Name: applications of rna interference in american cockroach
Uploaded: 2021-12-17T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Applications of RNA Interference in American Cockroach at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet af National Natural Science Foundation of China (Grant Nos. 32070500, 31620103917, 31330072 og 31572325 til C.R., Sh.L.), af Natural Science Foundation of Guangdong Province (Grant No. 2021B1515020044 og 2020A1515011267 til C.R.), af Institut for Videnskab og Teknologi i Guangdong-provinsen (Grant Nos. 2019B090905003 og 2019A0102006), af Institut for Videnskab og Teknologi i Guangzhou (Grant No. 202102020110), af Shenzhen Science and Technology Program (Grant No. KQTD20180411143628272 til Sh.L.).

Linjen af P. americana blev oprindeligt leveret af Dr. Huiling Hao. Denne art er blevet opretholdt med indavl i 30 år9.
1. Udklækning og fodring af P. americana
<ol><li>Saml frisk oothecae (umiddelbart efter æglægning) af P. americana og inkuber i den mørke inkubator ved 25 ° C og 60% fugtighed i ~ 25 dage. Derefter øges temperaturen og fugtigheden til 30 °C og 75 % 3 dage før udklækningen.</li>
	<li>Brug en sigte ...

<ol>
	<li>Miller, S. C., Miyata, K., Brown, S. J., Tomoyasu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissecting+systemic+RNA+interference+in+the+red+flour+beetle+Tribolium+castaneum:+Parameters+affecting+the+efficiency+of+RNAi.">Dissecting systemic RNA interference in the red flour beetle Tribolium castaneum: Parameters affecting the efficiency of RNAi.</a> PloS One. 7 (10), 47431 (2012).</li><li>Fire, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potent+and+specific+genetic+interference+by+double-stranded+RNA+in+Caenorhabditis+elegans.">Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans.</a> Nature. 391 (6669), 806-811 (1998).</li><li>Ambesajir, A., Kaushik, A., Kaushik, J. J., Petros, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+interference:+A+futuristic+tool+and+its+therapeutic+applications.">RNA interference: A futuristic tool and its therapeutic applications.</a> Saudi Journal of Biological Sciences. 19 (4), 395-403 (2012).</li><li>Younis, A., Siddique, M. I., Kim, C. K., Lim, K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+interference+(RNAi)+induced+gene+silencing:+A+promising+approach+of+hi-tech+plant+breeding.">RNA interference (RNAi) induced gene silencing: A promising approach of hi-tech plant breeding.</a> International Journal of Biological Sciences. 10 (10), 1150-1158 (2014).</li><li>Bell&#233;s, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+Drosophila:+RNAi+in+vivo+and+functional+genomics+in+insects.">Beyond Drosophila: RNAi in vivo and functional genomics in insects.</a> Annual Review of Entomology. 55, 111-128 (2010).</li><li>French, A. S., Meisner, S., Liu, H., Weckstr&#246;m, M., Torkkeli, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptome+analysis+and+RNA+interference+of+cockroach+phototransduction+indicate+three+opsins+and+suggest+a+major+role+for+TRPL+channels.">Transcriptome analysis and RNA interference of cockroach phototransduction indicate three opsins and suggest a major role for TRPL channels.</a> Frontiers in Physiology. 6, 207 (2015).</li><li>Hennenfent, A., Liu, H., Torkkeli, P. H., French, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+interference+supports+a+role+for+Nanchung-Inactive+in+mechanotransduction+by+the+cockroach,+Periplaneta+americana,+tactile+spine.">RNA interference supports a role for Nanchung-Inactive in mechanotransduction by the cockroach, Periplaneta americana, tactile spine.</a> Invertebrate Neuroscience: IN. 20 (1), 1 (2020).</li><li>Immonen, E. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EAG+channels+expressed+in+microvillar+photoreceptors+are+unsuited+to+diurnal+vision.">EAG channels expressed in microvillar photoreceptors are unsuited to diurnal vision.</a> The Journal of Physiology. 595 (16), 5465-5479 (2017).</li><li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genomic+and+functional+landscapes+of+developmental+plasticity+in+the+American+cockroach.">The genomic and functional landscapes of developmental plasticity in the American cockroach.</a> Nature Communications. 9 (1), 1008 (2018).</li><li>Zhao, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Grainy+head+signaling+regulates+epithelium+development+and+ecdysis+in+Blattella+germanica.">Grainy head signaling regulates epithelium development and ecdysis in Blattella germanica.</a> Insect Science. 28 (2), 485-494 (2021).</li><li>Lozano, J., Belles, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conserved+repressive+function+of+Kr&#252;ppel+homolog+1+on+insect+metamorphosis+in+hemimetabolous+and+holometabolous+species.">Conserved repressive function of Kr&#252;ppel homolog 1 on insect metamorphosis in hemimetabolous and holometabolous species.</a> Scientific Reports. 1, 163 (2011).</li><li>Philip, B. N., Tomoyasu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+knockdown+analysis+by+double-stranded+RNA+injection.">Gene knockdown analysis by double-stranded RNA injection.</a> Methods in Molecular Biology (Clifton, N. J). 772, 471-497 (2011).</li><li>Zheng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPR+interference-based+specific+and+efficient+gene+inactivation+in+the+brain.">CRISPR interference-based specific and efficient gene inactivation in the brain.</a> Nature Neuroscience. 21 (3), 447-454 (2018).</li><li>Garbutt, J. S., Bell&#233;s, X., Richards, E. H., Reynolds, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistence+of+double-stranded+RNA+in+insect+hemolymph+as+a+potential+determiner+of+RNA+interference+success:+Evidence+from+Manduca+sexta+and+Blattella+germanica.">Persistence of double-stranded RNA in insect hemolymph as a potential determiner of RNA interference success: Evidence from Manduca sexta and Blattella germanica.</a> Journal of Insect Physiology. 59 (2), 171-178 (2013).</li><li>Parrish, S., Fleenor, J., Xu, S., Mello, C., Fire, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+anatomy+of+a+dsRNA+trigger:+differential+requirement+for+the+two+trigger+strands+in+RNA+interference.">Functional anatomy of a dsRNA trigger: differential requirement for the two trigger strands in RNA interference.</a> Molecular Cell. 6 (5), 1077-1087 (2000).</li><li>Lemonds, T. R., Liu, J., Popadi&#263;, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+contribution+of+the+melanin+pathway+to+overall+body+pigmentation+during+ontogenesis+of+Periplaneta+americana.">The contribution of the melanin pathway to overall body pigmentation during ontogenesis of Periplaneta americana.</a> Insect Science. 23 (4), 513-519 (2016).</li><li>Jackson, A. L., Linsley, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noise+amidst+the+silence:+Off-target+effects+of+siRNAs.">Noise amidst the silence: Off-target effects of siRNAs.</a> Trends in Genetics: TIG. 20 (11), 521-524 (2004).</li><li>Patel, M., Peter, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+DISE-inducing+shRNAs+by+monitoring+cellular+responses.">Identification of DISE-inducing shRNAs by monitoring cellular responses.</a> Cell Cycle (Georgetown, Tex). 17 (4), 506-514 (2018).</li><li>Vent&#243;s-Alfonso, A., Ylla, G., Monta&#241;es, J. C., Belles, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNMT1+promotes+genome+methylation+and+early+embryo+development+in+cockroaches.">DNMT1 promotes genome methylation and early embryo development in cockroaches.</a> iScience. 23 (12), 101778 (2020).</li><li>Wang, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variation+in+RNAi+efficacy+among+insect+species+is+attributable+to+dsRNA+degradation+in+vivo.">Variation in RNAi efficacy among insect species is attributable to dsRNA degradation in vivo.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 77, 1-9 (2016).</li><li>Bi, F., Liu, N., Small Fan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=interfering+RNA:+A+new+tool+for+gene+therapy.">interfering RNA: A new tool for gene therapy.</a> Current Gene Therapy. 3 (5), 411-417 (2003).</li></ol>

Denne rapport beskrev en metodologisk trin-for-trin RNAi-strategi i P. americana; Bemærk, at det også kan anvendes på andre kakerlakker (f.eks. Blattella germanica ) og mange andre insekter med mindre ændringer. RNAi's genhæmningseffektivitet er imidlertid ikke altid høj nok, med en åbenlys ulempe sammenlignet med genknockout-strategien13. Følgende restvirkning af genniveau kan forstyrre de reelle fænotyper. For at sikre, at RNAi-behandlingen er vellykket, skal flere væ...

RNA-interferens (RNAi), en evolutionært bevaret mekanisme, bliver gradvist et vigtigt omvendt genetisk værktøj til at hæmme genekspression i mange organismer1, da Andrew Fire og Craig Mello2 udviklede den dobbeltstrengede RNA (dsRNA) medierede gensindsigtsstrategi. dsRNA spaltes i fragmenter af 21-23 nukleotider, små interfererende RNA'er (siRNA'er), af enzymet Dicer i celler for at aktivere RNAi-vejen. Derefter inkorporeres siRNA'er i det RNA-inducerede hæmningskompleks (RISC), som kobles til mål-mRNA'et, forårsager mRNA-spaltning og resulterer til sidst i tab af genfunktion 3,4,5. Blandt insektarterne er mange systemiske RNAi-eksperimenter hidtil blevet rapporteret i masser af insektordrer, såsom Orthoptera, Isoptera, Hemiptera, Coleoptera, Neuroptera, Diptera, Hymenoptera, Lepidoptera og Blattodea 5,6,7,8.
Kakerlakker (Blattaria) er en essentiel insektfamilie i udviklingsmæssige og metamorfe studier med deres hurtige vækstcyklusser, stærke tilpasningsevne til miljøet og høj udviklingsmæssig plasticitet9. Før man opdagede, at RNAi var kompatibel med kakerlakker, fokuserede tidligere forskning kun på kakerlakforebyggelse og -kontrol på grund af mangel på genetiske manipulationsteknikker i kakerlakker. Kakerlak oothecas unikke struktur gjorde det udfordrende at udføre embryoinjektionsbaseret genknockout med CRISPR-Cas9-systemet. Desuden viser de fleste væv i kakerlakker (såsom P. americana) robust systemisk RNAi-respons, hvilket muliggør hurtig generering af dysfunktionelle fænotyper ved at injicere en eller flere målrettede dsRNA'er 9,10,11. Disse funktioner gjorde RNAi til en uundværlig teknik inden for genfunktionel forskning i P. americana.
Selvom brugen af RNAi i funktionel genforskning i P. americana er blevet rapporteret, var der ingen detaljeret eller trinvis beskrivelse tilgængelig. Denne rapport giver en trinvis operationel retningslinje for RNAi i P. americana, der er nyttig til genfunktionsundersøgelse i andre kakerlakker. Desuden er denne vejledning ikke begrænset til Blattodea og kan anvendes på mange andre insekter med mindre ændringer.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>701 N 10 &#181;L Syr (26s/51/2)</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>PN:80300</td>
			<td>Injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Ningbo Jiangnan Instrument Factory</td>
			<td>RXZ-380A-LED</td>
			<td>For cockroaches hatching and feeding</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-injection pump</td>
			<td>Alcott Biotechnology</td>
			<td>ALC-IP600</td>
			<td>Injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pTOPO-Blunt Cloning Kit</td>
			<td>Aidlab Biotechnology</td>
			<td>CV16</td>
			<td>For Gene clonging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>quantitative Real-Time PCR Systems</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>CFX Connect</td>
			<td>For qRT-PCR analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T7 RiboMAX Express RNAi System</td>
			<td>Promega</td>
			<td>P1700</td>
			<td>For dsRNA synthesis, which contains Rnase A Solution (4 &#956;g/&#956;L), Sodium Acetate, 3.0M (pH 5.2), Enzyme Mix, T7 Express, Nuclease-Free water, Express T7 2x Buffer, RQ1 RNase-Free DNase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermal Cyclers</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>S1000</td>
			<td>For DNA amplification</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

applications of rna interference in american cockroach

Kakerlakker, et sanitært skadedyr, er vigtige arter i insektudviklingsmæssige og metamorfe undersøgelser på grund af deres lette fodring og hemimetaboløse egenskaber. Alt i alt med velkommenterede genomsekvenser har disse fordele gjort amerikansk kakerlak, Periplaneta americana, til en vigtig hemimetaboløs insektmodel. Begrænset af manglen på knockout-strategi bliver effektiv RNA-interferens (RNAi)-baseret gennedslag en uundværlig teknik i funktionel genforskning af P. americana. Den nuværende protokol beskriver RNAi-operationsteknikkerne i P. americana. Protokollen omfatter (1) udvælgelse af P. americana på korrekte udviklingsstadier, (2) forberedelse til injektionsindstillingen, (3) dsRNA-injektion og (4) påvisning af gennedslagseffektivitet. RNAi er et kraftfuldt omvendt genetisk værktøj i P. americana. Størstedelen af P. americana-væv er følsomme over for ekstracellulært dsRNA. Dens enkelhed gør det muligt for forskere hurtigt at opnå dysfunktionelle fænotyper under en eller flere målrettede dsRNA-injektioner, hvilket gør det muligt for forskere bedre at bruge P. americana til udviklingsmæssige og metamorfe undersøgelser.

Figur 1 viser en vellykket injektion. Mikroinjektionssprøjten med en nål med mikrodiameter skal placeres vandret på boosteren (figur 1A). Nålen indsættes via mellemrummet mellem to abdominale somitter vandret mod epidermis (figur 1B). Sørg for, at væsken går ind i P. americana maven. Nålens for stejle vinkel vil beskadige de indre organer (figur 1C), og forkert injektion føre...

Watch this Scientific Journal Video about Applications of RNA Interference in American Cockroach at JoVE.com

Applications of RNA Interference in American Cockroach

Den nuværende protokol beskriver trinvise retningslinjer for RNAi-operationsteknikkerne i P. americana.

Anvendelser af RNA-interferens i amerikansk kakerlak

Cockroaches, a sanitary pest, are essential species in insect developmental and metamorphic studies due to their easy feeding and hemimetabolous ...

Protokollen giver en enkel måde at studere amerikanske kakerlakker på. Et almindeligt sanitært skadedyr og et gavnligt insekt til traditionel kinesisk medicin. Det vil hjælpe med at udforske de molekylære mekanismer i flere livsaktiviteter i amerikanske kakerlakker ved at slå ned specifikke gener.Den største fordel ved denne teknologi er, at den kan slå gener i amerikansk kakerlak eller andre lignende insekter, der ikke er egnede til genredigering. Denne teknologi kan bruges til at udforske forskellige områder såsom den genetiske og epigenetiske regulering, udviklingsproces af væv, regenerering af vedhæng, parringsadfærd og andre interessante sider af amerikansk kakerlak. Denne teknologi er nem at betjene og alsidig.Vi foreslår at holde dyrene sunde under DSRA-injektionsbehandling. Jeg tror, at nybegyndere nemt kan mestre denne teknik efter flere øvelsessessioner. Til at begynde med skal du adskille de klækkede nymfer fra oothecae med en fire millimeter blænde sigte.Vælg den hvide friskmaltede P.americana med et glasrør. Placer P.americana i nye beholdere og vent på det rigtige stadium til behandling. I reaktionssystemet tilsættes 10 mikroliter T7 2X-buffer, 2 mikroliter T7 Express Enzyme Mix og to mikrogram PCR-produkt.Til sidst udgøres det samlede volumen til 20 mikroliter med dobbelt destilleret vand. Bland forsigtigt på hovedet manuelt og inkuber ved 37 grader Celsius i 30 minutter, derefter 70 grader Celsius i 10 minutter. Fortynd 4 mikrogram pr. mikroliter RNase A-opløsning med DEPC-vand i et forhold på 1 til 200.Derefter tilsættes 1 mikroliter af en enhed pr. mikroliter RQ1 RNase Free Dnase og 1 mikroliter fortyndet RNase A-opløsning til systemet. Inkuber ved 37 grader Celsius i 30 minutter. Derefter tilsættes 10% af det samlede volumen natriumacetat og tre volumener af det samlede volumen isopropanol.Bland forsigtigt på hovedet manuelt, læg derefter på is i fem minutter og centrifuge ved 13.000 g i 10 minutter ved 4 grader Celsius. Fjern supernatanten med en pipette. Vask derefter resten med 75% ethanol, med 25 procent DEPC-behandlet vand, derefter centrifuge ved 13.000 g i 5 minutter ved 4 grader Celsius.Fjern supernatant igen, lufttør pillen i 15 minutter ved stuetemperatur. Derefter opløses det dobbeltstrengede RNA med ca. 100 mikroliter DEPC-vand og fortyndes til den endelige koncentration på 2 mikrogram pr. Mikroliter. Konfigurer programmet i mikroinjektionspumpen for at sikre, at volumenet af hver injektion er konsistent.Rengør derefter sprøjten ved at fylde den med DEPC-vand 8 til 10 gange. Installer 10 mikroliter sprøjten på mikroinjektionspumpen. Start derefter pumpen og fyld sprøjten med 10 mikroliter dobbeltstrenget RNA-opløsning.Bedøjd kakerlakkerne med kuldioxid, tag dem derefter forsigtigt op med pincet og lever kakerlakken mod nålen i hånden. Indsæt derefter nålen via mellemrummet mellem to abdominale somitter vandret mod epidermis. Injicer den dobbeltstrengede RNA-opløsning i kakerlakken, hvilket sikrer, at nålespidsen er så tæt som muligt på epidermis for at undgå at beskadige indre organer.Til sidst skal du trække nålespidsen ud. Sæt de injicerede kakerlakker i rene bioassaybeholdere. Vent i ca. 10 til 20 minutter for at lade dem komme sig efter virkningerne af kuldioxid.Mærk beholderne med injektionsdato, type og dosis af dobbeltstrenget RNA og alder af P.americana. Ddc eller DOPA decarboxylase og Dpp eller decapentaplegiske gener blev udvalgt som to eksempler for at observere fænotypen af de maltede kakerlakker efter dobbeltstrenget RNA-injektion, og dsMocK, som ikke har noget mål i dyrene, blev taget som en negativ kontrol. RNAi-effektiviteten blev detekteret af qRT PCR.Generne blev signifikant slået ned med en P-værdi på mindre end 0,01 for dsDdc og mindre end 0,05 for dsDpp. P.americana med knockdown Ddc-gener havde den hvide epidermis på grund af blokeret melanisering. I eksperimentet med dsDpp-injektioner forstyrrede RNAi regenerering af lemmer.Insekterne skal være sunde og injiceres uden skade. Denne teknologi giver en enkel måde at udforske genfunktioner for insekter, der ikke kan genredigeres, såsom amerikansk kakerlak.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Transcriptional Analysis by Nascent RNA FISH of In Vivo Trophoblast Giant Cells or In Vitro Short-term Cultures of Ectoplacental Cone Explants

Transcriptional  Analysis by Nascent RNA FISH of In Vivo Trophoblast Giant Cells or In Vitro Short-term Cultures of Ectoplacental Cone Explants

Transkriptionel Analyse af Nascent RNA FISH af<em&gt; In vivo</em&gt; Trofoblasten kæmpeceller eller<em&gt; In vitro</em&gt; Kortsigtede Kulturer af Ectoplacental Cone Eksplantater

The placenta derives from one extra-embryonic lineage, the trophectoderm. In the peri-implantation murine blastocyst, mural trophectoderm cells ...

A Modified Trier Social Stress Test for Vulnerable Mexican American Adolescents

En ændret Trier Social Stress Test for sårbare mexicanske amerikanske adolescente

The Trier Social Stress Test (TSST) is a well validated and widely used social stressor that has been shown to induce a 2-4 fold increase in cortisol, the ...

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissektion og immunfluorescent farvning af champignon krop og fotoreceptor neuroner i voksen Drosophila melanogaster hjerner

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the ...

Processing of Human Cardiac Tissue Toward Extracellular Matrix Self-assembling Hydrogel for In Vitro and In Vivo Applications

Processing of Human Cardiac Tissue Toward Extracellular Matrix Self-assembling Hydrogel for In Vitro and In Vivo Applications

Behandling af menneskelige hjerte væv mod ekstracellulære Matrix selv samle Hydrogel for In Vitro og In Vivo applikationer

Acellular extracellular matrix preparations are useful for studying cell-matrix interactions and facilitate regenerative cell therapy applications. ...

Genetic Engineering of Primary Mouse Intestinal Organoids Using Magnetic Nanoparticle Transduction Viral Vectors for Frozen Sectioning

Genteknologi af primære mus intestinale Organoider ved hjælp af magnetisk nanopartikel Transduktionsvirale vektorer for frosne skæring

Intestinal organoid cultures provide a unique opportunity to investigate intestinal stem cell and crypt biology in vitro, although efficient approaches to ...

Thin Film Composite Silicon Elastomers for Cell Culture and Skin Applications: Manufacturing and Characterization

Tynd Film sammensat silicium elastomerer for cellekultur og hud applikationer: fremstilling og karakterisering

In this protocol, we present methods to fabricate thin elastomer composite films for advanced cell culture applications and for the development of skin ...

RNA-based Reprogramming of Human Primary Fibroblasts into Induced Pluripotent Stem Cells

RNA-baserede omprogrammering af menneskelige primære fibroblaster til induceret pluripotente stamceller

Induced pluripotent stem cells (iPSCs) have proven to be a valuable tool to study human development and disease. Further advancing iPSCs as a regenerative ...

Dissection, Culture and Analysis of Primary Cranial Neural Crest Cells from Mouse for the Study of Neural Crest Cell Delamination and Migration

Dissektion, kultur og analyse af primær kranie neurale crest celler fra mus til studiet af Neural Crest celle delaminering og migration

Over the past several decades there has been an increased availability of genetically modified mouse models used to mimic human pathologies. However, the ...

Preparation of Small RNA Libraries for Sequencing from Early Mouse Embryos

Forberedelse af små RNA-biblioteker til sekventering fra tidlige museembryoner

MicroRNAs (miRNAs) are important for the complex regulation of cell fate decisions and developmental timing. In vivo studies of the contribution of miRNAs ...

A Protocol for Immunohistochemistry and RNA In-situ Distribution within Early Drosophila Embryo

A Protocol for Immunohistochemistry and RNA In-situ Distribution within Early Drosophila Embryo

En protokol til immunohistokemi og RNA in situ-distribution inden for tidligt drosophila-embryo

Calcium induced calcium release signaling (CICR) plays a critical role in many biological processes. Every cellular activity from cell proliferation and ...