Name: a label-free segmentation approach for intravital imaging of mammary tumor microenvironment
Uploaded: 2022-05-24T13:00:00
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<p class="jove_content">लेखक इस काम के वित्तपोषण के लिए NCI R01 CA216248, CA206458, और CA179556 अनुदान स्वीकार करना चाहते हैं। हम अपने इंट्रावाइटल कार्यक्रम के शुरुआती विकास में अपनी तकनीकी विशेषज्ञता के लिए डॉ केविन एलिसीरी और उनके इमेजिंग समूह को भी स्वीकार करना चाहते हैं। हम एमआईडब्ल्यू के शुरुआती चरणों के दौरान अपने आवश्यक तकनीकी डिजाइन के लिए Morgridge Institute for Research में Dr. Ben Cox और Eliceiri Fabrication Group के अन्य सदस्यों को भी धन्यवाद देते हैं। डॉ एलेन Dobson ImageJ trainable WEKA विभाजन उपकरण के बारे में उपयोगी बातचीत के साथ सहायता की. इसके अलावा, हम डॉ मेलिसा स्काला और डॉ एलेक्सा बैरेस-हीटन को उनके माइक्रोस्कोप के समय पर उपयोग के लिए धन्यवाद देना चाहते हैं। अंत में, हम डॉ ब्रिगिट राबे, डीवीएम को हमारे माउस हैंडलिंग और देखभाल पर सभी विचारशील चर्चाओं और सलाह के लिए धन्यवाद देना चाहते हैं।</p>

<p class="jove_content">वर्णित सभी प्रयोगों को विस्कॉन्सिन-मैडिसन विश्वविद्यालय की संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था। सभी पशु प्रयोगों में कल्याण और दर्द प्रबंधन सर्वोपरि है। इस प्रकार, यह सुन?...

<p class="jove_content">4 डी इंट्रावाइटल इमेजिंग देशी ट्यूमर माइक्रोएन्वायरमेंट के स्थानिक और अस्थायी संदर्भ के भीतर गतिशील शारीरिक बातचीत की जांच करने के लिए एक शक्तिशाली उपकरण है। यह पांडुलिपि ट्यूमर द्रव्यमान, आसन्न स्?...

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	<tbody>
		<tr>
			<td>#1.5 12mm round cover glass</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td># 64-0712</td>
			<td>MIW construction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.0 mL syringe for SQ injection</td>
			<td>BD</td>
			<td>309659</td>
			<td>Syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20x objective</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>421452-988</td>
			<td>Water immersion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>27G needle for SQ injection</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>1188827012</td>
			<td>Needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40x objective</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>MRD77410</td>
			<td>Water immersion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-0 silk braided suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>K870</td>
			<td>Suture for MIW implantation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Artificial tears gel</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDC 59399-162-35</td>
			<td>Eye gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine solution, 5%</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC1558063</td>
			<td>Surgery antiseptic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cotton-tipped applicator</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>23-400-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyanoacrylate adhesive</td>
			<td>Loctite</td>
			<td>1365882</td>
			<td>MIW construction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fluorescent dextran</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T1287-50mg</td>
			<td>intravenous labelling of vasculature</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>forceps</td>
			<td>Mckesson.com</td>
			<td>Miltex&#160;#18-782</td>
			<td>stainless, 4 inch, curved</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GaAsP photomultiplier tube</td>
			<td>Hamamatsu&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>heating blanket</td>
			<td>CARA 72 heating pad</td>
			<td>&#160;038056000729</td>
			<td>Temperature selectable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>heating chamber</td>
			<td>home built</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescent lifetime handbook</td>
			<td>Becker and Hickl</td>
			<td></td>
			<td>https://www.becker-hickl.com/literature/handbooks</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>inverted microscope base</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDC 59399-106-01</td>
			<td>Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liqui-Nox</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>16-000-125</td>
			<td>MIW cleaning</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam</td>
			<td>Norbrook</td>
			<td>NDC 55529-040-10</td>
			<td>Analgesic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Hose</td>
			<td>Scientific Commodities INC.</td>
			<td>&#160;BB31695-PE/1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>multiphoton scan head</td>
			<td>Bruker Ultima II</td>
			<td></td>
			<td>Multiphoton scanhead and imaging platform</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NADH FLIM filter</td>
			<td>Chroma</td>
			<td>284994</td>
			<td>ET 440/80 m-2P</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nair</td>
			<td>CVS</td>
			<td>339826</td>
			<td>Depilatory cream</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>objective heater</td>
			<td>Tokai Hit</td>
			<td>STRG-WELSX-SET</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SHG/FAD filter</td>
			<td>Chroma</td>
			<td>320740</td>
			<td>ET450/40m-2P</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sparkle glass cleaner</td>
			<td>Amazon.com</td>
			<td>B00814ME24</td>
			<td>Glass Cleaner for implanted MIW</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPC-150 photon counting board</td>
			<td>Becker and Hickl</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>surgical light</td>
			<td>FAJ</td>
			<td>B06XV1VQVZ</td>
			<td>Magnetic LED gooseneck light</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>surgical micro-scissors</td>
			<td>Excelta</td>
			<td>366</td>
			<td>stainless, 3 inch</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triple antibiotic ointment</td>
			<td>Actavis Pharma</td>
			<td>NDC 0472-0179-34</td>
			<td>Antibiotic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TV catheter</td>
			<td>Custom</td>
			<td>BD 30G needle: 305106</td>
			<td>Catheter for TV injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Two photon filter</td>
			<td>Chroma</td>
			<td>320282</td>
			<td>ET585/65m-2P</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>two-photon laser</td>
			<td>Coherent charmeleon</td>
			<td></td>
			<td>Tunable multiphoton laser</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ultrasound gel</td>
			<td>Parker</td>
			<td>PKR-03-02</td>
			<td>Water immersion gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Urea crystals</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>U5128-5G</td>
			<td>Optional: FLIM IRF</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a label-free segmentation approach for intravital imaging of mammary tumor microenvironment

<p class="jove_content">एक जीवित ट्यूमर माइक्रोएन्वायरमेंट के भीतर कई सेल प्रकारों और एक्स्ट्रासेल्युलर मैट्रिक्स (ईसीएम) के बीच जटिल और गतिशील शारीरिक बातचीत की कल्पना करने की क्षमता ट्यूमर की प्रगति को विनियमित करने वाले तंत्र को समझने की दिशा में एक महत्वपूर्ण कदम है। हालांकि इसे वर्तमान इंट्रावाइटल इमेजिंग तकनीकों के माध्यम से पूरा किया जा सकता है, यह ऊतकों की विषम प्रकृति और प्रयोगात्मक अवलोकन के भीतर स्थानिक संदर्भ की आवश्यकता के कारण चुनौतीपूर्ण बना हुआ है। इस अंत में, हमने एक इंट्रावाइटल इमेजिंग वर्कफ़्लो विकसित किया है जो कोलेजन दूसरी हार्मोनिक पीढ़ी इमेजिंग, चयापचय सह-कारक एनएडी (पी) एच से अंतर्जात प्रतिदीप्ति, और प्रतिदीप्ति जीवनकाल इमेजिंग माइक्रोस्कोपी (एफएलआईएम) को गैर-आक्रामक रूप से ट्यूमर घोंसले के मूल डोमेन में ट्यूमर माइक्रोएन्वायरमेंट को विभाजित करने के साधन के रूप में जोड़ता है, आसपास के स्ट्रोमा या ईसीएम, और वास्कुलचर। यह गैर-इनवेसिव प्रोटोकॉल स्तन ट्यूमर मॉडल के समय-अंतराल छवियों के अधिग्रहण से लेकर पोस्ट-प्रोसेसिंग विश्लेषण और छवि विभाजन तक चरण-दर-चरण प्रक्रिया का विवरण देता है। इस वर्कफ़्लो का प्राथमिक लाभ यह है कि यह बहिर्जात फ्लोरोसेंट लेबल के उपयोग के बिना गतिशील रूप से बदलते लाइव ट्यूमर माइक्रोएन्वायरमेंट को संदर्भित करने के लिए चयापचय हस्ताक्षरों का शोषण करता है, जिससे यह मानव रोगी-व्युत्पन्न (पीडीएक्स) मॉडल और भविष्य के नैदानिक उपयोग के लिए फायदेमंद हो जाता है जहां बाहरी फ्लोरोफोरस आसानी से लागू नहीं होते हैं।</p>

<p class="jove_content">MIW की स्थापना और बुनियादी प्रयोगात्मक योजना इस प्रक्रिया में पहला कदम हैं। यह विशेष MIW डिजाइन और प्रोटोकॉल अनुदैर्ध्य अध्ययन<sup class="xref">19</sup> के लिए अधिक अनुकूल हैं और इसे सीधे और उल्टे माइक्रोस्कोप दोनों के ?...

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A Label-Free Segmentation Approach for Intravital Imaging of Mammary Tumor Microenvironment

<p class="jove_content">यहां वर्णित इंट्रावाइटल इमेजिंग विधि कोलेजन दूसरी हार्मोनिक पीढ़ी और चयापचय सह-कारक एनएडी (पी) एच से अंतर्जात प्रतिदीप्ति का उपयोग करती है, जो 4 डी इंट्रावाइटल छवियों के गहन विश्लेषण के लिए ट्यूमर, स्ट्रोमल और संवहनी डिब्बों में एक अनलेबल ट्यूमर माइक्रोएन्वायरमेंट को गैर-आक्रामक रूप से विभाजित करती है।</p>

स्तन ट्यूमर माइक्रोएन्वायरमेंट के इंट्रावाइटल इमेजिंग के लिए एक लेबल-मुक्त विभाजन दृष्टिकोण

The ability to visualize complex and dynamic physiological interactions between numerous cell types and the extracellular matrix (ECM) within a live tumor ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Mimic of the Tumor Microenvironment: A Simple Method for Generating Enriched Cell Populations and Investigating Intercellular Communication

ट्यूमर microenvironment की नकल: समृद्ध सेल आबादी सृजन और जांच कहनेवाला संचार के लिए एक सरल विधि

Understanding the early heterotypic interactions between cancer cells and the surrounding non-cancerous stroma is important in elucidating the events ...

A Time-lapse, Label-free, Quantitative Phase Imaging Study of Dormant and Active Human Cancer Cells

एक समय चूक, लेबल मुक्त, मात्रात्मक और सक्रिय मानव कैंसर कोशिकाओं के गुणात्मक चरण इमेजिंग अध्ययन

The acquisition of the angiogenic phenotype is an essential component of the escape from tumor dormancy. Although several classic in vitro assays (e.g., ...

Phosphopeptide Enrichment Coupled with Label-free Quantitative Mass Spectrometry to Investigate the Phosphoproteome in Prostate Cancer

Phosphopeptide संवर्धन लेबल के साथ युग्मित मुक्त मात्रात्मक जन स्पेक्ट्रोमेट्री प्रोस्टेट कैंसर में Phosphoproteome की जांच करने के लिए

Phosphoproteomics involves the large-scale study of phosphorylated proteins. Protein phosphorylation is a critical step in many signal transduction ...

Longitudinal Intravital Imaging of Brain Tumor Cell Behavior in Response to an Invasive Surgical Biopsy

एक इनवेसिव सर्जिकल बायोप्सी के जवाब में मस्तिष्क ट्यूमर सेल व्यवहार के दीर्घकालिक Intravital इमेजिंग

Biopsies are standard of care for cancer treatment and are clinically beneficial as they allow solid tumor diagnosis, prognosis, and personalized ...

Assessing Tumor Microenvironment of Metastasis Doorway-Mediated Vascular Permeability Associated with Cancer Cell Dissemination using Intravital Imaging and Fixed Tissue Analysis

मेटास्टेसिस डोरवे के ट्यूमर माइक्रोएनेवायरनमेंट का आकलन-मध्यस्थ संवहनी स्थायित्व कैंसर सेल प्रसार के साथ जुड़े इंट्राविटल इमेजिंग और फिक्स्ड ऊतक विश्लेषण का उपयोग कर

The most common cause of cancer related mortality is metastasis, a process that requires dissemination of cancer cells from the primary tumor to secondary ...

Analysis of Side Population in Solid Tumor Cell Lines

सॉलिड ट्यूमर सेल लाइनों में साइड पॉपुलेशन का विश्लेषण

Cancer stem cells (CSCs) are an important cause of tumor growth, metastasis, and recurrence. Isolation and identification of CSCs are of great ...

A Novel Stromal Fibroblast-Modulated 3D Tumor Spheroid Model for Studying Tumor-Stroma Interaction and Drug Discovery

ट्यूमर-स्ट्रोमा इंटरैक्शन और ड्रग डिस्कवरी का अध्ययन करने के लिए एक उपन्यास स्ट्रोमल फाइब्रोब्लास्ट-मोडलेटेड 3डी ट्यूमर स्फेरॉइड मॉडल

Tumor-stroma interactions play an important role in cancer progression. Three-dimensional (3D) tumor spheroid models are the most widely used in vitro ...

Isolation of Proximal Fluids to Investigate the Tumor Microenvironment of Pancreatic Adenocarcinoma

अग्नाशयी एडेनोकार्सिनोमा के ट्यूमर माइक्रोएन्वायरमेंट की जांच के लिए समीपस्थ तरल पदार्थ का अलगाव

Pancreatic adenocarcinoma (PDAC) is the fourth leading cause of cancer-related death, and soon to become the second. There is an urgent need of variables ...

Longitudinal Intravital Imaging Through Clear Silicone Windows

स्पष्ट सिलिकॉन विंडोज के माध्यम से अनुदैर्ध्य इंट्रावाइटल इमेजिंग

Intravital microscopy (IVM) enables visualization of cell movement, division, and death at single-cell resolution. IVM through surgically inserted imaging ...

Industrialized, Artificial Intelligence-guided Laser Microdissection for Microscaled Proteomic Analysis of the Tumor Microenvironment

ट्यूमर माइक्रोएन्वायरमेंट के माइक्रोस्केल्ड प्रोटिओमिक विश्लेषण के लिए औद्योगिक, आर्टिफिशियल इंटेलिजेंस-निर्देशित लेजर माइक्रोडिसेक्शन

The tumor microenvironment (TME) represents a complex ecosystem comprised of dozens of distinct cell types, including tumor, stroma, and immune cell ...