Name: applications of rna interference in american cockroach
Uploaded: 2021-12-17T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Applications of RNA Interference in American Cockroach at JoVE.com

Detta arbete stöddes av National Natural Science Foundation of China (Grant Nos. 32070500, 31620103917, 31330072 och 31572325 till C.R., Sh.L.), av Natural Science Foundation of Guangdong Province (Grant No. 2021B1515020044 and 2020A15111267 to C.R.), av Department of Science and Technology i Guangdongprovinsen (Grant Nos. 2019B090905003 and 2019A0102006), av Department of Science and Technology i Guangzhou (Grant No. 202102020110), av Shenzhen Science and Technology Program (Grant No. KQTD20180411143628272 till Sh.L.).

Linjen av P. americana tillhandahölls ursprungligen av Dr. Huiling Hao. Denna art har bibehållits med inavel i 30 år9.
1. Kläckning och utfodring av P. americana
<ol><li>Samla färsk oothecae (omedelbart efter äggläggning) av P. americana och inkubera i den mörka inkubatorn vid 25 ° C och 60% fuktighet i ~ 25 dagar. Öka sedan temperaturen och luftfuktigheten till 30 °C och 75 % 3 dagar före kläckning.</li>
	<li>A...

<ol>
	<li>Miller, S. C., Miyata, K., Brown, S. J., Tomoyasu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissecting+systemic+RNA+interference+in+the+red+flour+beetle+Tribolium+castaneum:+Parameters+affecting+the+efficiency+of+RNAi.">Dissecting systemic RNA interference in the red flour beetle Tribolium castaneum: Parameters affecting the efficiency of RNAi.</a> PloS One. 7 (10), 47431 (2012).</li><li>Fire, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potent+and+specific+genetic+interference+by+double-stranded+RNA+in+Caenorhabditis+elegans.">Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans.</a> Nature. 391 (6669), 806-811 (1998).</li><li>Ambesajir, A., Kaushik, A., Kaushik, J. J., Petros, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+interference:+A+futuristic+tool+and+its+therapeutic+applications.">RNA interference: A futuristic tool and its therapeutic applications.</a> Saudi Journal of Biological Sciences. 19 (4), 395-403 (2012).</li><li>Younis, A., Siddique, M. I., Kim, C. K., Lim, K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+interference+(RNAi)+induced+gene+silencing:+A+promising+approach+of+hi-tech+plant+breeding.">RNA interference (RNAi) induced gene silencing: A promising approach of hi-tech plant breeding.</a> International Journal of Biological Sciences. 10 (10), 1150-1158 (2014).</li><li>Bell&#233;s, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+Drosophila:+RNAi+in+vivo+and+functional+genomics+in+insects.">Beyond Drosophila: RNAi in vivo and functional genomics in insects.</a> Annual Review of Entomology. 55, 111-128 (2010).</li><li>French, A. S., Meisner, S., Liu, H., Weckstr&#246;m, M., Torkkeli, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptome+analysis+and+RNA+interference+of+cockroach+phototransduction+indicate+three+opsins+and+suggest+a+major+role+for+TRPL+channels.">Transcriptome analysis and RNA interference of cockroach phototransduction indicate three opsins and suggest a major role for TRPL channels.</a> Frontiers in Physiology. 6, 207 (2015).</li><li>Hennenfent, A., Liu, H., Torkkeli, P. H., French, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+interference+supports+a+role+for+Nanchung-Inactive+in+mechanotransduction+by+the+cockroach,+Periplaneta+americana,+tactile+spine.">RNA interference supports a role for Nanchung-Inactive in mechanotransduction by the cockroach, Periplaneta americana, tactile spine.</a> Invertebrate Neuroscience: IN. 20 (1), 1 (2020).</li><li>Immonen, E. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EAG+channels+expressed+in+microvillar+photoreceptors+are+unsuited+to+diurnal+vision.">EAG channels expressed in microvillar photoreceptors are unsuited to diurnal vision.</a> The Journal of Physiology. 595 (16), 5465-5479 (2017).</li><li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genomic+and+functional+landscapes+of+developmental+plasticity+in+the+American+cockroach.">The genomic and functional landscapes of developmental plasticity in the American cockroach.</a> Nature Communications. 9 (1), 1008 (2018).</li><li>Zhao, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Grainy+head+signaling+regulates+epithelium+development+and+ecdysis+in+Blattella+germanica.">Grainy head signaling regulates epithelium development and ecdysis in Blattella germanica.</a> Insect Science. 28 (2), 485-494 (2021).</li><li>Lozano, J., Belles, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conserved+repressive+function+of+Kr&#252;ppel+homolog+1+on+insect+metamorphosis+in+hemimetabolous+and+holometabolous+species.">Conserved repressive function of Kr&#252;ppel homolog 1 on insect metamorphosis in hemimetabolous and holometabolous species.</a> Scientific Reports. 1, 163 (2011).</li><li>Philip, B. N., Tomoyasu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+knockdown+analysis+by+double-stranded+RNA+injection.">Gene knockdown analysis by double-stranded RNA injection.</a> Methods in Molecular Biology (Clifton, N. J). 772, 471-497 (2011).</li><li>Zheng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPR+interference-based+specific+and+efficient+gene+inactivation+in+the+brain.">CRISPR interference-based specific and efficient gene inactivation in the brain.</a> Nature Neuroscience. 21 (3), 447-454 (2018).</li><li>Garbutt, J. S., Bell&#233;s, X., Richards, E. H., Reynolds, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistence+of+double-stranded+RNA+in+insect+hemolymph+as+a+potential+determiner+of+RNA+interference+success:+Evidence+from+Manduca+sexta+and+Blattella+germanica.">Persistence of double-stranded RNA in insect hemolymph as a potential determiner of RNA interference success: Evidence from Manduca sexta and Blattella germanica.</a> Journal of Insect Physiology. 59 (2), 171-178 (2013).</li><li>Parrish, S., Fleenor, J., Xu, S., Mello, C., Fire, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+anatomy+of+a+dsRNA+trigger:+differential+requirement+for+the+two+trigger+strands+in+RNA+interference.">Functional anatomy of a dsRNA trigger: differential requirement for the two trigger strands in RNA interference.</a> Molecular Cell. 6 (5), 1077-1087 (2000).</li><li>Lemonds, T. R., Liu, J., Popadi&#263;, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+contribution+of+the+melanin+pathway+to+overall+body+pigmentation+during+ontogenesis+of+Periplaneta+americana.">The contribution of the melanin pathway to overall body pigmentation during ontogenesis of Periplaneta americana.</a> Insect Science. 23 (4), 513-519 (2016).</li><li>Jackson, A. L., Linsley, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noise+amidst+the+silence:+Off-target+effects+of+siRNAs.">Noise amidst the silence: Off-target effects of siRNAs.</a> Trends in Genetics: TIG. 20 (11), 521-524 (2004).</li><li>Patel, M., Peter, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+DISE-inducing+shRNAs+by+monitoring+cellular+responses.">Identification of DISE-inducing shRNAs by monitoring cellular responses.</a> Cell Cycle (Georgetown, Tex). 17 (4), 506-514 (2018).</li><li>Vent&#243;s-Alfonso, A., Ylla, G., Monta&#241;es, J. C., Belles, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNMT1+promotes+genome+methylation+and+early+embryo+development+in+cockroaches.">DNMT1 promotes genome methylation and early embryo development in cockroaches.</a> iScience. 23 (12), 101778 (2020).</li><li>Wang, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variation+in+RNAi+efficacy+among+insect+species+is+attributable+to+dsRNA+degradation+in+vivo.">Variation in RNAi efficacy among insect species is attributable to dsRNA degradation in vivo.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 77, 1-9 (2016).</li><li>Bi, F., Liu, N., Small Fan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=interfering+RNA:+A+new+tool+for+gene+therapy.">interfering RNA: A new tool for gene therapy.</a> Current Gene Therapy. 3 (5), 411-417 (2003).</li></ol>

Denna rapport beskrev en metodologisk steg-för-steg-RNAi-strategi i P. americana; Observera att det också kan appliceras på andra kackerlackor (till exempel Blattella germanica ) och många andra insekter med mindre förändringar. RNAi: s gendämpningseffektivitet är emellertid inte alltid tillräckligt hög, med en uppenbar nackdel jämfört med genknockoutstrategin13. Följande kvarvarande effekt av gennivå kan störa de verkliga fenotyperna. För att säkerställa att RN...

RNA-interferens (RNAi), en evolutionärt bevarad mekanism, blir gradvis ett viktigt omvänd genetiskt verktyg för att hämma genuttryck i många organismer1, eftersom Andrew Fire och Craig Mello2 utvecklade den dubbelsträngade RNA (dsRNA) medierade gentystningsstrategin. dsRNA klyvs i fragment av 21-23 nukleotider, små interfererande RNA (siRNA), av enzymet Dicer i celler för att aktivera RNAi-vägen. Därefter införlivas siRNA i det RNA-inducerade ljuddämpningskomplexet (RISC), som kopplas till mål-mRNA, orsakar mRNA-klyvning och slutligen resulterar i förlust av genfunktion 3,4,5. Bland insektsarterna har många systemiska RNAi-experiment hittills rapporterats i många insektsordningar, såsom Orthoptera, Isoptera, Hemiptera, Coleoptera, Neuroptera, Diptera, Hymenoptera, Lepidoptera och Blattodea 5,6,7,8.
Kackerlackor (Blattaria) är en viktig insektsfamilj i utvecklings- och metamorfa studier med sina snabba tillväxtcykler, starka anpassningsförmåga till miljön och hög utvecklingsplasticitet9. Innan man upptäckte att RNAi var kompatibel med kackerlackor, fokuserade tidigare forskning endast på förebyggande och kontroll av kackerlacka på grund av brist på genetiska manipulationstekniker i kackerlackor. Kackerlackan oothecas unika struktur gjorde det utmanande att utföra embryoinjektionsbaserad genknockout med CRISPR-Cas9-systemet. Dessutom visar de flesta vävnader i kackerlackor (såsom P. americana) robust systemiskt RNAi-svar, vilket möjliggör snabb generering av dysfunktionella fenotyper genom att injicera en eller flera riktade dsRNA 9,10,11. Dessa egenskaper gjorde RNAi till en oumbärlig teknik inom genfunktionell forskning i P. americana.
Även om användningen av RNAi i funktionell genforskning i P. americana har rapporterats, var ingen detaljerad eller steg-för-steg-beskrivning tillgänglig. Denna rapport ger en steg-för-steg operativ riktlinje för RNAi i P. americana, användbar för genfunktionsstudie i andra kackerlackor. Dessutom är denna guide inte begränsad till Blattodea och kan tillämpas på många andra insekter med mindre modifieringar.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>701 N 10 &#181;L Syr (26s/51/2)</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>PN:80300</td>
			<td>Injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Ningbo Jiangnan Instrument Factory</td>
			<td>RXZ-380A-LED</td>
			<td>For cockroaches hatching and feeding</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-injection pump</td>
			<td>Alcott Biotechnology</td>
			<td>ALC-IP600</td>
			<td>Injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pTOPO-Blunt Cloning Kit</td>
			<td>Aidlab Biotechnology</td>
			<td>CV16</td>
			<td>For Gene clonging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>quantitative Real-Time PCR Systems</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>CFX Connect</td>
			<td>For qRT-PCR analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T7 RiboMAX Express RNAi System</td>
			<td>Promega</td>
			<td>P1700</td>
			<td>For dsRNA synthesis, which contains Rnase A Solution (4 &#956;g/&#956;L), Sodium Acetate, 3.0M (pH 5.2), Enzyme Mix, T7 Express, Nuclease-Free water, Express T7 2x Buffer, RQ1 RNase-Free DNase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermal Cyclers</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>S1000</td>
			<td>For DNA amplification</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

applications of rna interference in american cockroach

Kackerlackor, ett sanitärt skadedjur, är viktiga arter i insektsutvecklings- och metamorfa studier på grund av deras enkla utfodring och hemimetabola egenskaper. Sammantaget med väl kommenterade genomsekvenser har dessa fördelar gjort amerikansk kackerlacka, Periplaneta americana, till en viktig hemimetabol insektsmodell. Begränsad av bristen på knockout-strategi blir effektiv RNA-interferens (RNAi) -baserad genknockdown en oumbärlig teknik i funktionell genforskning av P. americana. Föreliggande protokoll beskriver RNAi-operationsteknikerna i P. americana. Protokollet innefattar (1) val av P. americana vid lämpliga utvecklingsstadier, (2) förberedelse för injektionsinställningen, (3) dsRNA-injektion och (4) detektering av gennedslagningseffektivitet. RNAi är ett kraftfullt omvänd genetiskt verktyg i P. americana. Majoriteten av P. americana vävnader är känsliga för extracellulärt dsRNA. Dess enkelhet gör det möjligt för forskare att snabbt få dysfunktionella fenotyper under en eller flera riktade dsRNA-injektioner, vilket gör det möjligt för forskare att bättre använda P. americana för utvecklings- och metamorfa studier.

Figur 1 visar en lyckad injektion. Mikroinjektionssprutan med en nål med mikrodiameter ska placeras horisontellt på boostern (figur 1A). Nålen sätts in via gapet mellan två buksomiter horisontellt mot överhuden (figur 1B). Se till att vätskan går in i P. americana buken. Nålens för branta vinkel kommer att skada de inre organen (figur 1C), och felaktig injektion leder till l?...

Watch this Scientific Journal Video about Applications of RNA Interference in American Cockroach at JoVE.com

Applications of RNA Interference in American Cockroach

Detta protokoll beskriver steg-för-steg-riktlinjer för RNAi-operationsteknikerna i P. americana.

Tillämpningar av RNA-interferens i amerikansk kackerlacka

Cockroaches, a sanitary pest, are essential species in insect developmental and metamorphic studies due to their easy feeding and hemimetabolous ...

Protokollet ger ett enkelt sätt att studera amerikanska kackerlackor. En vanlig sanitär skadedjur och en fördelaktig insekt för traditionell kinesisk medicin. Det kommer att bidra till att utforska de molekylära mekanismerna för flera livsaktiviteter hos amerikanska kackerlackor genom att slå ner specifika gener.Den största fördelen med denna teknik är att den kan slå ner gener i amerikansk kackerlacka eller andra liknande insekter som inte är lämpliga för genredigering. Denna teknik kan användas för att utforska olika områden som genetisk och epigenetisk reglering, utvecklingsprocess av vävnader, regenerering av bilagor, parningsbeteende och andra intressanta sidor av amerikansk kackerlacka. Denna teknik är enkel att använda och mångsidig.Vi föreslår att djuren är friska under DSRA-injektionsbehandling. Jag tror att nybörjare lätt kan behärska denna teknik efter flera träningspass. För att börja, separera de kläckta nymferna från oothecae med en fyra millimeter bländarsikt.Plocka ut den vita nymaltade P.americana med ett glasrör. Placera P.americana i nya behållare och vänta på rätt stadium för behandling. I reaktionssystemet tillsätt 10 mikroliter T7 2X buffert, 2 mikroliter av T7 Express Enzyme Mix och två mikrogram PCR-produkt.Slutligen utgör den totala volymen till 20 mikroliter med dubbelt destillerat vatten. Blanda försiktigt upp och ner manuellt och inkubera vid 37 grader Celsius i 30 minuter, sedan 70 grader Celsius i 10 minuter. Späd 4 mikrogram per mikroliter RNas A-lösning med DEPC-vatten i ett förhållande av 1 till 200.Tillsätt sedan 1 mikroliter av en enhet per mikroliter RQ1 RNasfri dnas och 1 mikroliter utspädd RNas A-lösning till systemet. Inkubera vid 37 grader Celsius i 30 minuter. Tillsätt sedan 10% av den totala volymen natriumacetat och tre volymer av den totala volymen isopropanol.Blanda försiktigt upp och ner manuellt, lägg sedan på is i fem minuter och centrifugera vid 13 000 g i 10 minuter vid 4 grader Celsius. Ta bort supernatanten med en pipett. Tvätta sedan återstoden med 75% etanol, med 25 procent DEPC-behandlat vatten, centrifug sedan vid 13 000 g i 5 minuter vid 4 grader Celsius.Ta bort supernatant igen, lufttorka pelletsen i 15 minuter vid rumstemperatur. Lös sedan upp det dubbelsträngade RNA med cirka 100 mikroliter DEPC-vatten och späd det till den slutliga koncentrationen av 2 mikrogram per mikroliter. Ställ in programmet i mikroinjektionspumpen för att säkerställa att volymen för varje injektion är konsekvent.Rengör sedan sprutan genom att fylla den med DEPC-vatten 8 till 10 gånger. Installera sprutan på 10 mikroliter på mikroinsprutningspumpen. Starta sedan pumpen och fyll sprutan med 10 mikroliter dubbelsträngad RNA-lösning.Bedöva kackerlackorna med koldioxid, plocka sedan försiktigt upp dem med pincett och leverera kackerlacka mot nålen för hand. Sätt sedan in nålen via klyftan mellan två buksomiter horisontellt mot överhuden. Injicera den dubbelsträngade RNA-lösningen i kackerlacka och se till att nålspetsen är så nära epidermis som möjligt för att undvika att skada inre organ.Dra slutligen ut nålspetsen. Lägg de injicerade kackerlackorna i rena bioassaybehållare. Vänta i cirka 10 till 20 minuter för att låta dem återhämta sig från effekterna av koldioxid.Märk behållarna med datum för injektion, typ och dos av dubbelsträngat RNA och ålder av P.americana. Ddc- eller DOPA-dekarboxylas och Dpp- eller dekapentagegiska gener valdes som två exempel för att observera fenotypen hos de mältade kackerlackorna efter dubbelsträngad RNA-injektion och dsMocK som inte har något mål hos djuren togs som en negativ kontroll. RNAi-effektiviteten detekterades av qRT PCR.Generna slogs signifikant ner med ett P-värde på mindre än 0,01 för dsDdc och mindre än 0,05 för dsDpp. P.americana med knockdown Ddc-gener hade den vita epidermis på grund av blockerad melanisering. I experimentet med dsDpp-injektioner störde RNAi lemregenerering.Insekterna ska vara friska och injiceras utan skada. Denna teknik ger ett enkelt sätt att utforska genfunktioner för insekter som inte kan genredigeras som amerikansk kackerlacka.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Transcriptional Analysis by Nascent RNA FISH of In Vivo Trophoblast Giant Cells or In Vitro Short-term Cultures of Ectoplacental Cone Explants

Transcriptional  Analysis by Nascent RNA FISH of In Vivo Trophoblast Giant Cells or In Vitro Short-term Cultures of Ectoplacental Cone Explants

Transkriptions Analys av Nascent RNA FISH av<em&gt; In Vivo</em&gt; Trofoblast jätteceller eller<em&gt; In Vitro</em&gt; Korttids Kulturer av Ectoplacental Cone explants

The placenta derives from one extra-embryonic lineage, the trophectoderm. In the peri-implantation murine blastocyst, mural trophectoderm cells ...

A Modified Trier Social Stress Test for Vulnerable Mexican American Adolescents

Ett modifierat socialt stressprov för Trier för utsatta mexikanska amerikanska ungdomar

The Trier Social Stress Test (TSST) is a well validated and widely used social stressor that has been shown to induce a 2-4 fold increase in cortisol, the ...

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissektion och Immunofluorescerande färgning av svamp kropp och ljusmätare nervceller i vuxen Drosophila melanogaster hjärnor

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the ...

Processing of Human Cardiac Tissue Toward Extracellular Matrix Self-assembling Hydrogel for In Vitro and In Vivo Applications

Processing of Human Cardiac Tissue Toward Extracellular Matrix Self-assembling Hydrogel for In Vitro and In Vivo Applications

Bearbetning av mänskliga hjärtvävnad mot extracellulära Matrix självmonterande Hydrogel för In Vitro och In Vivo applikationer

Acellular extracellular matrix preparations are useful for studying cell-matrix interactions and facilitate regenerative cell therapy applications. ...

Genetic Engineering of Primary Mouse Intestinal Organoids Using Magnetic Nanoparticle Transduction Viral Vectors for Frozen Sectioning

Genteknik för primär mus intestinal Organoider med hjälp av magnetiska nanopartikel Transduction virala vektorer för frysta snittning

Intestinal organoid cultures provide a unique opportunity to investigate intestinal stem cell and crypt biology in vitro, although efficient approaches to ...

Thin Film Composite Silicon Elastomers for Cell Culture and Skin Applications: Manufacturing and Characterization

Thin Film sammansatta silikon elastomerer för cellodling och hud applikationer: tillverkning och karakterisering

In this protocol, we present methods to fabricate thin elastomer composite films for advanced cell culture applications and for the development of skin ...

RNA-based Reprogramming of Human Primary Fibroblasts into Induced Pluripotent Stem Cells

RNA-baserade omprogrammering av mänskliga primära fibroblaster till inducerade pluripotenta stamceller

Induced pluripotent stem cells (iPSCs) have proven to be a valuable tool to study human development and disease. Further advancing iPSCs as a regenerative ...

Dissection, Culture and Analysis of Primary Cranial Neural Crest Cells from Mouse for the Study of Neural Crest Cell Delamination and Migration

Dissektion, kultur och analys av primära kraniella neurala krön celler från musen för studiet av neurala Crest cell delaminering och migration

Over the past several decades there has been an increased availability of genetically modified mouse models used to mimic human pathologies. However, the ...

Preparation of Small RNA Libraries for Sequencing from Early Mouse Embryos

Beredning av små RNA-bibliotek för sekvensering från tidiga musembryon

MicroRNAs (miRNAs) are important for the complex regulation of cell fate decisions and developmental timing. In vivo studies of the contribution of miRNAs ...

A Protocol for Immunohistochemistry and RNA In-situ Distribution within Early Drosophila Embryo

A Protocol for Immunohistochemistry and RNA In-situ Distribution within Early Drosophila Embryo

Ett protokoll för immunohistokemi och RNA In-situ-distribution inom tidigt Drosophila-embryo

Calcium induced calcium release signaling (CICR) plays a critical role in many biological processes. Every cellular activity from cell proliferation and ...