Name: quail chorioallantoic membrane - a tool for photodynamic diagnosis and therapy
Uploaded: 2022-04-28T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quail Chorioallantoic Membrane - A Tool for Photodynamic Diagnosis and Therapy at JoVE.com

تم دعم العمل من قبل VEGA 2/0042/21 و APVV 20-0129. مساهمة V. Huntošová هي نتيجة لتنفيذ المشروع: مجتمع علمي مفتوح للبحوث الحديثة متعددة التخصصات في الطب (اختصار: OPENMED) ، ITMS2014 +: 313011V455 بدعم من البرنامج التشغيلي للبنية التحتية المتكاملة ، بتمويل من ERDF.

وقد أجري البحث وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية. يجب تعقيم جميع المعدات والكواشف أو تعقيمها بنسبة 70٪ من الإيثانول أو الأشعة فوق البنفسجية.
1. حضانة البيض
<ol><li>تخزين بيض السمان المخصب في 10-15 درجة مئوية لمدة أقصاها 4-5 أيام قبل البدء في الحضانة. استخدم فقط البيض النظيف ?...

<ol>
	<li>Nowak-Sliwinska, P., van Beijnum, J. R., van Berkel, M., vanden Bergh, H., Grif&#64257;oen, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+regrowth+following+photodynamic+therapy+in+the+chicken+embryo+chorioallantoic+membrane.">Vascular regrowth following photodynamic therapy in the chicken embryo chorioallantoic membrane.</a> Angiogenesis. 13 (4), 281-292 (2010).</li><li>van Leengoed, H. L. L. M., vander Veen, N., Versteeg, A. A. C., Ouellet, R., van Lier, J. E., Star, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-vivo+photodynamic+effects+of+phthalocyanines+in+a+skin-fold+observation+chamber+model:+role+of+central+metal+ion+and+degree+of+sulfonation.">In-vivo photodynamic effects of phthalocyanines in a skin-fold observation chamber model: role of central metal ion and degree of sulfonation.</a> Photochemistry Photobiology. 58 (4), 575-580 (1993).</li><li>Ainsworth, S. J., Stanley, R. L., Evans, D. J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+stages+of+the+Japanese+quail.">Developmental stages of the Japanese quail.</a> Journal of Anatomy. 216 (1), 3 (2010).</li><li>De Fouw, D. O., Rizzo, V. J., Steinfeld, R., Feinberg, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+of+the+microcirculation+in+the+chick+chorioallantoic+membrane+during+normal+angiogenesis.">Mapping of the microcirculation in the chick chorioallantoic membrane during normal angiogenesis.</a> Microvascular Research. 38 (2), 136-147 (1989).</li><li>Sandau, K., Kurz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modelling+of+vascular+growth+processes:+a+stochastic+biophysical+approach+to+embryonic+angiogenesis.">Modelling of vascular growth processes: a stochastic biophysical approach to embryonic angiogenesis.</a> Journal of Microscopy. 175 (3), 205-213 (1994).</li><li>Kurz, H., Ambrosy, S., Wilting, J., Marm&#233;, D., Christ, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proliferation+pattern+of+capillary+endothelial+cells+in+chorioallantoic+membrane+development+indicates+local+growth+control,+which+is+counteracted+by+vascular+endothelial+growth+factor+application.">Proliferation pattern of capillary endothelial cells in chorioallantoic membrane development indicates local growth control, which is counteracted by vascular endothelial growth factor application.</a> Developmental Dynamics. 203 (2), 174-186 (1995).</li><li>Huss, D., Poynter, G., Lansford, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Japanese+quail+(Coturnix+japonica)+as+laboratory+animal+model.">Japanese quail (Coturnix japonica) as laboratory animal model.</a> Lab Animal. 37 (11), 513-519 (2008).</li><li>Gottfried, V., Lindenbaum, E. S., Kimel, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chick+chorioallantoic+membrane+(CAM)+as+an+in-vivo+model+for+photodynamic+therapy.">The chick chorioallantoic membrane (CAM) as an in-vivo model for photodynamic therapy.</a> Journal of Photochemistry and Photobiology, B: Biology. 12 (2), 204-207 (1992).</li><li>Mi&#353;kovsk&#253;, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypericin+-+a+new+antiviral+and+antitumor+photosensitizer:+mechanism+of+action+and+interaction+with+biological+molecules.">Hypericin - a new antiviral and antitumor photosensitizer: mechanism of action and interaction with biological molecules.</a> Current Drug Targets. 3 (1), 55-84 (2002).</li><li>&#268;avarga, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photodynamic+effect+of+hypericin+after+topical+application+in+the+ex+ovo+quail+chorioallantoic+membrane+model.">Photodynamic effect of hypericin after topical application in the ex ovo quail chorioallantoic membrane model.</a> Planta Medica. 80 (1), 56-62 (2014).</li><li>Martinez-Poveda, B., Quesada, A. R., Medina, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypericin+in+the+dark+inhibits+key+steps+of+angiogenesis+in+vitro.">Hypericin in the dark inhibits key steps of angiogenesis in vitro.</a> Europan Journal of Pharmacology. 516 (2), 97-103 (2005).</li><li>Datta, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unravelling+the+excellent+chemical+stability+and+bioavailability+of+solvent+responsive+curcumin-loaded+2-ethyl-2-oxazoline-grad-2-(4-dodecyloxyphenyl)-+2-oxazoline+copolymer+nanoparticles+for+drug+delivery.">Unravelling the excellent chemical stability and bioavailability of solvent responsive curcumin-loaded 2-ethyl-2-oxazoline-grad-2-(4-dodecyloxyphenyl)- 2-oxazoline copolymer nanoparticles for drug delivery.</a> Biomacromolecules. 19 (7), 2459-2471 (2018).</li><li>Hunto&#353;ov&#225;, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alkyl+Chain+length+in+poly(2-oxazoline)-based+amphiphilic+gradient+copolymers+regulates+the+delivery+of+hydrophobic+molecules:+a+case+of+the+biodistribution+and+the+photodynamic+activity+of+the+photosensitizer+hypericin.">Alkyl Chain length in poly(2-oxazoline)-based amphiphilic gradient copolymers regulates the delivery of hydrophobic molecules: a case of the biodistribution and the photodynamic activity of the photosensitizer hypericin.</a> Biomacromolecules. 22 (10), 4199-4216 (2021).</li><li>Bur&#237;kov&#225;, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypericin+fluorescence+kinetics+in+the+presence+of+low+density+lipoproteins:+study+on+quail+CAM+assay+for+topical+delivery.">Hypericin fluorescence kinetics in the presence of low density lipoproteins: study on quail CAM assay for topical delivery.</a> General Physiology and Biophysic. 35 (4), 459-468 (2016).</li><li>Lenkavska, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Benefits+of+hypericin+transport+and+delivery+by+low-+and+high-density+lipoproteins+to+cancer+cells:+From+in+vitro+to+ex+ovo.">Benefits of hypericin transport and delivery by low- and high-density lipoproteins to cancer cells: From in vitro to ex ovo.</a> Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. 25, 214-224 (2019).</li><li>R&#252;ck, A., B&#246;hmler, A., Steiner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PDT+with+TOOKAD+studied+in+the+chorioallantoic+membrane+of+fertilized+eggs.">PDT with TOOKAD studied in the chorioallantoic membrane of fertilized eggs.</a> Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. 2 (1), 79-90 (2005).</li><li>Gottfried, V., Davidi, R., Averbuj, C., Kimel, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+damage+to+chorioallantoic+membrane+blood+vessels+by+porphycene-induced+photodynamic+therapy.">In vivo damage to chorioallantoic membrane blood vessels by porphycene-induced photodynamic therapy.</a> Journal of Photochemistry and Photobiology, B: Biology. 30 (2-3), 115-121 (1995).</li><li>Buzz&#225;, H. H., Silva, L. V., Moriyama, L. T., Bagnato, V. S., Kurachi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+vascular+effect+of+Photodynamic+Therapy+in+chorioallantoic+membrane+using+different+photosensitizers.">Evaluation of vascular effect of Photodynamic Therapy in chorioallantoic membrane using different photosensitizers.</a> Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology. 138, 1-7 (2014).</li><li>Dougherty, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photodynamic+therapy.">Photodynamic therapy.</a> Journal of the National Cancer Institute. 90, 889-905 (1998).</li><li>Xiang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+optoacoustic+monitoring+of+vascular+damage+during+photodynamic+therapy+treatment+of+tumor.">Real-time optoacoustic monitoring of vascular damage during photodynamic therapy treatment of tumor.</a> Journal of Biomedical Optics. 12 (1), 01400-01408 (2007).</li><li>Foty, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+hanging+drop+cell+culture+protocol+for+generation+of+3D+spheroids.">A simple hanging drop cell culture protocol for generation of 3D spheroids.</a> Journal of Visualized Experiments. (51), 2720 (2011).</li><li>Abramoff, M. D., Magelhaes, P. J., Ram, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Image+Processing+with+ImageJ.">Image Processing with ImageJ.</a> Biophotonics International. 11 (7), 36-42 (2004).</li><li>Chomczynski, P., Sacchi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-step+method+of+RNA+isolation+by+acid+guanidium+thiocyanate-phenol-chloroform+extraction.">Single-step method of RNA isolation by acid guanidium thiocyanate-phenol-chloroform extraction.</a> Analytical Biochemistry. 162 (1), 156-159 (1987).</li><li>M&#225;&#269;ajov&#225;, M., &#268;avarga, I., S&#253;korov&#225;, M., Valachovi&#269;, M., Novotn&#225;, V., Bil&#269;&#237;k, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+angiogenesis+by+topical+application+of+leptin+and+high+and+low+molecular+heparin+using+the+Japanese+quail+chorioallantoic+membrane+model.">Modulation of angiogenesis by topical application of leptin and high and low molecular heparin using the Japanese quail chorioallantoic membrane model.</a> Saudi Journal of Biological Sciences. 27 (6), 1488-1493 (2020).</li><li>Mangir, N., Dikici, S., Claeyssens, F., MacNeil, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+Ex+Ovo+chick+chorioallantoic+membrane+(CAM)+assay+to+evaluate+the+biocompatibility+and+angiogenic+response+to+biomaterials.">Using Ex Ovo chick chorioallantoic membrane (CAM) assay to evaluate the biocompatibility and angiogenic response to biomaterials.</a> ACS Biomaterials Science Engineering. 5 (7), 3190-3200 (2019).</li><li>Marshall, K. M., Kanczler, J. M., Oreffo, R. O. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolving+applications+of+the+egg:+chorioallantoic+membrane+assay+and+ex+vivo+organotypic+culture+of+materials+for+bone+tissue+engineering.">Evolving applications of the egg: chorioallantoic membrane assay and ex vivo organotypic culture of materials for bone tissue engineering.</a> Journal of Tissue Engineering. 11, 1-25 (2020).</li><li>Merlos Rodrigo, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extending+the+applicability+of+in+ovo+and+ex+ovo+chicken+chorioallantoic+membrane+assays+to+study+cytostatic+activity+in+neuroblastoma+cells.">Extending the applicability of in ovo and ex ovo chicken chorioallantoic membrane assays to study cytostatic activity in neuroblastoma cells.</a> Frontiers in Oncology. 11, 1-10 (2021).</li><li>Meta, M., Kundekov&#225;, B., Bil&#269;&#237;k, B., M&#225;&#269;ajov&#225;, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+silicone+ring+application+on+CAM+vasculature+in+Japanese+Quail+(Coturnix+japonica).">The effect of silicone ring application on CAM vasculature in Japanese Quail (Coturnix japonica).</a> Proceedings of the Student Scientific Conference Faculty of Natural Sciences of Comenius University, Bratislava, Slovakia. , 385-390 (2019).</li><li>Kohli, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-screening+the+intrinsic+angiogenic+capacity+of+biomaterials+in+an+optimised+ex+ovo+chorioallantoic+membrane+model.">Pre-screening the intrinsic angiogenic capacity of biomaterials in an optimised ex ovo chorioallantoic membrane model.</a> Journal of Tissue Engineering. 11, 1-15 (2020).</li><li>Kundekov&#225;, B., M&#225;&#269;ajov&#225;, M., Meta, M., &#268;avarga, I., Bil&#269;&#237;k, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chorioallantoic+membrane+models+of+various+avian+species+differences+and+applications.">Chorioallantoic membrane models of various avian species differences and applications.</a> Biology-Basel. 10 (4), 301 (2021).</li><li>Parsons-Wingerter, P., Elliott, K. E., Clark, J. I., Farr, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblast+growth+factor-2+selectively+stimulates+angiogenesis+of+small+vessels+in+arterial+tree.">Fibroblast growth factor-2 selectively stimulates angiogenesis of small vessels in arterial tree.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis and Vascular Biology. 20 (5), 1250-1256 (2000).</li><li>Buzz&#225;, H. H., Zangirolami, A. C., Davis, A., G&#243;mez-Garc&#237;a, P. B., Kurachi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+analysis+of+a+tumor+model+in+the+chorioallantoic+membrane+used+for+the+evaluation+of+different+photosensitizers+for+photodynamic+therapy.">Fluorescence analysis of a tumor model in the chorioallantoic membrane used for the evaluation of different photosensitizers for photodynamic therapy.</a> Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. 19, 78-83 (2017).</li></ol>

لنجاح زراعة البيضة السابقة ، من المهم اتباع البروتوكول أعلاه. علاوة على ذلك ، إذا لم يتم فتح البيض بعناية كافية أو لم تكن هناك رطوبة كافية أثناء الزراعة ، فإن كيس صفار البيض يلتصق بالقشرة وغالبا ما يتمزق. إن بدء زراعة البيضة السابقة في وقت حوالي 60 ساعة من حضانة البيض يضمن ارتفاع مع...

نموذج غشاء الدجاج chorioallantoic (CAM) معروف جيدا ويستخدم على نطاق واسع في مختلف مجالات البحث. وهو عضو خارج الجنين غني بالأوعية الدموية يوفر تبادل الغازات ونقل المعادن1. نظرا لشفافية هذا الغشاء وإمكانية الوصول إليه ، يمكن ملاحظة الأوعية الدموية الفردية وتغييراتها الهيكلية في الوقت الفعلي2. على الرغم من المزايا ، فإن CAM الفرخ لديه أيضا بعض القيود (على سبيل المثال ، مرافق تربية أكبر ، وإنتاج البيض ، واستهلاك الأعلاف) التي يمكن تجنبها باستخدام أنواع الطيور الأخرى. في هذا البروتوكول ، يتم وصف نموذج CAM بديل ل ex ovo باستخدام جنين السمان الياباني (Coturnix japonica). نظرا لصغر حجمه ، فإنه يسمح باستخدام عدد أكبر بكثير من الأفراد التجريبيين من CAM الدجاج. علاوة على ذلك ، فإن التطور الجنيني الأقصر لمدة 16 يوما لأجنة السمان هو ميزة أخرى. تظهر أول أوعية أكبر على CAM السمان في اليوم الجنيني (ED) 7. يمكن مقارنة ذلك مباشرة مع تطور جنين الفرخ (المراحل 4-35) ؛ ومع ذلك ، فإن المراحل المتأخرة من التطور لم تعد قابلة للمقارنة وتتطلب وقتا أقل لجنين السمان3. من المثير للاهتمام هو الحدوث المنتظم للتفرع الوعائي الدقيق على غرار الدجاج CAMs 4,5,6. النضج الجنسي السريع ، وارتفاع إنتاج البيض ، والتربية منخفضة التكلفة هي أمثلة أخرى تفضل استخدام هذا النموذج التجريبي7.
غالبا ما يستخدم نموذج CAM للطيور في دراسات العلاج الضوئي الديناميكي (PDT)8. يستخدم PDT لعلاج عدة أشكال من السرطان (الأورام الموضعية الصغيرة) وغيرها من الأمراض غير الورمية. مبدأها هو في توصيل دواء الفلورسنت ، وهو محسس للضوء (PS) ، إلى الأنسجة التالفة وتنشيطه بضوء الطول الموجي المناسب. أحد PS المحتملين المستخدمين في الأبحاث هو hypericin ، المعزول أصلا من نبتة سانت جون الطبية (Hypericum perforatum)9. تعتمد تأثيرات الحساسية الضوئية القوية لهذا المركب على خصائصه الكيميائية الضوئية والفيزيائية الضوئية. تتميز هذه بقمم إثارة التألق المتعددة في نطاق 400-600 نانومتر ، مما يحفز انبعاث التألق عند حوالي 600 نانومتر. الحد الأقصى لامتصاص hypericin داخل النطاق الطيفي هو في نطاق 540-590 نانومتر ، والحد الأقصى للتألق في نطاق 590-640 نانومتر9. لتحقيق هذه التأثيرات الحساسة للضوء ، يتم إثارة hypericin بواسطة ضوء الليزر بطول موجي يبلغ 405 نانومتر بعد الإدارة المحلية10. في وجود الضوء ، يمكن أن يظهر hypericin تأثيرات مبيد للفيروسات ومضاد للتكاثر وسام للخلايا11 ، في حين لا توجد سمية جهازية ، ويتم إطلاقه بسرعة من الكائن الحي. Hypericin هي مادة محبة للدهون تشكل مجاميع غير قابلة للذوبان في الماء وغير فلورية ، وهذا هو السبب في أن عدة أنواع من الناقلات النانوية ، مثل الجسيمات النانوية البوليمرية12,13 أو البروتينات الدهنية عالية ومنخفضة الكثافة (HDL ، LDL) 14,15 ، تستخدم للمساعدة في توصيلها واختراقها في الخلايا. نظرا لأن CAM هو نظام يعاني من نقص المناعة بشكل طبيعي ، يمكن زرع الخلايا السرطانية مباشرة على سطح الغشاء. كما أن النموذج مناسب تماما لتسجيل مدى تلف الأوعية الدموية الناجم عن PDT وفقا لدرجة محددة16,17. يمكن استخدام ضوء أقل كثافة مقارنة ب PDT للتشخيص الضوئي الديناميكي (PDD). تؤدي مراقبة الأنسجة تحت ضوء LED البنفسجي المثير أيضا إلى التنشيط الضوئي للمحسسات الضوئية18،19،20 التي تؤدي إلى انبعاث ضوء الفلورسنت ، ومع ذلك فهي لا توفر طاقة كافية لبدء تفاعل PDT وإتلاف الخلايا. إنه يجعلها أداة جيدة لتصور الورم وتشخيصه أو مراقبة الحرائك الدوائية ل PSs14,15 المستخدمة.
توضح هذه المقالة إعداد فحص CAM للسمان ex ovo مع معدلات البقاء على قيد الحياة أكثر من 80٪. تم تطبيق هذه الثقافة السابقة بنجاح في عدد كبير من التجارب.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>6-Well Cell Culture Plate</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>83.392</td>
			<td>Transparent polystyrene, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 Incubator ESCO CCL-0508</td>
			<td>ESCO, Singapore</td>
			<td>CCL-050B-8</td>
			<td>CO2 cell culture incubator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cryocut Leica CM 1800</td>
			<td>Reichert-Jung, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>digital camera Canon EOS 6D II</td>
			<td>Canon, Japan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>diode laser 405 nm</td>
			<td>Ocean Optics, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>67-68-5</td>
			<td>dimethyl sulfoxid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eosin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>15086-94-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ethanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fine brush size 2</td>
			<td>Faber-Castell</td>
			<td>281802</td>
			<td>brush for CAM separation and manipulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glutaraldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>111-30-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hematoxylin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>517-28-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hypericin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>84082-80-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>incubator Bios Midi</td>
			<td>Bios Sedl<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/63422/63422eq01.jpg" style="margin: auto;" />any, Czech Republic</td>
			<td></td>
			<td>Forced draught incubator for initial incubation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>incubator Memmert IF160</td>
			<td>Memmert, Germany</td>
			<td></td>
			<td>Forced air circulation incubator for CAM incubation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kaiser slimlite plano, LED light box</td>
			<td>Kaiser, Germany</td>
			<td>2453</td>
			<td>Transilluminator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LED light 405 nm</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>custom made circular LED light</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>macro lens Canon MP- E 65 mm f/2.8</td>
			<td>Canon, Japan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microscope Kapa 2000</td>
			<td>Kvant, Slovakia</td>
			<td></td>
			<td>optical microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microtome Auxilab 508</td>
			<td>Auxilab, Spain</td>
			<td></td>
			<td>manual rotary microtome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>30525-89-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraplast Plus</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3683</td>
			<td>parafin medium for tissue embedding</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4417</td>
			<td>Phosphate saline buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>scissors Castroviejo</td>
			<td>Orimed</td>
			<td>&#160;OR66-108</td>
			<td>micro scissors for CAM separation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>software ImageJ 1.53</td>
			<td>public domain</td>
			<td></td>
			<td>image processing and analysis program</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stock solution HDL</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>437641-10MG</td>
			<td>high density lipoproteins</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stock solution LDL</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>437644-10MG</td>
			<td>low density lipoproteins</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek O.C.T. Compound</td>
			<td>Sakura Finetek</td>
			<td>4583</td>
			<td>Optimal Cutting Temperature Compound 118 mL squeeze bottles</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quail chorioallantoic membrane - a tool for photodynamic diagnosis and therapy

الغشاء المشيمي (CAM) لجنين الطيور هو غشاء رقيق خارج الجنين يعمل كعضو تنفسي أساسي. خصائصه تجعله نموذجا تجريبيا ممتازا في الجسم الحي لدراسة تكوين الأوعية الدموية ، ونمو الورم ، وأنظمة توصيل الأدوية ، أو التشخيص الضوئي الديناميكي (PDD) والعلاج الضوئي الديناميكي (PDT). وفي الوقت نفسه، يتناول هذا النموذج شرط استبدال التجارب ببديل مناسب. يسمح الجنين المزروع ب Ex ovo بسهولة تطبيق المادة والوصول إليها ومراقبتها وتوثيقها. الأكثر استخداما هو CAM الفرخ. ومع ذلك ، تصف هذه المقالة مزايا CAM السمان الياباني كنموذج منخفض التكلفة وعالي الإنتاجية. ميزة أخرى هي التطور الجنيني الأقصر ، والذي يسمح بدوران تجريبي أعلى. يتم استكشاف مدى ملاءمة CAM السمان ل PDD و PDT للسرطان والالتهابات الميكروبية هنا. على سبيل المثال ، يتم وصف استخدام المحسس الضوئي hypericin مع البروتينات الدهنية أو الجسيمات النانوية كنظام توصيل. تم تحديد درجة الضرر من الصور في الضوء الأبيض والتغيرات في شدة التألق لأنسجة CAM تحت الضوء البنفسجي (405 نانومتر) ، جنبا إلى جنب مع تحليل المقاطع النسيجية. أظهر CAM السمان بوضوح تأثير PDT على الأوعية الدموية والأنسجة. علاوة على ذلك ، يمكن ملاحظة تغييرات مثل النزيف الشعري ، والجلطة ، وتحلل الأوعية الصغيرة ، ونزيف الأوعية الكبيرة. يعد CAM للسمان الياباني نموذجا واعدا في الجسم الحي للتشخيص الضوئي الديناميكي وأبحاث العلاج ، مع تطبيقات في دراسات تكوين الأوعية الدموية للورم ، وكذلك العلاج المضاد للأوعية الدموية ومضادات الميكروبات.

توطين الورم على سطح CAM صعب في الضوء الأبيض. من المتوقع أن يتم تناول المحسس الضوئي (هنا ، hypericin) المستخدم في PDD بشكل انتقائي من قبل الورم ويساعد على تصور الورم. أظهرت إضافة hypericin واستخدام ضوء الفلورسنت (على سبيل المثال ، 405 نانومتر) موضع الورم (سرطان الخلايا الحرشفية TE1) بشكل جيد للغاية (<strong class="xf...

Watch this Scientific Journal Video about Quail Chorioallantoic Membrane - A Tool for Photodynamic Diagnosis and Therapy at JoVE.com

Quail Chorioallantoic Membrane - A Tool for Photodynamic Diagnosis and Therapy

الغشاء المشيمي (CAM) لجنين الطيور هو أداة مفيدة للغاية وقابلة للتطبيق لمختلف مجالات البحث. نموذج خاص من البيضاوي السابق من السمان الياباني CAM مناسب للتحقيق في العلاج الضوئي الديناميكي.

غشاء السمان Chorioallantoic - أداة للتشخيص الضوئي الديناميكي والعلاج

The chorioallantoic membrane (CAM) of an avian embryo is a thin, extraembryonic membrane that functions as a primary respiratory organ. Its properties ...

سنوضح لك كيفية تحضير السمان الياباني خارج ثقافة البيض وكيفية استخدام غشاء chorioallantoic أو CAM باختصار للتشخيص الضوئي الديناميكي وعلاج السرطان أو الالتهابات الميكروبية. مزايا هذه الطريقة هي النمو التنموي السريع ، وصغر الحجم ، والوصول الجيد إلى الأنسجة ، وسهولة التعامل. أيضا ، فإنه يحترم مبادئ قاعدة 3R لإجراء البحوث على الحيوانات.نظرا لتشابهه الهيكلي مع الأغشية المخاطية مثل المثانة أو الرئتين أو المشيمة ، فهو مناسب لاختبار الأدوية المحتملة في الجسم الحي أو اختبار السمية أو دراسات الزرع. ستوضح الإجراء باربورا كونديكوفا وماجليندا ميتا ، طالبتا الدكتوراه من مختبري. للبدء ، استخدم بيض السمان المخصب ، طازجا أو مخزنا في 10 إلى 15 درجة مئوية لمدة أقصاها 4 إلى 5 أيام قبل بدء الحضانة.استخدم البيض النظيف وغير التالف فقط ، ثم احتضن البيض في حاضنة قسرية عند رطوبة 50 إلى 60٪ و 37.5 درجة مئوية لمدة 54 ساعة تقريبا توضع أفقيا مع إيقاف دوران البيض. تطهير سطح البيض مع 70 ٪ من الإيثانول دون تدوير البيضة. بعد ذلك ، في خزانة تدفق صفائحية معقمة أثناء ارتداء القفازات ، افتح قشر البيض باستخدام مقص جراحي صغير معقم وانقل المحتوى إلى لوحة ثقافة من 6 آبار.بعد كل بيضة ، قم بتطهير المقص بنسبة 70٪ من الإيثانول. أضف ما يقرب من 5 ملليلتر من الماء المعقم إلى الفجوات الموجودة في الصفيحة المكونة من 6 آبار لأن الرطوبة ضرورية لمنع CAM من الجفاف. بعد ذلك ، قم بشفط الأجنة ذات الرؤوس غير الصحيحة أو البيض غير المخصب باستخدام شفاط فراغي ، ثم ضع الأجنة في حاضنة حتى إجراء المزيد من التجارب مع الحفاظ على درجة حرارة 37 درجة مئوية في رطوبة تتراوح بين 80 و 90٪.عندما يتم تطوير CAM بما فيه الكفاية ، عادة من اليوم الجنيني 7 ، ضع حلقة سيليكون معقمة على سطح CAM على طول الشعيرات الدموية الصغيرة مع تجنب الأوعية الدموية الرئيسية. في ظل ظروف معقمة ، ضع حجما مناسبا من محلول hypericin 30 ميكرولتر على حلقة السيليكون واحتفظ بالأجنة في حاضنة عند 37 درجة مئوية في رطوبة 80 إلى 90٪. لإجراء التشخيص الضوئي الديناميكي ، قم بإضاءة CAM باستخدام ضوء الإثارة البنفسجي وتسجيل تألق أنسجة hypericin و CAM والخلايا السرطانية باستخدام كاميرا رقمية على فترات زمنية مختلفة بعد إعطاء hypericin.إذا كان البحث يتطلب صورة ل CAM في الضوء الأبيض ، فقم بتسجيل CAM قبل إعطاء hypericin وفي نهاية التجربة قبل وقت قصير من تثبيت الأنسجة ، حيث يؤدي الضوء إلى تنشيط صورة hypericin. لإجراء العلاج الضوئي الديناميكي بعد تطبيق hypericin ، ضع CAM تحت الألياف البصرية لشعاع الليزر لتغطية المنطقة بأكملها داخل حلقة السيليكون. بعد إجراء التشعيع في الجسم الحي ، في هذه الحالة بالذات باستخدام ضوء ليزر 405 نانومتر بمعدل طلاقة يبلغ 285 مللي واط لكل سنتيمتر مربع ، سجل CAM باستخدام الضوء الأبيض و / أو ضوء الفلورسنت قبل وبعد المعالجة الضوئية الديناميكية.إصلاح الأنسجة CAM في لوحة زراعة مع 4 ٪ paraformaldehyde في PBS لمدة لا تقل عن 2 ساعة وبحد أقصى بين عشية وضحاها ، ثم إزالة paraformaldehyde وقطع بعناية من CAM جزء من الأنسجة داخل حلقة السيليكون. يجب أن تتم كل هذه الخطوات في غطاء الدخان. اغسل جزءا مقطوعا من نسيج CAM في الماء لمدة 10 دقائق ثم جففه في سلسلة الكحول الصاعدة عن طريق وضع نسيج CAM في 70٪ من الإيثانول لمدة 3 دقائق ، ومحلول الإيوسين لمدة دقيقتين ، والثروسين 96٪ من الإيثانول لمدة 5 دقائق ، والإيثانول 100٪ لمدة 5 دقائق ، ومرتين في الزيلين لمدة 10 دقائق في طبق بتري جديد.بعد ذلك ، انقل العينات في أسرع وقت ممكن إلى البارافين المذاب في أطباق بتري باستخدام ملعقة أو فرشاة رقيقة. بعد 24 ساعة ، ضع الأنسجة في قالب نسيجي ، واملأها بوسط تضمين البارافين واتركها تتصلب في الثلاجة ، ثم اقطع CAM المتصلب من وسط التضمين ، وقلبه في الدرج بمقدار 90 درجة ، واملأه مرة أخرى بوسط التضمين واتركه يتصلب. قم بإعداد 5 إلى 10 أقسام ميكرومتر على ميكروتوم للتحليل النسيجي المرضي لتحديد الضرر الناجم عن PDT.لإعداد أقسام CAM المجمدة لعلم الأنسجة ، قم بتركيب CAM الأصلي أو 4٪ paraformaldehyde الثابت بعناية على الشريحة الزجاجية ، واملأ قالب التضمين إلى النصف ب OCT وقم بتجميده في النيتروجين السائل أو خليط من الثلج الجاف والإيثانول. بعد التجميد ، قم بإمالة CAM بعناية وتحريكها من الشريحة الزجاجية إلى الجزء العلوي من وسط OCT المجمد. ضع مرة أخرى في القالب ، وقم بتغطيته بوسط OCT وقم بتجميده كما هو موضح سابقا.لتحليل الأوعية الدموية CAM ، هناك حاجة إلى عينات CAM كاملة. في خزانة التدفق الرقائقي ، تفيض CAM بمحلول تثبيت مسبق الاحترار من 4٪ من ألدهيد بارافورم ، و 2٪ glutaraldehyde في PBS ، ثم قم بإزالة محلول التثبيت بعد 48 ساعة. بعد ذلك ، افصل CAM بعناية عن الجنين باستخدام مقص دقيق وفرشاة دقيقة واغسله في PBS ، ثم قم بتركيب CAM المغسول على شريحة زجاجية واتركه يجف ببطء.بعد ذلك، قم بتصوير الشريحة باستخدام كاميرا رقمية في جهاز تحويل كمصدر للضوء الأبيض المتجانس. تم تصور موقع الورم على سطح CAM تحت الضوء الأبيض وضوء الفلورسنت عند إضافة hypericin. أظهر التحليل النسيجي هياكل متحدة المركز للخلايا الحرشفية غير الطبيعية التي تغزو الأنسجة السليمة مصحوبة بالوذمة وسماكة الغشاء.بعد العلاج باستخدام PDT ، لوحظ اختلاف واضح في كثافة الأوعية داخل الحلقة والمنطقة المحيطة بها. لم يسبب إشعاع الليزر دون وجود محسس للضوء أي ضرر مماثل للتحكم دون أي علاج. بعد 3 ساعات من الحضانة مع hypericin ، أدى تشعيع الليزر إلى التألق الناجم عن مونوميرات hypericin المجمعة مع أضرار جسيمة في الأوعية الدموية.كشف التحليل النسيجي أن التحكم غير المعالج CAM كان له سمك متساو نسبيا. ومع ذلك ، تسبب علاج PDT في أن يصبح CAM أرق وأكثر هشاشة. لقد أوضحنا للتو كيفية تحضير فحص CAM للسمان ex ovo وكيفية استخدامه.مع الحفاظ على المبادئ التوجيهية ، من السهل إتقان هذه المنهجية ويمكن أن تثبت نتائج سريعة.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Anticancer Efficacy of Photodynamic Therapy with Lung Cancer-Targeted Nanoparticles

المضادة للسرطان فعالية من العلاج الضوئي مع النانوية المستهدفة السرطان والرئة

Photodynamic therapy (PDT) is a non-invasive and non-surgical method representing an attractive alternative choice for lung cancer treatment. ...

The Colon-26 Carcinoma Tumor-bearing Mouse as a Model for the Study of Cancer Cachexia

كولون-26 سرطان الفأر نموذجا لدراسة سرطان دنف الحاملة للورم

Cancer cachexia is the progressive loss of skeletal muscle mass and adipose tissue, negative nitrogen balance, anorexia, fatigue, inflammation, and ...

Induction and Diagnosis of Tumors in Drosophila Imaginal Disc Epithelia

Induction and Diagnosis of Tumors in Drosophila Imaginal Disc Epithelia

الاستقراء والتشخيص للأورام في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; إيماجينال القرص إبيثيليا

In the early stages of cancer, transformed mutant cells show cytological abnormalities, begin uncontrolled overgrowth, and progressively disrupt tissue ...

Genome-wide RNAi Screening to Identify Host Factors That Modulate Oncolytic Virus Therapy

الفرز على نطاق الجينوم [رني] تحديد العوامل المضيفة التي تعدل علاج فيروس أونكوليتيك

High-throughput genome-wide RNAi (RNA interference) screening technology has been widely used for discovering host factors that impact&#160;virus ...

Therapy Testing in a Spheroid-based 3D Cell Culture Model for Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

اختبار في نموذج ثقافة خلية 3D على أساس كروي للرأس والرقبة الحرشفية خلية العلاج

Current treatment options for advanced and recurrent head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) enclose radiation and chemo-radiation approaches with ...

Dried Blood and Serum Spots As A Useful Tool for Sample Storage to Evaluate Cancer Biomarkers

تجفف الدم والبقع المصل كأداة مفيدة لتخزين نموذج لتقييم المؤشرات الحيوية السرطان

Blood sample quality is crucial to ensure accurate downstream analyses such as real-time PCR or ELISA. Correct storage of biological materials is the ...

A Three-dimensional Thymic Culture System to Generate Murine Induced Pluripotent Stem Cell-derived Tumor Antigen-specific Thymic Emigrants

نظام ثقافة ثيميك ثلاثي الأبعاد لتوليد المهاجرين الثيمة المضادة للخلايا الجذعية المشتقة من الخلايا الجذعية المتعددة القوى

The inheritance of pre-rearranged T cell receptors (TCRs) and their epigenetic rejuvenation make induced pluripotent stem cell (iPSC)-derived T cells a ...

A Spheroid Killing Assay by CAR T Cells

مقايسة قتل كروي من خلايا تي السيارة

Immunotherapy has become a field of growing interest in the fight against cancer otherwise untreatable. Among all immunotherapeutic methods, chimeric ...

Comparing Metastatic Clear Cell Renal Cell Carcinoma Model Established in Mouse Kidney and on Chicken Chorioallantoic Membrane

مقارنة النقيلي واضحة خلية الخلايا الكلوية نموذج سرطان الخلايا المنشأة في الكلى الماوس وعلى غشاء Chorioallantoic الدجاج

Metastatic clear cell renal cell carcinoma (ccRCC) is the most common subtype of kidney cancer. Localized ccRCC has a favorable surgical outcome. However, ...

Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers

استخدام غشاء Chorioallantoic الدجاج في نموذج Vivo لدراسة أمراض النساء وسرطان المسالك البولية

Mouse models are the benchmark tests for in vivo cancer studies. However, cost, time, and ethical considerations have led to calls for alternative in vivo ...