Name: applications of rna interference in american cockroach
Uploaded: 2021-12-17T15:00:00
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इस काम को चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (अनुदान संख्या 32070500, 31620103917, 31330072, और C.R., Sh.L.) के लिए 31572325 द्वारा समर्थित किया गया था, गुआंग्डोंग प्रांत के प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (अनुदान संख्या 2021B1515020044 और 2020A1515011267 को C.R.), गुआंग्डोंग प्रांत में विज्ञान और प्रौद्योगिकी विभाग द्वारा (अनुदान 202102020110 संख्या 201515011267) द्वारा, गुआंग्डोंग प्रांत में विज्ञान और प्रौद्योगिकी विभाग द्वारा (अनुदान संख्या 201515011267) द्वारा, गुआंग्डोंग प्रांत में विज्ञान और प्रौद्योगिकी विभाग द्वारा (अनुदान संख्या 201909000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000 शेन्ज़ेन विज्ञान और प्रौद्योगिकी कार्यक्रम द्वारा (अनुदान सं। KQTD20180411143628272 करने के लिए Sh.L.).

पी अमेरिकाना की लाइन शुरू में डॉ Huiling Hao द्वारा प्रदान की गई थी। इस प्रजाति को 30 वर्षों के लिए इनब्रीडिंग के साथ बनाए रखा गयाहै।
1. हैचिंग और पी. अमेरिकाना के खिला
<ol><li>पी अमे...

<ol>
	<li>Miller, S. C., Miyata, K., Brown, S. J., Tomoyasu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissecting+systemic+RNA+interference+in+the+red+flour+beetle+Tribolium+castaneum:+Parameters+affecting+the+efficiency+of+RNAi.">Dissecting systemic RNA interference in the red flour beetle Tribolium castaneum: Parameters affecting the efficiency of RNAi.</a> PloS One. 7 (10), 47431 (2012).</li><li>Fire, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potent+and+specific+genetic+interference+by+double-stranded+RNA+in+Caenorhabditis+elegans.">Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans.</a> Nature. 391 (6669), 806-811 (1998).</li><li>Ambesajir, A., Kaushik, A., Kaushik, J. J., Petros, S. 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R., Liu, J., Popadi&#263;, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+contribution+of+the+melanin+pathway+to+overall+body+pigmentation+during+ontogenesis+of+Periplaneta+americana.">The contribution of the melanin pathway to overall body pigmentation during ontogenesis of Periplaneta americana.</a> Insect Science. 23 (4), 513-519 (2016).</li><li>Jackson, A. L., Linsley, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noise+amidst+the+silence:+Off-target+effects+of+siRNAs.">Noise amidst the silence: Off-target effects of siRNAs.</a> Trends in Genetics: TIG. 20 (11), 521-524 (2004).</li><li>Patel, M., Peter, M. 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C., Belles, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNMT1+promotes+genome+methylation+and+early+embryo+development+in+cockroaches.">DNMT1 promotes genome methylation and early embryo development in cockroaches.</a> iScience. 23 (12), 101778 (2020).</li><li>Wang, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variation+in+RNAi+efficacy+among+insect+species+is+attributable+to+dsRNA+degradation+in+vivo.">Variation in RNAi efficacy among insect species is attributable to dsRNA degradation in vivo.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 77, 1-9 (2016).</li><li>Bi, F., Liu, N., Small Fan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=interfering+RNA:+A+new+tool+for+gene+therapy.">interfering RNA: A new tool for gene therapy.</a> Current Gene Therapy. 3 (5), 411-417 (2003).</li></ol>

इस रिपोर्ट में पी. अमेरिकाना में एक पद्धतिगत चरण-दर-चरण आरएनएआई रणनीति का वर्णन किया गया है; ध्यान दें, यह भी अन्य तिलचट्टे (Blattella germanica, उदाहरण के लिए) और मामूली परिवर्तन के साथ कई अन्य कीड़ों के लिए ला?...

आरएनए हस्तक्षेप (आरएनएआई), एक विकासवादी रूप से संरक्षित तंत्र, धीरे-धीरे कई जीवों में जीन अभिव्यक्ति को बाधित करने के लिए एक आवश्यक रिवर्स-आनुवंशिक उपकरण बन जाताहै 1, क्योंकि एंड्रयू फायर और क्रेग मेलो2 ने डबल-फंसे हुए आरएनए (डीएसआरएनए) मध्यस्थता जीन चुप्पी रणनीति विकसित की। dsRNA को 21-23 न्यूक्लियोटाइड्स, छोटे हस्तक्षेप करने वाले आरएनए (siRNAs) के टुकड़ों में विभाजित किया जाता है, जो आरएनएआई मार्ग को सक्रिय करने के लिए कोशिकाओं में एंजाइम डाइसर द्वारा होता है। फिर siRNAs को आरएनए-प्रेरित साइलेंसिंग कॉम्प्लेक्स (RISC) में शामिल किया जाता है, जो लक्ष्य mRNA के लिए जोड़ता है, mRNA दरार का कारण बनता है, और अंत में जीन फ़ंक्शन 3,4,5 के नुकसान में परिणाम देता है। कीट प्रजातियों में, कई प्रणालीगत आरएनएआई प्रयोगों को अब तक बहुत सारे कीट आदेशों में सूचित किया गया है, जैसे कि ऑर्थोप्टेरा, आइसोप्टेरा, हेमिप्टेरा, कोलिओप्टेरा, न्यूरोप्टेरा, डिप्टेरा, हाइमेनोप्टेरा, लेपिडोप्टेरा, और ब्लैटोडिया 5,6,7,8।
कॉकरोच (ब्लैटेरिया) विकासात्मक और रूपांतरित अध्ययनों में एक आवश्यक कीट परिवार हैं, जिसमें उनके तेजी से विकास चक्र, पर्यावरण के लिए मजबूत अनुकूलन क्षमता और उच्च विकासात्मक प्लास्टिसिटी9 है। यह पता लगाने से पहले कि आरएनएआई तिलचट्टे के साथ संगत था, पिछले शोध ने केवल तिलचट्टे में आनुवंशिक हेरफेर तकनीकों की कमी के कारण तिलचट्टे की रोकथाम और नियंत्रण पर ध्यान केंद्रित किया था। कॉकरोच ऊथेका की अद्वितीय संरचना ने CRISPR-Cas9 प्रणाली के साथ भ्रूण इंजेक्शन-आधारित जीन नॉकआउट करने के लिए चुनौतीपूर्ण बना दिया। इसके अलावा, तिलचट्टे में अधिकांश ऊतक (जैसे पी. अमेरिकाना) मजबूत प्रणालीगत आरएनएआई प्रतिक्रिया दिखाते हैं, जो एक या अधिक लक्ष्यीकरण dsRNAs 9,10,11 को इंजेक्ट करके बेकार फेनोटाइप की तेजी से पीढ़ी के लिए अनुमति देता है। इन विशेषताओं ने आरएनएआई को पी. अमेरिकाना में जीन कार्यात्मक अनुसंधान में एक अपरिहार्य तकनीक बना दिया।
भले ही पी. अमेरिकाना में कार्यात्मक जीन अनुसंधान में आरएनएआई के उपयोग की सूचना दी गई है, कोई विस्तृत या चरण-दर-चरण विवरण उपलब्ध नहीं था। यह रिपोर्ट पी. अमेरिकाना में आरएनएआई के लिए एक चरण-दर-चरण परिचालन दिशानिर्देश प्रदान करती है, जो अन्य तिलचट्टे में जीन फ़ंक्शन अध्ययन के लिए उपयोगी है। इसके अलावा, यह मार्गदर्शिका ब्लैटोडिया तक सीमित नहीं है और मामूली संशोधनों के साथ कई अन्य कीड़ों पर लागू की जा सकती है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>701 N 10 &#181;L Syr (26s/51/2)</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>PN:80300</td>
			<td>Injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Ningbo Jiangnan Instrument Factory</td>
			<td>RXZ-380A-LED</td>
			<td>For cockroaches hatching and feeding</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-injection pump</td>
			<td>Alcott Biotechnology</td>
			<td>ALC-IP600</td>
			<td>Injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pTOPO-Blunt Cloning Kit</td>
			<td>Aidlab Biotechnology</td>
			<td>CV16</td>
			<td>For Gene clonging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>quantitative Real-Time PCR Systems</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>CFX Connect</td>
			<td>For qRT-PCR analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T7 RiboMAX Express RNAi System</td>
			<td>Promega</td>
			<td>P1700</td>
			<td>For dsRNA synthesis, which contains Rnase A Solution (4 &#956;g/&#956;L), Sodium Acetate, 3.0M (pH 5.2), Enzyme Mix, T7 Express, Nuclease-Free water, Express T7 2x Buffer, RQ1 RNase-Free DNase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermal Cyclers</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>S1000</td>
			<td>For DNA amplification</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

applications of rna interference in american cockroach

कॉकरोच, एक सैनिटरी कीट, कीट विकास और मेटामॉर्फिक अध्ययनों में आवश्यक प्रजातियां हैं क्योंकि उनके आसान भोजन और हेमीमेटाबोलस विशेषताओं के कारण। पूरी तरह से अच्छी तरह से एनोटेट जीनोम अनुक्रमों के साथ, इन फायदों ने अमेरिकी तिलचट्टा, पेरिप्लेनेटा अमेरिकाना, एक महत्वपूर्ण हेमीमेटाबोलस कीट मॉडल बना दिया है। नॉकआउट रणनीति की कमी से सीमित, प्रभावी आरएनए हस्तक्षेप (आरएनएआई) -आधारित जीन नॉकडाउन पी अमेरिकाना के कार्यात्मक जीन अनुसंधान में एक अपरिहार्य तकनीक बन जाता है। वर्तमान प्रोटोकॉल पी. अमेरिकाना में आरएनएआई ऑपरेशन तकनीकों का वर्णन करता है। प्रोटोकॉल में (1) उचित विकास चरणों में पी. अमेरिकाना का चयन, (2) इंजेक्शन सेटिंग के लिए तैयारी, (3) डीएसआरएनए इंजेक्शन, और (4) जीन नॉकडाउन दक्षता का पता लगाना शामिल है। आरएनएआई पी अमेरिकाना में एक शक्तिशाली रिवर्स आनुवंशिक उपकरण है। पी. अमेरिकाना ऊतकों के बहुमत extracellular dsRNA के प्रति संवेदनशील हैं। इसकी सादगी शोधकर्ताओं को एक या कई लक्ष्यीकरण डीएसआरएनए इंजेक्शन के तहत जल्दी से बेकार फेनोटाइप प्राप्त करने की अनुमति देती है, जिससे शोधकर्ताओं को विकासात्मक और रूपांतरित अध्ययनों के लिए पी. अमेरिकाना का बेहतर उपयोग करने में सक्षम बनाया जा सकता है।

चित्र 1 एक सफल इंजेक्शन दिखाता है। एक माइक्रो व्यास सुई के साथ माइक्रोइंजेक्शन सिरिंज को क्षैतिज रूप से बूस्टर (चित्रा 1 ए) पर रखा जाना चाहिए। सुई को एपिडर्मिस (चित्रा 1 बी</str...

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Applications of RNA Interference in American Cockroach

वर्तमान प्रोटोकॉल पी. अमेरिकाना में आरएनएआई ऑपरेशन तकनीकों के लिए चरण-दर-चरण दिशानिर्देशों का वर्णन करता है।

अमेरिकी तिलचट्टा में आरएनए हस्तक्षेप के अनुप्रयोग

Cockroaches, a sanitary pest, are essential species in insect developmental and metamorphic studies due to their easy feeding and hemimetabolous ...

प्रोटोकॉल अमेरिकी तिलचट्टे का अध्ययन करने का एक सरल तरीका प्रदान करता है। एक आम सैनिटरी कीट और पारंपरिक चीनी चिकित्सा के लिए एक लाभकारी कीट। यह विशिष्ट जीनों को गिराकर अमेरिकी तिलचट्टे की कई जीवन गतिविधियों के आणविक तंत्र का पता लगाने में मदद करेगा।इस तकनीक का मुख्य लाभ यह है कि यह अमेरिकी तिलचट्टा या अन्य समान कीड़ों में जीन को गिरा सकता है जो जीन संपादन के लिए उपयुक्त नहीं हैं। इस तकनीक का उपयोग विभिन्न क्षेत्रों का पता लगाने के लिए किया जा सकता है जैसे कि आनुवंशिक और एपिजेनेटिक विनियमन, ऊतकों की विकास प्रक्रिया, उपांगों का पुनर्जनन, संभोग व्यवहार, और अमेरिकी तिलचट्टा के अन्य दिलचस्प पक्ष। यह तकनीक संचालित करने में आसान और बहुमुखी है।हम DSRA इंजेक्शन उपचार के दौरान जानवरों को स्वस्थ रखने का सुझाव देते हैं। मेरा मानना है कि नौसिखिए कई अभ्यास सत्रों के बाद आसानी से इस तकनीक में महारत हासिल कर सकते हैं। शुरू करने के लिए, एक चार मिलीमीटर एपर्चर छलनी के साथ oothecae से hatched अप्सराओं को अलग करें।एक ग्लास ट्यूब के साथ सफेद ताजा malted P.americana बाहर उठाओ. P.americana को नए कंटेनरों में रखें और उपचार के लिए सही चरण की प्रतीक्षा करें। प्रतिक्रिया प्रणाली में, T7 2X बफर के 10 माइक्रोलीटर, T7 एक्सप्रेस एंजाइम मिक्स के 2 माइक्रोलीटर और पीसीआर उत्पाद के दो माइक्रोग्राम जोड़ें।अंत में, डबल आसुत पानी के साथ 20 माइक्रोलीटर तक कुल मात्रा बनाएं। धीरे से मैन्युअल रूप से उल्टा मिलाएं और 30 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट करें, फिर 10 मिनट के लिए 70 डिग्री सेल्सियस। 1 से 200 के अनुपात में डीईपीसी पानी के साथ 4 माइक्रोग्राम प्रति माइक्रोलीटर RNase एक समाधान पतला करें।फिर माइक्रोलीटर RQ1 RNase Free Dnase प्रति एक इकाई के 1 माइक्रोलीटर और सिस्टम के लिए पतला RNase एक समाधान के 1 माइक्रोलीटर जोड़ें। 30 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट करें। फिर सोडियम एसीटेट की कुल मात्रा का 10% और आइसोप्रोपेनॉल की कुल मात्रा के तीन संस्करण जोड़ें।धीरे से मैन्युअल रूप से उल्टा मिश्रण करें, फिर पांच मिनट के लिए बर्फ पर रखें और 4 डिग्री सेल्सियस पर 10 मिनट के लिए 13, 000 ग्राम पर सेंट्रीफ्यूज करें। एक पिपेट के साथ supernatant निकालें। इसके बाद, 75% इथेनॉल के साथ अवशेषों को धोएं, 25 प्रतिशत डीईपीसी उपचारित पानी के साथ, फिर 4 डिग्री सेल्सियस पर 5 मिनट के लिए 13, 000 ग्राम पर सेंट्रीफ्यूज करें।supernatant फिर से निकालें, हवा कमरे के तापमान पर 15 मिनट के लिए गोली सूखी. फिर डीईपीसी पानी के लगभग 100 माइक्रोलीटर के साथ डबल फंसे हुए आरएनए को भंग करें और इसे प्रति माइक्रोलीटर 2 माइक्रोग्राम की अंतिम एकाग्रता में पतला करें। यह सुनिश्चित करने के लिए माइक्रोइंजेक्शन पंप में प्रोग्राम सेट करें कि प्रत्येक इंजेक्शन की मात्रा सुसंगत है।फिर सिरिंज को 8 से 10 बार डीईपीसी के पानी से भरकर साफ करें। माइक्रो इंजेक्शन पंप पर 10 माइक्रोलीटर सिरिंज स्थापित करें। फिर पंप शुरू करें और डबल फंसे हुए आरएनए समाधान के 10 माइक्रोलीटर के साथ सिरिंज भरें।कार्बन डाइऑक्साइड के साथ तिलचट्टे को एनेस्थेटाइज़ करें, फिर धीरे से उन्हें चिमटी के साथ उठाएं और हाथ से सुई की ओर कॉकरोच वितरित करें। इसके बाद, एपिडर्मिस के खिलाफ क्षैतिज रूप से दो पेट के सोमाइट्स के बीच के अंतर के माध्यम से सुई डालें। कॉकरोच में डबल फंसे हुए आरएनए समाधान को इंजेक्ट करें, यह सुनिश्चित करते हुए कि आंतरिक अंगों को नुकसान पहुंचाने से बचने के लिए सुई की नोक एपिडर्मिस के जितना संभव हो उतना करीब है।अंत में, सुई की नोक को बाहर निकालें। इंजेक्ट किए गए कॉकरोच को साफ बायोएसे कंटेनरों में डालें। कार्बन डाइऑक्साइड के प्रभाव से उबरने के लिए लगभग 10 से 20 मिनट तक प्रतीक्षा करें।इंजेक्शन की तारीख, डबल फंसे हुए आरएनए के प्रकार और खुराक और P.americana की उम्र के साथ कंटेनरों को लेबल करें। डीडीसी या डीओपीए डिकार्बोक्सिलेज और डीपीपी या डिकैपेन्टाप्लेजिक जीन को दो उदाहरणों के रूप में चुना गया था ताकि डबल फंसे हुए आरएनए इंजेक्शन और डीएसएमओसीके के बाद माल्टेड कॉकरोच के फेनोटाइप का निरीक्षण किया जा सके, जिसका जानवरों में कोई लक्ष्य नहीं है, को नकारात्मक नियंत्रण के रूप में लिया गया था। आरएनएआई दक्षता का पता क्यूआरटी पीसीआर द्वारा लगाया गया था।जीन को dsDdc के लिए 0.01 से कम और dsDpp के लिए 0.05 से कम के पी मान के साथ काफी नीचे गिरा दिया गया था। नॉकडाउन डीडीसी जीन के साथ P.americana अवरुद्ध melanization के कारण सफेद epidermis था। DsDpp इंजेक्शन के साथ प्रयोग में, आरएनएआई अंग पुनर्जनन बाधित.कीड़े स्वस्थ होने चाहिए और बिना किसी नुकसान के इंजेक्शन लगाने चाहिए। यह तकनीक उन कीड़ों के लिए जीन कार्यों का पता लगाने का एक सरल तरीका प्रदान करती है जिन्हें जीन संपादित नहीं किया जा सकता है जैसे कि अमेरिकी तिलचट्टा।

Research

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Processing of Human Cardiac Tissue Toward Extracellular Matrix Self-assembling Hydrogel for In Vitro and In Vivo Applications

Extracellular मैट्रिक्स की ओर मानव कार्डियक ऊतक के प्रसंस्करण स्व-कोडांतरण Hydrogel के लिए इन विट्रो में और Vivo में अनुप्रयोगों

Acellular extracellular matrix preparations are useful for studying cell-matrix interactions and facilitate regenerative cell therapy applications. ...

Genetic Engineering of Primary Mouse Intestinal Organoids Using Magnetic Nanoparticle Transduction Viral Vectors for Frozen Sectioning

जमे हुए अनुभाग के लिए चुंबकीय नैनोकण ट्रांसडक्शन वायरल वेक्टर्स का उपयोग प्राथमिक माउस आंत्र organoids की जेनेटिक इंजीनियरिंग

Intestinal organoid cultures provide a unique opportunity to investigate intestinal stem cell and crypt biology in vitro, although efficient approaches to ...

Thin Film Composite Silicon Elastomers for Cell Culture and Skin Applications: Manufacturing and Characterization

पतली फिल्म समग्र सिलिकॉन सेल संस्कृति और त्वचा अनुप्रयोगों के लिए Elastomers: विनिर्माण और लक्षण वर्णन

In this protocol, we present methods to fabricate thin elastomer composite films for advanced cell culture applications and for the development of skin ...

RNA-based Reprogramming of Human Primary Fibroblasts into Induced Pluripotent Stem Cells

आरएनए-प्रेरित Pluripotent स्टेम सेल में मानव प्राथमिक Fibroblasts के reprogramminging आधारित

Induced pluripotent stem cells (iPSCs) have proven to be a valuable tool to study human development and disease. Further advancing iPSCs as a regenerative ...

Dissection, Culture and Analysis of Primary Cranial Neural Crest Cells from Mouse for the Study of Neural Crest Cell Delamination and Migration

तंत्रिका क्रेस्ट सेल Delamination और प्रवास के अध्ययन के लिए माउस से प्राथमिक कपाल तंत्रिका क्रेस्ट कोशिकाओं का विच्छेदन, संस्कृति और विश्लेषण

Over the past several decades there has been an increased availability of genetically modified mouse models used to mimic human pathologies. However, the ...

Preparation of Small RNA Libraries for Sequencing from Early Mouse Embryos

प्रारंभिक माउस भ्रूण से अनुक्रमण के लिए छोटे आरएनए पुस्तकालयों की तैयारी

MicroRNAs (miRNAs) are important for the complex regulation of cell fate decisions and developmental timing. In vivo studies of the contribution of miRNAs ...

A Protocol for Immunohistochemistry and RNA In-situ Distribution within Early Drosophila Embryo

A Protocol for Immunohistochemistry and RNA In-situ Distribution within Early Drosophila Embryo

प्रारंभिक ड्रोसोफिला भ्रूण के भीतर इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री और आरएनए इन-सीटू वितरण के लिए एक प्रोटोकॉल

Calcium induced calcium release signaling (CICR) plays a critical role in many biological processes. Every cellular activity from cell proliferation and ...