Name: quail chorioallantoic membrane - a tool for photodynamic diagnosis and therapy
Uploaded: 2022-04-28T12:30:00
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Les travaux ont été soutenus par VEGA 2/0042/21 et APVV 20-0129. La contribution de V. Huntošová est le résultat de la mise en œuvre du projet: Communauté scientifique ouverte pour la recherche interdisciplinaire moderne en médecine (acronyme: OPENMED), ITMS2014+: 313011V455 soutenu par l’infrastructure intégrée du programme opérationnel, financé par le FEDER.

La recherche a été réalisée conformément aux lignes directrices institutionnelles. Tout l’équipement et les réactifs doivent être autoclavés ou stérilisés avec de l’éthanol à 70 % ou de la lumière UV.
1. Incubation des œufs
<ol><li>Conservez les œufs de caille fécondés à 10-15 °C pendant un maximum de 4-5 jours avant de commencer l’incubation. N’utilisez que des œufs propres et intacts.</li>
	<li>Incuber les œufs dans un incubateur à tirage for...

<ol>
	<li>Nowak-Sliwinska, P., van Beijnum, J. R., van Berkel, M., vanden Bergh, H., Grif&#64257;oen, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+regrowth+following+photodynamic+therapy+in+the+chicken+embryo+chorioallantoic+membrane.">Vascular regrowth following photodynamic therapy in the chicken embryo chorioallantoic membrane.</a> Angiogenesis. 13 (4), 281-292 (2010).</li><li>van Leengoed, H. L. L. M., vander Veen, N., Versteeg, A. A. C., Ouellet, R., van Lier, J. E., Star, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-vivo+photodynamic+effects+of+phthalocyanines+in+a+skin-fold+observation+chamber+model:+role+of+central+metal+ion+and+degree+of+sulfonation.">In-vivo photodynamic effects of phthalocyanines in a skin-fold observation chamber model: role of central metal ion and degree of sulfonation.</a> Photochemistry Photobiology. 58 (4), 575-580 (1993).</li><li>Ainsworth, S. J., Stanley, R. L., Evans, D. J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+stages+of+the+Japanese+quail.">Developmental stages of the Japanese quail.</a> Journal of Anatomy. 216 (1), 3 (2010).</li><li>De Fouw, D. O., Rizzo, V. J., Steinfeld, R., Feinberg, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+of+the+microcirculation+in+the+chick+chorioallantoic+membrane+during+normal+angiogenesis.">Mapping of the microcirculation in the chick chorioallantoic membrane during normal angiogenesis.</a> Microvascular Research. 38 (2), 136-147 (1989).</li><li>Sandau, K., Kurz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modelling+of+vascular+growth+processes:+a+stochastic+biophysical+approach+to+embryonic+angiogenesis.">Modelling of vascular growth processes: a stochastic biophysical approach to embryonic angiogenesis.</a> Journal of Microscopy. 175 (3), 205-213 (1994).</li><li>Kurz, H., Ambrosy, S., Wilting, J., Marm&#233;, D., Christ, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proliferation+pattern+of+capillary+endothelial+cells+in+chorioallantoic+membrane+development+indicates+local+growth+control,+which+is+counteracted+by+vascular+endothelial+growth+factor+application.">Proliferation pattern of capillary endothelial cells in chorioallantoic membrane development indicates local growth control, which is counteracted by vascular endothelial growth factor application.</a> Developmental Dynamics. 203 (2), 174-186 (1995).</li><li>Huss, D., Poynter, G., Lansford, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Japanese+quail+(Coturnix+japonica)+as+laboratory+animal+model.">Japanese quail (Coturnix japonica) as laboratory animal model.</a> Lab Animal. 37 (11), 513-519 (2008).</li><li>Gottfried, V., Lindenbaum, E. S., Kimel, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chick+chorioallantoic+membrane+(CAM)+as+an+in-vivo+model+for+photodynamic+therapy.">The chick chorioallantoic membrane (CAM) as an in-vivo model for photodynamic therapy.</a> Journal of Photochemistry and Photobiology, B: Biology. 12 (2), 204-207 (1992).</li><li>Mi&#353;kovsk&#253;, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypericin+-+a+new+antiviral+and+antitumor+photosensitizer:+mechanism+of+action+and+interaction+with+biological+molecules.">Hypericin - a new antiviral and antitumor photosensitizer: mechanism of action and interaction with biological molecules.</a> Current Drug Targets. 3 (1), 55-84 (2002).</li><li>&#268;avarga, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photodynamic+effect+of+hypericin+after+topical+application+in+the+ex+ovo+quail+chorioallantoic+membrane+model.">Photodynamic effect of hypericin after topical application in the ex ovo quail chorioallantoic membrane model.</a> Planta Medica. 80 (1), 56-62 (2014).</li><li>Martinez-Poveda, B., Quesada, A. R., Medina, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypericin+in+the+dark+inhibits+key+steps+of+angiogenesis+in+vitro.">Hypericin in the dark inhibits key steps of angiogenesis in vitro.</a> Europan Journal of Pharmacology. 516 (2), 97-103 (2005).</li><li>Datta, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unravelling+the+excellent+chemical+stability+and+bioavailability+of+solvent+responsive+curcumin-loaded+2-ethyl-2-oxazoline-grad-2-(4-dodecyloxyphenyl)-+2-oxazoline+copolymer+nanoparticles+for+drug+delivery.">Unravelling the excellent chemical stability and bioavailability of solvent responsive curcumin-loaded 2-ethyl-2-oxazoline-grad-2-(4-dodecyloxyphenyl)- 2-oxazoline copolymer nanoparticles for drug delivery.</a> Biomacromolecules. 19 (7), 2459-2471 (2018).</li><li>Hunto&#353;ov&#225;, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alkyl+Chain+length+in+poly(2-oxazoline)-based+amphiphilic+gradient+copolymers+regulates+the+delivery+of+hydrophobic+molecules:+a+case+of+the+biodistribution+and+the+photodynamic+activity+of+the+photosensitizer+hypericin.">Alkyl Chain length in poly(2-oxazoline)-based amphiphilic gradient copolymers regulates the delivery of hydrophobic molecules: a case of the biodistribution and the photodynamic activity of the photosensitizer hypericin.</a> Biomacromolecules. 22 (10), 4199-4216 (2021).</li><li>Bur&#237;kov&#225;, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypericin+fluorescence+kinetics+in+the+presence+of+low+density+lipoproteins:+study+on+quail+CAM+assay+for+topical+delivery.">Hypericin fluorescence kinetics in the presence of low density lipoproteins: study on quail CAM assay for topical delivery.</a> General Physiology and Biophysic. 35 (4), 459-468 (2016).</li><li>Lenkavska, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Benefits+of+hypericin+transport+and+delivery+by+low-+and+high-density+lipoproteins+to+cancer+cells:+From+in+vitro+to+ex+ovo.">Benefits of hypericin transport and delivery by low- and high-density lipoproteins to cancer cells: From in vitro to ex ovo.</a> Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. 25, 214-224 (2019).</li><li>R&#252;ck, A., B&#246;hmler, A., Steiner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PDT+with+TOOKAD+studied+in+the+chorioallantoic+membrane+of+fertilized+eggs.">PDT with TOOKAD studied in the chorioallantoic membrane of fertilized eggs.</a> Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. 2 (1), 79-90 (2005).</li><li>Gottfried, V., Davidi, R., Averbuj, C., Kimel, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+damage+to+chorioallantoic+membrane+blood+vessels+by+porphycene-induced+photodynamic+therapy.">In vivo damage to chorioallantoic membrane blood vessels by porphycene-induced photodynamic therapy.</a> Journal of Photochemistry and Photobiology, B: Biology. 30 (2-3), 115-121 (1995).</li><li>Buzz&#225;, H. H., Silva, L. V., Moriyama, L. T., Bagnato, V. S., Kurachi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+vascular+effect+of+Photodynamic+Therapy+in+chorioallantoic+membrane+using+different+photosensitizers.">Evaluation of vascular effect of Photodynamic Therapy in chorioallantoic membrane using different photosensitizers.</a> Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology. 138, 1-7 (2014).</li><li>Dougherty, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photodynamic+therapy.">Photodynamic therapy.</a> Journal of the National Cancer Institute. 90, 889-905 (1998).</li><li>Xiang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+optoacoustic+monitoring+of+vascular+damage+during+photodynamic+therapy+treatment+of+tumor.">Real-time optoacoustic monitoring of vascular damage during photodynamic therapy treatment of tumor.</a> Journal of Biomedical Optics. 12 (1), 01400-01408 (2007).</li><li>Foty, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+hanging+drop+cell+culture+protocol+for+generation+of+3D+spheroids.">A simple hanging drop cell culture protocol for generation of 3D spheroids.</a> Journal of Visualized Experiments. (51), 2720 (2011).</li><li>Abramoff, M. D., Magelhaes, P. J., Ram, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Image+Processing+with+ImageJ.">Image Processing with ImageJ.</a> Biophotonics International. 11 (7), 36-42 (2004).</li><li>Chomczynski, P., Sacchi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-step+method+of+RNA+isolation+by+acid+guanidium+thiocyanate-phenol-chloroform+extraction.">Single-step method of RNA isolation by acid guanidium thiocyanate-phenol-chloroform extraction.</a> Analytical Biochemistry. 162 (1), 156-159 (1987).</li><li>M&#225;&#269;ajov&#225;, M., &#268;avarga, I., S&#253;korov&#225;, M., Valachovi&#269;, M., Novotn&#225;, V., Bil&#269;&#237;k, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+angiogenesis+by+topical+application+of+leptin+and+high+and+low+molecular+heparin+using+the+Japanese+quail+chorioallantoic+membrane+model.">Modulation of angiogenesis by topical application of leptin and high and low molecular heparin using the Japanese quail chorioallantoic membrane model.</a> Saudi Journal of Biological Sciences. 27 (6), 1488-1493 (2020).</li><li>Mangir, N., Dikici, S., Claeyssens, F., MacNeil, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+Ex+Ovo+chick+chorioallantoic+membrane+(CAM)+assay+to+evaluate+the+biocompatibility+and+angiogenic+response+to+biomaterials.">Using Ex Ovo chick chorioallantoic membrane (CAM) assay to evaluate the biocompatibility and angiogenic response to biomaterials.</a> ACS Biomaterials Science Engineering. 5 (7), 3190-3200 (2019).</li><li>Marshall, K. M., Kanczler, J. M., Oreffo, R. O. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolving+applications+of+the+egg:+chorioallantoic+membrane+assay+and+ex+vivo+organotypic+culture+of+materials+for+bone+tissue+engineering.">Evolving applications of the egg: chorioallantoic membrane assay and ex vivo organotypic culture of materials for bone tissue engineering.</a> Journal of Tissue Engineering. 11, 1-25 (2020).</li><li>Merlos Rodrigo, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extending+the+applicability+of+in+ovo+and+ex+ovo+chicken+chorioallantoic+membrane+assays+to+study+cytostatic+activity+in+neuroblastoma+cells.">Extending the applicability of in ovo and ex ovo chicken chorioallantoic membrane assays to study cytostatic activity in neuroblastoma cells.</a> Frontiers in Oncology. 11, 1-10 (2021).</li><li>Meta, M., Kundekov&#225;, B., Bil&#269;&#237;k, B., M&#225;&#269;ajov&#225;, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+silicone+ring+application+on+CAM+vasculature+in+Japanese+Quail+(Coturnix+japonica).">The effect of silicone ring application on CAM vasculature in Japanese Quail (Coturnix japonica).</a> Proceedings of the Student Scientific Conference Faculty of Natural Sciences of Comenius University, Bratislava, Slovakia. , 385-390 (2019).</li><li>Kohli, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-screening+the+intrinsic+angiogenic+capacity+of+biomaterials+in+an+optimised+ex+ovo+chorioallantoic+membrane+model.">Pre-screening the intrinsic angiogenic capacity of biomaterials in an optimised ex ovo chorioallantoic membrane model.</a> Journal of Tissue Engineering. 11, 1-15 (2020).</li><li>Kundekov&#225;, B., M&#225;&#269;ajov&#225;, M., Meta, M., &#268;avarga, I., Bil&#269;&#237;k, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chorioallantoic+membrane+models+of+various+avian+species+differences+and+applications.">Chorioallantoic membrane models of various avian species differences and applications.</a> Biology-Basel. 10 (4), 301 (2021).</li><li>Parsons-Wingerter, P., Elliott, K. E., Clark, J. I., Farr, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblast+growth+factor-2+selectively+stimulates+angiogenesis+of+small+vessels+in+arterial+tree.">Fibroblast growth factor-2 selectively stimulates angiogenesis of small vessels in arterial tree.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis and Vascular Biology. 20 (5), 1250-1256 (2000).</li><li>Buzz&#225;, H. H., Zangirolami, A. C., Davis, A., G&#243;mez-Garc&#237;a, P. B., Kurachi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+analysis+of+a+tumor+model+in+the+chorioallantoic+membrane+used+for+the+evaluation+of+different+photosensitizers+for+photodynamic+therapy.">Fluorescence analysis of a tumor model in the chorioallantoic membrane used for the evaluation of different photosensitizers for photodynamic therapy.</a> Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. 19, 78-83 (2017).</li></ol>

Pour une culture ex ovo réussie, il est important de suivre le protocole ci-dessus. De plus, si les œufs ne sont pas ouverts assez soigneusement ou s’il n’y a pas suffisamment d’humidité pendant la culture, le sac de jaune colle à la coquille et se rompt souvent. Le début d’une culture ex ovo au moment d’environ 60 h d’incubation des œufs assure le taux de survie élevé des embryons, car ils sont déjà assez grands pour survivre à la manipulation. Aux stades ultérieurs du développ...

Le modèle de membrane chorio-allantoïdienne (CAM) de poulet est bien connu et largement utilisé dans divers domaines de recherche. C’est un organe extraembryonnaire richement vascularisé qui assure les échanges gazeux et le transport des minéraux1. Grâce à la transparence et à l’accessibilité de cette membrane, les vaisseaux sanguins individuels et leurs changements structurels peuvent être observés en temps réel2. Malgré les avantages, la MCP des poussins présente également certaines limites (p. ex., des installations d’élevage plus grandes, la production d’œufs et la consommation d’aliments) qui pourraient être évitées en utilisant d’autres espèces aviaires. Dans ce protocole, un modèle alternatif ex ovo CAM utilisant un embryon de caille japonaise (Coturnix japonica) est décrit. En raison de sa petite taille, il permet l’utilisation d’un nombre beaucoup plus important d’individus expérimentaux que le poulet CAM. De plus, le développement embryonnaire plus court de 16 jours des embryons de caille est un autre avantage. Les premiers vaisseaux plus gros sur la CAM de caille apparaissent le jour embryonnaire (ED) 7. Cela peut être directement comparé au développement de l’embryon de poussin (stades 4-35); Cependant, les stades ultérieurs de développement ne sont plus comparables et nécessitent moins de temps pour l’embryon de caille3. Il est intéressant de noter l’apparition régulière de ramifications microvasculaires similaires à celles des CAM 4,5,6 chez le poulet. La maturation sexuelle rapide, la production élevée d’œufs et l’élevage à faible coût sont d’autres exemples qui favorisent l’utilisation de ce modèle expérimental7.
Un modèle de MCP aviaire est souvent utilisé dans les études de thérapie photodynamique (PDT)8. La PDT est utilisée pour traiter plusieurs formes de cancer (petites tumeurs localisées) et d’autres maladies non oncologiques. Son principe réside dans l’administration d’un médicament fluorescent, un photosensibilisant (PS), au tissu endommagé et son activation avec la lumière de la longueur d’onde appropriée. Un PS potentiel utilisé dans la recherche est l’hypéricine, isolée à l’origine de la plante médicinale millepertuis (Hypericum perforatum)9. Les forts effets photosensibilisants de ce composé sont basés sur ses propriétés photochimiques et photophysiques. Ceux-ci sont caractérisés par de multiples pics d’excitation de fluorescence dans la gamme 400-600 nm, qui induisent l’émission de fluorescence à environ 600 nm. Les maxima d’absorption de l’hypéricine dans la bande spectrale sont dans la gamme 540-590 nm, et les maxima de fluorescence sont dans la gamme 590-640 nm9. Pour obtenir ces effets photosensibilisants, l’hypéricine est excitée par la lumière laser à une longueur d’onde de 405 nm après administration locale10. En présence de lumière, l’hypéricine peut présenter des effets virucides, antiprolifératifs et cytotoxiques11, alors qu’il n’y a pas de toxicité systémique, et elle est rapidement libérée de l’organisme. L’hypéricine est une substance lipophile qui forme des agrégats insolubles dans l’eau et non fluorescents, c’est pourquoi plusieurs types de nanotransporteurs, tels que les nanoparticules polymères 12,13 ou les lipoprotéines de haute et basse densité (HDL, LDL)14,15, sont utilisés pour aider à sa livraison et à sa pénétration dans les cellules. Étant donné que la MCA est un système naturellement immunodéficient, les cellules tumorales peuvent être implantées directement sur la surface de la membrane. Le modèle est également bien adapté pour enregistrer l’étendue des lésions vasculaires induites par la PDT selon un score définide 16,17. Une lumière de plus faible intensité par rapport à la PDT peut être utilisée pour le diagnostic photodynamique (TED). La surveillance du tissu sous excitation violette La lumière LED conduit également à la photoactivation des photosensibilisateurs18,19,20 qui entraîne une émission de lumière fluorescente, mais elle ne fournit pas assez d’énergie pour démarrer une réaction PDT et endommager les cellules. Il en fait un bon outil pour la visualisation et le diagnostic des tumeurs ou la surveillance de la pharmacocinétique des PSs14,15 utilisés.
Cet article décrit la préparation du test CAM ex ovo de caille avec des taux de survie supérieurs à 80%. Cette culture ex ovo a été appliquée avec succès dans un grand nombre d’expériences.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>6-Well Cell Culture Plate</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>83.392</td>
			<td>Transparent polystyrene, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 Incubator ESCO CCL-0508</td>
			<td>ESCO, Singapore</td>
			<td>CCL-050B-8</td>
			<td>CO2 cell culture incubator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cryocut Leica CM 1800</td>
			<td>Reichert-Jung, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>digital camera Canon EOS 6D II</td>
			<td>Canon, Japan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>diode laser 405 nm</td>
			<td>Ocean Optics, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>67-68-5</td>
			<td>dimethyl sulfoxid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eosin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>15086-94-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ethanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fine brush size 2</td>
			<td>Faber-Castell</td>
			<td>281802</td>
			<td>brush for CAM separation and manipulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glutaraldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>111-30-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hematoxylin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>517-28-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hypericin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>84082-80-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>incubator Bios Midi</td>
			<td>Bios Sedl<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/63422/63422eq01.jpg" style="margin: auto;" />any, Czech Republic</td>
			<td></td>
			<td>Forced draught incubator for initial incubation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>incubator Memmert IF160</td>
			<td>Memmert, Germany</td>
			<td></td>
			<td>Forced air circulation incubator for CAM incubation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kaiser slimlite plano, LED light box</td>
			<td>Kaiser, Germany</td>
			<td>2453</td>
			<td>Transilluminator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LED light 405 nm</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>custom made circular LED light</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>macro lens Canon MP- E 65 mm f/2.8</td>
			<td>Canon, Japan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microscope Kapa 2000</td>
			<td>Kvant, Slovakia</td>
			<td></td>
			<td>optical microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microtome Auxilab 508</td>
			<td>Auxilab, Spain</td>
			<td></td>
			<td>manual rotary microtome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>30525-89-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraplast Plus</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3683</td>
			<td>parafin medium for tissue embedding</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4417</td>
			<td>Phosphate saline buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>scissors Castroviejo</td>
			<td>Orimed</td>
			<td>&#160;OR66-108</td>
			<td>micro scissors for CAM separation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>software ImageJ 1.53</td>
			<td>public domain</td>
			<td></td>
			<td>image processing and analysis program</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stock solution HDL</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>437641-10MG</td>
			<td>high density lipoproteins</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stock solution LDL</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>437644-10MG</td>
			<td>low density lipoproteins</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek O.C.T. Compound</td>
			<td>Sakura Finetek</td>
			<td>4583</td>
			<td>Optimal Cutting Temperature Compound 118 mL squeeze bottles</td>
		</tr>
	</tbody>
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quail chorioallantoic membrane - a tool for photodynamic diagnosis and therapy

La membrane chorio-allantoïdienne (CAM) d’un embryon aviaire est une fine membrane extraembryonnaire qui fonctionne comme un organe respiratoire primaire. Ses propriétés en font un excellent modèle expérimental in vivo pour étudier l’angiogenèse, la croissance tumorale, les systèmes d’administration de médicaments ou le diagnostic photodynamique (PDD) et la thérapie photodynamique (PDT). Dans le même temps, ce modèle répond à la nécessité de remplacer les animaux de laboratoire par une alternative appropriée. L’embryon cultivé ex ovo permet une application, un accès, une surveillance et une documentation faciles de la substance. Le plus fréquemment utilisé est le poussin CAM; cependant, cet article décrit les avantages de la FAO de caille japonaise en tant que modèle à faible coût et à haut débit. Un autre avantage est le développement embryonnaire plus court, qui permet un renouvellement expérimental plus élevé. La pertinence de la MCP de caille pour le TDP et la TPD du cancer et des infections microbiennes est explorée ici. À titre d’exemple, l’utilisation de l’hypericine photosensibilisatrice en combinaison avec des lipoprotéines ou des nanoparticules comme système d’administration est décrite. Le score de dommages à partir d’images en lumière blanche et de changements dans l’intensité de fluorescence du tissu CAM sous lumière violette (405 nm) a été déterminé, ainsi que l’analyse des coupes histologiques. La CAM de caille a clairement montré l’effet de la PDT sur le système vasculaire et les tissus. De plus, des changements tels qu’une hémorragie capillaire, une thrombose, une lyse de petits vaisseaux et un saignement de vaisseaux plus gros ont pu être observés. La MCP de caille japonaise est un modèle in vivo prometteur pour le diagnostic photodynamique et la recherche thérapeutique, avec des applications dans les études de l’angiogenèse tumorale, ainsi que dans la thérapie antivasculaire et antimicrobienne.

La localisation de la tumeur sur la surface CAM est difficile en lumière blanche. Le photosensibilisateur (ici, l’hypéricine) utilisé dans le PDD devrait être absorbé sélectivement par la tumeur et aide à visualiser la tumeur. L’ajout d’hypéricine et l’utilisation de la lumière fluorescente (par exemple, 405 nm) ont très bien montré la position de la tumeur (carcinome épidermoïde TE1) (Figure 6A). L’analyse histologique a montré que les cellules tumorales vitales enva...

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Quail Chorioallantoic Membrane - A Tool for Photodynamic Diagnosis and Therapy

La membrane chorio-allantoïdienne (CAM) de l’embryon aviaire est un outil très utile et applicable pour divers domaines de recherche. Un modèle ex ovo spécial de CAM de caille japonaise convient à l’investigation de traitement photodynamique.

Membrane chorio-allantoïdienne de caille - Un outil pour le diagnostic photodynamique et la thérapie

The chorioallantoic membrane (CAM) of an avian embryo is a thin, extraembryonic membrane that functions as a primary respiratory organ. Its properties ...

Nous allons vous montrer comment préparer la culture ex ovo de caille japonaise et comment utiliser la membrane chorio-allantoïdienne ou CAM en bref pour le diagnostic photodynamique et le traitement du cancer ou des infections microbiennes. Les avantages de cette méthode sont une croissance rapide du développement, une petite taille, un bon accès aux tissus et une manipulation facile. De plus, il respecte les principes de la règle des 3R pour la conduite de la recherche animale.En raison de sa similitude structurelle avec les muqueuses telles que la vessie, les poumons ou le placenta, il convient aux tests in vivo de médicaments potentiels, aux tests de toxicité ou aux études de transplantation. La procédure sera présentée par Barbora Kundekova et Majlinda Meta, doctorantes de mon laboratoire. Pour commencer, utilisez des œufs de caille fécondés, frais ou entreposés à une température de 10 à 15 degrés Celsius pendant un maximum de 4 à 5 jours avant le début de l’incubation.N’utilisez que des œufs propres et intacts, puis incuber les œufs dans un incubateur à tirage forcé à 50 à 60% d’humidité et 37,5 degrés Celsius pendant environ 54 heures placé horizontalement avec les rotations d’œufs désactivées. Désinfectez la surface de l’œuf avec de l’éthanol à 70 % sans le faire pivoter. Ensuite, dans une armoire à flux laminaire stérile tout en portant des gants, ouvrez la coquille d’œuf à l’aide de petits ciseaux chirurgicaux stériles et transférez le contenu dans une plaque de culture à 6 puits.Après chaque œuf, désinfectez les ciseaux avec de l’éthanol à 70%. Ajoutez environ 5 millilitres d’eau stérile dans les espaces de la plaque à 6 puits, car l’humidité est essentielle pour empêcher le CAM de se dessécher. Ensuite, aspirez les embryons mal inclinés ou les œufs non fécondés avec un aspirateur sous vide, puis placez les embryons dans un incubateur jusqu’à d’autres expériences tout en maintenant une température de 37 degrés Celsius dans 80 à 90% d’humidité.Lorsque la MCP est suffisamment développée, généralement à partir du jour embryonnaire 7, placez un anneau en silicone stérilisé sur la surface du CAM le long des petits capillaires tout en évitant les principaux vaisseaux sanguins. Dans des conditions stériles, appliquez un volume approprié de solution d’hypéricine de 30 microlitres sur l’anneau de silicone et conservez les embryons dans un incubateur à 37 degrés Celsius dans 80 à 90% d’humidité. Pour effectuer un diagnostic photodynamique, illuminez le CAM à l’aide d’une lumière d’excitation violette et enregistrez la fluorescence de l’hypéricine et des tissus CAM et des cellules tumorales avec un appareil photo numérique à différents intervalles de temps après l’administration d’hypéricine.Si la recherche nécessite une image de la MCP en lumière blanche, notez la MCA avant l’administration d’hypéricine et à la fin de l’expérience peu avant la fixation des tissus, car la lumière déclenche la photoactivation de l’hypéricine. Pour effectuer la thérapie photodynamique après l’application d’hypéricine, placez le CAM sous la fibre optique pour que le faisceau laser couvre toute la zone de l’anneau en silicone. Après avoir effectué une irradiation in vivo, dans ce cas particulier avec une lumière laser de 405 nanomètres à un taux de fluence de 285 milliwatts par centimètre carré, enregistrer la FAO en utilisant la lumière blanche et / ou la lumière fluorescente avant et après le traitement photodynamique.Fixez le tissu CAM dans une plaque de culture avec 4% de paraformaldéhyde dans du PBS pendant un minimum de 2 heures et une nuit maximum, puis retirez le paraformaldéhyde et découpez soigneusement du CAM une partie du tissu dans l’anneau de silicone. Toutes ces étapes doivent être effectuées dans une hotte. Laver la partie coupée du tissu CAM dans l’eau pendant 10 minutes, puis déshydrater dans la série ascendante d’alcool en plaçant le tissu CAM dans de l’éthanol à 70% pendant 3 minutes, une solution d’éosine pendant 2 minutes, de la throcine à 96% d’éthanol pendant 5 minutes, 100% d’éthanol pendant 5 minutes et deux fois dans du xylène pendant 10 minutes dans une nouvelle boîte de Pétri.Ensuite, transférer les échantillons le plus rapidement possible dans la paraffine dissoute dans des boîtes de Petri à l’aide d’une spatule ou d’une brosse fine. Après 24 heures, placez le tissu dans un moule histologique, remplissez-le d’un milieu d’enrobage à la paraffine et laissez-le se solidifier au réfrigérateur, puis coupez le CAM solidifié du milieu d’enrobage, retournez-le dans le plateau de 90 degrés, remplissez-le à nouveau avec le milieu d’enrobage et laissez-le se solidifier. Préparer des coupes de 5 à 10 micromètres sur un microtome pour l’analyse histopathologique afin de déterminer les dommages induits par la PDT.Pour préparer les sections CAM congelées pour l’histologie, montez soigneusement la FAO fixe native ou paraformaldéhyde à 4% sur la lame de verre, remplissez le moule d’encastrement à moitié avec de l’OCT et congelez dans de l’azote liquide ou un mélange de glace sèche et d’éthanol. Après la congélation, inclinez délicatement et faites glisser le CAM de la lame en verre sur le dessus du milieu OCT congelé. Placer à nouveau dans le moule, le couvrir de milieu OCT et congeler comme décrit précédemment.Pour l’analyse du système vasculaire CAM, des échantillons entiers de CAM sont nécessaires. Dans l’armoire à flux laminaire, faire repleuvoir CAM avec une solution de fixation préchauffée d’aldéhyde paraforme à 4% et de glutaraldéhyde à 2% dans du PBS, puis retirer la solution de fixation après 48 heures. Ensuite, séparez soigneusement le CAM de l’embryon avec des micro-ciseaux et une brosse fine et lavez-le dans du PBS, puis montez le CAM lavé sur une lame de verre et laissez-le sécher lentement.Ensuite, photographiez la diapositive à l’aide d’un appareil photo numérique dans un transilluminateur comme source de lumière blanche homogène. L’emplacement de la tumeur sur la surface CAM a été visualisé sous lumière blanche et lumière fluorescente lors de l’ajout d’hypéricine. L’analyse histologique a montré des structures concentriques de cellules malpighiennes anormales envahissant les tissus sains accompagnées d’œdème et d’épaississement de la membrane.Après traitement par PDT, une nette différence dans la densité des vaisseaux à l’intérieur de l’anneau et de la zone environnante a été observée. Le rayonnement laser sans la présence de photosensibilisateur n’a causé aucun dommage comparable au témoin sans aucun traitement. Après 3 heures d’incubation avec l’hypéricine, l’irradiation laser a entraîné une fluorescence causée par la monomérisation de l’hypéricine agrégée avec des dommages importants au système vasculaire.L’analyse histologique a révélé que la MCP témoin non traitée avait une épaisseur relativement uniforme. Cependant, le traitement PDT a rendu la MCP plus mince et plus fragile. Nous venons de démontrer comment préparer le test CAM ex ovo de caille et comment l’utiliser.Tout en maintenant les lignes directrices, cette méthodologie est facile à maîtriser et peut s’avérer rapide.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

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Photodynamic therapy (PDT) is a non-invasive and non-surgical method representing an attractive alternative choice for lung cancer treatment. ...

Recherche

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