Name: topical application bioassay to quantify insecticide toxicity for mosquitoes and fruit flies
Uploaded: 2022-01-19T15:00:00
Duration: 9 min 37 s
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इस शोध को राष्ट्रीय विज्ञान फाउंडेशन द्वारा एसएच को पुरस्कार संख्या 2047572 के तहत एक कैरियर पुरस्कार द्वारा समर्थित किया गया था। हम फल मक्खी पालन और सामयिक आवेदन परख के लिए तैयारी में उनकी सहायता के लिए डेमियन रिवेरा को धन्यवाद देते हैं, विस्कॉन्सिन-मैडिसन विश्वविद्यालय में डॉ. गनेट्स्की अपने कैंटन-एस फल मक्खी तनाव को साझा करने के लिए, रॉकफेलर तनाव को साझा करने के लिए रोग नियंत्रण और रोकथाम केंद्र, और आईआईसीसी आइसोलाइन तनाव को साझा करने के लिए चिकित्सा कृषि और पशु चिकित्सा एंटोमोलॉजी के लिए संयुक्त राज्य अमेरिका के कृषि केंद्र। चित्रा 1 BioRender.com के साथ बनाया गया था।

लेखकों ने हितों के टकराव की घोषणा नहीं की है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL microcentrifuge tubes</td>
			<td>Thomas Scientific</td>
			<td>20A00L068</td>
			<td>Acetone aliquot storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL screw cap tubes</td>
			<td>Thomas Scientific</td>
			<td>1182K23</td>
			<td>Insecticide dilution storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL conical tubes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>339651</td>
			<td>Insecticide dilution storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 mL glass scintillation vials</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>0334125D</td>
			<td>Fruit fly weighing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 &#956;L syringe</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14815288</td>
			<td>Topical applicator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetone</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>AC423240040</td>
			<td>ACS 99.6%, 4 L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aedes aegypti (IICC strain)</td>
			<td>USDA CMAVE</td>
			<td>NA</td>
			<td>Insecticide resistant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aedes aegypti (Rockefeller strain)</td>
			<td>CDC</td>
			<td>NA</td>
			<td>Insecticide susceptible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytical scale</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-557-409</td>
			<td>Precision up to 0.1 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aspirator</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>6.49986E+11</td>
			<td>Mosquito collection device</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bench paper</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89126-794</td>
			<td>Place under workspace</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swabs</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B092S8JVQN</td>
			<td>Use for sorting insects</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton wool balls</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B0769MKZWT</td>
			<td>Use for sucrose solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispenser</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>1482225</td>
			<td>Repeater pipettor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drosophila melanogaster (Canton-S strain)</td>
			<td>University of Wisconsin-Madison</td>
			<td>NA</td>
			<td>Insecticide susceptible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine-tipped paint brushes</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B07KT2X1BK</td>
			<td>Use for sorting insects</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fruit fly stock bottles</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>AS355</td>
			<td>Use for rearing and sorting fruit flies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hand-held CO2 dispenser</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC1710679</td>
			<td>Use for knocking down insects</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Holding cups</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B08DXG7V1S</td>
			<td>Clear plastic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ice pack</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B08QDWMMW5</td>
			<td>Use for knocking down fruit flies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ice trays</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>9301085269</td>
			<td>Use for knocking down insects</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insect forceps</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B07B4767WR</td>
			<td>Insect forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insecticide</td>
			<td>Sigma-Aldrich Inc</td>
			<td>45423-250MG</td>
			<td>Deltamethrin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labeling stickers</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B07Q4X9GWX</td>
			<td>3/4&#34; Color dot stickers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labeling tape</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B00X6A1GYK</td>
			<td>White tape</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Netting</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B07F2PHHWV</td>
			<td>Use for covering holding cups and insect handling tent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB0875712H371</td>
			<td>100 mm x 15 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVC Pipe</td>
			<td>Lowe&#8217;s</td>
			<td>23971</td>
			<td>Insect handling tent materials</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber bands</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B00006IBRU</td>
			<td>Use for securing mesh/net on cups</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B01J78INO0</td>
			<td>Granulated White Sugar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weighing paper</td>
			<td>VWR</td>
			<td>12578-165</td>
			<td>4&#34; x 4&#34;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

topical application bioassay to quantify insecticide toxicity for mosquitoes and fruit flies

सार्वजनिक स्वास्थ्य और कृषि के लिए कीटनाशकों के निरंतर उपयोग ने व्यापक कीटनाशक प्रतिरोध और नियंत्रण विधियों को बाधित करने के लिए प्रेरित किया है। मच्छरों की आबादी की कीटनाशक प्रतिरोध निगरानी आमतौर पर रोग नियंत्रण और रोकथाम केंद्र (सीडीसी) बोतल बायोएसेस या विश्व स्वास्थ्य संगठन (डब्ल्यूएचओ) ट्यूब परीक्षणों के माध्यम से की जाती है। हालांकि, इन तरीकों के परिणामस्वरूप कीट के साथ चर कीटनाशक संपर्क के कारण मृत्यु दर के आंकड़ों में परिवर्तनशीलता की एक उच्च डिग्री हो सकती है, परीक्षण किए गए जीवों की अपेक्षाकृत छोटी संख्या, आबादी के बीच द्रव्यमान में व्यापक भिन्नता, और लगातार बदलती पर्यावरणीय स्थितियों, चर परिणामों के लिए अग्रणी। यह पेपर सामयिक अनुप्रयोग बायोएसे प्रस्तुत करता है, जो मच्छरों और फल मक्खियों दोनों के लिए एक उच्च-थ्रूपुट फेनोटाइपिक बायोएसे के रूप में अनुकूलित है, ताकि कीटनाशक सांद्रता की एक श्रृंखला के साथ बड़ी संख्या में कीड़ों का परीक्षण किया जा सके।
यह परख 1) हर जीव के साथ लगातार उपचार और कीटनाशक संपर्क सुनिश्चित करता है, 2) अत्यधिक विशिष्ट खुराक-प्रतिक्रिया घटता है कि उपभेदों और लिंगों के बीच औसत द्रव्यमान में अंतर के लिए खाते का उत्पादन करता है (जो क्षेत्र-एकत्र जीवों के लिए विशेष रूप से महत्वपूर्ण है), और 3) सांख्यिकीय रूप से कठोर औसत घातक खुराक (एलडी50) की गणना के लिए अनुमति देता है ), जो प्रतिरोध अनुपात तुलना के लिए आवश्यक हैं- नैदानिक खुराक मृत्यु दर से एक वैकल्पिक निगरानी दृष्टिकोण, जिसका उपयोग लार्विसाइड प्रतिरोध निगरानी के लिए भी किया जाता है। इस परख सटीक phenotyping मच्छर आबादी के लिए एक पूरक उपकरण होगा और, के रूप में फल मक्खियों का उपयोग कर सचित्र, आसानी से अन्य कीड़ों के साथ उपयोग के लिए अनुकूलनीय है. हम तर्क देते हैं कि यह परख कई कीट प्रजातियों में जीनोटाइपिक और फेनोटाइपिक कीटनाशक प्रतिरोध के बीच के अंतर को भरने में मदद करेगी।

इन प्रतिनिधि परिणामों में Ae. aegypti, Rockefeller (ROCK) के दो अलग-अलग उपभेदों और ज्ञात नॉकडाउन प्रतिरोध उत्परिवर्तन F1534C और V1016I (IICC जीनोटाइप) के साथ फ्लोरिडा से एक अलग क्षेत्र तनाव शामिल हैं। इसके अतिरिक्त, ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर (कैंटन: एस स्ट्रेन) को चित्रित किया गया है।
चित्रा 2 और चित्रा 3 उपरोक्त प्रोटोकॉल का पालन करते हुए तनाव और लिंग परीक्षण द्वारा प्रत्येक जीव की खुराक प्रतिक्रिया को दर्शाते हैं। चूंकि प्रत्येक तनाव के भीतर नर और मादा मच्छरों की खुराक-प्रतिक्रिया वक्रों के बीच कोई अंतर नहीं देखा गया था (टी = 1.70, पी = 0.098 रॉक के लिए और टी = 0.64, पी = 0.527 आईआईसीसी के लिए), प्रत्येक मच्छर तनाव के भीतर दोनों लिंगों से डेटा पूल किया गया था। ROCK और IICC के लिए द्रव्यमान-सापेक्षीकृत LD50 क्रमशः 0.008 ng/mg (95% CI: 0-0.104) और 0.336 ng/mg (95% CI: 0.235-0.438) हैं। इन मूल्यों के 95% सीआई ओवरलैप नहीं होते हैं, जो उपभेदों की काफी अलग खुराक प्रतिक्रियाओं को दर्शाते हैं। आईआईसीसी स्ट्रेन का आरआर (रॉक स्ट्रेन के सापेक्ष) 41.7 है, जिसे डब्ल्यूएचओ के अनुसार, अत्यधिक प्रतिरोधीमाना जाता है। कैंटन-एस फल मक्खियों के लिए, द्रव्यमान-सापेक्षीकृत एलडी50 0.213 एनजी / मिलीग्राम (95% सीआई: 0-0.490) है।
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63391/63391fig02.jpg"> चित्रा 2: सामयिक अनुप्रयोग bioassay का उपयोग कर मच्छरों के प्रतिनिधि डेटा. डेल्टामेथ्रिन और मच्छरों का उपयोग करके उपरोक्त प्रोटोकॉल का पालन करते हुए सामयिक अनुप्रयोग बायोएसे से प्रतिनिधि खुराक-प्रतिक्रिया डेटा: (ए) मादा एई एजिप्टी रॉक (एन = 880) और आईआईसीसी (एन = 550) उपभेदों, (बी) पुरुष एई एजिप्टी रॉक (एन = 880) और आईआईसीसी (एन = 569) उपभेदों। डेल्टामेथ्रिन परीक्षण सांद्रता 0.00075 एनजी / μL से 9.68705 एनजी / μL तक थी, और डेल्टामेथ्रिन की खुराक प्रति औसत मच्छर द्रव्यमान (मिलीग्राम) लागू (एनजी) एक्स-अक्ष पर परिलक्षित होती है। मृत्यु दर को y-अक्ष पर एक अनुपात के रूप में दिखाया गया है। प्रत्येक डेटा बिंदु क्लस्टर के माध्यम से काली रेखा तनाव और लिंग-विशिष्ट रैखिक प्रतिगमन का प्रतिनिधित्व करती है। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63391/63391fig02large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63391/63391fig03.jpg"> चित्रा 3: फल मक्खियों के प्रतिनिधि डेटा सामयिक आवेदन bioassay का उपयोग कर. डेल्टामेथ्रिन और फल मक्खियों का उपयोग करके उपरोक्त प्रोटोकॉल का पालन करते हुए सामयिक अनुप्रयोग बायोएसेसे प्रतिनिधि खुराक-प्रतिक्रिया डेटा: डी मेलानोगास्टर कैंटन-एस तनाव (एन = 1014)। Deltamethrin परीक्षण सांद्रता 0.00499 से 5.02876 ng / μL तक थी, और डेल्टामेथ्रिन की खुराक लागू (एनजी) प्रति औसत फल मक्खी द्रव्यमान (मिलीग्राम) एक्स-अक्ष पर परिलक्षित होती है। मृत्यु दर को y-अक्ष पर एक अनुपात के रूप में दिखाया गया है। काली रेखा रैखिक प्रतिगमन का प्रतिनिधित्व करती है। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63391/63391fig03large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
पूरक चित्रा S1: बेंचटॉप कीट हैंडलिंग तम्बू. Benchtop कीट हैंडलिंग तम्बू सामयिक आवेदन परख के दौरान मच्छरों या मक्खियों से बचने के आसान कब्जा के लिए प्रयोग किया जाता है। संरचना को A में बंद किया जाता है और B में खुला होता है। इस संरचना को पीवीसी पाइप और ठीक-जाल कपड़े के साथ बनाया गया था। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63391/Supplemental_Figure1.Final.V1.pdf" target="_blank">कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें।</a>
पूरक चित्रा S2: सिरिंज और पुनरावर्तक applicator इकाई. सिरिंज और पुनरावर्तक एप्लिकेटर इकाई का उपयोग कीटों को खुराक देने के लिए किया जाता है। मुख्य भागों में 1) सुई, 2) सिरिंज बैरल, 3) प्लंजर, 4) रिपीटर, और 5) रिपीटर बटन शामिल हैं। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63391/Supplemental_Figure2.Final.V1.pdf" target="_blank">कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें।</a>
पूरक फ़ाइल 1: यादृच्छिककरण स्क्रिप्ट: प्रत्येक प्रयोग के सभी कप के लिए गैर-पक्षपाती लेबल बनाने के लिए यादृच्छिकीकरण स्क्रिप्ट। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63391/Supplemental_File1_Randomization.Script.Final.V1.docx" target="_blank">कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें।</a>
पूरक फ़ाइल 2: मृत्यु दर स्कोर शीट: मृत्यु दर के मूल्यांकन में सहायता के लिए मृत्यु दर स्कोर शीट। शीट में रिकॉर्ड करने के लिए अन्य सभी महत्वपूर्ण जानकारी रिकॉर्ड करने के लिए स्थान भी शामिल हैं, जैसा कि प्रोटोकॉल में संदर्भित है, जैसे कि कीटनाशक अनुप्रयोग प्रारंभ और अंत समय। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63391/Supplemental_File2_Mortality.Score.Sheet.Final.V1%20(1).docx" target="_blank">कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें।</a>
पूरक फ़ाइल 3: उदाहरण मृत्यु दर डेटा: चित्र 2 बनाने के लिए उपयोग की जाने वाली उदाहरण डेटा फ़ाइल. स्तंभ शीर्षक विवरण निम्नानुसार हैं: "id" = प्रत्येक डेटा बिंदु का पहचान कोड; "प्रजाति" = प्रजातियों का नाम (उदाहरण के लिए, एडीज एजिप्टी); "कीटनाशक" = कीटनाशक का नाम शीर्ष रूप से लागू किया जाता है (उदाहरण के लिए, डेल्टामेथ्रिन); "तनाव" = मच्छर तनाव का नाम (उदाहरण के लिए, रॉक); "दिनांक" = प्रारंभ दिनांक सामयिक आवेदन; "सेक्स" = मच्छरों का लिंग; "उम्र" = मच्छरों की उम्र (युवा = 3-5-दिन की उम्र; बूढ़ा = 4 सप्ताह पुराना); "total.mosq" = बैच में तौले गए मच्छरों की कुल संख्या; "वजन" = बैच के भीतर सभी मच्छरों का वजन (मिलीग्राम); "एकाग्रता" = कीटनाशक की एकाग्रता (μg / mL); "सिरिंज" = सिरिंज की बूंद मात्रा (एमएल); "खुराक" = प्रत्येक मच्छर (एनजी) पर लागू कीटनाशक सक्रिय घटक की मात्रा; "कुल" = प्रत्येक कप में मच्छरों की संख्या; "मृत" = प्रत्येक कप में मृत मच्छरों की संख्या। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63391/Supplemental_File3_Example.Data.Final.V1%20(1).txt" target="_blank">कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें।</a>
पूरक फ़ाइल 4: आर विश्लेषण कोड: उदाहरण R कोड जिसका उपयोग Probit विश्लेषण को पूरा करने के लिए किया जा सकता है (जैसा कि प्रोटोकॉल के चरण 8 में वर्णित है)। प्रतिनिधि परिणाम (पूरक उदाहरण डेटा फ़ाइल के माध्यम से सुलभ) इस आर कोड के साथ इस्तेमाल किया जा सकता है। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63391/Supplemental_File4.Final.V3%20(1).R" target="_blank">कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें।</a>

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Topical Application Bioassay to Quantify Insecticide Toxicity for Mosquitoes and Fruit Flies

हम मच्छरों और फल मक्खियों में कीटनाशक संवेदनशीलता को मापने के लिए सामयिक अनुप्रयोग बायोएसे की कार्यप्रणाली और महत्व का वर्णन करते हैं। प्रस्तुत परख उच्च throughput है, कीट द्रव्यमान का उपयोग करता है-इस प्रकार एकाग्रता के बजाय एक बड़े पैमाने पर relativized घातक खुराक की गणना के लिए अनुमति देता है-और संभावना अन्य इसी तरह के तरीकों की तुलना में कम परिवर्तनशीलता है.

सामयिक अनुप्रयोग Bioassay मच्छरों और फल मक्खियों के लिए कीटनाशक विषाक्तता की मात्रा निर्धारित करने के लिए

The continued use of insecticides for public health and agriculture has led to widespread insecticide resistance and hampering of control methods. ...

सतह के संपर्क के बजाय कीट पर कीटनाशक को सीधे लागू करके, कीटनाशक जोखिम में न्यूनतम भिन्नता है, और यह हमें मच्छर आबादी की संवेदनशीलता प्रोफ़ाइल को अधिक सटीक रूप से मापने की अनुमति देता है। इस तकनीक का मुख्य लाभ यह है कि यह हमें घातक सांद्रता के बजाय कीटनाशक की बड़े पैमाने पर सापेक्षीकृत घातक खुराक की गणना करने की अनुमति देता है, जो प्रतिरोध अनुपात तुलना में बहुत सुधार करता है। कीटनाशकों को ठीक से स्टोर करने के लिए सावधान रहें, अपने उपकरणों को दूषित करने से बचें, और सुनिश्चित करें कि सिरिंज के हिस्से अच्छे आकार में हैं।यह आपको लगातार परिणाम प्राप्त करने में मदद करेगा। शुरू करने के लिए, फ्रीजर से आवश्यक कीटनाशक समाधान निकालें। तुरंत घोल को घुमाएं या पांच बार उलटें, और इसे कमरे के तापमान पर एक प्रकाश प्रतिरोधी कंटेनर में रखें ताकि कीटनाशकों को उपयोग करने से पहले कमरे के तापमान पर गर्म किया जा सके।एसीटोन प्रत्येक के 0.5 मिलीलीटर के साथ पांच माइक्रोसेंट्रीफ्यूज ट्यूब सेट करें। पहली ट्यूब से एसीटोन के साथ सिरिंज बैरल को पूरी तरह से भरें। फिर प्लंजर पर तेजी से नीचे धकेलकर एसीटोन को एक अपशिष्ट कंटेनर में निष्कासित करें, और एक ही एसीटोन एलीकोट से कुल पांच एसीटोन वॉश को पूरा करने के लिए चार और बार दोहराएं।फिर, सिरिंज बैरल को पूरी तरह से हवा से भरें, और अपशिष्ट कंटेनर में हवा और संभावित एसीटोन अवशेषों को निष्कासित करें। हवा के साथ तीन धोने को पूरा करने के लिए दो बार और दोहराएं। सिरिंज प्लंजर और सुई के शीर्ष के बीच बैरल के भीतर एक हवा की जेब बनाएँ बैरल में लगभग पांच मिलीमीटर प्लंजर खींचकर।ब्लाइंड मृत्यु दर मूल्यांकन के लिए यादृच्छिक आईडी के साथ प्लास्टिक होल्डिंग कप लेबल करें। साँस लेने से सक्शन द्वारा संचालित एक एस्पिरेटर का उपयोग करके, तीन से पांच दिन के पुराने वयस्क मच्छरों की वांछित संख्या को एस्पिरेट करें। एस्पिरेटर की नोक को टिप के चारों ओर लपेटे गए कपास के साथ ट्यूब में रखें।धीरे से साँस छोड़ें, और मच्छरों को एक शंक्वाकार ट्यूब में स्थानांतरित करने के लिए एस्पिरेटर को टैप करें। जब एस्पिरेटर टिप को हटा दिया जाता है, तो ट्यूब को प्लग करने के लिए कपास का उपयोग करें, और फिर ढक्कन के साथ कैप करें। संक्षेप में ट्यूबों में मच्छरों को चार डिग्री सेल्सियस पर कम से कम 10 मिनट के लिए रखकर या उन्हें बर्फ ट्रे में बर्फ के नीचे दफन करके नीचे गिराएं।दस्तक मच्छरों को कीट हैंडलिंग तम्बू में स्थानांतरित करें। बर्फ पर रखे गए प्लास्टिक ट्रे पर मच्छरों को सावधानीपूर्वक टिप दें, और यह सुनिश्चित करने के लिए एक समय में लगभग 50 मच्छर डालें कि प्रत्येक इसके नीचे शांत ट्रे को छूता है और नीचे खटखटाया जाता है। मच्छरों को धीरे-धीरे संदंश के साथ पैरों या पंखों से उठाकर सेक्स द्वारा सॉर्ट करें, इसके बाद प्रत्येक सेक्स को एक अलग होल्डिंग कप में रखें, और वांछित संख्या तक पहुंचने पर रुकें।छँटाई करते समय, किसी भी मच्छर को हटा दें जो घायल हो गए हैं या अतिरिक्त बड़े या छोटे हैं। मच्छर कप के वजन को रिकॉर्ड करने के लिए, पैमाने पर एक ढक्कन के रूप में पेट्री डिश के साथ एक खाली कप रखें, और पैमाने पर तारे। कंटेनर में मच्छरों को डालें, और ढक्कन को शीर्ष पर रखें।कंटेनर को पैमाने पर रखें, और मच्छरों की संख्या के साथ अंतिम वजन रिकॉर्ड करें। नमूनों के कप को तुरंत बर्फ पर वापस रखें ताकि उन्हें तब तक स्थिर रखा जा सके जब तक कि नमूने के सभी कप ों का वजन न हो जाए। तैयार मच्छरों को बर्फ पर रखे गए पांच से 10 अलग-अलग कपों में विभाजित करें, जिन्हें यादृच्छिक आईडी के साथ लेबल किया गया है।प्रति कप 20 से 25 मच्छरों को प्राप्त करने के लिए चिमटी और एक हैंडहेल्ड काउंटर का उपयोग करें। फल मक्खियों को सॉर्ट करने के लिए, सात सेकंड के लिए कार्बन डाइऑक्साइड का उपयोग करके मक्खियों को बेहोश करें। बेंच पेपर में लिपटे आइस पैक पर मक्खियों को डालें।एक ठीक-इत्तला वाले पेंटब्रश का उपयोग करके, पुरुषों और महिलाओं को अलग और गिनें। चुने हुए मक्खियों को धीरे से लेने के लिए पेंटब्रश का उपयोग करें, और उन्हें एक साफ, खाली स्टॉक बोतल में रखें। नर और मादा फल मक्खियों की समान संख्या चुनने के बाद, स्टॉक की बोतलों को स्ट्रेन नाम और फल मक्खी कुल के साथ लेबल करें।सात सेकंड के लिए कार्बन डाइऑक्साइड का उपयोग करके फल मक्खियों की बोतल को एनेस्थेटिक करें। फल मक्खियों को वजन वाले कागज पर डालें, और मक्खियों को एक यादृच्छिक आईडी के साथ लेबल किए गए एक तारांकित शीशी में मक्खियों को पेश करने के लिए एक फ़नल के रूप में कागज का उपयोग करें फल मक्खियों की शीशी के शीर्ष पर पेट्री डिश ढक्कन रखने के बाद, इसे पैमाने पर रखें। स्कोर शीट पर संयुक्त वजन और नमूनों की संख्या रिकॉर्ड करें।तुरंत फल मक्खियों की शीशी को बर्फ की ट्रे में ढक्कन के साथ रखें, जो अभी भी ऊपर है ताकि मक्खियों को भागने से रोका जा सके। उचित कीटनाशक एकाग्रता के साथ सिरिंज को लोड करें, कम से कम केंद्रित खुराक के साथ शुरू करें और जीवों के प्रत्येक समूह के साथ सबसे अधिक केंद्रित खुराक की ओर काम करें। बर्फ पर एक ट्रे के ऊपर रखा वजन कागज पर नमूनों टिप.उन नमूनों को अलग करें जो खुराक के लिए प्रत्येक नमूने तक आसान पहुंच की अनुमति देने के लिए एक स्वच्छ कीटनाशक-मुक्त पेंटब्रश या कपास झाड़ू का उपयोग करके एक साथ करीब हैं। सिरिंज का उपयोग करते हुए, मच्छरों के लिए वेंट्रल वक्ष और पेट क्षेत्र और फल मक्खियों के लिए डोरसम के लिए कीटनाशक समाधान की एक बूंद लागू करें। तुरंत नमूनों को लेबल किए गए प्लास्टिक कप में वापस डालें।कप को नेटिंग और रबर बैंड के साथ कवर करें। कप पर एक अद्यतन नमूना गिनती नोट करें यदि इस प्रक्रिया में किसी भी नमूने को मार दिया गया था, क्षतिग्रस्त या बच गया था। पूर्ण कप को एक होल्डिंग ट्रे में रखें।पहले कप के लिए, उस समय को रिकॉर्ड करें जब खुराक पूरी हो जाती है। प्रत्येक कप के लिए खुराक को दोहराएं जब तक कि सभी नमूनों को उचित कीटनाशक सांद्रता के साथ खुराक नहीं दी जाती है, और अंत के समय को रिकॉर्ड करें जब सभी नमूनों को खुराक दी गई हो। एक गीले कपास की गेंद के माध्यम से प्रत्येक कप के लिए 10% सुक्रोज समाधान प्रदान करें, और मच्छरों और फल मक्खियों को वांछित तापमान और आर्द्रता पर स्टोर करें।कीटनाशक जोखिम की शुरुआत के 24 घंटे बाद रिकॉर्ड नमूना मृत्यु दर। मच्छरों को जीवित के रूप में वर्गीकृत करें यदि वे उड़ सकते हैं और खुद को सीधे और मृत रख सकते हैं यदि वे अचल या अक्षम्य हैं, जैसा कि डब्ल्यूएचओ द्वारा वर्णित है। फल मक्खियों के लिए एक ही मृत्यु दर मूल्यांकन का पालन करें।बायोएसे करने के बाद, खुराक प्रतिक्रिया डेटा प्राप्त किया गया था जिसमें दो उपभेदों की विशेषता थी जो पुरुष और महिला एडीज एजिप्टी के लिए रॉकफेलर और आईआईसीसी जीनोटाइप हैं। रॉकफेलर और आईआईसीसी के लिए द्रव्यमान-सापेक्षीकृत औसत घातक खुराक क्रमशः 0.008 और 0.336 नैनोग्राम प्रति मिलीग्राम थी। परिणामों से पता चला कि प्रत्येक तनाव के भीतर मादा और पुरुष मच्छरों की खुराक प्रतिक्रिया घटता के बीच कोई अंतर नहीं है।इसलिए, दोनों लिंगों के डेटा को औसत घातक खुराक मूल्यों की गणना करने के लिए जोड़ा गया था। चूंकि इन दो उपभेदों की औसत घातक खुराक के लिए 95% आत्मविश्वास अंतराल ओवरलैप नहीं हुआ था, इसलिए इन मूल्यों को काफी अलग माना जाता था। इसके अतिरिक्त, प्रतिरोधी अनुपात की गणना करते समय, आईआईसीसी तनाव अतिसंवेदनशील रॉकफेलर तनाव की तुलना में 40 गुना अधिक प्रतिरोधी था।फल मक्खी, ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर, कैंटन-एस स्ट्रेन के लिए खुराक प्रतिक्रिया डेटा भी प्राप्त किया गया था, और बड़े पैमाने पर सापेक्षीकृत औसत घातक खुराक प्रति मिलीग्राम 0.213 नैनोग्राम पाई गई थी। स्थिरता महत्वपूर्ण है, खासकर जब कीटनाशक का भंडारण और लागू करना और मृत्यु दर का आकलन करना। इसके अलावा, नुकसान या मौत से बचने के लिए नमूने को संभालते समय ध्यान रखें जो कीटनाशक से प्रेरित नहीं है।इस विधि के साथ, अब हम मच्छर आबादी के तकनीकी प्रतिरोध को सही ढंग से निर्धारित कर सकते हैं और पर्यावरणीय स्थितियां प्रतिरोध को कैसे प्रभावित करती हैं या तकनीकी प्रतिरोध व्यावहारिक प्रतिरोध की भविष्यवाणी कैसे करता है।

Research

JoVE Journal

Biology

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An Optimized Protocol for Rearing Fopius arisanus, a Parasitoid of Tephritid Fruit Flies

पालन ​​के लिए एक अनुकूलित प्रोटोकॉल Fopius arisanus Tephritid फलों की एक Parasitoid मक्खियों

Fopius arisanus (Sonan) is an important parasitoid of Tephritid fruit flies for at least two reasons. First, it is the one of only three opiine ...

Isolation and Biophysical Study of Fruit Cuticles

अलगाव और फलों cuticles की biophysical अध्ययन

The cuticle, a hydrophobic protective layer on the aerial parts of terrestrial plants, functions as a versatile defensive barrier to various biotic and ...

A Multi-detection Assay for Malaria Transmitting Mosquitoes

मलेरिया हस्तांतरित मच्छरों के लिए एक बहु-खोज परख

The Anopheles gambiae species complex includes the major malaria transmitting mosquitoes in Africa. Because these species are of such medical importance, ...

Techniques to Induce and Quantify Cellular Senescence

तकनीक प्रेरित और यों सेलुलर बुढ़ापा को

In response to cellular stress or damage, proliferating cells can induce a specific program that initiates a state of long-term cell-cycle arrest, termed ...

Laboratory Rearing of Stable Flies and Other Muscoid Diptera

स्थिर मक्खियों और अंय Muscoid Diptera के प्रयोगशाला पालन

Stable flies, Stomoxys calcitrans, are serious pests of livestock, humans, companion animals and wildlife worldwide. During the last 20+ years, changes in ...

Protocols for Testing the Toxicity of Novel Insecticidal Chemistries to Mosquitoes

उपंयास कीटनाशक Chemistries मच्छरों के विषाक्तता के परीक्षण के लिए प्रोटोकॉल

New classes of insecticides with novel modes of action are needed to control insecticide resistant populations of mosquitoes that transmit diseases such ...

Nasal Potential Difference to Quantify Trans-epithelial Ion Transport in Mice

नाक से चूहों में ट्रांस उपकला आयन परिवहन का अंदाजा लगाने के लिए संभावित अंतर

The nasal potential difference test has been used for almost three decades to assist in the diagnosis of cystic fibrosis (CF). It has proven to be helpful ...

Forced Salivation As a Method to Analyze Vector Competence of Mosquitoes

एक विधि के रूप में मजबूर लार मच्छरों की वेक्टर क्षमता का विश्लेषण करने के लिए

Vector competence is defined as the potential of a mosquito species to transmit a mosquito-borne virus (mobovirus) to a vertebrate host. Viable virus ...