Name: in vivo imaging of biological tissues with combined two-photon fluorescence and stimulated raman scattering microscopy
Uploaded: 2021-12-20T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In vivo Imaging of Biological Tissues with Combined Two-Photon Fluorescence and Stimulated Raman Scattering Microscopy at JoVE.com

Detta arbete stöddes av Hong Kong Research Grants Council genom bidrag 16103215, 16148816, 16102518, 16102920, T13-607/12R, T13-706/11-1, T13-605/18W, C6002-17GF, C6001-19E, N_HKUST603/19, Innovation and Technology Commission (ITCPD/17-9), området för excellensprogram för university grants committee (AoE/M-604/16, AOE/M-16)

Alla djurförsök som utförs i detta arbete utförs i enlighet med riktlinjerna från Laboratory Animal Facility vid Hong Kong University of Science and Technology (HKUST) och har godkänts av HKUST:s djuriska kommitté. Säkerhetsutbildning för laserhantering krävs för att installera och driva TPEF-SRS-mikroskopet. Använd alltid laserglasögon med lämplig våglängdsintervall när du hanterar laser.
1. Installation av TPEF-SRS-mikroskopet (för installationsschema se <str...

I det här protokollet beskrivs den grundläggande inställningen av TPEF-SRS-mikroskopet i detalj. För SRS-avbildning överlappas pump- och Stokesstrålarna tidsmässigt och rumsligt inuti OPO. Denna överlappning kan dock störas efter att ha passerat genom mikroskopsystemet. Därför är både rumslig och tidsmässig optimering av colocalization av pumpen och Stokes strålar nödvändigt och avgörande för att uppnå optimal SRS-avbildning. Den tidsmässiga fördröjningen mellan pumpen och Stokes-strålen är rela...

Raman mikroskopi1,2 växer fram som en kraftfull etikettfri metod för att avbilda biologiska vävnader baserat på de karakteristiska frekvenserna av olika kemiska bindningar i biomolekyler. På grund av sin icke-invasiva och välanpassade avbildningsförmåga har Raman-mikroskopi använts i stor utsträckning för att avbilda lipidberikade komponenter i biologiska vävnader som myelslida3,4,5, adipocyter6,7 och lipiddroppar8,9,10 . Stimulerad Raman spridning (SRS) signal förvärvas som stimulerad Raman vinst (SRG) eller stimulerad Raman förlust (SRL) är bakgrundsfri, visar perfekt spektral likhet med spontan Raman spridning11,12. Dessutom är SRL och SRG linjärt beroende av analytkoncentrationen, vilket möjliggör kvantitativ analys av biokemiska komponenter9,11,13. Två-foton upphetsad fluorescensmikroskopi (TPEF) har använts i stor utsträckning för in vivo biologisk avbildning på grund av dess inneboende optiska sektionsförmåga, djupa penetrationsdjup och låg fototoxicitet14,15,16. Prestandan hos TPEF-avbildning beror dock på egenskaperna hos fluorescerande taggar, och antalet lösta färger är begränsat på grund av bredbandsfluorescensspektra8,17,18,19. Label-free SRS imaging och fluorescence-baserade TPEF imaging är två kompletterande bildframställning modaliteter, och deras kombination kan ge riklig biofysisk och biokemisk information om vävnader. Dessa två bildframställningsmetoder är båda baserade på de icke-linjära optiska (NLO) processerna, vilket möjliggör enkel integration i ett mikroskopsystem. Kombinationen av SRS- och TPEF-avbildning, den så kallade dubbelmodala avbildningen, möjliggör högdimensionell avbildning och profilering av celler och vävnader, vilket underlättar en omfattande förståelse av komplexa biologiska system. Specifikt kan picosekund (ps) SRS-mikroskopi uppnå kemisk bondavbildning med hög spektralupplösning jämfört med femtosekund (fs) SRS-teknik11, vilket gör det möjligt att skilja flera biokemiska komponenter i biologisk vävnad, särskilt i den trånga fingeravtrycksregionen20,21. Jämfört med ett annat vanligt dubbelmodalt NLO-mikroskopsystem med integrering av sammanhängande anti-Stokes-spridningsmikroskop (CARS), visar SRS dessutom överlägsen prestanda för CARS när det gäller spektral- och bildtolkning samt detekteringskänslighet11. SRS-TPEF mikroskopet har använts som ett kraftfullt verktyg för att studera olika biologiska system, såsom Caenorhabditis elegans9,22, Xenopus laevis tadpole brain5, mushjärna23,24, ryggmärg25,26, perifer nerv27 och fettvävnad7, etc.
Ryggmärgen tillsammans med hjärnan utgör centrala nervsystemet (CNS). Visualisering av cellulära aktiviteter i CNS in vivo under fysiologiska och patologiska förhållanden är avgörande för att förstå mekanismerna för CNS störningar28,29,30 och för att utveckla motsvarande terapier31,32,33. Myelin-mantel, som lindar in och isolerar axoner för höghastighetsverkanspotentialledning, spelar en viktig roll i utvecklingen av CNS. Demyelination anses vara ett kännetecken i vit fråga störningar, såsom multipel skleros34. Dessutom, efter ryggmärgsskada35, myelin skräp kan modulera makrofag aktivering, bidra till kronisk inflammation och sekundär skada36. Därför är in vivo imaging av myelisk mantel tillsammans med nervceller och gliaceller i levande musmodeller till stor hjälp för att förstå de dynamiska processerna i CNS störningar.
I detta protokoll beskrivs de grundläggande installationsförfarandena för ett hembyggt TPEF-SRS-mikroskop och de dubbla modala in vivo-avbildningsmetoderna för mus ryggmärg introduceras.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>#2 Forceps</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>11223-20</td>
			<td>For laminectomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10X objective</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>CFI Plan Apo Lambda 10X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25X objective</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>XLPLN25XSVMP2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Burn cream</td>
			<td>Betadine</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera</td>
			<td>Sony</td>
			<td>&#945;6300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Current amplifier</td>
			<td>Stanford research</td>
			<td>SR570</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Current photomultiplier modules</td>
			<td>Hamamatsu</td>
			<td>H11461-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D2 665 nm long-pass dichroic mirror</td>
			<td>Semrock</td>
			<td>FF665-Di02-25x36</td>
			<td>For directing epi-fluorescence signal to the detection module</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D3 700 nm short-pass dichroic mirror</td>
			<td>Edmund</td>
			<td>69-206</td>
			<td>For separating SRS from TPEF detection path</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Depilating cream</td>
			<td>Veet</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FS1 975 nm short-pass filter</td>
			<td>Edmund</td>
			<td>86-108</td>
			<td>For blocking stokes beam</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FS1 Bandpass filter</td>
			<td>Semrock</td>
			<td>FF01-850/310</td>
			<td>For blocking stokes beam</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fs2 Bandpass filter</td>
			<td>Semrock</td>
			<td>FF01-525/50</td>
			<td>For selecting YFP signal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fs2 Shortpass filter</td>
			<td>Semrock</td>
			<td>FF01-715/SP-25</td>
			<td>For blocking fs excitation laser beam</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Half-wave plate</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>SAHWP05M-1700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High-speed photodetector</td>
			<td>MenloSystems</td>
			<td>FPD 310-F</td>
			<td>For checking Stokes beam modulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodine</td>
			<td>Betadine</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IR Scope</td>
			<td>FJW</td>
			<td>FIND-R-SCOPE Infrared Viewer 2X Kit Model 84499C2X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>CPA1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L1</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>AC254-060-B-ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L10</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>LA4052-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L2</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>LA1422-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L3</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>AC254-050-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L4</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>AC254-060-B-ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L7</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>f=100 mm, AB coating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L8</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>LA4874-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L9</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>AC254-035-B-ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lock-in amplifier</td>
			<td>APE</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mirror</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>PF10-03-P01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Motorized flipper</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>MFF101/M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>multifunctional acquisition card</td>
			<td>National Instrument</td>
			<td>PCIe-6363</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oscilloscope</td>
			<td>Tektronix</td>
			<td>TDS2012C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photodiode</td>
			<td>APE</td>
			<td></td>
			<td>For detecting SRS signal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Picosecond laser source</td>
			<td>APE</td>
			<td>picoEmerald</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polarizing beam splitter</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>CCM1-PBS252/M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power meter</td>
			<td>Newport</td>
			<td>843-R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline</td>
			<td>Braun</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scan lens L5</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>SL50-CLS2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scanning mirror</td>
			<td>Cambridge Technology</td>
			<td>6215H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone gel</td>
			<td>World Precision Inc.</td>
			<td>KWIK-SIL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ti:sapphire fs laser</td>
			<td>Coherent</td>
			<td>Chameleon Ultra II</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tube lens L6</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>TTL200-S8</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo imaging of biological tissues with combined two-photon fluorescence and stimulated raman scattering microscopy

Stimulerad Raman spridning (SRS) mikroskopi möjliggör etikettfri avbildning av de biologiska vävnaderna i dess naturliga mikromiljö baserad på inneboende molekylär vibration, vilket ger ett perfekt verktyg för in vivo-studier av biologiska processer vid subcellulär upplösning. Genom att integrera TPEF-avbildning (Two-photon excited fluorescence) i SRS-mikroskopet kan dubbelmodal in vivo-avbildning av vävnader förvärva kritisk biokemisk och biofysisk information från flera perspektiv som hjälper till att förstå de dynamiska processerna som är involverade i cellulär metabolism, immunsvar och vävnadsrenovering etc. I detta videoprotokoll introduceras installationen av ett TPEF-SRS-mikroskopsystem samt in vivo-avbildningsmetoden för djurets ryggmärg. Ryggmärgen, som en del av centrala nervsystemet, spelar en avgörande roll i kommunikationen mellan hjärnan och det perifera nervsystemet. Myelin mantel, riklig i fosfolipider, omger och isolerar axon för att tillåta salt ledning av handlingspotentialer. In vivo imaging av myelmantlar i ryggmärgen är viktigt för att studera utvecklingen av neurodegenerativa sjukdomar och ryggmärgsskada. Protokollet beskriver också djurpreparat och in vivo TPEF-SRS-avbildningsmetoder för att förvärva högupplösta biologiska bilder.

In vivo dual-modal imaging av spinal axons samt myelin mantlar utförs med hjälp av Thy1-YFPH transgena möss, som uttrycker EYFP i dorsala rot ganglion afferent nervceller (figur 3). Dessa märkta afferenta nervceller vidarebefordrar den sensoriska informationen från perifera nerv till ryggmärgen, med den centrala grenen ligger i ryggmärgen dorsala kolonnen. Med TPEF-SRS mikroskopet kan tätt fördelade myelhylsa tydligt visualiseras med hjälp av etikettfri SRS-avbildning, och...

Watch this Scientific Journal Video about In vivo Imaging of Biological Tissues with Combined Two-Photon Fluorescence and Stimulated Raman Scattering Microscopy at JoVE.com

In vivo Imaging of Biological Tissues with Combined Two-Photon Fluorescence and Stimulated Raman Scattering Microscopy

Stimulerad Raman spridning (SRS) mikroskopi möjliggör etikettfri avbildning av biomolekyler baserat på deras inneboende vibrationer av specifika kemiska bindningar. I detta protokoll beskrivs den instrumentella installationen av en integrerad SRS och två-foton fluorescensmikroskop för att visualisera cellulära strukturer i ryggmärgen hos levande möss.

In vivo Avbildning av biologiska vävnader med kombinerad tvåfoto fluorescens och stimulerad Raman spridningsmikroskopi

Stimulated Raman scattering (SRS) microscopy enables label-free imaging of the biological tissues in its natural microenvironment based on intrinsic ...

In Vivo imaging av biologiska vävnader med subcellulär upplösning och kemisk specificitet är ett kraftfullt verktyg för att förstå de dynamiska processerna som är involverade i cellulär metabolism, immunsvar och vävnadsrenovering. Med kombinerad två-foton fluorescens och stimulerad Raman spridning mikroskopi, kritisk biokemisk och biofysisk information om biologiska vävnader kan förvärvas från flera perspektiv med subcellulär upplösning. Specifikt kan denna dubbelmodala mikroskopi användas för att avbilda cellulär dynamik och interaktioner i musens ryggmärg för att studera utvecklingen av neurodegenerativa sjukdomar och ryggmärgsskada.Till att börja med, slå på titansafirlasern genom att slå på nyckelbrytaren från standby till på position och vänta i 30 minuter tills lasern värms upp. Slå sedan på OPO genom att klicka på startknappen på OPO-kontrollpanelen och vänta i 20 minuter tills lasern värms upp. När picosekundlasern har värmts upp kontrollerar du stokesstrålens moduleringsdjup genom att sänka kraften hos Stokes-strålen till cirka 20 milliwatt, öppna laserluckan för Stokes-strålen och placera en höghastighetsfotodetektor vid OPO-utgången för att upptäcka strålen.Anslut sedan fotodetektorns utgångsport till ingångsporten för ett oscilloskop med hjälp av en koaxialkabel med en BNC-kontakt för att övervaka laserpulsen. Öppna sedan EOM-kontrollfönstret i OPO-styrprogramvaran och justera EOM-kraften och fasen enligt pulsintensitetsdiagrammet som visas på oscilloskopet för att uppnå maximalt moduleringsdjup vid 20 megahertz. Öppna pumplaserlaserluckan i OPO-styrprogramvaran samtidigt som du stoppar Stokes-utgången.Klicka sedan på den inställda signalrutan för att ställa in pumpstrålens våglängd till 796 nanometer, klicka sedan på den inställda OPO-kraftlådan och ange 20 för att ställa in dess effekt till ett minimum för optisk justering. Placera sedan inriktningsplattan P1 bakom den polariserande balkdelaren på ca 10 centimeter och placera plattan P2 bakom P1 på ca 30 centimeter på den optiska banan. När du har öppnat mikroskopluckan för picosekundlaserstrålen justerar du spegeln M1 för att lokalisera picosekundens laserstrålecentrum vid genomgående hål i P1. Använd ett IR-scope för att observera strålplatsens position vid P1 när du justerar spegeln M1. På samma sätt justerar du spegeln M2 för att lokalisera picosekundens laserstrålecentrum vid genomgående hål i P2. Använd det infraröda kikarsiktet för att observera strålplatsens position vid P2 när du justerar spegeln M2. När du har justerat speglarna tills picosekundsstrålecentret lokaliserar vid genomgående hål på båda inriktningsplattorna, stäng slutaren på picosekundstrålen i mikroskopkontrollprogramvaran.Öppna sedan mikroskopluckan för femtosekundslaserstrålen. Justera spegeln M3 för att lokalisera femtosekundens laserstrålepunktcentrum vid genomgående hål på P1 och justera sedan spegeln M4 för att lokalisera femtosekundslaserstrålens spotcenter vid genomgående hål på P2. När du har justerat speglarna tills femtosekundslaserstrålecentret lokaliserar vid genomgående hål på de två inriktningsplattorna, stäng mikroskopluckan för femtosekundsstrålen. Placera sedan en kamera i målets position för att visualisera placeringen av de två strålfläckarna och markera pumpstrålens position på kameraskärmen som referens.Placera sedan en inriktningsplatta P0 före linsen L3 och justera den optiska spegeln med hjälp av en hexnyckel så att Stokes strålcentrum passerar genomgående hål på justeringsplattan vid laserutgångsporten. Använd det infraröda kikarsiktet för att bekräfta strålplatsens position vid P0 under justeringen. Ta sedan bort justeringsplattan P0 och använd hex-tangenten för att justera den optiska spegeln två så att mitten av Stokes-strålen är samlokaliseras med referensmärket för pumpstrålen på kameran.Fortsätt att justera speglarna tills Stokes-strålen strikt överlappar pumpstrålen vid både P0 och kameraplanen. Öppna inlåsningsförstärkarens styrprogramvara och ställ in pumplaserns våglängd till 796 nanometer och pumpens och Stokes-strålens effekt till 50 respektive 70 milliwatt motsvarande 15 respektive 25 milliwatt på provet. Använd sedan olivolja för inlåsningsförstärkare fasoptimering.Olivoljan förseglas i en rutschkana med vävnadspapper fäst på botten för att förbättra signalspridningen eller EPI-SRS-detekteringen. Placera olivoljeprovet på scenen och justera fokus för 25X-målet på provet. Ställ in bildparametrarna enligt textmanuskriptet med hjälp av mikroskopstyrningsprogramvaran.Använd sedan inlåsningsförstärkarens styrprogramvara och ställ in tidskonstvärdet till 10 mikrosekunder. Skanna sedan laserstrålen över provet och justera fasen med en stegstorlek på 22,5 grader tills SRS-signalintensiteten når maximalt. Skanna sedan provet med laserluckan stängd och justera förskjutningsvärdet med en stegstorlek på en millivolt tills den genomsnittliga SRS-signalen är nära noll.Öppna sedan dialogrutan Delay Manager i OPO-kontrollprogramvaran och skanna olivoljan och justera fördröjningssteget tills olivoljans SRS-signal når sitt maximum. Sluta sedan skanna och klicka på knappen Lägg till data i dialogrutan Fördröjningshanteraren för att registrera aktuella fördröjningsdata. Efter att på liknande sätt ha skaffat fördröjningsdata vid olika Raman-skift genom att avbilda olika kemiska prover väljer du datapassningen i ordning fem i fördröjningshanterarens dialogruta för att passa de aktuella datapunkterna med den femte ordningens polynomiska funktion.Använd sedan de monterade uppgifterna genom att klicka på använda som anpassad knapp och markera kryssrutan. Fördröjningssteget justeras automatiskt vid olika våglängder beroende på den monterade fördröjningskurvan. För in vivo imaging, fixera musen på stabiliseringsstadiet med ryggmärgen exponerad och nedsänkt i saltlösning.Montera nu stabiliseringssteget på ett femaxligt steg under TPEF-SRS-mikroskopet. Fäst sedan mushuvudet med två huvudstänger och sänk hållplattan för att erbjuda tillräckligt med utrymme för bröströrelser under andning, vilket minskar rörelseartefakter. Justera sedan Z-translationella scenen för att justera fokus tills Brightfield-bilden av ryggmärgsvaskulaturen kan observeras under ett 10X-mål.Lokalisera ryggmärgens ryggben i mitten av synfältet genom att justera det tvåaxliga translationella stadiet i femaxliga scenen. Justera sedan rulle- och tonhöjdsvinklarna för femaxlade scenen för att justera ryggmärgens dorsala yta vinkelrätt mot målaxeln baserat på Brightfield-bilden. Byt sedan ut 10X mot ett 25X vattensänkningsmål för TPEF-SRS-avbildning.För SRS-avbildning väljer du den polariserande stråldelaren ovanför målet genom att trycka på strömbrytaren som är ansluten till den motoriserade flippern. För TPEF-avbildning väljer du den dichroiska spegeln D2 ovanför målet genom att trycka på strömbrytaren som är ansluten till den motoriserade flippern. Slutligen ställer du in bildparametrarna enligt beskrivningen i textmanuskriptet och börjar skanna provet.In vivo dual-modal imaging av glest märkta YFP axons och myelin mantlar i musen ryggmärgen visade att axons är nära lindade av ett tjockt lager av myelin mantlar. Som framgår av bilden av ryggmärgen TPEF-SRS har Ranviers noder minskat axonaldiametern och axilemma är direkt exponerad för den extracellulära matrisen. Kombinerat med nya sonder för fluorescens och SRS-avbildning av två foton upphetsad fluorescens SRS-mikroskopi kan uppnå samtidig strukturell och funktionell avbildning av olika biomolekyler, vilket underlättar vår förståelse av komplexa biologiska processer.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

In vivo Imaging of Biological Tissues with Combined Two-Photon Fluorescence and Stimulated Raman Scattering Microscopy

Rejection of Fluorescence Background in Resonance and Spontaneous Raman Microspectroscopy

Avslag på Fluorescens Bakgrund i resonans och spontana Raman microspectroscopy

Raman spectroscopy is often plagued by a strong fluorescent background, particularly for biological samples. If a sample is excited with a train of ...

Three-dimensional Optical-resolution Photoacoustic Microscopy

Tredimensionell optisk upplösning photoacoustic Mikroskopi

Optical microscopy, providing valuable insights at the cellular and organelle levels, has been widely recognized as an enabling biomedical technology. As ...

Small and Wide Angle X-Ray Scattering Studies of Biological Macromolecules in Solution

Små och Wide Angle X-ray scattering Studier av biologiska makromolekyler i lösning

In this paper, Small and Wide Angle X-ray Scattering (SWAXS) analysis of macromolecules is demonstrated through experimentation. SWAXS is a technique ...

Creating Adhesive and Soluble Gradients for Imaging Cell Migration with Fluorescence Microscopy

Skapa Lim och lösliga övertoningar för Imaging cellmigration med fluorescensmikroskopi

Cells can sense and migrate towards higher concentrations of adhesive cues such as the glycoproteins of the extracellular matrix and soluble cues such as ...

Imaging of Biological Tissues by Desorption Electrospray Ionization Mass Spectrometry

Avbildning av biologiska vävnader genom desorption elektrospray masspektrometri

Mass spectrometry imaging (MSI) provides untargeted molecular information with the highest specificity and spatial resolution for investigating biological ...

Long-term Intravital Immunofluorescence Imaging of Tissue Matrix Components with Epifluorescence and Two-photon Microscopy

Långsiktig Intravital Immunofluorescence avbildning av Tissue Matrix Komponenter med epifluorescens och Två-foton mikroskopi

Besides being a physical scaffold to maintain tissue morphology, the extracellular matrix (ECM) is actively involved in regulating cell and tissue ...

High-resolution Spatiotemporal Analysis of Receptor Dynamics by Single-molecule Fluorescence Microscopy

Högupplöst Spatiotemporal Analys av Receptor Dynamics av ​​Single-molekyl fluorescensmikroskopi

Single-molecule microscopy is emerging as a powerful approach to analyze the behavior of signaling molecules, in particular concerning those aspect (e.g., ...

3D Orbital Tracking in a Modified Two-photon Microscope: An Application to the Tracking of Intracellular Vesicles

3D Orbital Tracking i en modifierad Två-foton Mikroskop: En ansökan till spårning av intracellulära vesiklar

The objective of this video protocol is to discuss how to perform and analyze a three-dimensional fluorescent orbital particle tracking experiment using a ...

Fluorescence-quenching of a Liposomal-encapsulated Near-infrared Fluorophore as a Tool for In Vivo Optical Imaging

Fluorescence-quenching of a Liposomal-encapsulated Near-infrared Fluorophore as a Tool for In Vivo Optical Imaging

Fluorescens-släckning av en Liposomal-inkapslad Nära-infraröd fluoroforen som ett verktyg för<em&gt; In Vivo</em&gt; Optisk avbildning

Optical imaging offers a wide range of diagnostic modalities and has attracted a lot of interest as a tool for biomedical imaging. Despite the enormous ...

Conducting Multiple Imaging Modes with One Fluorescence Microscope

Genomföra flera Imaging lägen med en fluorescens Mikroskop

Fluorescence microscopy is a powerful tool to detect biological molecules in situ and monitor their dynamics and interactions in real-time. In addition to ...