Name: in vivo imaging of biological tissues with combined two-photon fluorescence and stimulated raman scattering microscopy
Uploaded: 2021-12-20T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In vivo Imaging of Biological Tissues with Combined Two-Photon Fluorescence and Stimulated Raman Scattering Microscopy at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet av Hong Kong Research Grants Council gjennom tilskudd 16103215, 16148816, 16102518, 16102920, T13-607/12R, T13-706/11-1, T13-605/18W, C6002-17GF, C6001-19E, N_HKUST603/19, Innovation and Technology Commission (ITCPD/17-9), Area of Excellence Scheme of the University Grants Committee (AoE/M-604/16, AOE/M-09/12) og Hong Kong University of Science &Technology (HKUST) gjennom tilskudd RPC10EG33.

Alle dyreprosedyrer som utføres i dette arbeidet utføres i henhold til retningslinjene fra Laboratory Animal Facility ved Hong Kong University of Science and Technology (HKUST) og er godkjent av Animal Ethics Committee of HKUST. Sikkerhetsopplæring for laserhåndtering er nødvendig for å sette opp og betjene TPEF-SRS mikroskopet. Bruk alltid lasersikkerhetsbriller med passende bølgelengdeområde når du arbeider med laser.
1. Oppsett av TPEF-SRS mikroskopet (for oppsett skjematisk ...

I denne protokollen er det grunnleggende oppsettet av TPEF-SRS-mikroskopet beskrevet i detalj. For SRS-avbildning er pumpen og Stokes-bjelkene timelig og romlig overlappet inne i OPO. Denne overlappingen kan imidlertid avbrytes etter å ha passert gjennom mikroskopsystemet. Derfor er både romlig og tidsmessig optimalisering av colokaliseringen av pumpen og Stokes bjelker nødvendig og kritisk for å oppnå optimal SRS-avbildning. Den tidsmessige forsinkelsen mellom pumpen og Stokes-strålen er relatert til den optiske ...

Raman mikroskopi1,2 fremstår som en kraftig etikettfri metode for å avbilde biologisk vev basert på de karakteristiske frekvensene av ulike kjemiske bindinger i biomolekyler. På grunn av sin ikke-invasive og godt adaptive bildebehandlingsevne har Raman-mikroskopi blitt mye brukt til å avbilde lipidberikede komponenter i biologisk vev som myelinhylse3,4,5, adipocytter6,7 og lipiddråper8,9,10 . Stimulert Raman spredning (SRS) signal ervervet som stimulert Raman gain (SRG) eller stimulert Raman tap (SRL) er bakgrunnsfri, viser perfekt spektral likhet med spontan Raman spredning11,12. I tillegg er SRL og SRG lineært avhengige av analyttkonsentrasjonen, noe som muliggjør kvantitativ analyse av biokjemiske komponenter9,11,13. To-foton spent fluorescensmikroskopi (TPEF) har blitt mye brukt til in vivo biologisk avbildning på grunn av sin iboende optiske seksjoneringsevne, dyp penetrasjonsdybde og lav fototoksisitet14,15,16. Ytelsen til TPEF-avbildning avhenger imidlertid av egenskapene til fluorescerende koder, og antall løselige farger er begrenset på grunn av bredbåndsfluorescensspektraet8,17,18,19. Etikettfri SRS-avbildning og fluorescensbasert TPEF-avbildning er to komplementære bildemodaliteter, og deres kombinasjon kan gi rikelig biofysisk og biokjemisk informasjon om vev. Disse to bildemodalitetene er begge basert på de ikke-lineære optiske (NLO) prosessene, noe som muliggjør enkel integrasjon i ett mikroskopsystem. Kombinasjonen av SRS- og TPEF-avbildningen, den såkalte dual-modale avbildningen, muliggjør høydimensjonal avbildning og profilering av celler og vev, noe som letter en omfattende forståelse av komplekse biologiske systemer. Nærmere bestemt kan picosecond (ps) SRS-mikroskopi oppnå kjemisk bindingsavbildning med høy spektral oppløsning sammenlignet med femtosecond (fs) SRS-teknikk11, noe som gjør det mulig å skille mellom flere biokjemiske komponenter i biologisk vev, spesielt i det overfylte fingeravtrykkområdet20,21. I tillegg, sammenlignet med et annet ofte brukt dobbeltmodalt NLO-mikroskopsystem med integrasjon av sammenhengende anti-Stokes spredningsmikroskop (CARS), viser SRS overlegen ytelse til CARS når det gjelder spektral- og bildetolkning samt deteksjonsfølsomhet11. SRS-TPEF mikroskopet har blitt brukt som et kraftig verktøy for å studere ulike biologiske systemer, for eksempel Caenorhabditis elegans9,22, Xenopus laevis tadpole brain5, mus hjerne23,24, ryggmargen25,26, perifer nerve27, og fettvev7, etc.
Ryggmargen sammen med hjernen utgjør sentralnervesystemet (CNS). Visualisering av cellulære aktiviteter i CNS in vivo under fysiologiske og patologiske forhold er avgjørende for å forstå mekanismene for CNS-lidelser28,29,30 og for å utvikle tilsvarende terapier31,32,33. Myelinhylse, som vikler og isolerer aksoner for høyhastighets handling potensiell ledning, spiller en betydelig rolle i utviklingen av CNS. Demyelinasjon er tenkt som et kjennetegn i hvite materieforstyrrelser, for eksempel multippel sklerose34. I tillegg, etter ryggmargsskade35, kan myelinrester modulere makrofagaktivering, noe som bidrar til kronisk betennelse og sekundær skade36. Derfor er in vivo-avbildning av myelinhylse sammen med nevroner og glialceller i levende musemodeller til stor hjelp for å forstå de dynamiske prosessene i CNS-lidelser.
I denne protokollen beskrives de grunnleggende oppsettsprosedyrene for et hjemmebygd TPEF-SRS-mikroskop, og de doble modale in vivo-avbildningsmetodene for musens ryggmarg introduseres.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>#2 Forceps</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>11223-20</td>
			<td>For laminectomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10X objective</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>CFI Plan Apo Lambda 10X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25X objective</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>XLPLN25XSVMP2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Burn cream</td>
			<td>Betadine</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera</td>
			<td>Sony</td>
			<td>&#945;6300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Current amplifier</td>
			<td>Stanford research</td>
			<td>SR570</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Current photomultiplier modules</td>
			<td>Hamamatsu</td>
			<td>H11461-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D2 665 nm long-pass dichroic mirror</td>
			<td>Semrock</td>
			<td>FF665-Di02-25x36</td>
			<td>For directing epi-fluorescence signal to the detection module</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D3 700 nm short-pass dichroic mirror</td>
			<td>Edmund</td>
			<td>69-206</td>
			<td>For separating SRS from TPEF detection path</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Depilating cream</td>
			<td>Veet</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FS1 975 nm short-pass filter</td>
			<td>Edmund</td>
			<td>86-108</td>
			<td>For blocking stokes beam</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FS1 Bandpass filter</td>
			<td>Semrock</td>
			<td>FF01-850/310</td>
			<td>For blocking stokes beam</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fs2 Bandpass filter</td>
			<td>Semrock</td>
			<td>FF01-525/50</td>
			<td>For selecting YFP signal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fs2 Shortpass filter</td>
			<td>Semrock</td>
			<td>FF01-715/SP-25</td>
			<td>For blocking fs excitation laser beam</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Half-wave plate</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>SAHWP05M-1700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High-speed photodetector</td>
			<td>MenloSystems</td>
			<td>FPD 310-F</td>
			<td>For checking Stokes beam modulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodine</td>
			<td>Betadine</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IR Scope</td>
			<td>FJW</td>
			<td>FIND-R-SCOPE Infrared Viewer 2X Kit Model 84499C2X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>CPA1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L1</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>AC254-060-B-ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L10</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>LA4052-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L2</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>LA1422-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L3</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>AC254-050-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L4</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>AC254-060-B-ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L7</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>f=100 mm, AB coating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L8</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>LA4874-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L9</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>AC254-035-B-ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lock-in amplifier</td>
			<td>APE</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mirror</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>PF10-03-P01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Motorized flipper</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>MFF101/M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>multifunctional acquisition card</td>
			<td>National Instrument</td>
			<td>PCIe-6363</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oscilloscope</td>
			<td>Tektronix</td>
			<td>TDS2012C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photodiode</td>
			<td>APE</td>
			<td></td>
			<td>For detecting SRS signal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Picosecond laser source</td>
			<td>APE</td>
			<td>picoEmerald</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polarizing beam splitter</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>CCM1-PBS252/M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power meter</td>
			<td>Newport</td>
			<td>843-R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline</td>
			<td>Braun</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scan lens L5</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>SL50-CLS2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scanning mirror</td>
			<td>Cambridge Technology</td>
			<td>6215H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone gel</td>
			<td>World Precision Inc.</td>
			<td>KWIK-SIL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ti:sapphire fs laser</td>
			<td>Coherent</td>
			<td>Chameleon Ultra II</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tube lens L6</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>TTL200-S8</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo imaging of biological tissues with combined two-photon fluorescence and stimulated raman scattering microscopy

Stimulert Raman-spredning (SRS) mikroskopi muliggjør etikettfri avbildning av det biologiske vevet i sitt naturlige mikromiljø basert på iboende molekylær vibrasjon, og gir dermed et perfekt verktøy for in vivo-studie av biologiske prosesser ved subcellulær oppløsning. Ved å integrere to-foton spent fluorescens (TPEF) bildebehandling i SRS mikroskop, dual-modal in vivo avbildning av vev kan skaffe kritisk biokjemisk og biofysisk informasjon fra flere perspektiver som bidrar til å forstå de dynamiske prosessene involvert i cellulær metabolisme, immunrespons og vev ombygging, etc. I denne videoprotokollen introduseres oppsettet av et TPEF-SRS-mikroskopsystem samt in vivo-avbildningsmetoden til dyrets ryggmarg. Ryggmargen, som en del av sentralnervesystemet, spiller en kritisk rolle i kommunikasjonen mellom hjernen og perifert nervesystem. Myelinhylse, rikelig i fosfolipider, omgir og isolerer axonen for å tillate saltatorisk ledning av virkningspotensialer. In vivo avbildning av myelinhylser i ryggmargen er viktig for å studere utviklingen av nevrodegenerative sykdommer og ryggmargsskade. Protokollen beskriver også dyreforberedelse og in vivo TPEF-SRS avbildningsmetoder for å skaffe seg biologiske bilder med høy oppløsning.

In vivo dual-modal avbildning av spinal axoner samt myelinhylser utføres ved hjelp av Thy1-YFPH transgene mus, som uttrykker EYFP i dorsal rot ganglion afferent neuroner (Figur 3). Disse merkede afferent nevronene videresender sensorisk informasjon fra perifer nerve til ryggmargen, med den sentrale grenen plassert i ryggmargens dorsalkolonne. Med TPEF-SRS-mikroskopet kan tett distribuert myelinhylse tydelig visualiseres ved hjelp av etikettfri SRS-avbildning, og tynt merkede YFP-ak...

Watch this Scientific Journal Video about In vivo Imaging of Biological Tissues with Combined Two-Photon Fluorescence and Stimulated Raman Scattering Microscopy at JoVE.com

In vivo Imaging of Biological Tissues with Combined Two-Photon Fluorescence and Stimulated Raman Scattering Microscopy

Stimulert Raman-spredning (SRS) mikroskopi tillater etikettfri avbildning av biomolekyler basert på deres iboende vibrasjon av spesifikke kjemiske bindinger. I denne protokollen er det instrumentelle oppsettet av et integrert SRS og to-foton fluorescensmikroskop beskrevet for å visualisere cellulære strukturer i ryggmargen til levende mus.

In vivo Avbildning av biologisk vev med kombinert to-foton fluorescens og stimulert ramanspredningsmikroskopi

Stimulated Raman scattering (SRS) microscopy enables label-free imaging of the biological tissues in its natural microenvironment based on intrinsic ...

In Vivo-avbildning av biologisk vev med subcellulær oppløsning og kjemisk spesifisitet er et kraftig verktøy for å forstå de dynamiske prosessene som er involvert i cellulær metabolisme, immunrespons og vevsoppussing. Med kombinert to-foton fluorescens og stimulert Raman spredningsmikroskopi, kan kritisk biokjemisk og biofysisk informasjon om biologisk vev anskaffes fra flere perspektiver med subcellulær oppløsning. Spesielt kan denne doble modale mikroskopien brukes til å avbilde cellulær dynamikk og interaksjoner i musens ryggmarg for å studere utviklingen av nevrodegenerative sykdommer og ryggmargsskade.Til å begynne med, slå på titan safirlaseren ved å bytte nøkkelbryteren fra standby til på-posisjon og vent i 30 minutter på at laseren skal varme opp. Slå deretter på OPO ved å klikke på startknappen på OPO-kontrollpanelet og vent i 20 minutter til laseren varmes opp. Etter at picosecond-laseren varmes opp, må du kontrollere stokesstrålens modulasjonsdybde ved å senke stokesstrålens kraft til ca. 20 milliwatt, åpne laserlukkeren for Stokes-strålen og plassere en høyhastighets fotodetektor ved OPO-utgangen for å oppdage strålen.Deretter kobler du utgangsporten til fotodetektoren til inngangsporten til et oscilloskop ved hjelp av en koaksialkabel med en BNC-kontakt for å overvåke laserpulsen. Åpne deretter EOM-kontrollvinduet i OPO-kontrollprogramvaren og juster EOM-kraften og -fasen i henhold til pulsintensitetsdiagrammet som vises på oscilloskopet for å oppnå maksimal modulasjonsdybde på 20 megahertz. I OPO-kontrollprogramvaren åpner du pumpelaserlukkeren mens du stopper Stokes-utgangen.Deretter klikker du på den innstilte signalboksen for å sette bølgelengden til pumpestrålen til 796 nanometer, deretter klikker du på den innstilte OPO-strømboksen og skriver inn 20 for å stille inn strømmen til minimum for optisk justering. Deretter plasserer du justeringsplaten P1 bak polariserende bjelkesplitter på ca. 10 centimeter og plasserer plate P2 bak P1 på ca. 30 centimeter på den optiske banen. Når du har åpnet mikroskopets lukker for picosecond-laserstrålen, justerer du speilet M1 for å finne picosecond laserstrålesenter ved gjennomgående hull på P1. Bruk et infrarødt omfang for å observere posisjonen til strålepunktet ved P1 når du justerer speilet M1. På samme måte justerer du speilet M2 for å finne picosecond laserstrålesenter ved gjennomgående hull på P2. Bruk det infrarøde omfanget til å observere posisjonen til strålepunktet ved P2 når du justerer speilet M2. Når du har justert speilene til picosecond-strålesenteret finner gjennomgående hull på begge justeringsplatene, lukker du lukkeren på picosecond-strålen i mikroskopkontrollprogramvaren.Deretter åpner du mikroskopdeksel for femtosecond laserstrålen. Juster speil-M3 for å finne femtosecond laserstrålepunktsenteret ved gjennomgående hull på P1, og juster deretter speil M4 for å finne femtosecond laserstrålepunktsenteret ved gjennomgående hull på P2. Når du har justert speilene til femtosecond laserstrålesenter befinner seg ved hullene på de to justeringsplatene, lukker du mikroskopdeksel for femtosecond-strålen. Deretter plasserer du et kamera i posisjon til målet om å visualisere plasseringen av de to strålepunktene og markere posisjonen til pumpestrålen på kameraskjermen som referanse.Plasser deretter en justeringsplate P0 foran objektivet L3 og juster det optiske speilet med en sekskantnøkkel slik at Stokes strålesenter passerer gjennom hullet på justeringsplaten ved laserutgangsporten. Bruk det infrarøde omfanget til å bekrefte posisjonen til strålepunktet ved P0 under justering. Deretter fjerner du justeringsplaten P0 og bruker sekskantnøkkelen til å justere det optiske speilet to slik at midten av Stokes-strålen samlokaliseres sammen med referansemerket til pumpestrålen på kameraet.Fortsett å justere speilene til Stokes-strålen overlapper med pumpestrålen på både P0 og kameraplanene. Åpne programvaren for innlåsingsforsterkerkontroll og sett pumpelaserens bølgelengde til 796 nanometer og pumpens og Stokes-strålens kraft til henholdsvis 50 og 70 milliwatt tilsvarende henholdsvis 15 og 25 milliwatt på prøven. Bruk deretter olivenolje for innlåsing av forsterkerfaseoptimalisering.Olivenoljen er forseglet i et lysbilde med vevpapir festet til bunnen for å forbedre signalet tilbake spredning eller EPI-SRS deteksjon. Plasser olivenoljeprøven på scenen og juster fokuset på 25X-målet på prøven. Bruk mikroskopkontrollprogramvaren til å angi bildeparameterne som nevnt i tekstmanuskriptet.Deretter bruker du programvaren for innlåsingsforsterkerkontroll, og setter tidskonstantverdien til 10 mikroseconds. Deretter skanner du laserstrålen over prøven, justerer fasen med en trinnstørrelse på 22,5 grader til SRS-signalintensiteten når maksimum. Skann deretter prøven med laserlukkeren lukket, og juster forskyvningsverdien med en trinnstørrelse på en millivolt til det gjennomsnittlige SRS-signalet er nær null.Deretter åpner du dialogboksen for forsinkelsesbehandling i OPO-kontrollprogramvaren og skanner olivenoljen, og justerer forsinkelsesfasen til olivenoljen SRS-signalet når sitt maksimale. Stopp deretter skanningen og klikk på legg til data-knappen i dialogboksen for forsinkelsesbehandling for å registrere gjeldende forsinkelsesdata. Etter å ha anskaffet forsinkelsesdata ved forskjellige Raman-skift ved å avbilde ulike kjemiske prøver, velger du datatilpasning i rekkefølge fem i forsinkelsesbehandlingsdialogboksen for å passe til de nåværende datapunktene med den femte rekkefølgen polynomfunksjon.Bruk deretter de monterte dataene ved å klikke på bruk som tilpasset knapp og merke av i avmerkingsboksen. Forsinkelsesstadiet justeres automatisk ved forskjellige bølgelengder i henhold til den monterte forsinkelseskurven. For in vivo-avbildning, fest musen på stabiliseringsstadiet med ryggmargen eksponert og nedsenket i saltvann.Monter nå stabiliseringstrinnet på et femaksestadium under TPEF-SRS-mikroskopet. Fest deretter musehodet med to hodestenger og senk holdeplaten for å gi nok plass til brystbevegelse under pusten, og lindre bevegelsesartefakter. Deretter justerer du Z-translasjonsstadiet for å justere fokuset til Brightfield-bildet av ryggmargens vaskulatur kan observeres under et 10X-mål.Finn ryggmargens dorsale vene i midten av synsfeltet ved å stille inn toaksens translasjonsstadium av femaksestadiet. Deretter justerer du rulle- og tonehøydevinklene på femaksetrinnet for å justere ryggmargens dorsale overflate vinkelrett på målaksen basert på Brightfield-bildet. Bytt deretter ut 10X med et 25X vanninnlevelsesmål for TPEF-SRS-avbildning.For SRS-avbildning velger du polariserende strålesplitter over målet ved å trykke på bryterknappen som er koblet til den motoriserte flipperen. For TPEF-avbildning velger du det dikroiske speilet D2 over målet ved å trykke på bryterknappen som er koblet til den motoriserte flipperen. Til slutt angir du bildeparameterne som beskrevet i tekstmanuskriptet, og begynner å skanne prøven.In vivo dual-modal avbildning av tynt merkede YFP-aksoner og myelinhylser i musens ryggmarg avslørte at axonene er tett innpakket av et tykt lag med myelinhylser. Som det fremgår av TPEF-SRS ryggmargsbildet, har nodene til Ranvier redusert axonal diameter og axilemma er direkte utsatt for den ekstracellulære matrisen. Kombinert med nye sonder for fluorescens og SRS-avbildning kan tofoton begeistret fluorescens SRS-mikroskopi oppnå samtidig strukturell og funksjonell avbildning av ulike biomolekyler, noe som letter vår forståelse av komplekse biologiske prosesser.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

In vivo Imaging of Biological Tissues with Combined Two-Photon Fluorescence and Stimulated Raman Scattering Microscopy

Rejection of Fluorescence Background in Resonance and Spontaneous Raman Microspectroscopy

Raman spectroscopy is often plagued by a strong fluorescent background, particularly for biological samples. If a sample is excited with a train of ...

Three-dimensional Optical-resolution Photoacoustic Microscopy

Optical microscopy, providing valuable insights at the cellular and organelle levels, has been widely recognized as an enabling biomedical technology. As ...

Small and Wide Angle X-Ray Scattering Studies of Biological Macromolecules in Solution

Små og vidvinkel X-ray spredning Studier av biologiske makromolekyler i Solution

In this paper, Small and Wide Angle X-ray Scattering (SWAXS) analysis of macromolecules is demonstrated through experimentation. SWAXS is a technique ...

Creating Adhesive and Soluble Gradients for Imaging Cell Migration with Fluorescence Microscopy

Opprette Lim og Løselig overgangar for Imaging Cell Migration med fluorescens mikroskopi

Cells can sense and migrate towards higher concentrations of adhesive cues such as the glycoproteins of the extracellular matrix and soluble cues such as ...

Imaging of Biological Tissues by Desorption Electrospray Ionization Mass Spectrometry

Avbildning av biologisk vev ved Desorpsjon Elektrospray Ionization massespektrometri

Mass spectrometry imaging (MSI) provides untargeted molecular information with the highest specificity and spatial resolution for investigating biological ...

Long-term Intravital Immunofluorescence Imaging of Tissue Matrix Components with Epifluorescence and Two-photon Microscopy

Langsiktig Intravital Immunfluorescens Imaging av Tissue Matrix Komponenter med epifluorescence og To-foton mikroskopi

Besides being a physical scaffold to maintain tissue morphology, the extracellular matrix (ECM) is actively involved in regulating cell and tissue ...

High-resolution Spatiotemporal Analysis of Receptor Dynamics by Single-molecule Fluorescence Microscopy

Høyoppløselig Spatiotemporal Analyse av Receptor Dynamics av ​​Single-molekyl fluorescens mikroskopi

Single-molecule microscopy is emerging as a powerful approach to analyze the behavior of signaling molecules, in particular concerning those aspect (e.g., ...

3D Orbital Tracking in a Modified Two-photon Microscope: An Application to the Tracking of Intracellular Vesicles

3D Orbital Tracking i en modifisert to-foton Microscope: en søknad til sporing av intracellulær Blemmer

The objective of this video protocol is to discuss how to perform and analyze a three-dimensional fluorescent orbital particle tracking experiment using a ...

Fluorescence-quenching of a Liposomal-encapsulated Near-infrared Fluorophore as a Tool for In Vivo Optical Imaging

Fluorescence-quenching of a Liposomal-encapsulated Near-infrared Fluorophore as a Tool for In Vivo Optical Imaging

Fluorescens-slukking av en Liposomalinnkapslet Nær-infrarød fluoroforen som et verktøy for<em&gt; I Vivo</em&gt; Optisk Imaging

Optical imaging offers a wide range of diagnostic modalities and has attracted a lot of interest as a tool for biomedical imaging. Despite the enormous ...

Conducting Multiple Imaging Modes with One Fluorescence Microscope

Gjennomføre flere Imaging modi med en fluorescens mikroskopet

Fluorescence microscopy is a powerful tool to detect biological molecules in situ and monitor their dynamics and interactions in real-time. In addition to ...