Name: quail chorioallantoic membrane - a tool for photodynamic diagnosis and therapy
Uploaded: 2022-04-28T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quail Chorioallantoic Membrane - A Tool for Photodynamic Diagnosis and Therapy at JoVE.com

Arbejdet blev støttet af VEGA 2/0042/21 og APVV 20-0129. V. Huntošovás bidrag er resultatet af projektgennemførelsen: Åbent videnskabeligt fællesskab for moderne tværfaglig forskning inden for medicin (akronym: OPENMED), ITMS2014+: 313011V455 støttet af det operationelle programs integrerede infrastruktur, finansieret af EFRU.

Forskningen blev udført i overensstemmelse med institutionelle retningslinjer. Alt udstyr og reagenser skal autoklaveres eller steriliseres med 70% ethanol eller UV-lys.
1. Inkubation af æg
<ol><li>Opbefrugtede vagtelæg opbevares ved 10-15 °C i højst 4-5 dage, før inkubationen påbegyndes. Brug kun rene og ubeskadigede æg.</li>
	<li>Inkuber æggene i en tvungen trækkuvøse i ~ 53-54 timer. Læg æggene vandret med ægrotationen slukket, ved 50% -60% fugtighed og 37,5...

<ol>
	<li>Nowak-Sliwinska, P., van Beijnum, J. R., van Berkel, M., vanden Bergh, H., Grif&#64257;oen, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+regrowth+following+photodynamic+therapy+in+the+chicken+embryo+chorioallantoic+membrane.">Vascular regrowth following photodynamic therapy in the chicken embryo chorioallantoic membrane.</a> Angiogenesis. 13 (4), 281-292 (2010).</li><li>van Leengoed, H. L. L. M., vander Veen, N., Versteeg, A. A. C., Ouellet, R., van Lier, J. E., Star, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-vivo+photodynamic+effects+of+phthalocyanines+in+a+skin-fold+observation+chamber+model:+role+of+central+metal+ion+and+degree+of+sulfonation.">In-vivo photodynamic effects of phthalocyanines in a skin-fold observation chamber model: role of central metal ion and degree of sulfonation.</a> Photochemistry Photobiology. 58 (4), 575-580 (1993).</li><li>Ainsworth, S. J., Stanley, R. L., Evans, D. J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+stages+of+the+Japanese+quail.">Developmental stages of the Japanese quail.</a> Journal of Anatomy. 216 (1), 3 (2010).</li><li>De Fouw, D. O., Rizzo, V. J., Steinfeld, R., Feinberg, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+of+the+microcirculation+in+the+chick+chorioallantoic+membrane+during+normal+angiogenesis.">Mapping of the microcirculation in the chick chorioallantoic membrane during normal angiogenesis.</a> Microvascular Research. 38 (2), 136-147 (1989).</li><li>Sandau, K., Kurz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modelling+of+vascular+growth+processes:+a+stochastic+biophysical+approach+to+embryonic+angiogenesis.">Modelling of vascular growth processes: a stochastic biophysical approach to embryonic angiogenesis.</a> Journal of Microscopy. 175 (3), 205-213 (1994).</li><li>Kurz, H., Ambrosy, S., Wilting, J., Marm&#233;, D., Christ, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proliferation+pattern+of+capillary+endothelial+cells+in+chorioallantoic+membrane+development+indicates+local+growth+control,+which+is+counteracted+by+vascular+endothelial+growth+factor+application.">Proliferation pattern of capillary endothelial cells in chorioallantoic membrane development indicates local growth control, which is counteracted by vascular endothelial growth factor application.</a> Developmental Dynamics. 203 (2), 174-186 (1995).</li><li>Huss, D., Poynter, G., Lansford, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Japanese+quail+(Coturnix+japonica)+as+laboratory+animal+model.">Japanese quail (Coturnix japonica) as laboratory animal model.</a> Lab Animal. 37 (11), 513-519 (2008).</li><li>Gottfried, V., Lindenbaum, E. S., Kimel, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chick+chorioallantoic+membrane+(CAM)+as+an+in-vivo+model+for+photodynamic+therapy.">The chick chorioallantoic membrane (CAM) as an in-vivo model for photodynamic therapy.</a> Journal of Photochemistry and Photobiology, B: Biology. 12 (2), 204-207 (1992).</li><li>Mi&#353;kovsk&#253;, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypericin+-+a+new+antiviral+and+antitumor+photosensitizer:+mechanism+of+action+and+interaction+with+biological+molecules.">Hypericin - a new antiviral and antitumor photosensitizer: mechanism of action and interaction with biological molecules.</a> Current Drug Targets. 3 (1), 55-84 (2002).</li><li>&#268;avarga, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photodynamic+effect+of+hypericin+after+topical+application+in+the+ex+ovo+quail+chorioallantoic+membrane+model.">Photodynamic effect of hypericin after topical application in the ex ovo quail chorioallantoic membrane model.</a> Planta Medica. 80 (1), 56-62 (2014).</li><li>Martinez-Poveda, B., Quesada, A. R., Medina, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypericin+in+the+dark+inhibits+key+steps+of+angiogenesis+in+vitro.">Hypericin in the dark inhibits key steps of angiogenesis in vitro.</a> Europan Journal of Pharmacology. 516 (2), 97-103 (2005).</li><li>Datta, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unravelling+the+excellent+chemical+stability+and+bioavailability+of+solvent+responsive+curcumin-loaded+2-ethyl-2-oxazoline-grad-2-(4-dodecyloxyphenyl)-+2-oxazoline+copolymer+nanoparticles+for+drug+delivery.">Unravelling the excellent chemical stability and bioavailability of solvent responsive curcumin-loaded 2-ethyl-2-oxazoline-grad-2-(4-dodecyloxyphenyl)- 2-oxazoline copolymer nanoparticles for drug delivery.</a> Biomacromolecules. 19 (7), 2459-2471 (2018).</li><li>Hunto&#353;ov&#225;, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alkyl+Chain+length+in+poly(2-oxazoline)-based+amphiphilic+gradient+copolymers+regulates+the+delivery+of+hydrophobic+molecules:+a+case+of+the+biodistribution+and+the+photodynamic+activity+of+the+photosensitizer+hypericin.">Alkyl Chain length in poly(2-oxazoline)-based amphiphilic gradient copolymers regulates the delivery of hydrophobic molecules: a case of the biodistribution and the photodynamic activity of the photosensitizer hypericin.</a> Biomacromolecules. 22 (10), 4199-4216 (2021).</li><li>Bur&#237;kov&#225;, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypericin+fluorescence+kinetics+in+the+presence+of+low+density+lipoproteins:+study+on+quail+CAM+assay+for+topical+delivery.">Hypericin fluorescence kinetics in the presence of low density lipoproteins: study on quail CAM assay for topical delivery.</a> General Physiology and Biophysic. 35 (4), 459-468 (2016).</li><li>Lenkavska, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Benefits+of+hypericin+transport+and+delivery+by+low-+and+high-density+lipoproteins+to+cancer+cells:+From+in+vitro+to+ex+ovo.">Benefits of hypericin transport and delivery by low- and high-density lipoproteins to cancer cells: From in vitro to ex ovo.</a> Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. 25, 214-224 (2019).</li><li>R&#252;ck, A., B&#246;hmler, A., Steiner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PDT+with+TOOKAD+studied+in+the+chorioallantoic+membrane+of+fertilized+eggs.">PDT with TOOKAD studied in the chorioallantoic membrane of fertilized eggs.</a> Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. 2 (1), 79-90 (2005).</li><li>Gottfried, V., Davidi, R., Averbuj, C., Kimel, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+damage+to+chorioallantoic+membrane+blood+vessels+by+porphycene-induced+photodynamic+therapy.">In vivo damage to chorioallantoic membrane blood vessels by porphycene-induced photodynamic therapy.</a> Journal of Photochemistry and Photobiology, B: Biology. 30 (2-3), 115-121 (1995).</li><li>Buzz&#225;, H. H., Silva, L. V., Moriyama, L. T., Bagnato, V. S., Kurachi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+vascular+effect+of+Photodynamic+Therapy+in+chorioallantoic+membrane+using+different+photosensitizers.">Evaluation of vascular effect of Photodynamic Therapy in chorioallantoic membrane using different photosensitizers.</a> Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology. 138, 1-7 (2014).</li><li>Dougherty, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photodynamic+therapy.">Photodynamic therapy.</a> Journal of the National Cancer Institute. 90, 889-905 (1998).</li><li>Xiang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+optoacoustic+monitoring+of+vascular+damage+during+photodynamic+therapy+treatment+of+tumor.">Real-time optoacoustic monitoring of vascular damage during photodynamic therapy treatment of tumor.</a> Journal of Biomedical Optics. 12 (1), 01400-01408 (2007).</li><li>Foty, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+hanging+drop+cell+culture+protocol+for+generation+of+3D+spheroids.">A simple hanging drop cell culture protocol for generation of 3D spheroids.</a> Journal of Visualized Experiments. (51), 2720 (2011).</li><li>Abramoff, M. D., Magelhaes, P. J., Ram, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Image+Processing+with+ImageJ.">Image Processing with ImageJ.</a> Biophotonics International. 11 (7), 36-42 (2004).</li><li>Chomczynski, P., Sacchi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-step+method+of+RNA+isolation+by+acid+guanidium+thiocyanate-phenol-chloroform+extraction.">Single-step method of RNA isolation by acid guanidium thiocyanate-phenol-chloroform extraction.</a> Analytical Biochemistry. 162 (1), 156-159 (1987).</li><li>M&#225;&#269;ajov&#225;, M., &#268;avarga, I., S&#253;korov&#225;, M., Valachovi&#269;, M., Novotn&#225;, V., Bil&#269;&#237;k, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+angiogenesis+by+topical+application+of+leptin+and+high+and+low+molecular+heparin+using+the+Japanese+quail+chorioallantoic+membrane+model.">Modulation of angiogenesis by topical application of leptin and high and low molecular heparin using the Japanese quail chorioallantoic membrane model.</a> Saudi Journal of Biological Sciences. 27 (6), 1488-1493 (2020).</li><li>Mangir, N., Dikici, S., Claeyssens, F., MacNeil, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+Ex+Ovo+chick+chorioallantoic+membrane+(CAM)+assay+to+evaluate+the+biocompatibility+and+angiogenic+response+to+biomaterials.">Using Ex Ovo chick chorioallantoic membrane (CAM) assay to evaluate the biocompatibility and angiogenic response to biomaterials.</a> ACS Biomaterials Science Engineering. 5 (7), 3190-3200 (2019).</li><li>Marshall, K. M., Kanczler, J. M., Oreffo, R. O. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolving+applications+of+the+egg:+chorioallantoic+membrane+assay+and+ex+vivo+organotypic+culture+of+materials+for+bone+tissue+engineering.">Evolving applications of the egg: chorioallantoic membrane assay and ex vivo organotypic culture of materials for bone tissue engineering.</a> Journal of Tissue Engineering. 11, 1-25 (2020).</li><li>Merlos Rodrigo, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extending+the+applicability+of+in+ovo+and+ex+ovo+chicken+chorioallantoic+membrane+assays+to+study+cytostatic+activity+in+neuroblastoma+cells.">Extending the applicability of in ovo and ex ovo chicken chorioallantoic membrane assays to study cytostatic activity in neuroblastoma cells.</a> Frontiers in Oncology. 11, 1-10 (2021).</li><li>Meta, M., Kundekov&#225;, B., Bil&#269;&#237;k, B., M&#225;&#269;ajov&#225;, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+silicone+ring+application+on+CAM+vasculature+in+Japanese+Quail+(Coturnix+japonica).">The effect of silicone ring application on CAM vasculature in Japanese Quail (Coturnix japonica).</a> Proceedings of the Student Scientific Conference Faculty of Natural Sciences of Comenius University, Bratislava, Slovakia. , 385-390 (2019).</li><li>Kohli, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-screening+the+intrinsic+angiogenic+capacity+of+biomaterials+in+an+optimised+ex+ovo+chorioallantoic+membrane+model.">Pre-screening the intrinsic angiogenic capacity of biomaterials in an optimised ex ovo chorioallantoic membrane model.</a> Journal of Tissue Engineering. 11, 1-15 (2020).</li><li>Kundekov&#225;, B., M&#225;&#269;ajov&#225;, M., Meta, M., &#268;avarga, I., Bil&#269;&#237;k, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chorioallantoic+membrane+models+of+various+avian+species+differences+and+applications.">Chorioallantoic membrane models of various avian species differences and applications.</a> Biology-Basel. 10 (4), 301 (2021).</li><li>Parsons-Wingerter, P., Elliott, K. E., Clark, J. I., Farr, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblast+growth+factor-2+selectively+stimulates+angiogenesis+of+small+vessels+in+arterial+tree.">Fibroblast growth factor-2 selectively stimulates angiogenesis of small vessels in arterial tree.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis and Vascular Biology. 20 (5), 1250-1256 (2000).</li><li>Buzz&#225;, H. H., Zangirolami, A. C., Davis, A., G&#243;mez-Garc&#237;a, P. B., Kurachi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+analysis+of+a+tumor+model+in+the+chorioallantoic+membrane+used+for+the+evaluation+of+different+photosensitizers+for+photodynamic+therapy.">Fluorescence analysis of a tumor model in the chorioallantoic membrane used for the evaluation of different photosensitizers for photodynamic therapy.</a> Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. 19, 78-83 (2017).</li></ol>

For en vellykket ex ovo-dyrkning er det vigtigt at følge protokollen ovenfor. Desuden, hvis æggene ikke åbnes omhyggeligt nok, eller der ikke er tilstrækkelig fugtighed under dyrkningen, klæber æggeblommesækken til skallen og brister ofte. Påbegyndelsen af en ex ovo-dyrkning på tidspunktet for ca. 60 timers æginkubation sikrer embryonernes høje overlevelsesrate, da de allerede er store nok til at overleve håndteringen. På de senere udviklingsstadier bliver CAM tyndere og klæber til æggesk...

Kylling chorioallantoic membran (CAM) modellen er velkendt og udbredt inden for forskellige forskningsområder. Det er et rigt vaskulariseret ekstraembryonalt organ, der giver gasudveksling og mineraltransport1. På grund af gennemsigtigheden og tilgængeligheden af denne membran kan individuelle blodkar og deres strukturelle ændringer observeres i realtid2. På trods af fordelene har kyllinge-CAM også nogle begrænsninger (f.eks. Større avlsfaciliteter, ægproduktion og foderforbrug), der kunne undgås ved at bruge andre fuglearter. I denne protokol beskrives en alternativ ex ovo CAM-model med japansk vagtel (Coturnix japonica) embryo. På grund af sin lille størrelse tillader det brugen af et meget større antal eksperimentelle individer end kylling CAM. Desuden er den kortere 16-dages embryonale udvikling af vagtelembryoner en anden fordel. De første større fartøjer på vagtel CAM vises på embryonal dag (ED) 7. Dette kan sammenlignes direkte med chick embryo udvikling (trin 4-35); De senere udviklingsstadier er imidlertid ikke længere sammenlignelige og kræver mindre tid til vagtelembryoet3. Af interesse er den regelmæssige forekomst af mikrovaskulær forgrening svarende til kylling CAMs 4,5,6. Hurtig seksuel modning, høj ægproduktion og billig avl er andre eksempler, der favoriserer brugen af denne eksperimentelle model7.
En CAM-model anvendes ofte i fotodynamiske terapiundersøgelser (PDT)8. PDT bruges til behandling af flere former for kræft (små lokaliserede tumorer) og andre ikke-onkologiske sygdomme. Dets princip er i levering af et fluorescerende lægemiddel, en fotosensibilisator (PS), til det beskadigede væv og dets aktivering med lys med den passende bølgelængde. En potentiel PS, der anvendes i forskning, er hypericin, oprindeligt isoleret fra lægeplanten St. John's wort (Hypericum perforatum)9. De stærke fotosensibiliserende virkninger af denne forbindelse er baseret på dets fotokemiske og fotofysiske egenskaber. Disse er kendetegnet ved flere fluorescens excitation toppe i området 400-600 nm, hvilket inducerer emission af fluorescens ved ca. 600 nm. Absorptionsmaksima for hypericin inden for spektralbåndet ligger i området 540-590 nm, og fluorescensmaksima ligger i området 590-640 nm9. For at opnå disse fotosensibiliserende effekter ophidses hypericin af laserlys ved en bølgelængde på 405 nm efter lokal administration10. I nærvær af lys kan hypericin udvise virucide, antiproliferative og cytotoksiske virkninger11, mens der ikke er nogen systemisk toksicitet, og det frigives hurtigt fra organismen. Hypericin er et lipofilt stof, der danner vanduopløselige, ikke-fluorescerende aggregater, hvorfor flere typer nanocarriers, såsom polymere nanopartikler 12,13 eller lipoproteiner med høj og lav densitet (HDL, LDL)14,15, bruges til at hjælpe dets levering og indtrængning i cellerne. Da CAM er et naturligt immundefekt system, kan tumorceller implanteres direkte på membranoverfladen. Modellen er også velegnet til registrering af omfanget af PDT-induceret vaskulær skade i henhold til en defineret score16,17. Lys med lavere intensitet sammenlignet med PDT kan bruges til fotodynamisk diagnose (PDD). Overvågning af vævet under violet excitation LED-lys fører også til fotoaktivering af fotosensibilisatorer18,19,20, der resulterer i en emission af fluorescerende lys, men det giver ikke nok energi til at starte en PDT-reaktion og beskadige cellerne. Det gør det til et godt værktøj til tumorvisualisering og diagnose eller overvågning af farmakokinetikken af brugte PSs14,15.
Denne artikel beskriver forberedelsen af vagtler ex ovo CAM-assay med overlevelsesrater over 80%. Denne ex ovo-kultur blev anvendt med succes i et stort antal eksperimenter.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>6-Well Cell Culture Plate</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>83.392</td>
			<td>Transparent polystyrene, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 Incubator ESCO CCL-0508</td>
			<td>ESCO, Singapore</td>
			<td>CCL-050B-8</td>
			<td>CO2 cell culture incubator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cryocut Leica CM 1800</td>
			<td>Reichert-Jung, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>digital camera Canon EOS 6D II</td>
			<td>Canon, Japan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>diode laser 405 nm</td>
			<td>Ocean Optics, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>67-68-5</td>
			<td>dimethyl sulfoxid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eosin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>15086-94-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ethanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fine brush size 2</td>
			<td>Faber-Castell</td>
			<td>281802</td>
			<td>brush for CAM separation and manipulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glutaraldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>111-30-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hematoxylin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>517-28-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hypericin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>84082-80-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>incubator Bios Midi</td>
			<td>Bios Sedl<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/63422/63422eq01.jpg" style="margin: auto;" />any, Czech Republic</td>
			<td></td>
			<td>Forced draught incubator for initial incubation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>incubator Memmert IF160</td>
			<td>Memmert, Germany</td>
			<td></td>
			<td>Forced air circulation incubator for CAM incubation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kaiser slimlite plano, LED light box</td>
			<td>Kaiser, Germany</td>
			<td>2453</td>
			<td>Transilluminator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LED light 405 nm</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>custom made circular LED light</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>macro lens Canon MP- E 65 mm f/2.8</td>
			<td>Canon, Japan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microscope Kapa 2000</td>
			<td>Kvant, Slovakia</td>
			<td></td>
			<td>optical microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microtome Auxilab 508</td>
			<td>Auxilab, Spain</td>
			<td></td>
			<td>manual rotary microtome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>30525-89-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraplast Plus</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3683</td>
			<td>parafin medium for tissue embedding</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4417</td>
			<td>Phosphate saline buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>scissors Castroviejo</td>
			<td>Orimed</td>
			<td>&#160;OR66-108</td>
			<td>micro scissors for CAM separation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>software ImageJ 1.53</td>
			<td>public domain</td>
			<td></td>
			<td>image processing and analysis program</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stock solution HDL</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>437641-10MG</td>
			<td>high density lipoproteins</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stock solution LDL</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>437644-10MG</td>
			<td>low density lipoproteins</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek O.C.T. Compound</td>
			<td>Sakura Finetek</td>
			<td>4583</td>
			<td>Optimal Cutting Temperature Compound 118 mL squeeze bottles</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quail chorioallantoic membrane - a tool for photodynamic diagnosis and therapy

Den chorioallantoiske membran (CAM) i et fugleembryo er en tynd, ekstraembryonal membran, der fungerer som et primært åndedrætsorgan. Dens egenskaber gør det til en fremragende in vivo eksperimentel model til at studere angiogenese, tumorvækst, lægemiddelleveringssystemer eller fotodynamisk diagnose (PDD) og fotodynamisk terapi (PDT). Samtidig imødekommer denne model kravet om udskiftning af forsøgsdyr med et passende alternativ. Ex ovo dyrket embryo giver nem stofpåføring, adgang, overvågning og dokumentation. Den mest anvendte er chick CAM; Denne artikel beskriver dog fordelene ved den japanske vagtel CAM som en billig og høj gennemstrømningsmodel. En anden fordel er den kortere embryonale udvikling, hvilket muliggør højere eksperimentel omsætning. Egnetheden af vagtel CAM til PDD og PDT af kræft og mikrobielle infektioner undersøges her. Som et eksempel beskrives brugen af fotosensibilisatoren hypericin i kombination med lipoproteiner eller nanopartikler som et leveringssystem. Skadesscoren fra billeder i hvidt lys og ændringer i fluorescensintensiteten af CAM-vævet under violet lys (405 nm) blev bestemt sammen med analyse af histologiske sektioner. Vagtel CAM viste tydeligt effekten af PDT på vaskulaturen og vævet. Desuden kunne ændringer som kapillærblødning, trombose, lysis af små kar og blødning af større kar observeres. Japansk vagtel CAM er en lovende in vivo-model til fotodynamisk diagnose og terapiforskning med anvendelser i undersøgelser af tumorangiogenese samt antivaskulær og antimikrobiel terapi.

Lokaliseringen af tumoren på CAM-overfladen er vanskelig i hvidt lys. Fotosensibilisator (her hypericin), der anvendes i PDD, forventes at blive optaget selektivt af tumoren og hjælper med at visualisere tumoren. Tilsætningen af hypericin og brugen af fluorescerende lys (f.eks. 405 nm) viste tumorpositionen (pladecellecarcinom TE1) meget godt (figur 6A). Histologisk analyse viste vitale tumorceller, der invaderede sunde væv. Koncentriske strukturer af unormale pladeceller, ofte beskrevet...

Watch this Scientific Journal Video about Quail Chorioallantoic Membrane - A Tool for Photodynamic Diagnosis and Therapy at JoVE.com

Quail Chorioallantoic Membrane - A Tool for Photodynamic Diagnosis and Therapy

Den chorioallantoiske membran (CAM) i fugleembryoet er et meget nyttigt og anvendeligt værktøj til forskellige forskningsområder. En særlig ex ovo-model af japansk vagtel CAM er velegnet til fotodynamisk behandlingsundersøgelse.

Quail Chorioallantoic membran - et værktøj til fotodynamisk diagnose og terapi

The chorioallantoic membrane (CAM) of an avian embryo is a thin, extraembryonic membrane that functions as a primary respiratory organ. Its properties ...

Vi vil vise dig, hvordan du forbereder japansk vagtel ex ovo-kultur, og hvordan du bruger chorioallantoic membran eller CAM kort til fotodynamisk diagnose og terapi af kræft eller mikrobielle infektioner. Fordele ved denne metode er hurtig udviklingsvækst, lille størrelse, god adgang til vævet og nem håndtering. Det respekterer også principperne i 3R-reglen for udførelse af dyreforsøg.På grund af dets strukturelle lighed med slimhinderne såsom blæren, lungerne eller moderkagen er den velegnet til in vivo-test af potentielle lægemidler, toksicitetstest eller transplantationsundersøgelser. Barbora Kundekova og Majlinda Meta, ph.d.-studerende fra mit laboratorium, demonstrerer proceduren. Til at begynde med skal du bruge befrugtede vagtelæg, friske eller opbevaret ved 10 til 15 grader Celsius i højst 4 til 5 dage før inkubationens start.Brug kun rene og ubeskadigede æg, og inkuber derefter æggene i en inkubator med tvangstræk ved 50 til 60% fugtighed og 37,5 grader Celsius i ca. 54 timer placeret vandret med ægrotationerne slået fra. Desinficer ægoverfladen med 70% ethanol uden at rotere ægget. Derefter åbnes æggeskallen i et sterilt lamilært flowskab, mens du har handsker på, ved hjælp af en lille steril kirurgisk saks og overfører indholdet til en 6-brønds kulturplade.Efter hvert æg desinficeres saksen med 70% ethanol. Tilsæt ca. 5 ml sterilt vand til hullerne i 6-brøndspladen, da fugtighed er afgørende for at forhindre CAM i at tørre ud. Derefter aspireres forkert tippede embryoner eller ubefrugtede æg med en vakuumaspirator, og placer derefter embryonerne i en inkubator indtil yderligere eksperimenter, mens du opretholder en temperatur på 37 grader Celsius i 80 til 90% fugtighed.Når CAM er udviklet nok, normalt fra embryonal dag 7, skal du placere en steriliseret silikonering på CAM-overfladen langs de små kapillærer, samtidig med at man undgår større blodkar. Under sterile forhold påføres et passende volumen hypericinopløsning 30 mikroliter på silikoneringen og opbevares embryonerne i en inkubator ved 37 grader Celsius i 80 til 90% fugtighed. For at udføre fotodynamisk diagnose skal du belyse CAM ved hjælp af violet excitationslys og registrere fluorescensen af hypericin og CAM-væv og tumorceller med et digitalt kamera med forskellige tidsintervaller efter hypericinadministration.Hvis forskningen kræver et billede af CAM i hvidt lys, skal du registrere CAM før hypericin administration og i slutningen af eksperimentet kort før vævsfiksering, da lyset udløser fotoaktivering af hypericin. For at udføre den fotodynamiske terapi efter hypericin-påføring skal du placere CAM under den optiske fiber for laserstrålen for at dække hele området inden for silikoningen. Efter at have udført in vivo-bestråling, i dette særlige tilfælde med et 405 nanometer laserlys med en fluenshastighed på 285 milliwatt pr. Centimeter kvadrat, skal du optage CAM ved hjælp af hvidt lys og / eller fluorescerende lys før og efter fotodynamisk behandling.Fastgør CAM-vævet i en dyrkningsplade med 4% paraformaldehyd i PBS i mindst 2 timer og højst natten over, fjern derefter paraformaldehydet og skær forsigtigt en del af vævet i silikoneringen ud af CAM. Alle disse trin skal udføres i en røghætte. Vask den afskårne del fra CAM-vævet i vand i 10 minutter og dehydrer derefter i stigende alkoholserier ved at placere CAM-vævet i 70% ethanol i 3 minutter, eosinopløsning i 2 minutter, throcin 96% ethanol i 5 minutter, 100% ethanol i 5 minutter og to gange i xylen i 10 minutter i en ny petriskål.Derefter overføres prøverne så hurtigt som muligt til den opløste paraffin i petriskåle ved hjælp af en spatel eller tynd børste. Efter 24 timer skal du placere vævet i histologisk skimmel, fylde det med et paraffinindlejringsmedium og lade det størkne i køleskabet, derefter skære det størknede CAM fra indlejringsmediet, dreje det i bakken med 90 grader, fylde det igen med indlejringsmediet og lade det størkne. Forbered 5 til 10 mikrometer sektioner på et mikrotom til histopatologisk analyse for at bestemme PDT-induceret skade.For at forberede de frosne CAM-sektioner til histologi skal du forsigtigt montere native eller 4% paraformaldehydfast CAM på glasdiaset, fylde indlejringsformen til halvdelen med OCT og fryse i flydende nitrogen eller en blanding af tøris og ethanol. Efter frysning vippes og skubbes forsigtigt CAM fra glasrutsjebanen ned på toppen af det frosne OCT-medium. Placer igen i formen, dæk den med OCT-medium og frys som beskrevet tidligere.Til analyse af CAM-vaskulatur er der brug for hele CAM-prøver. I det laminære flowskab overløb CAM med en forvarmet fikseringsopløsning af 4% paraformaldehyd og 2% glutaraldehyd i PBS, og fjern derefter fikseringsopløsningen efter 48 timer. Derefter adskilles CAM'et forsigtigt fra embryoet med mikrosaks og en fin børste og vaskes i PBS, monteres derefter det vaskede CAM på et glasglas og lad det langsomt tørre.Bagefter fotograferes diaset ved hjælp af et digitalt kamera i en transilluminator som en kilde til homogent hvidt lys. Placeringen af tumoren på CAM-overfladen blev visualiseret under hvidt lys og fluorescerende lys ved tilsætning af hypericin. Histologisk analyse viste koncentriske strukturer af unormale pladeceller, der invaderede det sunde væv ledsaget af ødem og membranfortykkelse.Efter behandling med PDT blev der observeret en klar forskel i fartøjstætheden inde i ringen og det omkringliggende område. Laserstrålingen uden tilstedeværelse af fotosensibilisator forårsagede ingen skade, der kunne sammenlignes med kontrollen uden nogen behandling. Efter 3 timers inkubation med hypericin resulterede laserbestråling i fluorescens forårsaget af monomerisering af det aggregerede hypericin med omfattende skade på vaskulaturen.Histologisk analyse afslørede, at ubehandlet kontrol CAM havde relativt jævn tykkelse. PDT-behandling fik imidlertid CAM til at blive tyndere og mere skrøbelig. Vi har lige demonstreret, hvordan man forbereder vagtler ex ovo CAM-analyse, og hvordan man bruger det.Mens retningslinjerne opretholdes, er denne metode let at mestre og kan vise hurtige resultater.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Anticancer Efficacy of Photodynamic Therapy with Lung Cancer-Targeted Nanoparticles

Anticancer Effekten af ​​Fotodynamisk terapi med lungekræft-Målrettet Nanopartikler

Photodynamic therapy (PDT) is a non-invasive and non-surgical method representing an attractive alternative choice for lung cancer treatment. ...

The Colon-26 Carcinoma Tumor-bearing Mouse as a Model for the Study of Cancer Cachexia

Den Colon-26 Carcinoma Tumor-bærende mus som en model for Studiet af Cancer Kakeksi

Cancer cachexia is the progressive loss of skeletal muscle mass and adipose tissue, negative nitrogen balance, anorexia, fatigue, inflammation, and ...

Induction and Diagnosis of Tumors in Drosophila Imaginal Disc Epithelia

Induction and Diagnosis of Tumors in Drosophila Imaginal Disc Epithelia

Induktion og diagnose af tumorer i<em&gt; Drosophila</em&gt; Imaginal Disc Epithelia

In the early stages of cancer, transformed mutant cells show cytological abnormalities, begin uncontrolled overgrowth, and progressively disrupt tissue ...

Genome-wide RNAi Screening to Identify Host Factors That Modulate Oncolytic Virus Therapy

Genome-wide RNAi Screening at identificere vært faktorer, at modulerer Oncolytic Virus terapi

High-throughput genome-wide RNAi (RNA interference) screening technology has been widely used for discovering host factors that impact&#160;virus ...

Therapy Testing in a Spheroid-based 3D Cell Culture Model for Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

Terapi test i en klumpformet-baseret 3D celle kultur Model for hoved og hals planocellulært karcinom

Current treatment options for advanced and recurrent head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) enclose radiation and chemo-radiation approaches with ...

Dried Blood and Serum Spots As A Useful Tool for Sample Storage to Evaluate Cancer Biomarkers

Tørrede blod og Serum steder som et nyttigt redskab for prøven Storage til at evaluere kræft biomarkører

Blood sample quality is crucial to ensure accurate downstream analyses such as real-time PCR or ELISA. Correct storage of biological materials is the ...

A Three-dimensional Thymic Culture System to Generate Murine Induced Pluripotent Stem Cell-derived Tumor Antigen-specific Thymic Emigrants

En tredimensionel Thymisk kultur system til at generere murine induceret pluripotente stamcelle-afledte tumor antigen-specifikke Thymisk emigranter

The inheritance of pre-rearranged T cell receptors (TCRs) and their epigenetic rejuvenation make induced pluripotent stem cell (iPSC)-derived T cells a ...

A Spheroid Killing Assay by CAR T Cells

En klumpformet drab Assay af bil T celler

Immunotherapy has become a field of growing interest in the fight against cancer otherwise untreatable. Among all immunotherapeutic methods, chimeric ...

Comparing Metastatic Clear Cell Renal Cell Carcinoma Model Established in Mouse Kidney and on Chicken Chorioallantoic Membrane

Sammenligning metastatisk klar celle renal celle karcinom model etableret i mus nyre og på Kylling Chorioallantoic Membran

Metastatic clear cell renal cell carcinoma (ccRCC) is the most common subtype of kidney cancer. Localized ccRCC has a favorable surgical outcome. However, ...

Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers

Brug af kylling chorioallantoic membran i Vivo Model til at studere gynækologiske og urologiske kræftformer

Mouse models are the benchmark tests for in vivo cancer studies. However, cost, time, and ethical considerations have led to calls for alternative in vivo ...