PE-konjugat / Get-anti-human (eller kanin) IgM, SB-konjugatdetektionsantikroppar vid 8, 4, 2, 1 och 0,5 μg / ml. Get-anti-human (eller kanin) IgA, PE-konjugat / Get-anti-human (eller kanin) IgM, SB-konjugatdetektionsantikroppar vid 8, 4, 2, 1 och 0,5 μg / ml.</li>
		<li>Fortsätt med plattavläsningen på analysatorn med 60 μL av analysblandningen enligt tillverkarens rekommendationer.</li>
	</ol></li>
	<li>Optimering av sekundär antikroppsinkubationstid<ol>
<li>Utför denna procedur enligt beskrivningen i avsnitt 2.1 med 15 min, 30 min, 60 min och 120 min inkubationstid definierad i steg 2.1.14.</li>
		<li>Fortsätt med plattavläsningen på analysatorn med 60 μL av analysblandningen enligt tillverkarens rekommendationer.</li>
	</ol></li>
	<li>Utvärdering av motivprover med optimerade tvåkanalsanalyser<ol>
<li>Samla in plasmaprover från försökspersonen (n = 4) vid dagarna -21, -11, -1/0, +14, +28, +60, +90 och +120 i förhållande till slutförandet av Covid-19-vaccin (dvs. andra dosen) administrering. OBS: Dag 0 representerar den tidpunkt då vaccinationen slutfördes.</li>
		<li>Utför alla analyser med basprotokollet (avsnitt 2.1.) som antingen en IgG/IgM- eller IgA/IgM-analys med dubbla kanaler.</li>
		<li>Normalisera resultaten till det maximala observerade MFI-värdet (Median Fluorescent Intensity) för varje specifikt immunglobulin och analys.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol>
	<li>Tighe, P. J., Ryder, R. R., Todd, I., Fairclough, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ELISA+in+the+multiplex+era:+potentials+and+pitfalls.">ELISA in the multiplex era: potentials and pitfalls.</a> Proteomics - Clinical Applications. 9, 406-422 (2015).</li><li>Baker, H. N., Murphy, R., Lopez, E., Garcia, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conversion+of+a+capture+ELISA+to+a+Luminex+xMAP+assay+using+a+multiplex+antibody+screening+method.">Conversion of a capture ELISA to a Luminex xMAP assay using a multiplex antibody screening method.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (65), e4084 (2012).</li><li>Powell, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+multiplex+microsphere-based+immunoassay+increases+the+sensitivity+of+siv-specific+antibody+detection+in+serum+samples+and+mucosal+specimens+collected+from+rhesus+macaques+infected+with+SIVmac239.">A multiplex microsphere-based immunoassay increases the sensitivity of siv-specific antibody detection in serum samples and mucosal specimens collected from rhesus macaques infected with SIVmac239.</a> BioResearch Open Access. 2 (3), 171-178 (2013).</li><li>Volpetti, F., Garcia-Cordero, J., Maerkl, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microfluidic+platform+for+high-throughput+multiplexed+protein+quantitation.">A microfluidic platform for high-throughput multiplexed protein quantitation.</a> PLoS One. 10 (2), 0117744 (2015).</li><li>Rabi, F. A., Al Zoubi, M. S., Kasasbeh, G. A., Salameh, D. M., Al-Nasser, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SARS-CoV-2+and+coronavirus+disease+2019:+What+we+know+so+far.">SARS-CoV-2 and coronavirus disease 2019: What we know so far.</a> Pathogens. 9 (3), 231 (2020).</li><li>Asif, M., Xu, Y., Xiao, F., Sun, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+of+COVID-19,+vitality+of+emerging+technologies+and+preventive+measures.">Diagnosis of COVID-19, vitality of emerging technologies and preventive measures.</a> Chemical Engineering Journal. 423, 130189 (2021).</li><li>La Marca, A., Capuzzo, M., Paglia, T., Roli, L., Trenti, T., Nelson, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testing+for+SARS-CoV-2+(COVID-19):+a+systematic+review+and+clinical+guide+to+molecular+and+serological+in-vitro+diagnostic+assays.">Testing for SARS-CoV-2 (COVID-19): a systematic review and clinical guide to molecular and serological in-vitro diagnostic assays.</a> Reproductive Biomedicine Online. 41 (3), 483-499 (2020).</li><li>Armbruster, D. A., Pry, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limit+of+blank,+limit+of+detection+and+limit+of+quantitation.">Limit of blank, limit of detection and limit of quantitation.</a> The Clinical Biochemist. Reviews. 29, 49-52 (2008).</li><li>Tarhoni, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+between+circulating+tumor-associated+autoantibodies+and+clinical+outcomes+in+advanced-stage+NSCLC+patients+receiving+PD-1/-L1+directed+immune+checkpoint+inhibition.">Relationship between circulating tumor-associated autoantibodies and clinical outcomes in advanced-stage NSCLC patients receiving PD-1/-L1 directed immune checkpoint inhibition.</a> Journal of Immunological Methods. 490, 112956 (2021).</li><li>Deeks, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibody+tests+for+identification+of+current+and+past+infection+with+SARS-CoV-2.">Antibody tests for identification of current and past infection with SARS-CoV-2.</a> The Cochrane Database of Systematic Reviews. 6, 013652 (2020).</li><li>Mahalingam, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Landscape+of+humoral+immune+responses+against+SARS-CoV-2+in+patients+with+COVID-19+disease+and+the+value+of+antibody+testing.">Landscape of humoral immune responses against SARS-CoV-2 in patients with COVID-19 disease and the value of antibody testing.</a> Heliyon. 7 (4), 06836 (2021).</li><li>Ruano-Gallego, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+multiplex+antigen+microarray+for+simultaneous+IgG+and+IgM+detection+against+SARS-CoV-2+reveals+higher+seroprevalence+than+reported.">A multiplex antigen microarray for simultaneous IgG and IgM detection against SARS-CoV-2 reveals higher seroprevalence than reported.</a> Microbial Biotechnology. 14 (3), 1228-1236 (2021).</li><li>Shah, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IgG+and+IgM+antibody+formation+to+spike+and+nucleocapsid+proteins+in+COVID-19+characterized+by+multiplex+immunoblot+assays.">IgG and IgM antibody formation to spike and nucleocapsid proteins in COVID-19 characterized by multiplex immunoblot assays.</a> BMC Infectious Diseases. 21 (1), 325 (2021).</li><li>Gambino, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+a+rapid+immunochromatographic+test+with+a+chemiluminescence+immunoassay+for+detection+of+anti-SARS-CoV-2+IgM+and+IgG.">Comparison of a rapid immunochromatographic test with a chemiluminescence immunoassay for detection of anti-SARS-CoV-2 IgM and IgG.</a> Biochemia Medica (Zagreb). 30 (3), 030901 (2020).</li><li>Algaissi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SARS-CoV-2+S1+and+N-based+serological+assays+reveal+rapid+seroconversion+and+induction+of+specific+antibody+response+in+COVID-19+patients.">SARS-CoV-2 S1 and N-based serological assays reveal rapid seroconversion and induction of specific antibody response in COVID-19 patients.</a> Scientific Reports. 10, 16561 (2020).</li><li>Chiereghin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+the+evaluation+of+serological+assays+for+the+diagnosis+of+SARS-CoV-2+infection+and+COVID-19.">Recent advances in the evaluation of serological assays for the diagnosis of SARS-CoV-2 infection and COVID-19.</a> Frontiers in Public Health. 8, 620222 (2020).</li><li>Nicol, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+SARS-CoV-2+serological+tests+for+the+diagnosis+of+COVID-19+through+the+evaluation+of+three+immunoassays:+Two+automated+immunoassays+(Euroimmun+and+Abbott)+and+one+rapid+lateral+flow+immunoassay+(NG+Biotech).">Assessment of SARS-CoV-2 serological tests for the diagnosis of COVID-19 through the evaluation of three immunoassays: Two automated immunoassays (Euroimmun and Abbott) and one rapid lateral flow immunoassay (NG Biotech).</a> Journal of Clinical Virology: The Official Publication of the Pan American Society for Clinical Virology. 129, 104511 (2020).</li><li>Butt, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+multiplex+serology+to+serolomics-A+novel+approach+to+the+antibody+response+against+the+SARS-CoV-2+proteome.">From multiplex serology to serolomics-A novel approach to the antibody response against the SARS-CoV-2 proteome.</a> Viruses. 13 (5), 749 (2021).</li><li>Byrum, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=multiSero:+open+multiplex-ELISA+platform+for+analyzing+antibody+responses+to+SARS-CoV-2+infection.">multiSero: open multiplex-ELISA platform for analyzing antibody responses to SARS-CoV-2 infection.</a> medRxiv. , (2021).</li><li>Dobano, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+sensitive+and+specific+multiplex+antibody+assays+to+quantify+immunoglobulins+m,+a,+and+g+against+SARS-CoV-2+antigens.">Highly sensitive and specific multiplex antibody assays to quantify immunoglobulins m, a, and g against SARS-CoV-2 antigens.</a> Journal of Clinical Microbiology. 59 (2), 01731 (2021).</li><li>Schultz, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+validation+of+a+multiplex+microsphere+immunoassay+using+dried+blood+spots+for+SARS-CoV-2+seroprevalence:+Application+in+first+responders+in+first+responders+in+Colorado,+USA.">Development and validation of a multiplex microsphere immunoassay using dried blood spots for SARS-CoV-2 seroprevalence: Application in first responders in first responders in Colorado, USA.</a> Journal of Clinical Microbiology. 59 (6), 00290 (2021).</li><li>Beavis, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+EUROIMMUN+anti-SARS-CoV-2+ELISA+assay+for+detection+of+IgA+and+IgG+antibodies.">Evaluation of the EUROIMMUN anti-SARS-CoV-2 ELISA assay for detection of IgA and IgG antibodies.</a> Journal of Clinical Virology: The Official Publication of the Pan Americal Society for Clinical Virology. 129, 104468 (2020).</li><li>Jung, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+performance+of+a+semi-quantitative+assay+for+SARS-CoV2+IgG+and+SARS-CoV2+IgM+antibodies.">Clinical performance of a semi-quantitative assay for SARS-CoV2 IgG and SARS-CoV2 IgM antibodies.</a> Clinica Chimica Acta: International Journal of Clinical Chemistry. 510, 790-795 (2020).</li></ol>

Dr Borgia är uppfinnaren av det serologiska testet som används i detta manuskript som är patentsökt. Artikeln presenteras på ett beskrivande sätt endast utan några statistiska analyser presenterade för att undvika potentiell partiskhet som introduceras av författarkonflikt.

Uppskattningen av ett immunsvar mot SARS-CoV-2-exponering, i kombination med RT-PCR-baserad övervakning av infektionsstatus, har beskrivits väl som ett recept för att klargöra förloppet för återhämtning från Covid-19, för att fungera som ett sätt att identifiera konvalescentplasma med potentiellt terapeutiskt värde och för att kartlägga infektionshastigheter på befolkningsskala10,11. Olika exempel för att förstå serokonversion hos försökspersoner inkluderar protein (antigen) arrays12, immunoblots13, snabba immunokromatografiska konstruktioner14 och enzymbundna immunosorbentanalyser (ELISA)15,16,17. Var och en av dessa ovannämnda tekniker kan bedöma flera immunoglobulinisotyper individuellt med mindre modifieringar. Dessa förfaranden kan emellertid inte praktiskt återanvändas för att möjliggöra parallell analys av flera isotyper, som presenteras i detta manuskript, vilket gör kostnads- och genomströmningsfaktorer som begränsningar för deras administration på en populationsbaserad skala teststrategi. Flera av dessa applikationer ger också möjlighet att sammanfoga nivåer av flera antigener parallellt antingen som presenterade eller i förändrade format, såsom en multiplex ELISA18,19. Slutligen ger immunbeadplattformen möjlighet att utvärdera nivåer av flera antigener parallellt20,21 men har begränsats till en enda epitop (dvs. immunoglobulinisotyp) per analys, såvida inte det senaste instrumentet med "dubbelkanals" analysförmåga används.
I denna rapport räknas protokoll upp som fastställer tillförlitlig mätning av flera epitoper i en immunbeadanalys med hjälp av instrumentet i "dubbelkanalläge" i en fallstudie av serokonversion av Covid-19-vaccinerade individer. Metoden visade utmärkt precision (% CV-värden vanligtvis <20%) med hjälp av manuella analysdesigner som kan förbättras med integrationen av laboratorieautomatiserade system. Analyskänslighet och dynamiskt omfång för alla utvalda analyter och epitoper var lämpliga för rutinutvärderingar. Även om avsaknaden av kommersiellt tillgängliga antiantigen-IgA- och IgM-immunreagenter begränsade kvantifieringen till IgG-isotypen, utesluter en sådan begränsning inte möjligheten att erbjuda semikvantitativa bedömningar eller bedömningar i förhållande till ett specifikt prov som en kalibrant22,23.
Den validerade immunobead-analysen tilldelades för att undersöka serokonversion i en kohort av individer som immuniserats med Covid-19-vaccinet. I motsats till andra liknande plattformar möjliggör instrumentfamiljen prospektering av serokonversion hos hundratals individer per dag i ett manuellt arbetsflöde och tusentals per dag i ett automatiserat schema. Sammantaget bekräftar dessa resultat att "tvåkanalsmetoden" har lämplig känslighet för beskrivningen av flera epitoper parallellt för samma analys och är livskraftig i ett multianalytsammanhang. En skillnad i känslighet för kanal 1 och kanal 2, som utförs med phycoerythrin respektive Super Bright 436 fluoroforer, kan motivera utformningen av ett specifikt experiment för att säkerställa att livskraftiga analysresultat förvärvas för ett givet experiment. Det vill säga reservationen av kanal 1 för epitoper eller analyter med lägre prevalens kan vara nödvändig för att upprätthålla ett dynamiskt omfång av analysen som inkluderar de observerade värdena för okända. Utöver detta övervägande var analysdesign uppenbar och bör vara lättillgänglig för laboratorier med begränsad analytisk kapacitet. Visst bör detta övervägande vägas när man överväger kanal 1 till kanal 2-störningar, som vi noterade för figur 5, varigenom störningar från isotyper med högre överflöd kan orsaka vilseledande analysfel för dem i mycket lägre överflöd när de mäts i ett dubbelkanalformat. Denna potential för interferens i situationer med mycket olika analytkoncentrationer kan utgöra en betydande begränsning av tillvägagångssättet om det inte hanteras korrekt i analysdesignfasen.
Sammanfattningsvis presenterades en metod för att snabbt mäta antikroppstitrar från de stora immunoglobulinisotyperna associerade med ett immunsvar mot Covid-19-infektion eller vaccination. Att tillämpa detta tillvägagångssätt på ett longitudinellt sätt för att bedöma serokonversion kan ge insikter som bättre kan användas för att hantera och / eller övervaka sjukdomsförloppet eller, alternativt, vägleda potentiella Covid-19-boostervaccinprogram.

Samtidig mätning av flera sjukdomsrelaterade biomarkörer i biologiska prover möjliggör beskrivande och prediktiva insikter i patologiska processer. Medan konventionella immunologiska förfaranden för enstaka analyter, såsom enzymbundna immunosorbentanalyser (ELISA), har varit hörnstenen i kvantitativa analyser i både kliniska och forskningsmiljöer, kan dessa tekniker ha betydande begränsningar när det gäller genomströmning, mängden prov som krävs för varje mätning och kostnadseffektivitet som i hög grad begränsar studien av flera biologiska element som ofta är sammanflätade under sjukdomsförloppet1 . Mikrosfärbaserad multiplexeringsteknik har blivit en oumbärlig plattform för både diagnos- och forskningsanläggningar för dess förmåga att kombinera analyser för att förbättra laboratoriegenomströmningen, mildra provbrist och minska repetitiva tester för att maximerakostnadsbesparingarna 1,2,3,4. Nyligen har ytterligare förstärkning av denna multiplexeringskraft introducerats med instrument som har dubbla reporterfunktioner. Dual-reporter-funktionen implementerar två fluorescerande kanaler för detektion, vilket ger en annan dimension av multiplexering, vilket möjliggör detektering av flera epitoper på samma analyt.
Allvarligt akut respiratoriskt syndrom coronavirus 2 (SARS-CoV-2) är den patogen som är ansvarig för den nuvarande coronavirussjukdomen 2019 (COVID-19) pandemi5. Medan RT-PCR-testning är avgörande för infektionsbekräftelse i början av sjukdomsförloppet, har serologiska undersökningar av antikroppstitrar visat sig vara avgörande för korrekt och fullständig kritik av individer angående en tidigare exponering eller återhämtning; ett svar på immunisering; och/eller en utvärdering av Covid-19 vaccinationseffekt 6,7.
Denna rapport avgränsar metoder för att mäta serokonversion för flera SARS-CoV-2 virala antigener som använder ett flödesbaserat, multiplexläsare dubbelrapporteringssystem. Specifikt beskrivs samtidig detektion av två antikroppsundertyper (konfigurerade som IgG / IgM eller IgA / IgM) för en 3-plex SARS-CoV-2-antigenpanel som inkluderar analyser för Spike S1, Nukleokapsid och membran (aka Matrix) glykoproteiner. Detta tillvägagångssätt ger ett idealiskt företag för att fånga longitudinell serokonversion och bidrar med ett värdefullt verktyg i arsenalen mot Covid-19-pandemin.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>384-well black side polystyrene microtiter plates</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>12-565-346</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Activation buffer (0.1 M NaH2PO4, pH 6.2)</td>
			<td>Prepared in house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Assay buffer (PBS, 1% Bovine Serum Albumin, 0.01% Polysorbate-20)</td>
			<td>Prepared in house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin, heat shock fraction</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>A-7888-50G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coupling buffer (50 mM MES, pH 5.0)</td>
			<td>Prepared in house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>COVID 19 M Coronavirus Recombinant Matrix Protein (6xHis tag)</td>
			<td>MyBioSource</td>
			<td>MBS8574735</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable pipette tips</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDC (1-Ethyl-3-[3-dimethylaminopropyl]carbodiimide hydrochloride)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>PIA35391</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat Albumin, Fraction V Powder</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>A2514-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgA Goat anti-Human, R-PE, Polyclonal</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>OB205009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgG Goat anti-Human, R-PE, Polyclonal</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>OB204009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgG Goat anti-Rabbit, R-PE, Polyclonal</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>OB403009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgM Goat anti-Human, R-PE, Polyclonal</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>OB202009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgM Mouse anti-Human, SB 436, Clone SA-DA4</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>62999842</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Instrument Analyzer</td>
			<td>Luminex Corp.</td>
			<td>INTELLIFLEX-RUO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low-Bind microcentrifuge tubes (1.5 mL)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>13-698-794</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MagPlex-C Microspheres, Region XXX</td>
			<td>Luminex Corp.</td>
			<td>MC10XXX-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MES hydrate (2-(N-Morpholino) ethane sulfonic acid hydrate)</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>M2933</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate aluminum sealing tape</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>07-200-683</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polysorbate-20</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>BP337-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quality Biological Inc. PBS, pH 7.2</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>50-751-7328</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quench buffer (PBS, 1% Goat Serum Albumin, 0.01% Polysorbate-20)</td>
			<td>Prepared in house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Nucleocapsid Protein (His tag)</td>
			<td>Sino Biologicals</td>
			<td>40588-V08B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Spike Protein (S1 Subunit, His tag)</td>
			<td>Sino Biologicals</td>
			<td>40591-V08H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Spike RBD Antibody, Rabbit pAb</td>
			<td>Sino Biologicals</td>
			<td>40592-T62</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Nucleocapsid Antibody, Rabbit mAb</td>
			<td>Sino Biologicals</td>
			<td>40588-R0004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SARS-CoV-2 (COVID-19) Membrane Antibody (IN), Rabbit pAb</td>
			<td>ProSci</td>
			<td>10-516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sulfo-NHS (N-hydroxysulfosuccinimide)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>PIA39269</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wash Buffer (PBS, 0.01% Polysorbate-20)</td>
			<td>Prepared in house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water, LC/MS grade</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>W-64</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dynamic monitoring of seroconversion using a multianalyte immunobead assay for covid-19

Multiplexteknik för att förhöra flera biomarkörer i samförstånd har funnits i flera decennier; metoder för att utvärdera flera epitoper på samma analyt förblir dock begränsade. Denna rapport beskriver utvecklingen och optimeringen av en multiplexerad immunobead-analys för serologisk testning av vanliga immunoglobulinisotyper (t.ex. IgA, IgM och IgG) associerade med ett immunsvar mot SARS-CoV-2-infektion eller vaccination. Analyser utfördes med hjälp av en flödesbaserad, multiplex fluorescerande läsare med dubbelkanalskapacitet. Optimeringar fokuserade på analytfångsttid, detektionsantikroppskoncentration och detektionsantikroppsinkubationstid. Analytiska analysprestandaegenskaper (t.ex. analysområde (inklusive nedre och övre kvantifieringsgränser) och precision mellan och mellan analyser) fastställdes för antingen IgG/IgM eller IgA/IgM serotypkombination tillsammans med hjälp av "dual channel"-läget. Analytinspelningstider på 30 minuter för IgG, 60 min för IgM och 120 min för IgA var lämpliga för de flesta applikationer, vilket gav en balans mellan analysprestanda och genomströmning. Optimala detektionsantikroppsinkubationer vid 4 μg/ml i 30 min observerades och rekommenderas för allmänna tillämpningar, med tanke på den övergripande utmärkta precisionen (procentvariationskoefficient (% CV) ≤ 20%) och känslighetsvärden som observerats. Det dynamiska området för IgG-isotypen sträckte sig över flera storleksordningar för varje analys (Spike S1, Nukleokapsid och membranglykoproteiner), vilket stöder robusta titerutvärderingar vid en utspädningsfaktor på 1:500 för kliniska tillämpningar. Slutligen tillämpades det optimerade protokollet för övervakning av Spike S1-serokonversion för försökspersoner (n = 4) som slutförde en SARS-CoV-2-vaccinregim. Inom denna kohort observerades Spike S1 IgG-nivåer för att nå maximala titrar vid 14 dagar efter administrering av andra dosen, vid en mycket högre (~ 40-faldig) signalintensitet än antingen IgM- eller IgA-isotyper. Intressant nog observerade vi mycket varierande Spike S1 IgG titer sönderfallshastigheter som till stor del var ämnesberoende observerades, vilket kommer att vara ämnet för framtida studier.

Watch this Scientific Journal Video about Dynamic Monitoring of Seroconversion using a Multianalyte Immunobead Assay for Covid-19 at JoVE.com

Dynamic Monitoring of Seroconversion using a Multianalyte Immunobead Assay for Covid-19

Denna artikel beskriver en bekväm metod för att övervaka dynamiska förändringar i antikroppstitrar för två immunoglobulinisotyper samtidigt (antingen IgA, IgM eller IgG) till följd av ett immunsvar mot SARS-CoV-2-infektion eller vaccination. Denna "Multianalyte Covid-19 Immune Response Panel" använder tre indirekta immunanalyser byggda på kodade mikrosfärer som läses med en flödesbaserad multiplexläsare med "dubbelkanal" -kapacitet.

Dynamisk övervakning av serokonversion med hjälp av en Multianalyte Immunobead-analys för Covid-19

Multiplex technologies for interrogating multiple biomarkers in concert have existed for several decades; however, methods to evaluate multiple epitopes ...

Metoden vi kommer att demonstrera idag ger en lösning med hög genomströmning för att utvärdera serokonvertering av antikroppar associerade med antingen COVID-19-infektioner eller vaccination för rutinanalyser. Intressant nog tillåter detta tillvägagångssätt oss att utvärdera flera epitoper på samma analyt. Detta har många tillämpningar inom de biologiska vetenskaperna, inklusive cellsignalstudier och övervakning av immunsvar.Att demonstrera denna teknik för dig idag kommer att vara Dr.Imad Tarhoni, en postdoktor i mitt laboratorium. För att börja, välj tre olika injektionsflaskor med de magnetiska mikrosfärerna med unika pärlregioner och registrera pärl-ID och partiinformation för varje injektionsflaska som används. Sedan virvla det valda mikrosfärbeståndet i 60 sekunder och sonikat i fem minuter.Överför 1,0 gånger 10 till de sex pärlorna till ett 1,5 ml mikrocentrifugrör med låg proteinbindning och sätt in röret i en magnetisk separator. för att tillåta separationen i 60 sekunder. Med röret fortfarande i magnetavskiljaren, ta försiktigt bort supernatanten utan att störa pärlpelleten.Ta bort röret från magnetavskiljaren och sätt sedan tillbaka pärlorna med 100 mikroliter vatten och virvel av HPLC-kvalitet i 30 sekunder. Återigen, placera röret tillbaka i magnetavskiljaren i 60 sekunder och ta sedan bort supernatanten. Upprepa tvättprotokollet två gånger.Efter den sista tvätten, ta bort röret från magnetavskiljaren och återsuspendera de tvättade mikrosfärerna i 90 mikroliter aktiveringsbuffert, pH 6,2, med virvel i 30 sekunder. Därefter behandlas mikrosfärerna sekventiellt med 10 mikroliter av 50 milligram per milliliter anhydroxi-sulfosuccinamid och 10 mikroliter av 50 milligram per milliliter EDC-lösning genom virvel i 10 sekunder. Senare inkubera mikrosfärerna i 20 minuter vid rumstemperatur med en mild virvel var 10: e minut.Tvätta mikrosfärerna två gånger med 50 millimolär MES eller kopplingsbuffert, pH 5,0, enligt beskrivningen ovan. Upprepa tvätten två gånger. När du är klar, ta bort röret från magnetavskiljaren och återsuspendera pärlorna med 100 mikroliter kopplingsbuffert med virvel i 30 sekunder, följt omedelbart genom att tillsätta önskad mängd protein till röret.Ta den totala volymen till 150 mikroliter med kopplingsbuffert och blanda reaktionen med virvel i 30 sekunder. Inkubera sedan röret i två timmar genom rotation vid rumstemperatur. Efter inkubation, tvätta mikrosfärerna två gånger med PBS-släckningsbuffert och återsuspendera de tvättade mikrosfärerna i 100 mikroliter släckningsbuffert innehållande 0,05% natriumazid med virvel i 30 sekunder.Räkna antalet återvunna mikrosfärer med hjälp av en automatiserad cellräknare och registrera den observerade pärlkoncentrationen. För analysprestanda, resuspend de kopplade mikrosfärerna med virvel i 30 sekunder och ultraljudsbehandling i 60 till 90 sekunder. Ta sedan bort den erforderliga mängden av varje pärlkolloid från respektive rör och kombinera pärlkolloiderna i ett nytt 1,5-milliliter mikrocentrifugrör.Sätt sedan in röret i en magnetisk separator och tillåt separation i 60 sekunder. Med röret fortfarande i magnetavskiljaren, ta bort supernatanten utan att störa pärlpelleten. När du har tagit bort pärlorna från separatorn, återsuspendera pärlorna i 100 mikroliter analysbuffert.Vortex i 30 sekunder innan röret placeras i en magnetisk separator i 60 sekunder för att separera pärlorna. Upprepa tvätten två gånger. Justera sedan koncentrationen av den tre-plex fungerande mikrosfärblandningen genom att tillsätta en lämplig volym analysbuffert för att generera en slutlig koncentration på 100 mikrosfär per en mikroliter för varje mål.Alikvot 25 mikroliter av mikrosfärblandningen i varje brunn på en 96-brunnsplatta. Späd plasma- eller serumprover 500 gånger i analysbuffert och förbered standardprover enligt önskad titrering. Tillsätt 25 mikroliter analysbuffert som blindprov och tillsätt var och en av de utspädda proverna eller standarden i varje angiven brunn på en provplatta med 96 brunnar.När du är klar täcker du plattan med en aluminiumtätning eller folie för att inkubera i en timme vid rumstemperatur på en plattskakare inställd på 700 rotationer per minut. Bered en lösning av anti-humana detektionsantikroppar eller sekundära antikroppslösningar vid fyra mikrogram per mikroliter med analysbuffert enligt beskrivningen i manuskriptet. Placera plattan på en magnetisk separator för att tvätta snabbt och vänd sedan kraftigt plattan över en biofarlig behållare för att ta bort vätska från brunnarna.Med plattan fortfarande inverterad, knacka plattan kraftigt mot en tjock pappersmassa. Tvätta sedan varje brunn med 100 mikroliter analysbuffert och ta bort vätskan genom kraftfull inversion över en biofarlig behållare. Upprepa tvätten två gånger.Efter den sista tvätten, kassera alla använda pappersmassor i en biohazardbehållare. Tillsätt sedan 25 mikroliter sekundär antikroppslösning till varje brunn på en 96-brunnsplatta och täck plattan med aluminiumfolie för att inkubera på en plattskakare med 700 rotationer per minut. Efter 30 minuters inkubation, tvätta plattans brunnar två gånger med analysbuffert som visats tidigare.Tillsätt sedan 100 mikroliter analysbuffert i varje brunn på 96-brunnsplattan. Täck plattan med aluminiumfolie och inkubera i fem minuter på en plattskakare vid rumstemperatur. Analysera ett 60-mikroliterprov via instrumentanalysatorn enligt systemhandboken.För optimering av provfångstinkubationstiden, inkubera plattorna under en varaktighet av 30, 60 och 120 minuter. Efter inkubation analysera 60 mikroliter av analysblandningen på analysatorn. En sjupunkts standardkurva baserad på en 1:5 seriell utspädningsserie utvärderades för spiken S1, membranantikropparna och nukleokapsiden.Precisionstestet för intraanalys utfördes på plattan för att utvärdera analysprecision beräknad som procentuell variationskoefficient, standardavvikelse och medelvärde. För precision mellan analyserna förbereddes tre distinkta satser av pärluppsättningarna för varje analys. Precisionsvariabler för analysen med standarden och humana plasmaprover beräknades.De genomsnittliga medianvärdena för fluorescerande intensitet vid 120 minuter av inkubationen var optimala för IgG-titrar för spiken S1, membranet och nukleokapsidantikropparna, vilket indikerar en snabb primär antikroppsbindande kinetik. Sekundära antikroppskoncentrationsoptimeringar i dubbelkanalsprestanda visade ett brett spektrum av signaler i linjär mätning för alla koncentrationer. De observerade signalerna från olika tidsinubationer av de sekundära antikropparna och detaljerna om signalförändringarna för alla inkubationstider visas här.I specificitetsbedömningarna för tvåkanalsanalyser observerades försumbar korssignalkontaminering mellan den tomma och den enda reporterkanalen. I illustrationen av serokonverteringshändelser efter COVID 19-vaccinationen var de observerade spik S1 IgA- och IgM-värdena ungefär 40 gånger lägre än IgG-isotyptitrarna. Denna metod har viktiga konsekvenser för övervakning av svar på vacciner hos immunkomprometterade individer.Det kommer att göra det möjligt för oss att avgöra om dessa patienter verkligen skyddas av dessa vaccinationer.

Research

JoVE Journal

Medicine

Quantitative Visualization and Detection of Skin Cancer Using Dynamic Thermal Imaging

Kvantitativa Visualisering och detektion av hudcancer Använda dynamiska Värmekameror

In 2010 approximately 68,720 melanomas will be diagnosed in the US alone, with around 8,650 resulting in death 1. To date, the only effective treatment ...

Computerized Dynamic Posturography for Postural Control Assessment in Patients with Intermittent Claudication

Datoriserad Dynamic Posturography för postural kontroll Bedömning i patienter med fönstertittarsjuka

Computerized dynamic posturography with the EquiTest is an objective technique for measuring postural strategies under challenging static and dynamic ...

Dynamic Lung Tumor Tracking for Stereotactic Ablative Body Radiation Therapy

Dynamisk lungtumör Tracking för Stereotactic Ablativ Body strålterapi

Physicians considering stereotactic ablative body radiation therapy (SBRT) for the treatment of extracranial cancer targets must be aware of the sizeable ...

A Detailed Protocol for Perspiration Monitoring Using a Novel, Small, Wireless Device

Ett detaljerat protokoll för svett övervakning med hjälp av en roman, liten, trådlös enhet

Perspiration monitoring can be utilized for the detection of certain diseases, such as thermoregulation and mental disorders, particularly when the ...

Identifying Inhibitors of the HBx-DDB1 Interaction Using a Split Luciferase Assay System

Identifiera hämmare av HBx-DDB1 interaktion med hjälp av en Split Luciferase assay system

There is an urgent need for novel therapeutic agents for hepatitis B virus (HBV) infection. Although currently available nucleos(t)ide analogs potently ...

Evaluation of Capnography Sampling Line Compatibility and Accuracy when Used with a Portable Capnography Monitor

Utvärdering av Capnography Sampling Line Kompatibilitet och noggrannhet när den används med en bärbar capnography Monitor

Capnography is commonly used to monitor patient&#8217;s ventilatory status. While sidestream capnography has been shown to provide a reliable assessment ...

Real-Time Dynamic Navigation System for the Precise Quad-Zygomatic Implant Placement in a Patient with a Severely Atrophic Maxilla

Dynamiskt navigationssystem i realtid för exakt quad-zygomatisk implantatplacering hos en patient med en allvarligt atrofisk maxilla

Zygomatic implants (ZIs) are an ideal way to address cases of a severely atrophic edentulous maxilla and maxilla defects because they replace extensive ...

Dynamic Navigation for Dental Implant Placement

Dynamisk navigering för placering av tandimplantat

In modern implantology, the application of surgical navigation systems is becoming increasingly important. In addition to static surgical navigation ...

A Surgical Model of Heart Failure with Preserved Ejection Fraction in Tibetan Minipigs

En kirurgisk modell av hjärtsvikt med bevarad ejektionsfraktion hos tibetanska minigrisar

More than half of heart failure (HF) cases are classified as heart failure with preserved ejection fraction (HFpEF) worldwide. Large animal models are ...

Dynamic Navigation in Endodontics: Guided Access Cavity Preparation by Means of a Miniaturized Navigation System

Dynamisk navigering i endodonti: guidad förberedelse av åtkomsthålighet med hjälp av ett miniatyriserat navigationssystem

In the case of teeth with pulp canal calcification (PCC) and apical pathology or pulpitis, root canal treatment can be very challenging. PCC are common ...