Name: applications of rna interference in american cockroach
Uploaded: 2021-12-17T15:00:00
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Este trabalho foi apoiado pela Fundação Nacional de Ciência Natural da China (Grant No. 32070500, 31620103917, 31330072, e 31572325 à C.R., Sh.L.), pela Fundação de Ciência Natural da Província de Guangdong (Grant No. 2021B1515020044 e 2020A1515011267 a C.R.), pelo Departamento de Ciência e Tecnologia da Província de Guangdong (Grant No. 2019B090905003 e 2019A0102006), pelo Departamento de Ciência e Tecnologia de Guangzhou (Grant No. 202102020110), pelo Shenzhen Science and Technology Program (Grant No. KQTD20180411143628272 para Sh.L.).

A linha de P. americana foi inicialmente fornecida pelo Dr. Huiling Hao. Esta espécie tem sido mantida com endogamia por 30 anos9.
1. Incubação e alimentação de P. americana
<ol><li>Colete oothecae fresco (imediatamente pós-colocação de ovos) de P. americana e incubar na incubadora escura a 25 °C e 60% de umidade por ~25 dias. Em seguida, aumente a temperatura e a umidade para 30 °C e 75% 3 dias antes do eclosão.<...

<ol>
	<li>Miller, S. C., Miyata, K., Brown, S. J., Tomoyasu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissecting+systemic+RNA+interference+in+the+red+flour+beetle+Tribolium+castaneum:+Parameters+affecting+the+efficiency+of+RNAi.">Dissecting systemic RNA interference in the red flour beetle Tribolium castaneum: Parameters affecting the efficiency of RNAi.</a> PloS One. 7 (10), 47431 (2012).</li><li>Fire, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potent+and+specific+genetic+interference+by+double-stranded+RNA+in+Caenorhabditis+elegans.">Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans.</a> Nature. 391 (6669), 806-811 (1998).</li><li>Ambesajir, A., Kaushik, A., Kaushik, J. J., Petros, S. 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B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+interference+(RNAi)+induced+gene+silencing:+A+promising+approach+of+hi-tech+plant+breeding.">RNA interference (RNAi) induced gene silencing: A promising approach of hi-tech plant breeding.</a> International Journal of Biological Sciences. 10 (10), 1150-1158 (2014).</li><li>Bell&#233;s, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+Drosophila:+RNAi+in+vivo+and+functional+genomics+in+insects.">Beyond Drosophila: RNAi in vivo and functional genomics in insects.</a> Annual Review of Entomology. 55, 111-128 (2010).</li><li>French, A. S., Meisner, S., Liu, H., Weckstr&#246;m, M., Torkkeli, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptome+analysis+and+RNA+interference+of+cockroach+phototransduction+indicate+three+opsins+and+suggest+a+major+role+for+TRPL+channels.">Transcriptome analysis and RNA interference of cockroach phototransduction indicate three opsins and suggest a major role for TRPL channels.</a> Frontiers in Physiology. 6, 207 (2015).</li><li>Hennenfent, A., Liu, H., Torkkeli, P. H., French, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+interference+supports+a+role+for+Nanchung-Inactive+in+mechanotransduction+by+the+cockroach,+Periplaneta+americana,+tactile+spine.">RNA interference supports a role for Nanchung-Inactive in mechanotransduction by the cockroach, Periplaneta americana, tactile spine.</a> Invertebrate Neuroscience: IN. 20 (1), 1 (2020).</li><li>Immonen, E. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EAG+channels+expressed+in+microvillar+photoreceptors+are+unsuited+to+diurnal+vision.">EAG channels expressed in microvillar photoreceptors are unsuited to diurnal vision.</a> The Journal of Physiology. 595 (16), 5465-5479 (2017).</li><li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genomic+and+functional+landscapes+of+developmental+plasticity+in+the+American+cockroach.">The genomic and functional landscapes of developmental plasticity in the American cockroach.</a> Nature Communications. 9 (1), 1008 (2018).</li><li>Zhao, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Grainy+head+signaling+regulates+epithelium+development+and+ecdysis+in+Blattella+germanica.">Grainy head signaling regulates epithelium development and ecdysis in Blattella germanica.</a> Insect Science. 28 (2), 485-494 (2021).</li><li>Lozano, J., Belles, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conserved+repressive+function+of+Kr&#252;ppel+homolog+1+on+insect+metamorphosis+in+hemimetabolous+and+holometabolous+species.">Conserved repressive function of Kr&#252;ppel homolog 1 on insect metamorphosis in hemimetabolous and holometabolous species.</a> Scientific Reports. 1, 163 (2011).</li><li>Philip, B. N., Tomoyasu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+knockdown+analysis+by+double-stranded+RNA+injection.">Gene knockdown analysis by double-stranded RNA injection.</a> Methods in Molecular Biology (Clifton, N. J). 772, 471-497 (2011).</li><li>Zheng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPR+interference-based+specific+and+efficient+gene+inactivation+in+the+brain.">CRISPR interference-based specific and efficient gene inactivation in the brain.</a> Nature Neuroscience. 21 (3), 447-454 (2018).</li><li>Garbutt, J. S., Bell&#233;s, X., Richards, E. H., Reynolds, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistence+of+double-stranded+RNA+in+insect+hemolymph+as+a+potential+determiner+of+RNA+interference+success:+Evidence+from+Manduca+sexta+and+Blattella+germanica.">Persistence of double-stranded RNA in insect hemolymph as a potential determiner of RNA interference success: Evidence from Manduca sexta and Blattella germanica.</a> Journal of Insect Physiology. 59 (2), 171-178 (2013).</li><li>Parrish, S., Fleenor, J., Xu, S., Mello, C., Fire, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+anatomy+of+a+dsRNA+trigger:+differential+requirement+for+the+two+trigger+strands+in+RNA+interference.">Functional anatomy of a dsRNA trigger: differential requirement for the two trigger strands in RNA interference.</a> Molecular Cell. 6 (5), 1077-1087 (2000).</li><li>Lemonds, T. R., Liu, J., Popadi&#263;, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+contribution+of+the+melanin+pathway+to+overall+body+pigmentation+during+ontogenesis+of+Periplaneta+americana.">The contribution of the melanin pathway to overall body pigmentation during ontogenesis of Periplaneta americana.</a> Insect Science. 23 (4), 513-519 (2016).</li><li>Jackson, A. L., Linsley, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noise+amidst+the+silence:+Off-target+effects+of+siRNAs.">Noise amidst the silence: Off-target effects of siRNAs.</a> Trends in Genetics: TIG. 20 (11), 521-524 (2004).</li><li>Patel, M., Peter, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+DISE-inducing+shRNAs+by+monitoring+cellular+responses.">Identification of DISE-inducing shRNAs by monitoring cellular responses.</a> Cell Cycle (Georgetown, Tex). 17 (4), 506-514 (2018).</li><li>Vent&#243;s-Alfonso, A., Ylla, G., Monta&#241;es, J. C., Belles, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNMT1+promotes+genome+methylation+and+early+embryo+development+in+cockroaches.">DNMT1 promotes genome methylation and early embryo development in cockroaches.</a> iScience. 23 (12), 101778 (2020).</li><li>Wang, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variation+in+RNAi+efficacy+among+insect+species+is+attributable+to+dsRNA+degradation+in+vivo.">Variation in RNAi efficacy among insect species is attributable to dsRNA degradation in vivo.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 77, 1-9 (2016).</li><li>Bi, F., Liu, N., Small Fan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=interfering+RNA:+A+new+tool+for+gene+therapy.">interfering RNA: A new tool for gene therapy.</a> Current Gene Therapy. 3 (5), 411-417 (2003).</li></ol>

Este relatório descreveu uma estratégia metodológica passo a passo da RNAi em P. americana; note-se que também pode ser aplicado a outras baratas (Blattella germanica, por exemplo) e muitos outros insetos com pequenas alterações. No entanto, a eficiência de silenciamento genético da RNAi nem sempre é alta o suficiente, com uma desvantagem óbvia em comparação com a estratégia de nocaute genético13. O seguinte efeito residual do nível genético pode interferir com os...

A interferência de RNA (RNAi), um mecanismo evolutivamente conservado, gradualmente se torna uma ferramenta essencial de reversão genética para inibir a expressão genética em muitos organismos1, uma vez que Andrew Fire e Craig Mello2 desenvolveram a estratégia de silêncio genético mediado por duplar (dsRNA). dsRNA é cortado em fragmentos de 21-23 nucleotídeos, pequenas RNAs interferentes (siRNAs), pela enzima Dicer em células para ativar a via RNAi. Em seguida, siRNAs são incorporadas ao complexo de silenciamento induzido pelo RNA (RISC), que casa o mRNA alvo, causa decote mRNA e, finalmente, resulta na perda da função genética 3,4,5. Entre as espécies de insetos, muitos experimentos sistêmicos rnai foram relatados até agora em muitas ordens de insetos, como Orthoptera, Isoptera, Hemiptera, Coleoptera, Neuroptera, Diptera, Hymenoptera, Lepidoptera e Blattodea 5,6,7,8.
As baratas (Blattaria) são uma família essencial de insetos em estudos de desenvolvimento e metamórficos com seus ciclos de crescimento rápido, forte adaptabilidade ao meio ambiente e alta plasticidadede desenvolvimento 9. Antes de descobrir que a RNAi era compatível com baratas, pesquisas anteriores focavam apenas na prevenção e controle de baratas devido à escassez de técnicas de manipulação genética em baratas. A estrutura única da ootheca da barata tornou desafiador realizar o nocaute genético baseado em injeção de embriões com o sistema CRISPR-Cas9. Além disso, a maioria dos tecidos em baratas (como P. americana) apresenta robusta resposta sistêmica RNAi, permitindo a rápida geração de fenótipos disfuncionais injetando um ou mais dsRNAs 9,10,11. Essas características fizeram da RNAi uma técnica indispensável em pesquisa funcional genética em P. americana.
Embora tenha sido relatado o uso de RNAi em pesquisa genética funcional em P. americana , não foi relatada nenhuma descrição detalhada ou passo a passo. Este relatório fornece uma diretriz operacional passo a passo para rnai em P. americana, útil para o estudo da função genética em outras baratas. Além disso, este guia não se limita a Blattodea e pode ser aplicado a muitos outros insetos com pequenas modificações.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>701 N 10 &#181;L Syr (26s/51/2)</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>PN:80300</td>
			<td>Injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Ningbo Jiangnan Instrument Factory</td>
			<td>RXZ-380A-LED</td>
			<td>For cockroaches hatching and feeding</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-injection pump</td>
			<td>Alcott Biotechnology</td>
			<td>ALC-IP600</td>
			<td>Injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pTOPO-Blunt Cloning Kit</td>
			<td>Aidlab Biotechnology</td>
			<td>CV16</td>
			<td>For Gene clonging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>quantitative Real-Time PCR Systems</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>CFX Connect</td>
			<td>For qRT-PCR analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T7 RiboMAX Express RNAi System</td>
			<td>Promega</td>
			<td>P1700</td>
			<td>For dsRNA synthesis, which contains Rnase A Solution (4 &#956;g/&#956;L), Sodium Acetate, 3.0M (pH 5.2), Enzyme Mix, T7 Express, Nuclease-Free water, Express T7 2x Buffer, RQ1 RNase-Free DNase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermal Cyclers</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>S1000</td>
			<td>For DNA amplification</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

applications of rna interference in american cockroach

Baratas, uma praga sanitária, são espécies essenciais em estudos de desenvolvimento de insetos e metamórficos devido à sua fácil alimentação e características hemimetabólicas. Ao todo com sequências de genomas bem anotadas, essas vantagens fizeram da barata americana Periplaneta americana, um importante modelo de insetos hemimetados. Limitado pela escassez de estratégia de nocaute, o knockdown genético baseado em RNA eficaz (RNAi) torna-se uma técnica indispensável na pesquisa genética funcional da P. americana. O presente protocolo descreve as técnicas de operação RNAi em P. americana. O protocolo inclui (1) seleção do P. americana em estágios de desenvolvimento adequados, (2) preparação para a configuração da injeção, (3) injeção de dsRNA e (4) detecção de eficiência de knockdown genético. RNAi é uma poderosa ferramenta genética reversa em P. americana. A maioria dos tecidos P. americanas são sensíveis ao dsRNA extracelular. Sua simplicidade permite que os pesquisadores obtenham rapidamente fenótipos disfuncionais sob uma ou múltiplas injeções de dsRNA, permitindo que os pesquisadores usem melhor o P. americana para estudos de desenvolvimento e metamórficos.

A figura 1 mostra uma injeção bem sucedida. A seringa de microinjeção com uma agulha de micro diâmetro deve ser colocada horizontalmente no propulsor (Figura 1A). A agulha é inserida através da lacuna entre duas somitas abdominais horizontalmente contra a epiderme (Figura 1B). Certifique-se de que o líquido vai para o abdômen P. americana . O ângulo muito íngreme da agulha danificará os órgãos interno...

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Applications of RNA Interference in American Cockroach

O presente protocolo descreve as diretrizes passo a passo para as técnicas de operação rnai em P. americana.

Aplicações de interferência de RNA na barata americana

Cockroaches, a sanitary pest, are essential species in insect developmental and metamorphic studies due to their easy feeding and hemimetabolous ...

O protocolo fornece uma maneira simples de estudar baratas americanas. Uma praga sanitária comum e um inseto benéfico para a medicina tradicional chinesa. Ajudará a explorar os mecanismos moleculares de múltiplas atividades de vida de baratas americanas derrubando genes específicos.A principal vantagem desta tecnologia é que ela pode derrubar genes em baratas americanas ou outros insetos similares que não são adequados para a edição de genes. Essa tecnologia pode ser usada para explorar vários campos, como a regulação genética e epigenética, processo de desenvolvimento de tecidos, regeneração de apêndices, comportamento de acasalamento e outros lados interessantes da barata americana. Esta tecnologia é fácil de operar e versátil.Sugerimos manter os animais saudáveis durante o tratamento de injeção de DSRA. Acredito que os novatos podem facilmente dominar essa técnica depois de várias sessões de treino. Para começar, separe as ninfas eclodidas da oothecae com uma peneira de abertura de quatro milímetros.Escolha o P.americana recém-maltado branco com um tubo de vidro. Coloque o P.americana em novos recipientes e aguarde o estágio correto para o tratamento. No sistema de reação, adicione 10 microliters de tampão T7 2X, 2 microliters do T7 Express Enzima Mix e dois microgramas de produto PCR.Finalmente, compõem o volume total para 20 microliters com água dupla destilada. Misture suavemente de cabeça para baixo manualmente e incubar a 37 graus Celsius por 30 minutos, depois 70 graus Celsius por 10 minutos. Diluir 4 microgramas por microliter RNase Uma solução com água DEPC a uma razão de 1 a 200.Em seguida, adicione 1 microliter de uma unidade por microliter RQ1 RNase Free Dnase e 1 microliter de solução RNase A diluída ao sistema. Incubar a 37 graus Celsius por 30 minutos. Em seguida, adicione 10% do volume total de acetato de sódio e três volumes do volume total de isopropanol.Misture suavemente de cabeça para baixo manualmente, em seguida, coloque no gelo por cinco minutos e centrífuga a 13.000 g por 10 minutos a 4 graus Celsius. Remova o supernatante com uma pipeta. Em seguida, lave o resíduo com 75% de etanol, com 25% de água tratada DEPC, depois centrífuga a 13.000 g por 5 minutos a 4 graus Celsius.Retire o supernasce novamente, o ar seque a pelota por 15 minutos em temperatura ambiente. Em seguida, dissolva o RNA duplo encalhado com cerca de 100 microlitres de água DEPC e dilui-o para a concentração final de 2 microgramas por microliter. Configure o programa na bomba de microinjeção para garantir que o volume de cada injeção seja consistente.Em seguida, limpe a seringa enchendo-a com água DEPC 8 a 10 vezes. Instale a seringa de 10 microliter na bomba de micro injeção. Em seguida, inicie a bomba e encha a seringa com 10 microliters de solução RNA duplamente encalhada.Anestesiar as baratas com dióxido de carbono, depois pegá-las suavemente com pinças e entregar a barata em direção à agulha à mão. Em seguida, insira a agulha através da lacuna entre dois somitas abdominais horizontalmente contra a epiderme. Injete a solução de RNA duplamente encalhada na barata garantindo que a ponta da agulha esteja o mais próxima possível da epiderme para evitar danificar órgãos internos.Finalmente, puxe a ponta da agulha. Coloque as baratas injetadas em recipientes limpos de bioensaio. Espere cerca de 10 a 20 minutos para deixá-los se recuperar dos efeitos do dióxido de carbono.Rotule os recipientes com a data de injeção, tipo e dose de RNA duplo encalhado e idade do P.americana. Ddc ou DOPA decarboxilase e Dpp ou genes decapentagáicos foram selecionados como dois exemplos para observar o fenótipo das baratas malteadas após injeção dupla de RNA encalhada e dsMocK que não tem alvo nos animais foi tomado como um controle negativo. A eficiência rnai foi detectada pelo QRT PCR.Os genes foram significativamente derrubados com um valor P inferior a 0,01 para dsDdc e menos de 0,05 para dsDpp. P.americana com genes Ddc knockdown teve a epiderme branca devido à melanização bloqueada. No experimento com injeções de dsDpp, o RNAi interrompeu a regeneração dos membros.Os insetos devem ser saudáveis e injetados sem danos. Esta tecnologia fornece uma maneira simples de explorar funções genéticas para insetos que não podem ser editados por genes, como barata americana.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Transcriptional Analysis by Nascent RNA FISH of In Vivo Trophoblast Giant Cells or In Vitro Short-term Cultures of Ectoplacental Cone Explants

Transcriptional  Analysis by Nascent RNA FISH of In Vivo Trophoblast Giant Cells or In Vitro Short-term Cultures of Ectoplacental Cone Explants

Análise transcricional por RNA Nascente PEIXES de<em&gt; In Vivo</em&gt; Células trofoblásticas gigantes ou<em&gt; In Vitro</em&gt; Culturas de curto prazo de Ectoplacental Cone explantes

The placenta derives from one extra-embryonic lineage, the trophectoderm. In the peri-implantation murine blastocyst, mural trophectoderm cells ...

Biologia do Desenvolvimento

A Modified Trier Social Stress Test for Vulnerable Mexican American Adolescents

Um Teste de Stress Social Modificado de Trier para Vulneráveis ​​Mexicano-Adolescentes

The Trier Social Stress Test (TSST) is a well validated and widely used social stressor that has been shown to induce a 2-4 fold increase in cortisol, the ...

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissecção e imunofluorescência coloração de cogumelo corpo e fotoreceptor neurônios em cérebros adultos Drosophila melanogaster

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the ...

Processing of Human Cardiac Tissue Toward Extracellular Matrix Self-assembling Hydrogel for In Vitro and In Vivo Applications

Processing of Human Cardiac Tissue Toward Extracellular Matrix Self-assembling Hydrogel for In Vitro and In Vivo Applications

Processamento do tecido cardíaco humano em direção a matriz extracelular auto montagem hidrogel para In Vitro e In Vivo de aplicações

Acellular extracellular matrix preparations are useful for studying cell-matrix interactions and facilitate regenerative cell therapy applications. ...

Genetic Engineering of Primary Mouse Intestinal Organoids Using Magnetic Nanoparticle Transduction Viral Vectors for Frozen Sectioning

Engenharia genética de organóides intestinais do camundongo primário usando vetores virais de transdução de nanopartículas magnéticas para seccionamento congelado

Intestinal organoid cultures provide a unique opportunity to investigate intestinal stem cell and crypt biology in vitro, although efficient approaches to ...

Thin Film Composite Silicon Elastomers for Cell Culture and Skin Applications: Manufacturing and Characterization

Fina película composta de silício elastômeros para aplicações de pele e cultura de pilha: fabricação e caracterização

In this protocol, we present methods to fabricate thin elastomer composite films for advanced cell culture applications and for the development of skin ...

RNA-based Reprogramming of Human Primary Fibroblasts into Induced Pluripotent Stem Cells

Baseado em RNA reprogramação de fibroblastos humanos primários em células-tronco pluripotentes induzidas

Induced pluripotent stem cells (iPSCs) have proven to be a valuable tool to study human development and disease. Further advancing iPSCs as a regenerative ...

Dissection, Culture and Analysis of Primary Cranial Neural Crest Cells from Mouse for the Study of Neural Crest Cell Delamination and Migration

Dissecção, cultura e análise de células da crista neural craniana primária do mouse para o estudo de delaminação e migração de células de crista neural

Over the past several decades there has been an increased availability of genetically modified mouse models used to mimic human pathologies. However, the ...

Preparation of Small RNA Libraries for Sequencing from Early Mouse Embryos

Preparação de Pequenas Bibliotecas de RNA para Sequenciamento de Embriões de Camundongos Primitivos

MicroRNAs (miRNAs) are important for the complex regulation of cell fate decisions and developmental timing. In vivo studies of the contribution of miRNAs ...

A Protocol for Immunohistochemistry and RNA In-situ Distribution within Early Drosophila Embryo

A Protocol for Immunohistochemistry and RNA In-situ Distribution within Early Drosophila Embryo

Um Protocolo para Imunohistoquímica e Distribuição In-situ de RNA dentro do Embrião Drosophila Precoce

Calcium induced calcium release signaling (CICR) plays a critical role in many biological processes. Every cellular activity from cell proliferation and ...