Name: applications of rna interference in american cockroach
Uploaded: 2021-12-17T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Applications of RNA Interference in American Cockroach at JoVE.com

Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (Hibe No. 32070500, 31620103917, 31330072 ve C.R., Sh.L.'ye 31572325), Guangdong Eyaleti Doğa Bilimleri Vakfı (Hibe No. 2021B1515020044 ve 2020A1515011267 C.R.), Guangdong Eyaleti Bilim ve Teknoloji Bölümü (Hibe No. 2019B090905003 ve 2019A0102006), Guangzhou'daki Bilim ve Teknoloji Bölümü (Hibe No. 202102020110), Shenzhen Bilim ve Teknoloji Programı tarafından (Hibe No. KQTD20180411143628272 için Sh.L.).

P. americana çizgisi başlangıçta Dr. Huiling Hao tarafından sağlandı. Bu tür 30 yıldır akrabalık ile korunmaktadır9.
1. P. americana'nın kuluçkalanması ve beslenmesi
<ol><li>P. americana'nın taze oothecae'sini (yumurtlamadan hemen sonra) toplayın ve karanlık inkübatörde 25 ° C'de ve% 60 nemde ~ 25 gün boyunca inkübe edin . Daha sonra sıcaklığı ve nemi 30 ° C'ye ve% 75'e yumurtadan çıkmadan 3 gü...

<ol>
	<li>Miller, S. C., Miyata, K., Brown, S. J., Tomoyasu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissecting+systemic+RNA+interference+in+the+red+flour+beetle+Tribolium+castaneum:+Parameters+affecting+the+efficiency+of+RNAi.">Dissecting systemic RNA interference in the red flour beetle Tribolium castaneum: Parameters affecting the efficiency of RNAi.</a> PloS One. 7 (10), 47431 (2012).</li><li>Fire, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potent+and+specific+genetic+interference+by+double-stranded+RNA+in+Caenorhabditis+elegans.">Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans.</a> Nature. 391 (6669), 806-811 (1998).</li><li>Ambesajir, A., Kaushik, A., Kaushik, J. J., Petros, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+interference:+A+futuristic+tool+and+its+therapeutic+applications.">RNA interference: A futuristic tool and its therapeutic applications.</a> Saudi Journal of Biological Sciences. 19 (4), 395-403 (2012).</li><li>Younis, A., Siddique, M. I., Kim, C. K., Lim, K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+interference+(RNAi)+induced+gene+silencing:+A+promising+approach+of+hi-tech+plant+breeding.">RNA interference (RNAi) induced gene silencing: A promising approach of hi-tech plant breeding.</a> International Journal of Biological Sciences. 10 (10), 1150-1158 (2014).</li><li>Bell&#233;s, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+Drosophila:+RNAi+in+vivo+and+functional+genomics+in+insects.">Beyond Drosophila: RNAi in vivo and functional genomics in insects.</a> Annual Review of Entomology. 55, 111-128 (2010).</li><li>French, A. S., Meisner, S., Liu, H., Weckstr&#246;m, M., Torkkeli, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptome+analysis+and+RNA+interference+of+cockroach+phototransduction+indicate+three+opsins+and+suggest+a+major+role+for+TRPL+channels.">Transcriptome analysis and RNA interference of cockroach phototransduction indicate three opsins and suggest a major role for TRPL channels.</a> Frontiers in Physiology. 6, 207 (2015).</li><li>Hennenfent, A., Liu, H., Torkkeli, P. H., French, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+interference+supports+a+role+for+Nanchung-Inactive+in+mechanotransduction+by+the+cockroach,+Periplaneta+americana,+tactile+spine.">RNA interference supports a role for Nanchung-Inactive in mechanotransduction by the cockroach, Periplaneta americana, tactile spine.</a> Invertebrate Neuroscience: IN. 20 (1), 1 (2020).</li><li>Immonen, E. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EAG+channels+expressed+in+microvillar+photoreceptors+are+unsuited+to+diurnal+vision.">EAG channels expressed in microvillar photoreceptors are unsuited to diurnal vision.</a> The Journal of Physiology. 595 (16), 5465-5479 (2017).</li><li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genomic+and+functional+landscapes+of+developmental+plasticity+in+the+American+cockroach.">The genomic and functional landscapes of developmental plasticity in the American cockroach.</a> Nature Communications. 9 (1), 1008 (2018).</li><li>Zhao, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Grainy+head+signaling+regulates+epithelium+development+and+ecdysis+in+Blattella+germanica.">Grainy head signaling regulates epithelium development and ecdysis in Blattella germanica.</a> Insect Science. 28 (2), 485-494 (2021).</li><li>Lozano, J., Belles, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conserved+repressive+function+of+Kr&#252;ppel+homolog+1+on+insect+metamorphosis+in+hemimetabolous+and+holometabolous+species.">Conserved repressive function of Kr&#252;ppel homolog 1 on insect metamorphosis in hemimetabolous and holometabolous species.</a> Scientific Reports. 1, 163 (2011).</li><li>Philip, B. N., Tomoyasu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+knockdown+analysis+by+double-stranded+RNA+injection.">Gene knockdown analysis by double-stranded RNA injection.</a> Methods in Molecular Biology (Clifton, N. J). 772, 471-497 (2011).</li><li>Zheng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPR+interference-based+specific+and+efficient+gene+inactivation+in+the+brain.">CRISPR interference-based specific and efficient gene inactivation in the brain.</a> Nature Neuroscience. 21 (3), 447-454 (2018).</li><li>Garbutt, J. S., Bell&#233;s, X., Richards, E. H., Reynolds, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistence+of+double-stranded+RNA+in+insect+hemolymph+as+a+potential+determiner+of+RNA+interference+success:+Evidence+from+Manduca+sexta+and+Blattella+germanica.">Persistence of double-stranded RNA in insect hemolymph as a potential determiner of RNA interference success: Evidence from Manduca sexta and Blattella germanica.</a> Journal of Insect Physiology. 59 (2), 171-178 (2013).</li><li>Parrish, S., Fleenor, J., Xu, S., Mello, C., Fire, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+anatomy+of+a+dsRNA+trigger:+differential+requirement+for+the+two+trigger+strands+in+RNA+interference.">Functional anatomy of a dsRNA trigger: differential requirement for the two trigger strands in RNA interference.</a> Molecular Cell. 6 (5), 1077-1087 (2000).</li><li>Lemonds, T. R., Liu, J., Popadi&#263;, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+contribution+of+the+melanin+pathway+to+overall+body+pigmentation+during+ontogenesis+of+Periplaneta+americana.">The contribution of the melanin pathway to overall body pigmentation during ontogenesis of Periplaneta americana.</a> Insect Science. 23 (4), 513-519 (2016).</li><li>Jackson, A. L., Linsley, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noise+amidst+the+silence:+Off-target+effects+of+siRNAs.">Noise amidst the silence: Off-target effects of siRNAs.</a> Trends in Genetics: TIG. 20 (11), 521-524 (2004).</li><li>Patel, M., Peter, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+DISE-inducing+shRNAs+by+monitoring+cellular+responses.">Identification of DISE-inducing shRNAs by monitoring cellular responses.</a> Cell Cycle (Georgetown, Tex). 17 (4), 506-514 (2018).</li><li>Vent&#243;s-Alfonso, A., Ylla, G., Monta&#241;es, J. C., Belles, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNMT1+promotes+genome+methylation+and+early+embryo+development+in+cockroaches.">DNMT1 promotes genome methylation and early embryo development in cockroaches.</a> iScience. 23 (12), 101778 (2020).</li><li>Wang, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variation+in+RNAi+efficacy+among+insect+species+is+attributable+to+dsRNA+degradation+in+vivo.">Variation in RNAi efficacy among insect species is attributable to dsRNA degradation in vivo.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 77, 1-9 (2016).</li><li>Bi, F., Liu, N., Small Fan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=interfering+RNA:+A+new+tool+for+gene+therapy.">interfering RNA: A new tool for gene therapy.</a> Current Gene Therapy. 3 (5), 411-417 (2003).</li></ol>

Bu rapor, P. americana'da metodolojik bir adım adım RNAi stratejisini tanımladı; Not olarak, diğer hamamböceklerine (örneğin Blattella germanica ) ve küçük değişikliklerle diğer birçok böceğe de uygulanabilir. Bununla birlikte, RNAi'nin gen susturma etkinliği her zaman yeterince yüksek değildir, gen nakavt stratejisi13 ile karşılaştırıldığında belirgin bir dezavantaj vardır. Gen seviyesinin aşağıdaki kalıntı etkisi, gerçek fenotiplere müdahale ...

Evrimsel olarak korunmuş bir mekanizma olan RNA girişimi (RNAi), Andrew Fire ve Craig Mello2'nin çift sarmallı RNA (dsRNA) aracılı gen sessizliği stratejisini geliştirmesinden bu yana, yavaş yavaş birçok organizmada gen ekspresyonunu inhibe etmek için gerekli bir ters-genetik araç haline gelir1. dsRNA, RNAi yolunu aktive etmek için hücrelerdeki Dicer enzimi tarafından 21-23 nükleotid, küçük müdahale eden RNA'lar (siRNA'lar) fragmanlarına bölünür. Daha sonra siRNA'lar, hedef mRNA ile çiftleşen, mRNA bölünmesine neden olan ve son olarakgen fonksiyonunun 3,4,5 kaybına neden olan RNA kaynaklı susturma kompleksine (RISC) dahil edilir. Böcek türleri arasında, şimdiye kadar Orthoptera, Isoptera, Hemiptera, Coleoptera, Neuroptera, Diptera, Hymenoptera, Lepidoptera ve Blattodea 5,6,7,8 gibi birçok sistemik RNAi deneyi bildirilmiştir.
Hamamböceği (Blattaria), hızlı büyüme döngüleri, çevreye güçlü adaptasyonu ve yüksek gelişimsel plastisitesi9 ile gelişimsel ve metamorfik çalışmalarda önemli bir böcek ailesidir. RNAi'nin hamamböceği ile uyumlu olduğunu keşfetmeden önce, önceki araştırmalar hamamböceklerinde genetik manipülasyon tekniklerinin azlığı nedeniyle sadece hamamböceği önleme ve kontrolüne odaklandı. Hamamböceği ootheca'nın eşsiz yapısı, CRISPR-Cas9 sistemi ile embriyo enjeksiyonuna dayalı gen nakavtını gerçekleştirmeyi zorlaştırdı. Ayrıca, hamamböceklerindeki çoğu doku (P. americana gibi) sağlam sistemik RNAi yanıtı gösterir ve bir veya daha fazla dsRNA'yı 9,10,11 hedefleyerek disfonksiyonel fenotiplerin hızlı bir şekilde üretilmesine izin verir. Bu özellikler RNAi'yi P. americana'daki gen fonksiyonel araştırmalarında vazgeçilmez bir teknik haline getirdi.
RNAi'nin P. americana'daki fonksiyonel gen araştırmalarında kullanımı bildirilmiş olmasına rağmen, ayrıntılı veya adım adım bir açıklama mevcut değildi . Bu rapor, P. americana'daki RNAi için diğer hamamböceklerinde gen fonksiyonu çalışması için yararlı olan adım adım operasyonel bir kılavuz sunmaktadır. Ayrıca, bu kılavuz Blattodea ile sınırlı değildir ve küçük değişikliklerle diğer birçok böceğe uygulanabilir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>701 N 10 &#181;L Syr (26s/51/2)</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>PN:80300</td>
			<td>Injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Ningbo Jiangnan Instrument Factory</td>
			<td>RXZ-380A-LED</td>
			<td>For cockroaches hatching and feeding</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-injection pump</td>
			<td>Alcott Biotechnology</td>
			<td>ALC-IP600</td>
			<td>Injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pTOPO-Blunt Cloning Kit</td>
			<td>Aidlab Biotechnology</td>
			<td>CV16</td>
			<td>For Gene clonging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>quantitative Real-Time PCR Systems</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>CFX Connect</td>
			<td>For qRT-PCR analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T7 RiboMAX Express RNAi System</td>
			<td>Promega</td>
			<td>P1700</td>
			<td>For dsRNA synthesis, which contains Rnase A Solution (4 &#956;g/&#956;L), Sodium Acetate, 3.0M (pH 5.2), Enzyme Mix, T7 Express, Nuclease-Free water, Express T7 2x Buffer, RQ1 RNase-Free DNase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermal Cyclers</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>S1000</td>
			<td>For DNA amplification</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

applications of rna interference in american cockroach

Sıhhi bir haşere olan hamamböceği, kolay beslenme ve hemimetabolöz özellikleri nedeniyle böcek gelişimsel ve metamorfik çalışmalarında vazgeçilmez türlerdir. İyi açıklamalı genom dizileri ile birlikte, bu avantajlar Amerikan hamamböceği, Periplaneta americana'yı önemli bir hemimetabolöz böcek modeli haline getirmiştir. Nakavt stratejisinin yetersizliği ile sınırlı olarak, etkili RNA girişimi (RNAi) tabanlı gen nakavtı, P. americana'nın fonksiyonel gen araştırmalarında vazgeçilmez bir teknik haline gelir. Mevcut protokol P. americana'daki RNAi operasyon tekniklerini açıklamaktadır. Protokol, (1) uygun gelişim aşamalarında P . americana'nın seçimini, (2) enjeksiyon ayarına hazırlık, (3) dsRNA enjeksiyonu ve (4) gen nakavt verimliliği tespitini içerir. RNAi, P. americana'da güçlü bir ters genetik araçtır. P. americana dokularının çoğunluğu hücre dışı dsRNA'ya duyarlıdır. Sadeliği, araştırmacıların bir veya daha fazla hedefleme dsRNA enjeksiyonu altında işlevsiz fenotipleri hızlı bir şekilde elde etmelerini sağlayarak araştırmacıların gelişimsel ve metamorfik çalışmalar için P. americana'yı daha iyi kullanmalarını sağlar.

Şekil 1'de başarılı bir enjeksiyon görülmektedir. Mikro çaplı iğneli mikroenjeksiyon şırıngası, güçlendirici üzerine yatay olarak yerleştirilmelidir (Şekil 1A). İğne, epidermise karşı yatay olarak iki abdominal somit arasındaki boşluktan yerleştirilir (Şekil 1B). Sıvının P. americana karnına girdiğinden emin olun. İğnenin çok dik açısı iç organlara zarar verir (Şekil <strong c...

Watch this Scientific Journal Video about Applications of RNA Interference in American Cockroach at JoVE.com

Applications of RNA Interference in American Cockroach

Mevcut protokol, P. americana'daki RNAi operasyon teknikleri için adım adım kılavuzları açıklamaktadır.

Amerikan Hamamböceğinde RNA Girişiminin Uygulamaları

Cockroaches, a sanitary pest, are essential species in insect developmental and metamorphic studies due to their easy feeding and hemimetabolous ...

Protokol, Amerikan hamamböceklerini incelemek için basit bir yol sağlar. Yaygın bir sıhhi haşere ve geleneksel Çin tıbbı için faydalı bir böcek. Belirli genleri yıkarak Amerikan hamamböceklerinin çoklu yaşam aktivitelerinin moleküler mekanizmalarını keşfetmeye yardımcı olacaktır.Bu teknolojinin temel avantajı, Amerikan hamamböceğinde veya gen düzenleme için uygun olmayan diğer benzer böceklerde genleri yıkabilmesidir. Bu teknoloji, genetik ve epigenetik düzenleme, dokuların gelişim süreci, uzantıların yenilenmesi, çiftleşme davranışı ve Amerikan hamamböceğinin diğer ilginç tarafları gibi çeşitli alanları keşfetmek için kullanılabilir. Bu teknolojinin kullanımı kolay ve çok yönlüdür.DSRA enjeksiyon tedavisi sırasında hayvanların sağlıklı tutulmasını öneriyoruz. Acemilerin birkaç uygulama seansından sonra bu teknikte kolayca ustalaşabileceğine inanıyorum. Başlamak için, taranmış nimfleri oothecae'den dört milimetrelik bir açıklık eleği ile ayırın.Bir cam tüp ile beyaz taze malt P.americana seçin. P.americana'yı yeni kaplara yerleştirin ve tedavi için doğru aşamayı bekleyin. Reaksiyon sisteminde, 10 mikrolitre T7 2X tamponu, 2 mikrolitre T7 Express Enzim Karışımı ve iki mikrogram PCR ürünü ekleyin.Son olarak, toplam hacmi çift damıtılmış su ile 20 mikrolitreye kadar yapın. Yavaşça baş aşağı manuel olarak karıştırın ve 30 dakika boyunca 37 santigrat derecede, ardından 10 dakika boyunca 70 santigrat derecede kuluçkaya yatırın. Mikrolitre başına 4 mikrogram seyreltin RNaz DEPC suyu ile 1 ila 200 oranında bir çözelti.Daha sonra sisteme mikrolitre RQ1 RNase Free Dnase başına 1 mikrolitre bir birim ve 1 mikrolitre seyreltilmiş RNase A çözeltisi ekleyin. 30 dakika boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin. Daha sonra toplam sodyum asetat hacminin% 10'unu ve toplam izopropanol hacminin üç hacmini ekleyin.Yavaşça baş aşağı manuel olarak karıştırın, ardından beş dakika boyunca buzun üzerine yerleştirin ve 4 santigrat derecede 10 dakika boyunca 13.000 g'da santrifüj yapın. Süpernatantı bir pipetle çıkarın. Daha sonra, kalıntıyı% 75 etanolle,% 25 DEPC ile arıtılmış suyla yıkayın, ardından 4 santigrat derecede 5 dakika boyunca 13.000 g'da santrifüj yapın.Süpernatantı tekrar çıkarın, peleti oda sıcaklığında 15 dakika boyunca hava ile kurulayın. Daha sonra çift sarmallı RNA'yı yaklaşık 100 mikrolitre DEPC suyu ile çözün ve mikrolitre başına 2 mikrogramlık son konsantrasyona kadar seyreltin. Her enjeksiyonun hacminin tutarlı olmasını sağlamak için programı mikroenjeksiyon pompasında ayarlayın.Daha sonra şırıngayı 8 ila 10 kez DEPC suyuyla doldurarak temizleyin. 10 mikrolitrelik şırıngayı mikro enjeksiyon pompasına takın. Ardından pompayı çalıştırın ve şırıngayı 10 mikrolitre çift sarmallı RNA çözeltisi ile doldurun.Hamamböceklerini karbondioksit ile uyuşturun, sonra cımbızla yavaşça alın ve hamamböceğini iğneye doğru elle iletin. Daha sonra, iğneyi epidermise karşı yatay olarak iki karın somiti arasındaki boşluktan yerleştirin. Çift sarmallı RNA çözeltisini hamamböceğine enjekte edin, iç organlara zarar vermemek için iğne ucunun epidermise mümkün olduğunca yakın olmasını sağlayın.Son olarak, iğne ucunu çekin. Enjekte edilen hamamböceklerini temiz biyotahlil kaplarına koyun. Karbondioksitin etkilerinden kurtulmalarını sağlamak için yaklaşık 10 ila 20 dakika bekleyin.Kapları enjeksiyon tarihi, çift sarmallı RNA'nın tipi ve dozu ve P.americana'nın yaşı ile etiketleyin. Çift sarmallı RNA enjeksiyonu ve hayvanlarda hedefi olmayan dsMocK negatif kontrol olarak alındıktan sonra maltlanmış hamamböceklerinin fenotipini gözlemlemek için Ddc veya DOPA dekarboksilaz ve Dpp veya dekapentaplejik genler iki örnek olarak seçilmiştir. RNAi etkinliği qRT PCR ile tespit edildi.Genler, dsDdc için 0.01'den az ve dsDpp için 0.05'ten düşük bir P değeri ile önemli ölçüde parçalandı. Ddc genlerini nakavt eden P.americana, tıkanmış melanizasyon nedeniyle beyaz epidermise sahipti. dsDpp enjeksiyonları ile yapılan deneyde, RNAi uzuv rejenerasyonunu bozdu.Böcekler sağlıklı olmalı ve zarar vermeden enjekte edilmelidir. Bu teknoloji, Amerikan hamamböceği gibi gen düzenlenemeyen böcekler için gen fonksiyonlarını keşfetmenin basit bir yolunu sunar.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Transcriptional Analysis by Nascent RNA FISH of In Vivo Trophoblast Giant Cells or In Vitro Short-term Cultures of Ectoplacental Cone Explants

Transcriptional  Analysis by Nascent RNA FISH of In Vivo Trophoblast Giant Cells or In Vitro Short-term Cultures of Ectoplacental Cone Explants

ve Doğan RNA FISH ile kopyalanma Analizi<em&gt; İn Vivo</em&gt; Trofoblast Dev Hücreler ya da<em&gt; İn Vitro</em&gt; Ectoplacental Koni Eksplantlarından kısa vadeli Kültürler

The placenta derives from one extra-embryonic lineage, the trophectoderm. In the peri-implantation murine blastocyst, mural trophectoderm cells ...

A Modified Trier Social Stress Test for Vulnerable Mexican American Adolescents

Savunmasız Meksikalı Amerikalı Adolesanlar için Trier Değiştirilmiş Sosyal Gerilme Testi

The Trier Social Stress Test (TSST) is a well validated and widely used social stressor that has been shown to induce a 2-4 fold increase in cortisol, the ...

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Diseksiyon ve mantar vücut immünfloresan boyama ve yetişkin Drosophila melanogaster beynindeki nöronlar Photoreceptor

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the ...

Processing of Human Cardiac Tissue Toward Extracellular Matrix Self-assembling Hydrogel for In Vitro and In Vivo Applications

Processing of Human Cardiac Tissue Toward Extracellular Matrix Self-assembling Hydrogel for In Vitro and In Vivo Applications

İnsan kalp dokusu hücre dışı matriks hidrojel Vitro ve In Vivo uygulamaları için kendi kendine montaj doğru işlenmesi

Acellular extracellular matrix preparations are useful for studying cell-matrix interactions and facilitate regenerative cell therapy applications. ...

Genetic Engineering of Primary Mouse Intestinal Organoids Using Magnetic Nanoparticle Transduction Viral Vectors for Frozen Sectioning

Primer fare bağırsak Organoidlerin genetik mühendisliği dondurulmuş bölümleme için Manyetik Nano madde dönüştürücü viral vektörler kullanma

Intestinal organoid cultures provide a unique opportunity to investigate intestinal stem cell and crypt biology in vitro, although efficient approaches to ...

Thin Film Composite Silicon Elastomers for Cell Culture and Skin Applications: Manufacturing and Characterization

İnce Film kompozit silikon elastomer hücre kültürü ve cilt uygulamaları için: üretim ve karakterizasyonu

In this protocol, we present methods to fabricate thin elastomer composite films for advanced cell culture applications and for the development of skin ...

RNA-based Reprogramming of Human Primary Fibroblasts into Induced Pluripotent Stem Cells

RNA tabanlı insan birincil fibroblastlar indüklenmiş Pluripotent kök hücre yeniden programlama

Induced pluripotent stem cells (iPSCs) have proven to be a valuable tool to study human development and disease. Further advancing iPSCs as a regenerative ...

Dissection, Culture and Analysis of Primary Cranial Neural Crest Cells from Mouse for the Study of Neural Crest Cell Delamination and Migration

Nöral Krest Hücre Delaminasyonu ve Göçü Çalışması İçin Fareden Birincil Kranial Nöral Krest Hücrelerinin Diseksiyonu, Kültürü ve Analizi

Over the past several decades there has been an increased availability of genetically modified mouse models used to mimic human pathologies. However, the ...

Preparation of Small RNA Libraries for Sequencing from Early Mouse Embryos

Erken Fare Embriyolarından Sıralama için Küçük RNA Kütüphanelerinin Hazırlanması

MicroRNAs (miRNAs) are important for the complex regulation of cell fate decisions and developmental timing. In vivo studies of the contribution of miRNAs ...

A Protocol for Immunohistochemistry and RNA In-situ Distribution within Early Drosophila Embryo

A Protocol for Immunohistochemistry and RNA In-situ Distribution within Early Drosophila Embryo

Erken Drosophila Embriyosunda İmmünohistokimya ve RNA In-situ Dağılımı için Bir Protokol

Calcium induced calcium release signaling (CICR) plays a critical role in many biological processes. Every cellular activity from cell proliferation and ...