Name: application of optical coherence tomography to a mouse model of retinopathy
Uploaded: 2022-01-12T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Application of Optical Coherence Tomography to a Mouse Model of Retinopathy at JoVE.com

מקור הפרויקט: הקרן למדעי הטבע של מחוז גואנגדונג (2018A0303130306). המחברים רוצים להודות למעבדה לחקר העיניים, למרכז העיניים הבינלאומי המשותף של שנטאו באוניברסיטת שנטאו ולאוניברסיטה הסינית של הונג קונג על המימון והחומרים.

הניתוחים בוצעו בעקבות ההצהרה על השימוש בבעלי חיים במחקרי עיניים וראייה של האגודה לחקר הראייה והעיניים. תכנון הניסוי אושר על ידי ועדת האתיקה המוסדית לבעלי חיים (ועדת האתיקה הרפואית של JSIEC, EC 20171213(4)-P01). במחקר זה נעשה שימוש בעכברי C57BL/6J בני חודשיים ובעכברי נוקאאוט Vldler. בכל קבוצה היו 7 עכברי...

<ol>
	<li>Frombach, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serine+protease-mediated+cutaneous+inflammation:+characterization+of+an+ex+vivo+skin+model+for+the+assessment+of+dexamethasone-loaded+core+multishell-nanocarriers.">Serine protease-mediated cutaneous inflammation: characterization of an ex vivo skin model for the assessment of dexamethasone-loaded core multishell-nanocarriers.</a> Pharmaceutics. 12 (9), 862 (2020).</li><li>Osiac, E., S&#259;ftoiu, A., Gheonea, D. I., Mandrila, I., Angelescu, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography+and+Doppler+optical+coherence+tomography+in+the+gastrointestinal+tract.">Optical coherence tomography and Doppler optical coherence tomography in the gastrointestinal tract.</a> Journal of Gastroenterology. 17 (1), 15-20 (2011).</li><li>Xiong, Y. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+accuracy+of+optical+coherence+tomography+for+bladder+cancer:+A+systematic+review+and+meta-analysis.">Diagnostic accuracy of optical coherence tomography for bladder cancer: A systematic review and meta-analysis.</a> Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. 27, 298-304 (2019).</li><li>Andrews, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography+of+the+aging+kidney.">Optical coherence tomography of the aging kidney.</a> &amp; Clinical Transplantation. 14 (6), 617-622 (2016).</li><li>Terashima, M., Kaneda, H., Suzuki, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+optical+coherence+tomography+in+coronary+intervention.">The role of optical coherence tomography in coronary intervention.</a> The Korean Journal of Internal Medicine. 27 (1), 1-12 (2012).</li><li>Avital, Y., Madar, A., Arnon, S., Koifman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+coronary+calcifications+in+optical+coherence+tomography+imaging+using+deep+learning.">Identification of coronary calcifications in optical coherence tomography imaging using deep learning.</a> Scientific Reports. 11 (1), 11269 (2021).</li><li>Huang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography.">Optical coherence tomography.</a> Science. 254 (5035), 1178-1181 (1991).</li><li>Tsai, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography+in+gastroenterology:+a+review+and+future+outlook.">Optical coherence tomography in gastroenterology: a review and future outlook.</a> Journal of Biomedical Optics. 22 (12), 1-17 (2017).</li><li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+between+optical+intensity+on+optical+coherence+tomography+and+retinal+ischemia+in+branch+retinal+vein+occlusion.">Relationship between optical intensity on optical coherence tomography and retinal ischemia in branch retinal vein occlusion.</a> Scientific Reports. 8 (1), 9626 (2018).</li><li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+analysis+of+retinal+layer+optical+intensities+on+three-dimensional+optical+coherence+tomography.">Quantitative analysis of retinal layer optical intensities on three-dimensional optical coherence tomography.</a> Investigative Opthalmology &amp; Visual Science. 54 (10), 6846-6851 (2013).</li><li>Cruz-Herranz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+retinal+changes+with+optical+coherence+tomography+predicts+neuronal+loss+in+experimental+autoimmune+encephalomyelitis.">Monitoring retinal changes with optical coherence tomography predicts neuronal loss in experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Journal of Neuroinflammation. 16 (1), 203 (2019).</li><li>Podoleanu, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography.">Optical coherence tomography.</a> Journal of Microscopy. 247 (3), 209-219 (2012).</li><li>Augustin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography+findings+in+the+retinas+of+SOD1+knockout+mice.">Optical coherence tomography findings in the retinas of SOD1 knockout mice.</a> Translational Vision Science &amp; Technology. 9 (4), 15 (2020).</li><li>Berger, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectral-domain+optical+coherence+tomography+of+the+rodent+eye:+highlighting+layers+of+the+outer+retina+using+signal+averaging+and+comparison+with+histology.">Spectral-domain optical coherence tomography of the rodent eye: highlighting layers of the outer retina using signal averaging and comparison with histology.</a> PLoS One. 9 (5), 96494 (2014).</li><li>Burns, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+developments+in+murine+imaging+for+assessing+photoreceptor+degeneration+in+vivo.">New developments in murine imaging for assessing photoreceptor degeneration in vivo.</a> Advances in Experimental Medicine &amp; Biology. 854, 269-275 (2016).</li><li>Jagodzinska, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography:+imaging+mouse+retinal+ganglion+cells+in+vivo.">Optical coherence tomography: imaging mouse retinal ganglion cells in vivo.</a> Journal of Visualized Experiments: Jove. (127), e55865 (2017).</li><li>Kocaoglu, O. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+fundus+imaging+and+optical+coherence+tomography+of+the+mouse+retina.">Simultaneous fundus imaging and optical coherence tomography of the mouse retina.</a> Investigative Opthalmology &amp; Visual Science. 48 (3), 1283-1289 (2007).</li><li>Tode, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermal+stimulation+of+the+retina+reduces+Bruch's+membrane+thickness+in+age+related+macular+degeneration+mouse+models.">Thermal stimulation of the retina reduces Bruch's membrane thickness in age related macular degeneration mouse models.</a> Translational Vision Science &amp; Technology. 7 (3), 2 (2018).</li><li>Wang, R., Jiang, C., Ma, J., Young, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+morphological+changes+in+the+retina+of+rhodopsin-/-+mice+with+spectral+domain+optical+coherence+tomography.">Monitoring morphological changes in the retina of rhodopsin-/- mice with spectral domain optical coherence tomography.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 53 (7), 3967-3972 (2012).</li><li>Xie, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+spectral-domain+optical+coherence+tomographic+analysis+of+Rdh5-/-+mice+retina.">A spectral-domain optical coherence tomographic analysis of Rdh5-/- mice retina.</a> PLoS ONE. 15 (4), 0231220 (2020).</li><li>Li, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+imaging+by+optical+coherence+tomography+to+monitor+retinal+degeneration+in+the+mouse.">Noninvasive imaging by optical coherence tomography to monitor retinal degeneration in the mouse.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 42 (12), 2981-2989 (2001).</li><li>Horio, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progressive+change+of+optical+coherence+tomography+scans+in+retinal+degeneration+slow+mice.">Progressive change of optical coherence tomography scans in retinal degeneration slow mice.</a> Archives of Ophthalmology. 119 (9), 1329-1332 (2001).</li><li>Hu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+VLDLR+in+the+retina+and+evolution+of+subretinal+neovascularization+in+the+knockout+mouse+model's+retinal+angiomatous+proliferation.">Expression of VLDLR in the retina and evolution of subretinal neovascularization in the knockout mouse model's retinal angiomatous proliferation.</a> Investigative Opthalmology &amp; Visual Science. 49 (1), 407-415 (2008).</li><li>Wyne, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+the+VLDL+receptor+in+endothelial+cells.">Expression of the VLDL receptor in endothelial cells.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 16 (3), 407-415 (1996).</li><li>Augustin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+characterization+of+spontaneous+retinal+neovascularization+in+the+mouse+eye+by+multifunctional+optical+coherence+tomography.">In vivo characterization of spontaneous retinal neovascularization in the mouse eye by multifunctional optical coherence tomography.</a> Investigative Opthalmology &amp; Visual Science. 59 (5), 2054-2068 (2018).</li><li>Fang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fundus+autofluorescence,+spectral-domain+optical+coherence+tomography,+and+histology+correlations+in+a+Stargardt+disease+mouse+model.">Fundus autofluorescence, spectral-domain optical coherence tomography, and histology correlations in a Stargardt disease mouse model.</a> The FASEB Journal. 34 (3), 3693-3714 (2020).</li></ol>

במחקר זה, הדמיית OCT באמצעות מערכת הדמיית רשתית של בעלי חיים קטנים יושמה כדי להעריך שינויים ברשתית בעכברי Vldlr knockout, אשר מדגימים ניתוק זגוגית אחורית לא שלם, ניאו-וסקולריזציה תת-רשתית והידלדלות עובי הרשתית. OCT היא שיטת הדמיה לא פולשנית לבחינת מצב הרשתית in vivo. רוב מכשירי OCT מיועדים לבדי...

טומוגרפיה קוהרנטית אופטית (OCT) היא טכניקת הדמיה שיכולה לספק ברזולוציה גבוהה in vivo והדמיית חתך עבור רקמות 1,2,3,4,5,6,7,8, במיוחד עבור בדיקה לא פולשנית ברשתית 9,10,11,12 . זה יכול לשמש גם כדי לכמת כמה סמנים ביולוגיים חשובים, כגון עובי הרשתית ועובי שכבת סיבי עצב הרשתית. העיקרון של OCT הוא רפלקטומטריית קוהרנטיות אופטית, המקבלת מידע על רקמת חתך מקוהרנטיות האור המוחזרת מדגימה וממירה אותו לצורה גרפית או דיגיטלית באמצעות מערכת מחשב7. OCT נמצא בשימוש נרחב במרפאות עיניים ככלי חיוני לאבחון, מעקב וניהול עבור מטופלים עם הפרעות ברשתית. זה יכול גם לספק תובנה לגבי הפתוגנזה של מחלות רשתית.
בנוסף ליישומים קליניים, OCT שימש גם במחקרים בבעלי חיים. למרות שפתולוגיה היא תקן הזהב של אפיון מורפולוגי, ל- OCT יש את היתרון של הדמיית in vivo לא פולשנית ומעקב אורכי. יתר על כן, הוכח כי OCT מתואם היטב עם היסטופתולוגיה במודלים של חיות רטינופתיה 11,13,14,15,16,17,18,19,20. העכבר הוא החיה הנפוצה ביותר במחקרים ביו-רפואיים. עם זאת, גלגלי העיניים הקטנים שלו מהווים אתגר טכני לביצוע הדמיית OCT בעכברים.
בהשוואה ל-OCT ששימש לראשונה להדמיית רשתית בעכברים21,22, OCT בבעלי חיים קטנים עבר כעת אופטימיזציה ביחס למערכות חומרה ותוכנה. לדוגמה, OCT, בשילוב עם הגשש, מקטין באופן משמעותי את יחס האות לרעש; שדרוגי מערכת תוכנת OCT מאפשרים לזהות שכבות רשתית רבות יותר באופן אוטומטי; וקרן DLP המשולבת מסייעת להפחית את תוצרי התנועה.
קולטן ליפופרוטאין בצפיפות נמוכה מאוד (Vldlr) הוא חלבון טרנס-ממברנה בתאי אנדותל. הוא מתבטא על תאי אנדותל של כלי הדם ברשתית, תאי אפיתל פיגמנט רשתית, וסביב הממברנה המגבילה החיצונית23,24. ניאו-וסקולריזציה תת-קרקעית היא הפנוטיפ של עכברי הנוקאאוט של Vldlr 23. לכן, עכברי נוקאאוט Vldlr משמשים לחקור את הפתוגנזה ואת הטיפול הפוטנציאלי של neovascularization subretinal. מאמר זה מדגים את היישום של הדמיית OCT לזיהוי נגעים ברשתית בעכברי נוקאאוט Vvldler, בתקווה לספק התייחסות טכנית למחקר רטינופתיה במודלים של בעלי חיים קטנים.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>100-Dpt contact lens</td>
			<td>Volk Optical,Inc, Mentor, OH</td>
			<td></td>
			<td>Accessory belonging to the RETImap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Double aspheric 60-Dpt glass lens</td>
			<td>Volk Optical,Inc, Mentor, OH</td>
			<td></td>
			<td>Accessory belonging to the RETImap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric heating blanket</td>
			<td>POPOCOLA</td>
			<td>CW-DRT-01</td>
			<td>50 x 35 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection syringe (1 mL)</td>
			<td>Kaile</td>
			<td></td>
			<td>0.45 x 16RWLB</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Levofloxacin Hydrochloride Eye Gel</td>
			<td>EBE PHARMACEUTICAL Co.LTD</td>
			<td></td>
			<td>5 g: 0.015 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical sodium hyaluronate gel</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>16H01E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microliter syringes</td>
			<td>Shanghai high pigeon industry and trade co., LTD</td>
			<td>Q31/0113000236C001-2017</td>
			<td>50 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone iodine solution</td>
			<td>Guangdong medihealth pharmaceutical Co.,LTD</td>
			<td></td>
			<td>100 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RETImap</td>
			<td>ROLAND CONSULT</td>
			<td>19-99_50-2.1_1.2E</td>
			<td>cSLO/ERG/VEP/FA/OCT/GFP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small animal ear studs</td>
			<td>OSMO POCKET OT110</td>
			<td>INS1005-1S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide Phenylephrine Eye Drops</td>
			<td>Santen Pharmaceutical Co.,LTD</td>
			<td></td>
			<td>5 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>X1251-5G</td>
			<td>5 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zoletil 50</td>
			<td>Virbac.S.A</td>
			<td>7FRPA</td>
			<td>Tiletamine 125 mg + Zolazepam 125 mg</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

application of optical coherence tomography to a mouse model of retinopathy

טומוגרפיה קוהרנטית אופטית (OCT) מציעה שיטה לא פולשנית לאבחון רטינופתיה. מכונת OCT יכולה ללכוד תמונות חתך רשתית שמהן ניתן לחשב את עובי הרשתית. למרות OCT נמצא בשימוש נרחב בפועל קליני, היישום שלה במחקר בסיסי אינו נפוץ כמו, במיוחד בבעלי חיים קטנים כגון עכברים. בגלל גודלם הקטן של גלגלי העיניים שלהם, מאתגר לערוך בדיקות הדמיית פונדוס בעכברים. לכן, נדרשת מערכת הדמיית רשתית מיוחדת כדי להתאים להדמיית OCT על בעלי חיים קטנים. מאמר זה מדגים מערכת ספציפית לבעלי חיים קטנים עבור הליכי בדיקת OCT ושיטה מפורטת לניתוח תמונה. מוצגות התוצאות של בדיקת OCT ברשתית של עכברי קולטן ליפופרוטאין בצפיפות נמוכה מאוד (Vldlr) ועכברי C57BL/6J. תמונות ה-OCT של עכברי C57BL/6J הראו שכבות רשתית, ואילו אלה של עכברי Vldlr נוקאאוט הראו ניאו-וסקולריזציה תת-רשתית ודילול רשתית. לסיכום, בדיקת OCT יכולה להקל על זיהוי ומדידה לא פולשניים של רטינופתיה במודלים של עכברים.

הודות לסריקות ברזולוציה גבוהה של OCT, ניתן לראות את שכבות רשתית העכבר, וניתן לזהות השתקפויות חריגות ומיקומן המדויק. תמונות ה-OCT של הרשתית של עכברי נוקאאוט Vldlr ועכברי C57BL/6J הושוו במחקר זה. תמונות ה-OCT של כל עכברי C57BL/6J הראו שכבות רשתית שונות עם רפלקטיביות שונה, והתיחום היה ברור (א?...

Watch this Scientific Journal Video about Application of Optical Coherence Tomography to a Mouse Model of Retinopathy at JoVE.com

Application of Optical Coherence Tomography to a Mouse Model of Retinopathy

כאן אנו מתארים טכניקת הדמיה in vivo באמצעות טומוגרפיה קוהרנטית אופטית כדי להקל על האבחון והמדידה הכמותית של רטינופתיה בעכברים.

יישום טומוגרפיה של קוהרנטיות אופטית למודל עכבר של רטינופתיה

Optical coherence tomography (OCT) offers a noninvasive method for the diagnosis of retinopathy. The OCT machine can capture retinal crosssectional images ...

טומוגרפיה קוהרנטית אופטית נמצאת בשימוש נרחב באבחון קליני של מחלות רשתית שונות, אך עדיין מאתגר ליישם אותה במודלים של עכברים. פרוטוקול זה מתאר כיצד לנהל את טכניקת OCT בבעלי חיים. טכנולוגיה זו יכולה להיות מיושמת על בעלי חיים עם גדלים שונים של גלגלי עיניים.הוא מאפשר הדמיית חתך רשתית לא פולשנית, ברזולוציות גבוהות ובזמן אמת, יחד עם מדידות כמותיות של עובי הרשתית. OCT מסייע באבחון רטינופתיה על ידי זיהוי תכונות הנגע כגון מיקום, טווח, צורה וגודל של הנגעים, כמו גם כל ההפרעות החשודות ברשתית כגון neovascularization הרשתית. פרוטוקול זה חל על מחקרים בבעלי חיים או מחלות פונדוס, כולל מחלות רשתית.לפני תחילת ההליך, להיות מוכן ופעל לפי הפרוטוקול צעד אחר צעד. בצע את הניסוי כאשר החיה מורדמת. אחד צריך להיות מסוגל להשיג תמונות OCT באיכות טובה לאחר תרגול כלשהו.כדי להתחיל, הפעל את המחשב והפעל את התוכנה. לחץ על לחצן תוכנית הבדיקה כדי להשלים את תוכנית הבדיקה. לאחר מכן, הפעל את התרמוסטט וחמם אותו ל -37 מעלות צלזיוס.לאחר בדיקת התוכנית, התחל את הליך מודול OCT. צור נושא חדש ומלא את פרטי העכבר. לאחר מכן, מחממים מראש את השמיכה החשמלית ומכסים אותה במגבות כירורגיות.הניחו את העכבר המרדים על משטח השמיכה החשמלית ומיד צפו את שתי העיניים בג'ל נתרן היאלורונאט רפואי. לאחר מכן, הניחו עדשת מגע 100D על קרנית העכבר כשהצד הקעור נוגע בג'ל הנתרן היאלורונאט על משטח הקרנית. לאחר מכן, הנח את העכבר על פלטפורמת בעלי החיים הקטנה בטמפרטורה קבועה של התקן cSLO.התאם את זווית עדשת המגע באמצעות מלקחיים כדי לשמור על האישון במרכז העדשה. כוונן את ההתאמות לראש כדי לגרום לעין לפנות ישר קדימה. לחץ על לחצן OCT, בחר את מודול העכבר והפעל את תוכנית cSLO.לאחר מכן, השתמש בידית ההפעלה כדי להזיז באיטיות את העדשה המוגדרת מראש לכיוון עדשת המגע. בצע התאמות נוספות כדי ליישר את התמונה של הקוטב הקדמי-אחורי, ומרכזו בראש עצב הראייה. לאחר מכן, הפעל את תוכנית OCT ולחץ על מד ההתקדמות למעלה ולמטה עד להופעת תמונת ה- OCT.התאם את הטווח המינימלי בין 0 ל- 20 ואת הטווח המרבי בין 40 ל- 60. לאחר מכן, כוונן את המרחק וכיוון המיקום המוגדרים מראש של העדשה עד לקבלת תמונת OCT אידיאלית. בחר את מיקום הסריקה על-ידי הזזת הקו הרגיל ב- cSLO.לאחר מכן, לחץ על ממוצע כדי לכסות את אות התמונה cSLO ו- OCT ולחץ על לחצן הצילום כדי להשיג את תמונת ה- OCT של SLO. לאחר הניסוי, הסר את עדשת המגע 100D ומרוח את ג'ל העיניים levofloxacin כדי להגן על הקרנית. לתיקון ריבוד הרשתית, לחצו על 'טען בדיקה' בממשק OCT וקראו את תמונות ה-OCT מחלון נפתח.לאחר מכן, לחץ פעמיים על התמונה בגורם המכיל של המדיה כדי להציג אותה על המסך. לאחר מכן, לחץ על זיהוי שכבה כדי להשלים שכבות אוטומטיות על הרשתית. לאחר בחירת הקו המפריד משני צידי השכבה שהוכנה לניתוח, לחצו על 'ערוך שכבה' להתאמת הריווח ולהגבלת הטווח.לאחר מכן, שנה את הקו על-ידי הזזת העיגול האדום. למדידת עובי למינציה ברשתית, לחצו על הלחצן 'סמן מדידה' ובחרו בקו המפריד של השכבה שיש לנתח כדי להציג את גבול השכבה בתמונת OCT. לאחר מכן, בחר התחבר לשכבה והישאר מחובר תוך כדי תנועה.לאחר מכן, בחר את האזור להצגת התוצאות ולחץ על המיקום שיש לנתח בתמונת OCT כדי לגרום לקו המדידה להופיע. לחץ על העמודה הבאה לקבלת מדידות עוקבות וכדי לחשוף את הנתונים הקודמים. כדי למדוד את עובי הרשתית המלא, בחר שורה אחת וקו שבע ברשימה בפינה השמאלית העליונה.לאחר מכן, מהופעת מבנה הרשתית בקצה הפפילה האופטית, מדוד ארבעה ערכים במרווחים של 200 מיקרומטר על הסרגל האופקי. תמונות OCT של עכברי C57BL/6 הראו שכבות רשתית שונות עם תיחום ברור. לעומת זאת, עכברי נוקאאוט של Vldlr הראו נגעים היפר-רפלקטיביים חריגים.תמונות ה-OCT הראו כמה פסים מחזירי אור אמצעיים על משטחי הרשתית של עכברי הנוקאאוט Vldlr. רצועות אלה דבקו בכלי הרשתית, בהיותן עקביות עם מאפייני OCT של ניתוק זגוגית לא שלם. נגע היפר-רפלקטיבי אחד הופיע בחלל התת-קרקעי והתפשט לשכבה הגרעינית החיצונית, אך לא פרץ את שכבת הפרספקס החיצונית.הופעת ה-OCT של נגע זה עלתה בקנה אחד עם ממצאים פתולוגיים. החלק הפתולוגי הראה כי ניאו-וסקולריזציה פרצה דרך שכבת האפיתל של פיגמנט הרשתית, מקטעים פנימיים-חיצוניים של פוטורצפטור והממברנה המגבילה החיצונית, ופלשה לשכבה הגרעינית החיצונית, אך לא לשכבת הפרספקס החיצונית. רצועה נוספת של נגע היפר-רפלקטיבי, הממוקם בחלל התת-קרקעי, לא כללה את השכבה הגרעינית החיצונית.בהתאם לממצאים הפתולוגיים, ניאו-וסקולריזציה תת-קרקעית זו לא פרצה את הממברנה המגבילה החיצונית. השוואת עובי הרשתית של עין ימין בכיוונים הטמפורליים, האף, העליונים והנחותים של הקוטב האחורי בין שתי הקבוצות גילתה כי עובי הרשתית של עכברי Vldlr נוקאאוט היה נמוך משמעותית מזה של עכברי C57BL/6J. בעת ביצוע הפרוטוקול, הניחו כראוי עדשת מגע 100D על הקרנית, ולאחר מכן התאימו את מיקום התמונה.בחר את מיקום הסריקה ושכב את התמונה לפני הצילום. לאחר הליך זה, OCT מקטע קדמי אפשרי, הדורש שינוי המרחק בין העדשה המוגדרת מראש לבין הקרנית. זה יכול להראות את הקרנית, החדר הקדמי, הקשתית, הגוף הציליארי, והעדשה.טכניקה זו מספקת כלי חשוב לחקר רטינופתיה במודלים של בעלי חיים קטנים, ומקדמת זיהוי ומדידה לא פולשניים של רטינופתיה במחקר בסיסי.

Research

JoVE Journal

Medicine

Doppler Optical Coherence Tomography of Retinal Circulation

טומוגרפיה אופטית קוהרנטיות דופלר של Circulation רשתית

Noncontact retinal blood flow measurements are performed with a Fourier domain optical coherence tomography (OCT) system using a circumpapillary double ...

Near Infrared Optical Projection Tomography for Assessments of &beta;-cell Mass Distribution in Diabetes Research

Near Infrared Optical Projection Tomography for Assessments of ÃƒÅ½Ã‚Â²-cell Mass Distribution in Diabetes Research

קרוב אינפרא האדומה האופטית טומוגרפיה תחזית להערכות של חלוקת מסת β-תאים בחקר הסוכרת

By adapting OPT to include the capability of imaging in the near infrared (NIR) spectrum, we here illustrate the possibility to image larger bodies of ...

Generation and 3-Dimensional Quantitation of Arterial Lesions in Mice Using Optical Projection Tomography

דור וQuantitation 3 ממדים של עורקי פצעים בעכברים באמצעות טומוגרפיה הקרנה אופטית

The generation and analysis of vascular lesions in appropriate animal models is a cornerstone of research into cardiovascular disease, generating ...

In Vivo, Percutaneous, Needle Based, Optical Coherence Tomography of Renal Masses

In Vivo, Percutaneous, Needle Based, Optical Coherence Tomography of Renal Masses

בVivo, Percutaneous, מחט מבוססת, אופטי קוהרנטיות טומוגרפיה של המונים כליה

Optical coherence tomography (OCT) is the optical equivalent of ultrasound imaging, based on the backscattering of near infrared light. OCT provides real ...

A Neonatal Mouse Spinal Cord Compression Injury Model

חוט השדרה עכבר בילוד דגם פגיעה דחיסה

Spinal cord injury (SCI) typically causes devastating neurological deficits, particularly through damage to fibers descending from the brain to the spinal ...

Diffuse Optical Spectroscopy for the Quantitative Assessment of Acute Ionizing Radiation Induced Skin Toxicity Using a Mouse Model

מפוזר ספקטרוסקופיה אופטית עבור הערכה כמותית של רעילות העור לקרינה מייננת מושרה חריפה שימוש במודל של עכברים

Acute skin toxicities from ionizing radiation (IR) are a common side effect from therapeutic courses of external beam radiation therapy (RT) and ...

Using Micro-computed Tomography for the Assessment of Tumor Development and Follow-up of Response to Treatment in a Mouse Model of Lung Cancer

באמצעות טומוגרפיה מיקרו שחושבת הערכת התפתחות גידול ומעקב של תגובה לטיפול במודל עכברי של סרטן הריאות

Lung cancer is the most lethal cancer in the world. Intensive research is ongoing worldwide to identify new therapies for lung cancer. Several mouse ...

Ultrahigh Resolution Mouse Optical Coherence Tomography to Aid Intraocular Injection in Retinal Gene Therapy Research

טומוגרפיה אופטית קוהרנטית העכבר הרזולוציה על קוליים כדי לסייע הזרקה תוך-עיני במחקר ריפוי גנטי ברשתית

HR-SD-OCT is utilized to monitor the progression of photoreceptor degeneration in live mouse models, assess the delivery of therapeutic agents into the ...

In Vivo Imaging of Cx3cr1gfp/gfp Reporter Mice with Spectral-domain Optical Coherence Tomography and Scanning Laser Ophthalmoscopy

In Vivo Imaging of Cx3cr1gfp/gfp Reporter Mice with Spectral-domain Optical Coherence Tomography and Scanning Laser Ophthalmoscopy

אין ויוו הדמיה של עכברים כתב Cx3cr1gfp/gfp עם תחומים הספקטרום טומוגרפיה אופטית קוהרנטית, סריקת לייזר Ophthalmoscopy

Spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT) and scanning laser ophthalmoscopy (SLO) are extensively used in experimental ophthalmology. In the ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Contractility איזומטרי מדידה של עורק מצע המעי העליון העכבר באמצעות חוט Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...