Name: topical application bioassay to quantify insecticide toxicity for mosquitoes and fruit flies
Uploaded: 2022-01-19T15:00:00
Duration: 9 min 37 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Topical Application Bioassay to Quantify Insecticide Toxicity for Mosquitoes and Fruit Flies at JoVE.com

Denne forskningen ble støttet av en KARRIERE-pris av National Science Foundation til SH under tildelingsnummer 2047572. Vi takker Damien Rivera for hans hjelp til fruktflueoppdrett og forberedelse til aktuell applikasjonsanalyse, Dr. Ganetzky ved University of Wisconsin-Madison for å ha delt sin Canton-S fruktfluestamme, Centers for Disease Control and Prevention for å dele Rockefeller-stammen, og USAs department of Agriculture Center for Medical Agricultural and Veterinary Entomology for å dele IICC-isolinestammen. Figur 1 ble opprettet med BioRender.com.

Forfatterne erklærer ingen interessekonflikter.

Dette papiret presenterer en tilpasset protokoll for den aktuelle applikasjonsanalysen for mygg og fruktfluer. Denne prosedyren kan enkelt tilpasses for å brukes i feltet og med andre organismer, da det krever minimalt med spesialisert utstyr. Nedenfor finner du denne protokollens kritiske trinn, potensielle endringer, feilsøkingsråd, begrensninger for metoden og betydningen av denne metoden.
Kritiske trinn i protokollen: Det er tre kritiske trinn i protokollen som, hvis de fullføres feil, kan drastisk påvirke resultatene av bioassay: insektmiddelkonsentrasjonsnøyaktighet, prøve knockdown og dødelighetsvurdering.
Insektmiddel konsentrasjon nøyaktighet: Det er ekstremt viktig å ha nøyaktige insektmiddelløsninger for å oppnå replikerbare doseresponskurver og meningsfulle resultater. Den volumetriske tilnærmingen til insektmiddelløsningspreparat er mer vanlig i litteraturen for både CDC-flaskebioassay7 og aktuelle applikasjoner 13,14,43. Imidlertid er den gravimetriske tilnærmingen beskrevet her iboende mer nøyaktig på grunn av hensynet til temperatur gjennom inkludering av (temperaturspesifikk) tetthet, noe som fører til mer nøyaktig formuleringsforberedelse.
Prøve knockdown: Å slå ned prøvene er en kritisk komponent i denne metoden og muliggjør nøyaktig administrering av insektmiddel- og vektmålingene. Men å slå ned organismer inneholder uunngåelig risikoen for fysisk stress og skade, som tidligere vist30. Vær derfor forsiktig og oppmerksom når du slår ned prøvene for å sikre i) hver prøve blir slått ned i en lignende varighet, ii) lengden på knockdown holdes på et minimum, og iii) metoden for knockdown holdes konsistent på tvers av alle prøver. I tillegg anbefales det å teste knockdown-metoden separat, før insektmiddelapplikasjon, for å sikre at metoden er vellykket og ikke induserer kontrolldødelighet større enn 10%. Den første testen kan ta lengre tid for en uerfaren bruker, noe som fører til lengre knockdown-tider. Vær derfor forsiktig når du tolker resultater fra de første analysene.
Dødelighet vurdering: Vurdering av dødelighet kan være utfordrende, spesielt når insektmiddelet ikke helt dreper, men bare slår ned eller maims mygg eller fly. Derfor er det viktig å være klar over hvordan insektmiddelet påvirker målorganismen og har en klar definisjon for "døde" (eller nedslått) organismer før du starter. I tillegg anbefales det å la samme person vurdere dødelighet mellom doser og replikerer for å redusere variasjon.
Protokollendringer: Flere endringer beskrevet nedenfor kan brukes på denne protokollen for å forbedre allsidigheten og tilgjengeligheten.
Tilpasse analysen til mindre eller større insekter: Ved bruk av mindre eller større prøver anbefales det å bruke et mindre eller større dosevolum av insektmiddel, henholdsvis. Som et eksempel tilpasset vi myggprotokollen til fruktfluer ved å redusere 0,5 μL-dosen til en 0,2 μL dose. Kontroller at riktig sprøytestørrelse er valgt for det valgte dosevolumet.
Tilpasning av analysen til feltinsekter: Ved bruk av feltinsekter kan det være mer variasjon i insektstørrelse. Derfor vil veiing av insekter i mindre grupper (f.eks. per kopp) anbefales i stedet for som en stor gruppe (f.eks. alle insekter som brukes til ett eksperiment). Dette kan bidra til å fange den potensielle variasjonen i insektmiddel mottakelighet forbundet med forskjellene i felt insektmasse.
Modifikasjoner av utstyr: Insekthåndteringstelt: Dosering av prøven kan fullføres under et insekthåndteringstelt som bare er konstruert med PVC-rør og myggnetting. Dette kan være et alternativ til et lukket rom (f.eks. insektmiddel) og bidra til å eliminere potensiell insektmiddelforurensning i områder der insektoppdrett kan forekomme. Dette insekthåndteringsteltet er enkelt å konstruere og rimelig (~ $ 70). Alternativt kan et insekthåndteringsbur kjøpes (~ $ 425).
Kjølebord: Ispakker eller isbrett kan brukes til å slå ned prøven og/eller holde prøven slått ned.
Inkubator: Inkubatorer anbefales for oppdrett av prøven og holder prøven i 24 timer etter insektmiddelbehandling. Hvis en inkubator ikke er tilgjengelig, kan den konstrueres. Utstyr som trengs for å bygge inkubatoren inkluderer en isolert beholder, luftfukter, varmekabler, fuktighets- og temperaturregulator og et lys, som skal legge opp til en total kostnad på ~ $ 170, følge og utvide på tidligere metoder44.
Holde kopper: Selv om plastkopper brukes til å sortere og holde den behandlede prøven, vil voksforede papirkopper eller glassbeholdere være egnede alternativer.
Organisme og livsstadium modifikasjon: Denne metoden er veldig tilpasningsdyktig for bruk med andre vektorer, insekter og / eller leddyr som Culex quinquefasciatus mygg32, husfluer32 og kakerlakker45, samt ikke-voksne livsstadier, for eksempel mygg larver46.
Endring av aktuell programplassering: Denne metoden beskriver å bruke insektmiddelet på ventral thorax og mageregion for mygg (og dorsum for fruktfluer). Andre programplasseringer kan imidlertid brukes så lenge eksponeringsstedet er konsekvent. Konsistens er viktig fordi insektmiddelfølsomhet kan variere basert på applikasjonsplassering32.
Råd om feilsøking: Denne metoden har flere trinn som i utgangspunktet er utfordrende. Beskrevet nedenfor er noen av de vanligste problemene man kan støte på.
Lekker/fordamper insektmiddelløsninger: Insekticider oppløses ofte i aceton, en svært flyktig forbindelse. Dette betyr at aceton fordampes raskt ved romtemperatur, og øker insektmiddelkonsentrasjonene over tid. Hvis insektmiddelløsningene ser ut til å lekke eller fordampe, kan du gjenskape løsningene, sikre at rørets lokk er på tett, og dobbeltsjekk at lagringsprotokollene følges riktig (f.eks. parafilm brukes, og rørene lagres oppreist). Hvis lekkasjen vedvarer, kan du prøve å fylle rørene med et lavere volum for å gi mer plass til volumendringen som acetonopplevelsene opplever ved forskjellige temperaturer. I tillegg, hvis du bruker aceton som løsningsmiddel, må du sørge for at rørene er vurdert for acetonlagring (f.eks. FEP-, TFE- og PFA-plast). Hvis du bruker hydrofobe insektmidler, lagre løsningene i glassflasker (da hydrofobe insektmidler holder seg til glass mindre enn plast). Det er også god praksis å markere menisken til løsningen før lagring for å overvåke fordampning.
Vektdrift på mikrovekt ved veiing av organismer: Hvis vektavlesningen på vekten driver (sakte går opp eller ned), kan dette skyldes statisk. Drift oppstår oftest når du veier organismer i plastprodukter, da plast lett kan holde en statisk ladning. For å unngå dette kan et veiepapir plasseres under plastbeholderen som veies, eller en beholder uten plast som glass kan brukes.
Unormale dødelighetsresultater: Det er mange måter dødelighetsresultatene kan virke unormale på, for eksempel å observere høy dødelighet i kontrollene eller høy / lav dødelighet gjennom alle insektmiddeldoser. Se gjennom følgende tilfeller for feilsøking av hvert scenario.
Høy kontrolldødelighet Hvis det er høy dødelighet i kontrollgruppen (10% eller større), vurdere knockdown-metoden og tiden prøvene blir slått ned. Hvis det er mulig, forkort tiden som prøvene er slått ned for. Andre potensielle faktorer å vurdere for høy dødelighet i kontrollene inkluderer i) å sjekke om inkubatorinnstillingene er riktige - unormale temperaturer og / eller fuktighet kan føre til økt dødelighet. Temperatur og fuktighet bør kontrolleres med en uavhengig datalogger. ii) Vurdering av insekthåndtering. Håndtering av insekter for mye eller for grovt kan føre til høy dødelighet. iii) Kontrollere om det ikke er insektmiddelforurensning i 100% aceton som brukes til å behandle kontrollgruppen eller på instrumenteringen. Skift ut aceton og rengjør alle instrumenter med aceton eller etanol. Unngå kontaminering ved ofte å skifte ut hansker, forhindre søl og rengjøringsinstrumenter. Merk at i Supplemental File 3 døde maksimalt to mygg innenfor kontrollen (kun aceton) kopper. Dette nivået av dødelighet anses ikke som høyt (det er mindre enn 10%), og derfor var det ingen grunn til bekymring.
Høy dødelighet i alle eksponerte grupper (men ikke i kontrollgrupper) Bruk lavere insektmiddelkonsentrasjoner eller mindre dosevolumer for testing. Dosene som brukes kan være over minimumsdosen som ikke vil indusere dødelighet. Bruk flere 10 ganger fortynning for å identifisere riktig doseområde, og utelukke forurensning. For å unngå forurensning, begynn å dosere med lavest konsentrasjon og arbeid mot den høyeste konsentrasjonen. I tillegg må du sørge for at alt utstyr som brukes regelmessig rengjøres med aceton og/eller etanol, dosene som påføres prøven er svært små, og selv den minste krysskontaminering kan påvirke resultatene.
Lav dødelighet i alle utsatte grupper Bruk høyere insektmiddelkonsentrasjoner. Dosene som brukes kan alle være for lave til å forårsake dødelighet i befolkningen. For å identifisere riktig doseområde, eksponer prøver for flere mer 10 ganger konsentrerte doser. Forsikre deg om at insektmiddelløsningene ikke har utløpt eller degradert (potensielt på grunn av høy temperatur eller lyseksponering). Hvis løsningene er utløpt eller mistenkes for å ha blitt degradert, kan du gjenskape løsningene og sikre at riktige lagringsforhold følges.
Inkonsekvent dødelighet mellom replikeringer/dager Tidspunktet på dagen når insekter blir utsatt for insektmiddelet, kan påvirke motstandsnivået uttrykt, spesielt for metabolsk motstand34. Gjenta denne protokollen i samme tidsvindu hver dag for å unngå tid på dagen som en potensiell variabel som bidrar til endringer i dødeligheten. Andre potensielle faktorer som bidrar til inkonsekvent dødelighet mellom replikeringer inkluderer i) prøver som blir differensialt oppdratt mellom eksperimenter. Forsikre deg om at alle prøver er av samme aldersgruppe, oppdrettet ved samme temperatur og lignende tettheter og mattilgjengelighet. ii) insektmiddelkonsentrasjoner som forringes over tid eller blir mer konsentrert på grunn av acetonfordampning. Remake løsningene og sikre riktige lagringsforhold. iii) Inkonsekvent dødelighetsscoring. Sørg for at samme person scorer dødelighet eller utvikle en klar protokoll som skal brukes konsekvent på tvers av teamet. Bruk blind scoring for å redusere skjevheter i dødelighet scoring.
Insekter som stikker til overflaten av sorteringsbrettet: Aceton reagerer på plast som brukes i denne protokollen, for eksempel Petri-retter. Prøven vil sannsynligvis holde seg til overflaten hvis du bruker aceton på Petri-retter eller lignende plastflater. Denne vedheften kan unngås ved å fôre sorteringsbrettet med veiepapir eller bruke en ikke-plastisk sorteringsbrett. I tillegg kan kondens på overflaten av plast i sorteringsbrettet eller holde kopper føre til insekter som holder seg til kondensen, eller prøven kan være for kald og potensielt fryse til overflaten. Juster knockdown-metoden for å redusere kondens samtidig som prøvene blir for kalde/frosne (plasser for eksempel veiepapir mellom prøvene og plastsorteringsbrettet).
R-analysefeil: Når dødelighetsdataene er samlet inn, kan det oppstå en rekke komplikasjoner under analysen. Den vanligste grunnen til at en R-kode ikke kan fullføre handlingene for datafilen, er at dataformatet ikke samsvarer med koden (f.eks. kolonneoverskrifter og/eller tomme celler). Hvis det oppstår mer alvorlige komplikasjoner, kan du se R-hjelpesidene som er innebygd i Rstudio35.
Begrensninger ved den ovenfor beskrevne aktuelle søknadsmetoden: Insektmiddelabsorpsjon via aktuell applikasjonsmetode etterligner ikke naturlig eksponering: Aktuell anvendelse på primærkroppen er ikke den naturlige måten å absorpsjon av insektmiddel på. I feltet absorberer insekter for det meste insektmidler gjennom bena over den tiden de er i kontakt med den insektmiddelbehandlede overflaten eller på vingene gjennom små aerosolpartikler 47,48, i stedet for en rask eksponering på ventraloverflaten. Imidlertid vil den direkte anvendelsen av en kjent insektmiddeldose nøyaktig etablere en fenotypisk respons på insektmidler, som trengs for genetiske og evolusjonære studier eller sammenligninger av insektmiddelfølsomhet over rom eller tid. Derfor er denne tilnærmingen gunstig for å teste teknisk motstand, men vil ikke direkte måle praktisk motstand (effekten av det faktiske intervensjonsverktøyet i et feltsett15). Det er imidlertid viktig å merke seg at de nåværende standardmetodene (f.eks. WHO-rørtester og CDC-flaskebioassays) heller ikke kan fange eller etterligne aerosol (dvs. ved å dugge) insektmiddeleksponering i feltet.
Aktuelle applikasjonsanalyser kan bare vurdere kontaktabsorpsjonsinseksjonsmidler: Denne metoden er beregnet på insektmidler som virker gjennom kontakt og absorpsjon av insektmiddelet og ikke for bruk med orale insektmidler, for eksempel borsyre som vanligvis brukes i attraktive giftige sukkeragn49.
Betydningen av metoden: Den aktuelle applikasjonsmetoden utvider veletablerte standarder for insektmiddelbioassays ved å beregne dødelig dose (ikke konsentrasjon) og måle teknisk (ikke praktisk) motstand15. Nedenfor er fordelene og ulempene ved denne metoden over eksisterende insektmiddel mottakelighetsanalyser.
Beregning av dødelig dose: Denne metoden bestemmer den dødelige dosen av insektmiddelet, i stedet for den dødelige konsentrasjonen som CDC og WHO bioassays bruker for å etablere den diskriminerende dosen11. Den dødelige dosen er mer meningsfylt fordi det er en kvantifisert mengde insektmiddel kjent for å fremkalle dødelighet. I motsetning til dette vurderer den dødelige konsentrasjonen ikke hvor mye insektmiddel organismen faktisk får. Ved bruk av dødelig doseberegning kan forskjeller mellom kjønns- eller størrelsesavhengige følsomhetsprofiler observeres og kvantifiseres mer nøyaktig, noe som gjør denne målingen enda mer allsidig.
Teknisk motstand: Denne metoden vurderer teknisk motstand, som er motstand målt under standardiserte, kontrollerte miljøer. Slike målinger er egnet for overvåking av spredning av insektmiddelresistens og kobling av fenotypisk motstand med potensielle markører15. På grunn av den reduserte variasjonen i dødelighet som følge av den aktuelle anvendelsen bioassay, gir det bedre identifisering av nye motstandsmarkører. På grunn av unaturlig eksponering av insektmidler til mygg, er denne analysen imidlertid ikke egnet for estimering av effekt av en bestemt intervensjon i en bestemt befolkning. Andre analyser er nødvendig for målinger av slik praktisk motstand15.
Prøve tilpasningsevne: Denne metoden kan praktiseres på andre viktige leddyr som avlinger (f.eks. Colorado potetbille), hus (f.eks. og sengebugger), eller pollinatorer (f.eks. bier) med enkle endringer i knockdown tilnærming og / eller insektmiddel dose, volum og / eller konsentrasjon (som beskrevet ovenfor). Den enkle tilpasningsevnen kan bidra til å analogisere insektmiddelresistensforskning på tvers av forskjellige forskningsfelt. Bruken av en LD50-verdi i stedet for en dødelig konsentrasjon som dreper 50% av prøvene (LC50) tillater nøyaktig sammenligning på tvers av arter.
Kostnad: I likhet med CDC-flaskebioassays og WHO-rørtester, er kostnadene for å kjøre den aktuelle applikasjonsanalysen minimale (se materialtabellen). De viktigste utstyrsdelene er sprøyten (ca. $ 70) og dispenseren (ca. $ 100), som kan brukes på tvers av analyser.
Antall eksemplarer som trengs: Minst 20-25 prøver bør brukes per aktuell applikasjonsanalysekopp. Minst fem insektmiddelkonsentrasjoner anbefales å testes per eksperiment, med minst tre repliker som anbefales for prosedyren. Totalt sett resulterer dette i minimum 300-375 prøver som trengs for en komplett test, sammenlignbar med antall prøver som trengs for å utføre motstandsintensitetstester ved hjelp av WHO-rørtester eller CDC-flaskebioassays. Men hvis redusert variasjon oppnås med den aktuelle anvendelsesbioassay, kan samme antall prøver føre til mer statistisk kraft for å sammenligne følsomhetsdata på tvers av rom eller tid.

Mygg er ansvarlig for over 700.000 dødsfall hvert år på grunn av sykdommene de overfører til mennesker, med over halvparten av disse dødsfallene på grunn av malaria alene1. Den viktigste forebyggende metoden mot overføring av malaria og andre vektorbårne sykdommer er bruk av insektmidler, ofte i form av langvarige insektmiddelnett eller innendørs gjenværende sprøyting2. Insektmiddelresistens er imidlertid utbredt blant mygg og andre insektvektorer, samt landbruksskade skadedyr 3,4. For effektivt å håndtere motstand er overvåking av viktig betydning5. For dette er det nødvendig med svært nøyaktige og høygjennomstrømningsmotstandsdeteksjonsmetoder. For tiden er de mest utbredte overvåkingsverktøyene for insektmiddelresistens for mygg WHO tube test6 og CDC-flasken bioassay7. For fruktfluer er gjenværende kontaktapplikasjonsmetode (lik CDC-flasken bioassay) et vanlig brukt insektmiddelbioassay 8,9,10. Imidlertid er variasjonen i data fra disse metodene vanligvis høy, med målinger av samme laboratorie myggstamme som spenner fra ~ 20-70% dødelighet i CDC-flaskeanalyser og 0-50% i WHO-rørtester når de utsettes for subletal doser11. Slike variasjoner er overraskende fordi den begrensede genetiske variasjonen i de fleste laboratoriestammer forventes å føre til begrenset variasjon i insektmiddelets følsomhet i befolkningen. Likevel er det fortsatt stor variasjon i bioassayresultatene.
Potensielle kilder til denne variasjonen kan være et resultat av heterogen insektmiddeleksponering mellom prøver i bioassay på grunn av indirekte insektmiddeleksponering via overflaten, heterogene miljøeffekter, normal biologisk variasjon mellom individer av samme genotype og variasjon i massen av prøver av samme populasjon12. . En sjelden brukt metode med høyere replikerbarhet er den aktuelle applikasjonen bioassay. I denne analysen påføres insektmiddelet direkte på hvert insekt13,14, og fjerner faktoren for heterogen eksponering av forskjellige prøver innenfor samme analyse. På grunn av denne metodens langsomme gjennomstrømning brukes den imidlertid ikke rutinemessig som et insektmiddel mottakelighetsovervåkingsverktøy for myggpopulasjoner. Dette dokumentet presenterer en modifisert protokoll for den aktuelle applikasjonsbioassay som gir mulighet for høyere gjennomstrømningseksponeringer samtidig som den korrigerer for variasjon i insektmasse, en parameter som korrelerer med endringer i insektmiddel mottakelighet12. En reduksjon i støy og masserelatert variasjon i dødelighetsdata fra variabel insektmiddeleksponering vil gi mer nøyaktig tekniskmotstandsovervåking 11,15. Slike data kan brukes til å knytte fenotypisk resistens mer nøyaktig til genetiske markører, treningsparametere og/eller vektorkompetanse. I tillegg demonstrerer vi hvordan denne analysen lett kan tilpasses andre insektarter ved å bruke den aktuelle anvendelsen bioassay på fruktfluer, en mindre kroppslig insektart.
Hovedbegrensningen for de nevnte gjenværende kontaktapplikasjonene er at insektmiddeleksponering kan variere fra prøve til prøve i samme analyse. Når det gjelder CDC-flaskebioassays og kontaktmetoden, kan insektmiddeleksponering variere mellom replikeringer av samme analyse. Insektene er utsatt for insektmiddel som enten distribueres på innsiden av en glassflaske (CDC-flaskebioassay og kontaktmetode) eller på impregnerte papirer (WHO tube test). Konsentrasjonen av insektmiddel på begge overflater (glass og papir) er kjent og forhåndsbestemt ved å screene forskjellige arter av kjente genotyper. Mengden som er tilgjengelig for potensielt å bli absorbert av insektet, kan imidlertid variere sterkt avhengig av overflaten som brukes, insektmiddelblandingskomponentene og hvor homogent insektmiddelet fordeles over overflatematerialet16,17. I CDC-flasken bioassay er insektmiddelbelegget på innsiden av flasken avhengig av prosedyrer som brukes av hvert laboratorium og bruker. I WHO-rørtesten produseres insektmiddelbehandlede papirer sentralt og dermed mest sannsynlig ganske homogent på tvers av laboratorier. Men i WHO-rørtesten tillater eksponeringsrøret prøver å lande og hvile på ikke-insektmiddeleksponert metallnett, noe som fører til potensiell heterogen insektmiddeleksponering blant prøvene i hver test. Den faktiske mengden insektmiddel plukket opp og absorbert av prøver via hver metode må fortsatt utforskes ytterligere18.
I tillegg brukes CDC-flasken bioassay, WHO tube test og kontaktmetode oftest som terskelanalyser som tester bare en forhåndsbestemt insektmiddelkonsentrasjon. Denne tilnærmingen kan nøyaktig oppdage tilstedeværelsen av motstand og er verdifull for motstandsovervåking (spesielt når motstanden sprer seg). Terskelanalyser kan imidlertid ikke kvantifisere styrken på motstanden, noe som kan være mer prediktivt for effekten av intervensjonsverktøy. Hvis flere insektmiddelkonsentrasjoner brukes med disse metodene, kan de brukes som intensitetsanalyser. Intensitetsanalyser for CDC-flasken bioassay og WHO tube test har blitt introdusert ved å teste 5x og 10x de forhåndsbestemte diskriminerende doser for å adressere dette gapet i overvåking 6,19. Samtidig som det gir større evne til å skille mellom resistente populasjoner, gir 3-5 (forhåndsbestemte) doser begrenset oppløsning for å beregne dødelige konsentrasjoner. I tillegg brukes mygg av forskjellige størrelser i slike analyser. Likevel er massen viktig å måle ettersom større prøver kan trenge en høyere dose for å bli drept, da den effektive dosen per masseenhet vil være mye lavere enn for en mindre organisme12. Beregning av en masse-relativisert dødelig dose (mengde insektmiddel per insektmasse) ville være en mer nyttig beregning enn den mer vanlige dødelige konsentrasjonen (f.eks. mengde insektmiddel per overflateareal) da den vurderer variasjonen av insektmasse mellom kjønn, populasjoner og genotyper. Slike data vil bidra til å fylle gapet mellom genotypisk og fenotypisk motstand i laboratoriet og feltet, og kan også gi en enkel måte å beregne den nødvendige applikasjonskonsentrasjonen for å behandle en populasjon av insekter av en kjent gjennomsnittlig masse.
Bruken av masse-relativiserte dødelige doser som dreper 50% av prøvene (LD50) inneholder også flere andre fordeler. Vurdering av toksisiteten til en bestemt forbindelse i mg/kg (= ng/mg) er standard i human og veterinær toksikologi14, og LD50-verdier finnes på sikkerhetsdatablad. Dødelige doser tillater også direkte sammenligning av toksisitet mellom forskjellige kjemikalier mot en bestemt art eller samme kjemikalie mot forskjellige arter20, samt høyverdig evaluering av nye insektmidler og kjemikalier13. I tillegg kan LD50 gi mer meningsfylte og nøyaktige motstandsforhold enn de som er avledet av diagnostiske dosedødelighetsresultater, noe som kan føre til en overestimering av motstandsnivået som finnes i en populasjon. Derfor vil denne analysen være egnet for rutinemessige overvåkingsprogrammer ved å gi strengere motstandsovervåking basert på masse relativiserte dødelige doser avledet fra flere prøver enn anbefalt for andre bioassays21.
Den aktuelle applikasjonsmetoden har blitt brukt i insektmiddel mottakelighet overvåking for mygg og fluer som et alternativ for standard insektmiddel mottakelighet bioassays når motstand er allerede kjent eller mistenkt22,23, samt for overvåking i noen insekter24 for mer nøyaktig å vurdere motstandsprofiler og insektmiddel iboende toksisitet21 . I aktuell anvendelse bioassays påføres insektmiddelet på hver organisme, noe som resulterer i minimal variasjon i insektmiddeleksponering. Dette papiret presenterer en litt tilpasset og forbedret metode som gjør det mulig å bruke insektmiddeleksponering på et stort antall insekter på kort tid, samtidig som det kontrolleres for insektmasse22. Denne metoden med høyere gjennomstrømning med gode nivåer av replikerbarhet kan være et nyttig ekstra verktøy for rutinemessig insektmiddel mottakelighet overvåking.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL microcentrifuge tubes</td>
			<td>Thomas Scientific</td>
			<td>20A00L068</td>
			<td>Acetone aliquot storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL screw cap tubes</td>
			<td>Thomas Scientific</td>
			<td>1182K23</td>
			<td>Insecticide dilution storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL conical tubes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>339651</td>
			<td>Insecticide dilution storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 mL glass scintillation vials</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>0334125D</td>
			<td>Fruit fly weighing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 &#956;L syringe</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14815288</td>
			<td>Topical applicator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetone</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>AC423240040</td>
			<td>ACS 99.6%, 4 L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aedes aegypti (IICC strain)</td>
			<td>USDA CMAVE</td>
			<td>NA</td>
			<td>Insecticide resistant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aedes aegypti (Rockefeller strain)</td>
			<td>CDC</td>
			<td>NA</td>
			<td>Insecticide susceptible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytical scale</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-557-409</td>
			<td>Precision up to 0.1 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aspirator</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>6.49986E+11</td>
			<td>Mosquito collection device</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bench paper</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89126-794</td>
			<td>Place under workspace</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swabs</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B092S8JVQN</td>
			<td>Use for sorting insects</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton wool balls</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B0769MKZWT</td>
			<td>Use for sucrose solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispenser</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>1482225</td>
			<td>Repeater pipettor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drosophila melanogaster (Canton-S strain)</td>
			<td>University of Wisconsin-Madison</td>
			<td>NA</td>
			<td>Insecticide susceptible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine-tipped paint brushes</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B07KT2X1BK</td>
			<td>Use for sorting insects</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fruit fly stock bottles</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>AS355</td>
			<td>Use for rearing and sorting fruit flies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hand-held CO2 dispenser</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC1710679</td>
			<td>Use for knocking down insects</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Holding cups</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B08DXG7V1S</td>
			<td>Clear plastic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ice pack</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B08QDWMMW5</td>
			<td>Use for knocking down fruit flies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ice trays</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>9301085269</td>
			<td>Use for knocking down insects</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insect forceps</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B07B4767WR</td>
			<td>Insect forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insecticide</td>
			<td>Sigma-Aldrich Inc</td>
			<td>45423-250MG</td>
			<td>Deltamethrin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labeling stickers</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B07Q4X9GWX</td>
			<td>3/4&#34; Color dot stickers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labeling tape</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B00X6A1GYK</td>
			<td>White tape</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Netting</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B07F2PHHWV</td>
			<td>Use for covering holding cups and insect handling tent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB0875712H371</td>
			<td>100 mm x 15 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVC Pipe</td>
			<td>Lowe&#8217;s</td>
			<td>23971</td>
			<td>Insect handling tent materials</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber bands</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B00006IBRU</td>
			<td>Use for securing mesh/net on cups</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B01J78INO0</td>
			<td>Granulated White Sugar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weighing paper</td>
			<td>VWR</td>
			<td>12578-165</td>
			<td>4&#34; x 4&#34;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

topical application bioassay to quantify insecticide toxicity for mosquitoes and fruit flies

Fortsatt bruk av insektmidler for folkehelse og landbruk har ført til utbredt insektmiddelresistens og hemming av kontrollmetoder. Insektmiddelresistensovervåkning av myggpopulasjoner gjøres vanligvis gjennom Centers for Disease Control and Prevention (CDC) flaskebioassays eller World Health Organization (WHO) rørtester. Imidlertid kan disse metodene resultere i en høy grad av variasjon i dødelighetsdata på grunn av variabel insektmiddelkontakt med insektet, det relativt små antallet organismer testet, omfattende variasjon i masse mellom populasjoner og stadig skiftende miljøforhold, noe som fører til variable resultater. Dette papiret presenterer den aktuelle applikasjonen bioassay, tilpasset som en høy-gjennomstrømning fenotypisk bioassay for både mygg og fruktfluer, for å teste et stort antall insekter langs en rekke insektmiddelkonsentrasjoner.
Denne analysen 1) sikrer konsistent behandling og insektmiddelkontakt med hver organisme, 2) produserer svært spesifikke doseresponskurver som står for forskjeller i gjennomsnittlig masse mellom stammer og kjønn (som er spesielt viktig for feltoppsamlede organismer), og 3) muliggjør beregning av statistisk strenge median dødelige doser (LD50 ), som er nødvendige for sammenligninger av resistensforhold - en alternativ overvåkingsmetode fra diagnostisk dosedødelighet, som også brukes til larvicidresistensovervåking. Denne analysen vil være et komplementært verktøy for nøyaktig fenotyping myggpopulasjoner, og som illustrert ved hjelp av fruktfluer, er lett tilpasningsdyktig for bruk med andre insekter. Vi hevder at denne analysen vil bidra til å fylle gapet mellom genotypisk og fenotypisk insektmiddelresistens i flere insektarter.

Disse representative resultatene har to forskjellige stammer av Ae. aegypti, Rockefeller (ROCK), og en isolert feltstamme fra Florida med kjente knockdown-resistensmutasjoner F1534C og V1016I (IICC genotype). I tillegg er Drosophila melanogaster (Canton: S-stamme) omtalt.
Figur 2 og figur 3 illustrerer doseresponsen til hver organisme ved belastning og kjønnstestet etter protokollen ovenfor. Siden det ikke ble observert forskjeller mellom doseresponskurvene til mannlige og kvinnelige mygg i hver stamme (t = 1,70, p = 0,098 for ROCK og t = 0,64, p = 0,527 for IICC), ble data fra begge kjønn innenfor hver myggstamme samlet. Den masse-relativiserte LD50 for ROCK og IICC er henholdsvis 0,008 ng/mg (95 % KI: 0-0,104) og 0,336 ng/mg (95 % KI: 0,235-0,438). De 95% CIene av disse verdiene overlapper ikke, noe som indikerer signifikant forskjellige doseresponser av stammene. RR for IICC-stammen (i forhold til ROCK-stammen) er 41,7, som ifølge WHO regnes som svært motstandsdyktig5. For Canton-S fruktfluer er den masse-relativiserte LD50 0,213 ng/mg (95% KI: 0-0,490).
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63391/63391fig02.jpg"> Figur 2: Representative data om mygg ved hjelp av aktuell anvendelse bioassay. Representative doseresponsdata fra aktuell applikasjonsbioassay etter ovennevnte protokoll ved hjelp av deltametrin og mygg: (A) kvinnelige Ae. aegypti ROCK (n = 880) og IICC (n = 550) stammer, (B) mannlige Ae. aegypti ROCK (n = 880) og IICC (n = 569) stammer. Deltametrintestkonsentrasjonene varierte fra 0,00075 ng/μL til 9,68705 ng/μL, og dosen av deltametrin påført (ng) per gjennomsnittlig myggmasse (mg) reflekteres på x-aksen. Dødelighet vises som en andel på y-aksen. Den svarte linjen gjennom hver datapunktklynge representerer belastningen og kjønnsspesifikk lineær regresjon. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63391/63391fig02large.jpg" target="_blank">Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63391/63391fig03.jpg"> Figur 3: Representative data om fruktfluer ved hjelp av aktuell anvendelsesbioassay. Representative doseresponsdata fra aktuell applikasjonsbioassay etter protokollen ovenfor ved hjelp av deltametrin og fruktfluer: D. melanogaster Canton-S-stamme (n = 1014). Deltametrintestkonsentrasjonene varierte fra 0,00499 til 5,02876 ng/μL, og dosen av deltametrin påført (ng) per gjennomsnittlig fruktfluemasse (mg) reflekteres på x-aksen. Dødelighet vises som en andel på y-aksen. Den svarte linjen representerer den lineære regresjonen. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63391/63391fig03large.jpg" target="_blank">Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.</a>
Supplerende figur S1: Benkeplate insekthåndteringstelt. Benkeplate insekthåndteringstelt brukes til enklere fangst av å unnslippe mygg eller fluer under den aktuelle applikasjonsanalysen. Strukturen er lukket i A og åpen i B. Denne strukturen ble bygget med PVC-rør og finmasket stoff. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63391/Supplemental_Figure1.Final.V1.pdf" target="_blank">Klikk her for å laste ned denne filen.</a>
Supplerende figur S2: Sprøyte- og repeaterapplikatorenhet. Sprøyte- og repeaterapplikatorenhet som brukes til dosering av insekter. Hoveddelene inkluderer 1) kanyle, 2) sprøytefat, 3) stempel, 4) repeater og 5) repeaterknapp. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63391/Supplemental_Figure2.Final.V1.pdf" target="_blank">Klikk her for å laste ned denne filen.</a>
Tilleggsfil 1: Randomiseringsskript: Randomiseringsskript for å lage ikke-partiske etiketter for alle kopper av hvert eksperiment. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63391/Supplemental_File1_Randomization.Script.Final.V1.docx" target="_blank">Klikk her for å laste ned denne filen.</a>
Supplerende fil 2: Dødelighetsresultatark: Dødelighetsskår for å hjelpe dødelighetsvurdering. Sheet inkluderer også steder å registrere all annen viktig informasjon som skal registreres, som referert i protokollen, for eksempel start- og sluttidspunkt for insektmiddelapplikasjonen. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63391/Supplemental_File2_Mortality.Score.Sheet.Final.V1%20(1).docx" target="_blank">Klikk her for å laste ned denne filen.</a>
Supplerende fil 3: Eksempel på dødelighetsdata: Eksempeldatafil som brukes til å opprette figur 2. Kolonneoverskriftsbeskrivelsene er som følger: "id" = identifikasjonskode for hvert datapunkt. "arter" = artsnavn (f.eks. Aedes aegypti); "insektmiddel" = navn på insektmiddel topisk påført (f.eks. Deltametrin); "stamme" = myggstammenavn (f.eks. "date" = startdato aktuell søknad; "sex" = myggens kjønn; "alder" = mygg alder (ung = 3-5-dagers gammel; gammel = 4 uker gammel); "total.mosq" = totalt antall mygg veid i batch; "vekt" = vekt (mg) av alle mygg i batch; "konsentrasjon" = konsentrasjon av insektmiddel (μg / ml); "sprøyte" = dråpevolum (ml) sprøyte; "dose" = mengde insektmiddel aktiv ingrediens påført hver mygg (ng); "totalt" = antall mygg i hver kopp; "død" = antall døde mygg i hver kopp. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63391/Supplemental_File3_Example.Data.Final.V1%20(1).txt" target="_blank">Klikk her for å laste ned denne filen.</a>
Supplerende fil 4: R analysekode: Eksempel på R-kode som kan brukes til å fullføre probitanalysen (som beskrevet i trinn 8 i protokollen). De representative resultatene (tilgjengelig via den supplerende eksempeldatafilen) kan brukes med denne R-koden. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63391/Supplemental_File4.Final.V3%20(1).R" target="_blank">Klikk her for å laste ned denne filen.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Topical Application Bioassay to Quantify Insecticide Toxicity for Mosquitoes and Fruit Flies at JoVE.com

Topical Application Bioassay to Quantify Insecticide Toxicity for Mosquitoes and Fruit Flies

Vi beskriver metodikken og betydningen av den aktuelle applikasjonen bioassay for å måle insektmiddel mottakelighet i mygg og fruktfluer. Den presenterte analysen er høy gjennomstrømning, utnytter insektmasse- og tillater dermed beregning av en masse-relativisert dødelig dose i stedet for konsentrasjon - og har sannsynligvis lavere variasjon enn andre lignende metoder.

Aktuell anvendelse Bioassay å kvantifisere insektmiddel toksisitet for mygg og frukt fluer

The continued use of insecticides for public health and agriculture has led to widespread insecticide resistance and hampering of control methods. ...

Ved å bruke insektmiddel direkte på insektet i stedet for gjennom overflatekontakt, er det minimal variasjon i insektmiddeleksponering, og dette gjør at vi kan måle følsomhetsprofilen til myggpopulasjoner mer nøyaktig. Den største fordelen med denne teknikken er at den lar oss beregne masse-relativiserte dødelige doser av et insektmiddel i stedet for dødelige konsentrasjoner, noe som i stor grad forbedrer sammenligninger av motstandsforhold. Vær forsiktig med å lagre insekticidene riktig, unngå å forurense verktøyene dine, og sørg for at sprøytedelene er i god form.Dette vil hjelpe deg med å oppnå konsistente resultater. Til å begynne med, fjern de nødvendige insektmiddelløsningene fra fryseren. Virvel straks løsningen eller inverter fem ganger, og legg den i en lysbestandig beholder ved romtemperatur for å la insekticidene varme til romtemperatur før bruk.Sett ut fem mikrocentrifuge rør med 0,5 milliliter aceton hver. Fyll sprøytefatet helt med aceton fra det første røret. Deretter utviser du acetonen i en avfallsbeholder ved raskt å skyve ned på stempelet, og gjenta fire ganger til for å fullføre totalt fem acetonvasker fra samme aceton aliquot.Fyll deretter sprøytefatet helt med luft, og utvis luft og potensielle acetonrester inn i avfallsbeholderen. Gjenta to ganger til for å fullføre tre vasker med luft. Lag en luftlomme i fatet mellom sprøytestempelen og toppen av nålen ved å trekke stempelet omtrent fem millimeter opp i fatet.Merk plastholderkoppene med tilfeldig ID for blind dødelighetsvurdering. Ved hjelp av en aspirator drevet av sug fra innånding, aspirer ønsket antall tre til fem dager gamle voksne mygg. Plasser spissen av aspiratoren i røret med bomull viklet rundt spissen.Pust forsiktig ut, og trykk på aspiratoren for å overføre myggene til et konisk rør. Bruk bomullen til å koble til røret når aspiratorspissen er fjernet, og deretter hette med lokket. Slå kort ned myggene i rørene ved å plassere dem i minst 10 minutter ved fire grader Celsius eller begrave dem under isen i et isbrett.Overfør de bankede myggene til insekthåndteringsteltet. Vipp myggene forsiktig ut på et plastbrett plassert på isen, og hell rundt 50 mygg om gangen for å sikre at hver berører den kjølige skuffen under den og forblir slått ned. Sorter myggene etter kjønn ved å forsiktig plukke dem opp av bena eller vingene med tang, etterfulgt av å plassere hvert kjønn i en separat holdekopp, og stopp når ønsket nummer er nådd.Mens du sorterer, fjern mygg som er skadet eller er ekstra store eller små. For å registrere vekten av myggkoppen, legg en tom kopp med en Petri-tallerken som lokk på skalaen, og tjære skalaen. Hell myggene i beholderen, og legg lokket på toppen.Plasser beholderen på skalaen, og registrer den endelige vekten, sammen med antall mygg. Plasser straks koppen av prøver tilbake på isen for å holde dem immobilisert til alle kopper av prøven er veid. Del de tilberedte myggene i fem til ti separate kopper plassert på is, merket med tilfeldige ID-er.Bruk pinsett og en håndholdt teller for å oppnå 20 til 25 mygg per kopp. For å sortere fruktfluene, bedøv fluene ved hjelp av karbondioksid i syv sekunder. Hell fluene på en ispakke innpakket i benkpapir.Bruk en fin tippet pensel, skille og telle menn og kvinner. Bruk penselen til forsiktig å plukke opp de valgte fluene, og legg dem i en ren, tom lagerflaske. Etter å ha valgt like mange mannlige og kvinnelige fruktfluer, merk lagerflaskene med stammenavnet og fruktfluen totalt.Bedøv flasken med fruktfluer ved hjelp av karbondioksid i syv sekunder. Hell fruktfluene på veiepapir, og bruk papiret som en trakt for å introdusere fluene i et tared hetteglass merket med en tilfeldig ID.Etter å ha plassert Petri-parabollokket på toppen av hetteglasset med fruktfluer, plasser det på skalaen. Registrer den kombinerte vekten og antall prøver på resultatarket.Plasser straks hetteglasset med fruktfluer i et brett med is med lokket fortsatt på toppen for å forhindre at fluene rømmer. Last sprøyten med riktig insektmiddelkonsentrasjon, start med den minst konsentrerte dosen og arbeid mot den mest konsentrerte dosen med hver gruppe organismer. Tipp prøvene på veiepapir plassert på toppen av et brett på isen.Skill prøvene som er tett sammen ved hjelp av en ren insektmiddelfri pensel eller bomullspinne for å gi enkel tilgang til hver prøve for dosering. Bruk sprøyten, bruk en dråpe insektmiddelløsning på ventral thorax og mageområde for mygg og dorsum for fruktfluer. Hell straks prøvene tilbake i den merkede plastkoppen.Dekk koppen med netting og et gummibånd. Legg merke til en oppdatert prøvetelling på koppen hvis noen prøver ble drept, skadet eller rømt i denne prosessen. Plasser den ferdige koppen i en holderbrett.For den første koppen registrerer du tiden når doseringen er fullført. Gjenta dosering for hver kopp til alle prøvene er dosert med riktig insektmiddelkonsentrasjon, og registrer sluttidspunktet når alle prøvene er dosert. Gi 10% sukroseløsning til hver kopp via en våt bomullskule, og lagre mygg og fruktfluer ved ønsket temperatur og fuktighet.Registrer prøvedødelighet ved 24 timer etter starten av insektmiddeleksponering. Klassifisere mygg som levende hvis de kan fly og holde seg oppreist og døde hvis de er immobile eller ataxic, som beskrevet av WHO. Følg samme dødelighetsvurdering for fruktfluer.Etter å ha utført bioassay, dose respons data ble innhentet med to stammer som er Rockefeller og IICC genotype for mannlige og kvinnelige Aedes aegypti. Den masse-relativiserte median dødelige dosen for Rockefeller og IICC var henholdsvis 0,008 og 0,336 nanogram per milligram. Resultatene viste ingen forskjeller mellom doseresponskurvene til kvinnelige og mannlige mygg innenfor hver stamme.Derfor ble data fra begge kjønn kombinert for å beregne median dødelige doseverdier. Siden 95% konfidensintervaller for median dødelig dose av disse to stammene ikke overlappet, ble disse verdiene ansett som betydelig forskjellige. I tillegg, når du beregner de motstandsdyktige forholdene, var IICC-stammen over 40 ganger mer motstandsdyktig enn den mottakelige Rockefeller-stammen.Doseresponsdata for fruktflue, Drosophila melanogaster, Canton-S-stamme, ble også innhentet, og den masse-relativiserte median dødelige dosen ble funnet å være 0,213 nanogram per milligram. Konsistens er kritisk, spesielt når du lagrer og bruker insektmiddelet og vurderer dødelighet. Vær også forsiktig når du håndterer prøven for å unngå skade eller død som ikke er indusert av insektmiddelet.Med denne metoden kan vi nå nøyaktig bestemme den tekniske motstanden til en myggpopulasjon og hvordan miljøforholdene påvirker motstand eller hvordan teknisk motstand forutsier praktisk motstand.

Research

JoVE Journal

Biology

Studying Aggression in Drosophila (fruit flies)

Studying Aggression in Drosophila fruit flies

Aggression is an innate behavior that evolved in the framework of defending or obtaining resources.  This complex social behavior is influenced by ...

Bioassays for Monitoring Insecticide Resistance

Pest resistance to pesticides is an increasing problem because pesticides are an integral part of high-yielding production agriculture. When few products ...

An Optimized Protocol for Rearing Fopius arisanus, a Parasitoid of Tephritid Fruit Flies

An Optimized Protocol for Rearing Fopius arisanus, a Parasitoid of Tephritid Fruit Flies

Fopius arisanus (Sonan) is an important parasitoid of Tephritid fruit flies for at least two reasons. First, it is the one of only three opiine ...

Isolation and Biophysical Study of Fruit Cuticles

Isolering og Biofysikalsk Study of Fruit neglebåndene

The cuticle, a hydrophobic protective layer on the aerial parts of terrestrial plants, functions as a versatile defensive barrier to various biotic and ...

A Multi-detection Assay for Malaria Transmitting Mosquitoes

En Multi-deteksjon analysen for Malaria Sending Mygg

The Anopheles gambiae species complex includes the major malaria transmitting mosquitoes in Africa. Because these species are of such medical importance, ...

Techniques to Induce and Quantify Cellular Senescence

Teknikker for å indusere og kvantifisere Cellular Senescence

In response to cellular stress or damage, proliferating cells can induce a specific program that initiates a state of long-term cell-cycle arrest, termed ...

Laboratory Rearing of Stable Flies and Other Muscoid Diptera

Laboratoriet oppdrett av stabil fluer og andre Muscoid Diptera

Stable flies, Stomoxys calcitrans, are serious pests of livestock, humans, companion animals and wildlife worldwide. During the last 20+ years, changes in ...

Protocols for Testing the Toxicity of Novel Insecticidal Chemistries to Mosquitoes

Protokoller for Testing toksisitet av romanen Insecticidal kjemikalier til mygg

New classes of insecticides with novel modes of action are needed to control insecticide resistant populations of mosquitoes that transmit diseases such ...

Nasal Potential Difference to Quantify Trans-epithelial Ion Transport in Mice

Nasal potensiell forskjell å kvantifisere Trans-epitelial Ion Transport i mus

The nasal potential difference test has been used for almost three decades to assist in the diagnosis of cystic fibrosis (CF). It has proven to be helpful ...

Forced Salivation As a Method to Analyze Vector Competence of Mosquitoes

Tvunget spyttsekresjon som metode for å analysere vektor kompetanse med mygg

Vector competence is defined as the potential of a mosquito species to transmit a mosquito-borne virus (mobovirus) to a vertebrate host. Viable virus ...