Name: applications of rna interference in american cockroach
Uploaded: 2021-12-17T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Applications of RNA Interference in American Cockroach at JoVE.com

تم دعم هذا العمل من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (رقم المنحة 32070500 31620103917 31330072 31572325 إلى C.R. ، Sh.L.) ، من قبل مؤسسة العلوم الطبيعية في مقاطعة قوانغدونغ (المنحة رقم 2021B1515020044 و 2020A1515011267 إلى C.R.) ، من قبل وزارة العلوم والتكنولوجيا في مقاطعة قوانغدونغ (رقم المنحة 2019B090905003 و 2019A0102006) ، من قبل وزارة العلوم والتكنولوجيا في قوانغتشو (المنحة رقم 202102020110) ، من قبل برنامج شنتشن للعلوم والتكنولوجيا (رقم المنحة. KQTD20180411143628272 إلى Sh.L.).

تم توفير خط P. americana في البداية من قبل الدكتور Huiling Hao. تم الحفاظ على هذا النوع مع زواج الأقارب لمدة 30 عاما9.
1. تفريخ وتغذية P. americana
<ol><li>جمع oothecae الطازجة (مباشرة بعد وضع البيض) من P. americana وحضانتها في الحاضنة المظلمة عند 25 درجة مئوية ورطوبة 60 ٪ ?...

<ol>
	<li>Miller, S. C., Miyata, K., Brown, S. J., Tomoyasu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissecting+systemic+RNA+interference+in+the+red+flour+beetle+Tribolium+castaneum:+Parameters+affecting+the+efficiency+of+RNAi.">Dissecting systemic RNA interference in the red flour beetle Tribolium castaneum: Parameters affecting the efficiency of RNAi.</a> PloS One. 7 (10), 47431 (2012).</li><li>Fire, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potent+and+specific+genetic+interference+by+double-stranded+RNA+in+Caenorhabditis+elegans.">Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans.</a> Nature. 391 (6669), 806-811 (1998).</li><li>Ambesajir, A., Kaushik, A., Kaushik, J. J., Petros, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+interference:+A+futuristic+tool+and+its+therapeutic+applications.">RNA interference: A futuristic tool and its therapeutic applications.</a> Saudi Journal of Biological Sciences. 19 (4), 395-403 (2012).</li><li>Younis, A., Siddique, M. I., Kim, C. K., Lim, K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+interference+(RNAi)+induced+gene+silencing:+A+promising+approach+of+hi-tech+plant+breeding.">RNA interference (RNAi) induced gene silencing: A promising approach of hi-tech plant breeding.</a> International Journal of Biological Sciences. 10 (10), 1150-1158 (2014).</li><li>Bell&#233;s, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+Drosophila:+RNAi+in+vivo+and+functional+genomics+in+insects.">Beyond Drosophila: RNAi in vivo and functional genomics in insects.</a> Annual Review of Entomology. 55, 111-128 (2010).</li><li>French, A. S., Meisner, S., Liu, H., Weckstr&#246;m, M., Torkkeli, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptome+analysis+and+RNA+interference+of+cockroach+phototransduction+indicate+three+opsins+and+suggest+a+major+role+for+TRPL+channels.">Transcriptome analysis and RNA interference of cockroach phototransduction indicate three opsins and suggest a major role for TRPL channels.</a> Frontiers in Physiology. 6, 207 (2015).</li><li>Hennenfent, A., Liu, H., Torkkeli, P. H., French, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+interference+supports+a+role+for+Nanchung-Inactive+in+mechanotransduction+by+the+cockroach,+Periplaneta+americana,+tactile+spine.">RNA interference supports a role for Nanchung-Inactive in mechanotransduction by the cockroach, Periplaneta americana, tactile spine.</a> Invertebrate Neuroscience: IN. 20 (1), 1 (2020).</li><li>Immonen, E. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EAG+channels+expressed+in+microvillar+photoreceptors+are+unsuited+to+diurnal+vision.">EAG channels expressed in microvillar photoreceptors are unsuited to diurnal vision.</a> The Journal of Physiology. 595 (16), 5465-5479 (2017).</li><li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genomic+and+functional+landscapes+of+developmental+plasticity+in+the+American+cockroach.">The genomic and functional landscapes of developmental plasticity in the American cockroach.</a> Nature Communications. 9 (1), 1008 (2018).</li><li>Zhao, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Grainy+head+signaling+regulates+epithelium+development+and+ecdysis+in+Blattella+germanica.">Grainy head signaling regulates epithelium development and ecdysis in Blattella germanica.</a> Insect Science. 28 (2), 485-494 (2021).</li><li>Lozano, J., Belles, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conserved+repressive+function+of+Kr&#252;ppel+homolog+1+on+insect+metamorphosis+in+hemimetabolous+and+holometabolous+species.">Conserved repressive function of Kr&#252;ppel homolog 1 on insect metamorphosis in hemimetabolous and holometabolous species.</a> Scientific Reports. 1, 163 (2011).</li><li>Philip, B. N., Tomoyasu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+knockdown+analysis+by+double-stranded+RNA+injection.">Gene knockdown analysis by double-stranded RNA injection.</a> Methods in Molecular Biology (Clifton, N. J). 772, 471-497 (2011).</li><li>Zheng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPR+interference-based+specific+and+efficient+gene+inactivation+in+the+brain.">CRISPR interference-based specific and efficient gene inactivation in the brain.</a> Nature Neuroscience. 21 (3), 447-454 (2018).</li><li>Garbutt, J. S., Bell&#233;s, X., Richards, E. H., Reynolds, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistence+of+double-stranded+RNA+in+insect+hemolymph+as+a+potential+determiner+of+RNA+interference+success:+Evidence+from+Manduca+sexta+and+Blattella+germanica.">Persistence of double-stranded RNA in insect hemolymph as a potential determiner of RNA interference success: Evidence from Manduca sexta and Blattella germanica.</a> Journal of Insect Physiology. 59 (2), 171-178 (2013).</li><li>Parrish, S., Fleenor, J., Xu, S., Mello, C., Fire, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+anatomy+of+a+dsRNA+trigger:+differential+requirement+for+the+two+trigger+strands+in+RNA+interference.">Functional anatomy of a dsRNA trigger: differential requirement for the two trigger strands in RNA interference.</a> Molecular Cell. 6 (5), 1077-1087 (2000).</li><li>Lemonds, T. R., Liu, J., Popadi&#263;, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+contribution+of+the+melanin+pathway+to+overall+body+pigmentation+during+ontogenesis+of+Periplaneta+americana.">The contribution of the melanin pathway to overall body pigmentation during ontogenesis of Periplaneta americana.</a> Insect Science. 23 (4), 513-519 (2016).</li><li>Jackson, A. L., Linsley, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noise+amidst+the+silence:+Off-target+effects+of+siRNAs.">Noise amidst the silence: Off-target effects of siRNAs.</a> Trends in Genetics: TIG. 20 (11), 521-524 (2004).</li><li>Patel, M., Peter, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+DISE-inducing+shRNAs+by+monitoring+cellular+responses.">Identification of DISE-inducing shRNAs by monitoring cellular responses.</a> Cell Cycle (Georgetown, Tex). 17 (4), 506-514 (2018).</li><li>Vent&#243;s-Alfonso, A., Ylla, G., Monta&#241;es, J. C., Belles, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNMT1+promotes+genome+methylation+and+early+embryo+development+in+cockroaches.">DNMT1 promotes genome methylation and early embryo development in cockroaches.</a> iScience. 23 (12), 101778 (2020).</li><li>Wang, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variation+in+RNAi+efficacy+among+insect+species+is+attributable+to+dsRNA+degradation+in+vivo.">Variation in RNAi efficacy among insect species is attributable to dsRNA degradation in vivo.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 77, 1-9 (2016).</li><li>Bi, F., Liu, N., Small Fan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=interfering+RNA:+A+new+tool+for+gene+therapy.">interfering RNA: A new tool for gene therapy.</a> Current Gene Therapy. 3 (5), 411-417 (2003).</li></ol>

وصف هذا التقرير استراتيجية منهجية خطوة بخطوة للحمض النووي الريبي في P. americana. تجدر الإشارة إلى أنه يمكن تطبيقه أيضا على الصراصير الأخرى (Blattella germanica ، على سبيل المثال) والعديد من الحشرات الأخرى ذات التغييرات الطفيفة. ومع ذلك ، فإن كفاءة إسكات الجينات في RNAi ليست دائما عالية بما فيه ا?...

يصبح تداخل الحمض النووي الريبي (RNAi) ، وهو آلية محفوظة تطوريا ، تدريجيا أداة جينية عكسية أساسية لمنع التعبير الجيني في العديد من الكائنات الحية1 ، منذ أن طور أندرو فاير وكريغ ميلو2 استراتيجية صمت الجينات بوساطة الحمض النووي الريبي المزدوج (dsRNA). يتم شق dsRNA إلى شظايا من 21-23 نيوكليوتيدات ، الحمض النووي الريبي المتداخل الصغير (siRNAs) ، بواسطة إنزيم Dicer في الخلايا لتنشيط مسار RNAi. ثم يتم دمج siRNAs في مجمع إسكات الحمض النووي الريبي الناجم عن الحمض النووي الريبي (RISC) ، والذي يقترن بالحمض النووي الريبي المرسال المستهدف ، ويسبب انقسام الحمض النووي الريبي المرسال ، ويؤدي في النهاية إلى فقدان وظيفة الجينات3،4،5. من بين أنواع الحشرات ، تم الإبلاغ عن العديد من تجارب RNAi الجهازية حتى الآن في الكثير من أوامر الحشرات ، مثل Orthoptera و Isoptera و Hemiptera و Coleoptera و Neuroptera و Diptera و Hymenoptera و Lepidoptera و Blattodea 5,6,7,8.
الصراصير (Blattaria) هي عائلة حشرات أساسية في الدراسات التنموية والمتحولة مع دورات نموها السريع ، وقدرتها القوية على التكيف مع البيئة ، واللدونة التنموية العالية9. قبل اكتشاف أن الحمض النووي الريبي كان متوافقا مع الصراصير ، ركزت الأبحاث السابقة فقط على الوقاية من الصراصير ومكافحتها بسبب ندرة تقنيات التلاعب الجيني في الصراصير. جعلت البنية الفريدة ل cockroach ootheca من الصعب إجراء عملية الضربة القاضية الجينية القائمة على حقن الأجنة باستخدام نظام CRISPR-Cas9. إلى جانب ذلك ، تظهر معظم الأنسجة في الصراصير (مثل P. americana) استجابة RNAi جهازية قوية ، مما يسمح بالتوليد السريع للأنماط الظاهرية المختلة وظيفيا عن طريق حقن واحد أو أكثر يستهدف dsRNAs 9,10,11. جعلت هذه الميزات RNAi تقنية لا غنى عنها في البحوث الوظيفية الجينية في P. americana.
على الرغم من أنه تم الإبلاغ عن استخدام الحمض النووي الريبي في أبحاث الجينات الوظيفية في P. americana ، إلا أنه لم يتوفر وصف مفصل أو خطوة بخطوة. يقدم هذا التقرير إرشادات تشغيلية خطوة بخطوة ل RNAi في P. americana ، وهو مفيد لدراسة وظيفة الجينات في الصراصير الأخرى. علاوة على ذلك ، لا يقتصر هذا الدليل على Blattodea ويمكن تطبيقه على العديد من الحشرات الأخرى مع تعديلات طفيفة.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>701 N 10 &#181;L Syr (26s/51/2)</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>PN:80300</td>
			<td>Injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Ningbo Jiangnan Instrument Factory</td>
			<td>RXZ-380A-LED</td>
			<td>For cockroaches hatching and feeding</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-injection pump</td>
			<td>Alcott Biotechnology</td>
			<td>ALC-IP600</td>
			<td>Injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pTOPO-Blunt Cloning Kit</td>
			<td>Aidlab Biotechnology</td>
			<td>CV16</td>
			<td>For Gene clonging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>quantitative Real-Time PCR Systems</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>CFX Connect</td>
			<td>For qRT-PCR analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T7 RiboMAX Express RNAi System</td>
			<td>Promega</td>
			<td>P1700</td>
			<td>For dsRNA synthesis, which contains Rnase A Solution (4 &#956;g/&#956;L), Sodium Acetate, 3.0M (pH 5.2), Enzyme Mix, T7 Express, Nuclease-Free water, Express T7 2x Buffer, RQ1 RNase-Free DNase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermal Cyclers</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>S1000</td>
			<td>For DNA amplification</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

applications of rna interference in american cockroach

الصراصير ، وهي آفة صحية ، هي أنواع أساسية في الدراسات التنموية والمتحولة للحشرات بسبب سهولة تغذيتها وخصائصها نصف الأيضية. جنبا إلى جنب مع تسلسل الجينوم المشروح جيدا ، جعلت هذه المزايا الصرصور الأمريكي ، Periplaneta americana ، نموذجا مهما للحشرات نصف الأيضية. نظرا لمحدودية النقص في استراتيجية الضربة القاضية ، يصبح الضربة القاضية الجينية الفعالة القائمة على تداخل الحمض النووي الريبي (RNAi) تقنية لا غنى عنها في أبحاث الجينات الوظيفية ل P. americana. يصف هذا البروتوكول تقنيات تشغيل الحمض النووي الريبي في P. americana. يتضمن البروتوكول (1) اختيار P. americana في مراحل النمو المناسبة ، (2) التحضير لإعداد الحقن ، (3) حقن dsRNA ، و (4) اكتشاف كفاءة ضربة قاضية للجينات. RNAi هو أداة وراثية عكسية قوية في P. americana. غالبية أنسجة P. americana حساسة ل dsRNA خارج الخلية. تسمح بساطته للباحثين بالحصول بسرعة على أنماط ظاهرية مختلة وظيفيا تحت حقن واحدة أو عدة حقن dsRNA مستهدفة ، مما يمكن الباحثين من استخدام P. americana بشكل أفضل للدراسات التنموية والمتحولة.

يوضح الشكل 1 حقنة ناجحة. يجب وضع حقنة الحقن المجهري ذات إبرة قطرها الصغير أفقيا على الداعم (الشكل 1A). يتم إدخال الإبرة عبر الفجوة بين اثنين من سوميت البطن أفقيا ضد البشرة (الشكل 1B). تأكد من أن السائل يذهب إلى بطن P. americana. الزاوية شديدة ?...

Watch this Scientific Journal Video about Applications of RNA Interference in American Cockroach at JoVE.com

Applications of RNA Interference in American Cockroach

يصف هذا البروتوكول المبادئ التوجيهية خطوة بخطوة لتقنيات تشغيل الحمض النووي الريبي في P. americana.

تطبيقات تدخل الحمض النووي الريبي في الصرصور الأمريكي

Cockroaches, a sanitary pest, are essential species in insect developmental and metamorphic studies due to their easy feeding and hemimetabolous ...

يوفر البروتوكول طريقة بسيطة لدراسة الصراصير الأمريكية. آفة صحية شائعة وحشرة مفيدة للطب الصيني التقليدي. وسوف يساعد على استكشاف الآليات الجزيئية لأنشطة الحياة المتعددة للصراصير الأمريكية عن طريق هدم جينات محددة.الميزة الرئيسية لهذه التكنولوجيا هي أنها يمكن أن تهدم الجينات في الصرصور الأمريكي أو غيرها من الحشرات المماثلة التي ليست مناسبة لتحرير الجينات. يمكن استخدام هذه التكنولوجيا لاستكشاف مجالات مختلفة مثل التنظيم الجيني واللاجيني ، وعملية تطوير الأنسجة ، وتجديد الزوائد ، وسلوك التزاوج ، وغيرها من الجوانب المثيرة للاهتمام للصرصور الأمريكي. هذه التكنولوجيا سهلة التشغيل ومتعددة الاستخدامات.نقترح الحفاظ على صحة الحيوانات أثناء علاج حقن DSRA. أعتقد أن المبتدئين يمكنهم بسهولة إتقان هذه التقنية بعد عدة جلسات تدريبية. للبدء ، افصل الحوريات الفقس عن oothecae بغربال فتحة أربعة ملليمترات.اختر P.americana الأبيض المملح حديثا مع أنبوب زجاجي. ضع P.americana في حاويات جديدة وانتظر المرحلة الصحيحة للعلاج. في نظام التفاعل ، أضف 10 ميكرولترات من المخزن المؤقت T7 2X ، و 2 ميكرولتر من T7 Express Enzyme Mix وميكروغرام من منتج PCR.أخيرا ، قم بتكوين الحجم الإجمالي إلى 20 ميكرولتر بالماء المقطر المزدوج. تخلط بلطف رأسا على عقب يدويا وتحضن عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة ، ثم 70 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. تمييع 4 ميكروغرام لكل ميكرولتر RNase محلول مع ماء DEPC بنسبة 1 إلى 200.ثم أضف 1 ميكرولتر من وحدة واحدة لكل ميكرولتر RQ1 RNase Free Dnase و 1 ميكرولتر من محلول RNase المخفف إلى النظام. تحضن عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. ثم أضف 10٪ من الحجم الكلي لخلات الصوديوم وثلاثة أحجام من الحجم الكلي للأيزوبروبانول.تخلط بلطف رأسا على عقب يدويا ، ثم توضع على الثلج لمدة خمس دقائق وجهاز طرد مركزي على ارتفاع 13،000 غرام لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية. إزالة supernatant مع ماصة. بعد ذلك ، اغسل البقايا بنسبة 75٪ من الإيثانول ، مع 25٪ من الماء المعالج DEPC ، ثم جهاز الطرد المركزي عند 13،000 جم لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية.قم بإزالة supernatant مرة أخرى ، وجفف الكريات في الهواء لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ثم قم بإذابة الحمض النووي الريبي المزدوج الذي تقطعت به السبل بحوالي 100 ميكرولتر من ماء DEPC وتخفيفه إلى التركيز النهائي البالغ 2 ميكروغرام لكل ميكرولتر. قم بإعداد البرنامج في مضخة الحقن المجهري لضمان اتساق حجم كل حقنة.ثم قم بتنظيف المحقنة عن طريق ملئها بماء DEPC من 8 إلى 10 مرات. قم بتركيب حقنة 10 ميكرولتر على مضخة الحقن الدقيقة. ثم ابدأ تشغيل المضخة واملأ المحقنة ب 10 ميكرولترات من محلول الحمض النووي الريبي المزدوج الذي تقطعت به السبل.تخدير الصراصير بثاني أكسيد الكربون ، ثم التقاطها بلطف باستخدام ملاقط وتسليم الصرصور نحو الإبرة باليد. بعد ذلك ، أدخل الإبرة عبر الفجوة بين اثنين من سوميت البطن أفقيا ضد البشرة. حقن محلول الحمض النووي الريبي المزدوج الذي تقطعت به السبل في الصرصور لضمان أن يكون طرف الإبرة أقرب ما يمكن إلى البشرة لتجنب إتلاف الأعضاء الداخلية.أخيرا ، اسحب طرف الإبرة. ضع الصراصير المحقونة في حاويات الفحص الحيوي النظيفة. انتظر حوالي 10 إلى 20 دقيقة للسماح لهم بالتعافي من آثار ثاني أكسيد الكربون.قم بتسمية الحاويات بتاريخ الحقن ونوع وجرعة الحمض النووي الريبي المزدوج الذي تقطعت به السبل وعمر P.americana. تم اختيار Ddc أو DOPA decarboxylase و Dpp أو decapentaplegic genes كمثالين لمراقبة النمط الظاهري للصراصير المملحة بعد حقن الحمض النووي الريبي المزدوج الذي تقطعت به السبل و dsMocK الذي ليس له هدف في الحيوانات تم أخذه كعنصر تحكم سلبي. تم الكشف عن كفاءة RNAi بواسطة qRT PCR.تم هدم الجينات بشكل كبير مع قيمة P أقل من 0.01 ل dsDdc وأقل من 0.05 ل dsDpp. P.americana مع جينات Ddc الضربة القاضية كان البشرة البيضاء بسبب الميلانين المحظور. في تجربة حقن dsDpp ، عطل RNAi تجديد الأطراف.يجب أن تكون الحشرات صحية ويتم حقنها دون ضرر. توفر هذه التقنية طريقة بسيطة لاستكشاف وظائف الجينات للحشرات التي لا يمكن تحريرها جينيا مثل الصرصور الأمريكي.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Transcriptional Analysis by Nascent RNA FISH of In Vivo Trophoblast Giant Cells or In Vitro Short-term Cultures of Ectoplacental Cone Explants

Transcriptional  Analysis by Nascent RNA FISH of In Vivo Trophoblast Giant Cells or In Vitro Short-term Cultures of Ectoplacental Cone Explants

تحليل النسخي التي كتبها الوليدة RNA FISH من<em&gt; في فيفو</em&gt; خلايا الأرومة الغاذية العملاق أو<em&gt; في المختبر</em&gt; الثقافات قصير الأجل من المشيمة الظاهر المخروط إإكسبلنتس

The placenta derives from one extra-embryonic lineage, the trophectoderm. In the peri-implantation murine blastocyst, mural trophectoderm cells ...

A Modified Trier Social Stress Test for Vulnerable Mexican American Adolescents

اختبار ترير تعديل الإجهاد الاجتماعي للمراهقين الأمريكيين المكسيكيين الضعفاء

The Trier Social Stress Test (TSST) is a well validated and widely used social stressor that has been shown to induce a 2-4 fold increase in cortisol, the ...

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

تشريح وتلطيخ إيممونوفلوريسسينت للفطر الجسم وعلم الخلايا العصبية في أدمغة البالغين melanogaster المورفولوجية

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the ...

Processing of Human Cardiac Tissue Toward Extracellular Matrix Self-assembling Hydrogel for In Vitro and In Vivo Applications

Processing of Human Cardiac Tissue Toward Extracellular Matrix Self-assembling Hydrogel for In Vitro and In Vivo Applications

التجهيز لانسجة القلب البشري تجاه المصفوفة خارج الخلية التي ذاتية تجميع المائية في المختبر و في فيفو التطبيقات

Acellular extracellular matrix preparations are useful for studying cell-matrix interactions and facilitate regenerative cell therapy applications. ...

Genetic Engineering of Primary Mouse Intestinal Organoids Using Magnetic Nanoparticle Transduction Viral Vectors for Frozen Sectioning

الهندسة الوراثية للأجهزة المعوية الماوس الأولية باستخدام الجسيمات النانوية المغناطيسية تحويل ناقلات الفيروسية للتقسيم المجمدة

Intestinal organoid cultures provide a unique opportunity to investigate intestinal stem cell and crypt biology in vitro, although efficient approaches to ...

Thin Film Composite Silicon Elastomers for Cell Culture and Skin Applications: Manufacturing and Characterization

رقيقة اللدائن السيليكون المركبة الفيلم لخلية ثقافة وتطبيقات الجلد: التصنيع وتوصيف

In this protocol, we present methods to fabricate thin elastomer composite films for advanced cell culture applications and for the development of skin ...

RNA-based Reprogramming of Human Primary Fibroblasts into Induced Pluripotent Stem Cells

الجيش الملكي النيبالي على إعادة برمجة الليفية الأولية البشرية داخل الخلايا الجذعية المستحثة Pluripotent

Induced pluripotent stem cells (iPSCs) have proven to be a valuable tool to study human development and disease. Further advancing iPSCs as a regenerative ...

Dissection, Culture and Analysis of Primary Cranial Neural Crest Cells from Mouse for the Study of Neural Crest Cell Delamination and Migration

تشريح والثقافة وتحليل خلايا الجمجمة العصبية الابتدائية من الماوس لدراسة الخلية كريست العصبية الترقيم والهجرة

Over the past several decades there has been an increased availability of genetically modified mouse models used to mimic human pathologies. However, the ...

Preparation of Small RNA Libraries for Sequencing from Early Mouse Embryos

إعداد مكتبات RNA الصغيرة لتسلسل من أجنة الماوس المبكر

MicroRNAs (miRNAs) are important for the complex regulation of cell fate decisions and developmental timing. In vivo studies of the contribution of miRNAs ...

A Protocol for Immunohistochemistry and RNA In-situ Distribution within Early Drosophila Embryo

A Protocol for Immunohistochemistry and RNA In-situ Distribution within Early Drosophila Embryo

بروتوكول للكيمياء النسيجية المناعية وتوزيع الحمض النووي الريبي في الموقع داخل جنين ذبابة الفاكهة المبكر

Calcium induced calcium release signaling (CICR) plays a critical role in many biological processes. Every cellular activity from cell proliferation and ...