Name: quail chorioallantoic membrane - a tool for photodynamic diagnosis and therapy
Uploaded: 2022-04-28T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quail Chorioallantoic Membrane - A Tool for Photodynamic Diagnosis and Therapy at JoVE.com

이 작업은 VEGA 2/0042/21 및 APVV 20-0129의 지원을 받았습니다. V. Huntošová의 기여는 프로젝트 구현의 결과입니다 : 의학의 현대 학제 간 연구를위한 개방형 과학 커뮤니티 (약어 : OPENMED), ITMS2014 + : 313011V455 ERDF가 자금을 지원하는 운영 프로그램 통합 인프라가 지원합니다.

연구는 기관 지침에 따라 수행되었습니다. 모든 장비와 시약은 70% 에탄올 또는 자외선으로 오토클레이브 또는 멸균해야 합니다.
1. 계란 배양
<ol><li>부화를 시작하기 전에 수정 된 메추라기 알을 10-15 ° C에서 최대 4-5 일 동안 보관하십시오. 깨끗하고 손상되지 않은 계란 만 사용하십시오.</li>
	<li>강제 초안 인큐베이터에서 ~ 53-54 시간 동안 알을 품습니다. 계란 회...

<ol>
	<li>Nowak-Sliwinska, P., van Beijnum, J. R., van Berkel, M., vanden Bergh, H., Grif&#64257;oen, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+regrowth+following+photodynamic+therapy+in+the+chicken+embryo+chorioallantoic+membrane.">Vascular regrowth following photodynamic therapy in the chicken embryo chorioallantoic membrane.</a> Angiogenesis. 13 (4), 281-292 (2010).</li><li>van Leengoed, H. L. L. M., vander Veen, N., Versteeg, A. A. C., Ouellet, R., van Lier, J. E., Star, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-vivo+photodynamic+effects+of+phthalocyanines+in+a+skin-fold+observation+chamber+model:+role+of+central+metal+ion+and+degree+of+sulfonation.">In-vivo photodynamic effects of phthalocyanines in a skin-fold observation chamber model: role of central metal ion and degree of sulfonation.</a> Photochemistry Photobiology. 58 (4), 575-580 (1993).</li><li>Ainsworth, S. J., Stanley, R. L., Evans, D. J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+stages+of+the+Japanese+quail.">Developmental stages of the Japanese quail.</a> Journal of Anatomy. 216 (1), 3 (2010).</li><li>De Fouw, D. O., Rizzo, V. J., Steinfeld, R., Feinberg, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+of+the+microcirculation+in+the+chick+chorioallantoic+membrane+during+normal+angiogenesis.">Mapping of the microcirculation in the chick chorioallantoic membrane during normal angiogenesis.</a> Microvascular Research. 38 (2), 136-147 (1989).</li><li>Sandau, K., Kurz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modelling+of+vascular+growth+processes:+a+stochastic+biophysical+approach+to+embryonic+angiogenesis.">Modelling of vascular growth processes: a stochastic biophysical approach to embryonic angiogenesis.</a> Journal of Microscopy. 175 (3), 205-213 (1994).</li><li>Kurz, H., Ambrosy, S., Wilting, J., Marm&#233;, D., Christ, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proliferation+pattern+of+capillary+endothelial+cells+in+chorioallantoic+membrane+development+indicates+local+growth+control,+which+is+counteracted+by+vascular+endothelial+growth+factor+application.">Proliferation pattern of capillary endothelial cells in chorioallantoic membrane development indicates local growth control, which is counteracted by vascular endothelial growth factor application.</a> Developmental Dynamics. 203 (2), 174-186 (1995).</li><li>Huss, D., Poynter, G., Lansford, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Japanese+quail+(Coturnix+japonica)+as+laboratory+animal+model.">Japanese quail (Coturnix japonica) as laboratory animal model.</a> Lab Animal. 37 (11), 513-519 (2008).</li><li>Gottfried, V., Lindenbaum, E. S., Kimel, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chick+chorioallantoic+membrane+(CAM)+as+an+in-vivo+model+for+photodynamic+therapy.">The chick chorioallantoic membrane (CAM) as an in-vivo model for photodynamic therapy.</a> Journal of Photochemistry and Photobiology, B: Biology. 12 (2), 204-207 (1992).</li><li>Mi&#353;kovsk&#253;, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypericin+-+a+new+antiviral+and+antitumor+photosensitizer:+mechanism+of+action+and+interaction+with+biological+molecules.">Hypericin - a new antiviral and antitumor photosensitizer: mechanism of action and interaction with biological molecules.</a> Current Drug Targets. 3 (1), 55-84 (2002).</li><li>&#268;avarga, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photodynamic+effect+of+hypericin+after+topical+application+in+the+ex+ovo+quail+chorioallantoic+membrane+model.">Photodynamic effect of hypericin after topical application in the ex ovo quail chorioallantoic membrane model.</a> Planta Medica. 80 (1), 56-62 (2014).</li><li>Martinez-Poveda, B., Quesada, A. R., Medina, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypericin+in+the+dark+inhibits+key+steps+of+angiogenesis+in+vitro.">Hypericin in the dark inhibits key steps of angiogenesis in vitro.</a> Europan Journal of Pharmacology. 516 (2), 97-103 (2005).</li><li>Datta, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unravelling+the+excellent+chemical+stability+and+bioavailability+of+solvent+responsive+curcumin-loaded+2-ethyl-2-oxazoline-grad-2-(4-dodecyloxyphenyl)-+2-oxazoline+copolymer+nanoparticles+for+drug+delivery.">Unravelling the excellent chemical stability and bioavailability of solvent responsive curcumin-loaded 2-ethyl-2-oxazoline-grad-2-(4-dodecyloxyphenyl)- 2-oxazoline copolymer nanoparticles for drug delivery.</a> Biomacromolecules. 19 (7), 2459-2471 (2018).</li><li>Hunto&#353;ov&#225;, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alkyl+Chain+length+in+poly(2-oxazoline)-based+amphiphilic+gradient+copolymers+regulates+the+delivery+of+hydrophobic+molecules:+a+case+of+the+biodistribution+and+the+photodynamic+activity+of+the+photosensitizer+hypericin.">Alkyl Chain length in poly(2-oxazoline)-based amphiphilic gradient copolymers regulates the delivery of hydrophobic molecules: a case of the biodistribution and the photodynamic activity of the photosensitizer hypericin.</a> Biomacromolecules. 22 (10), 4199-4216 (2021).</li><li>Bur&#237;kov&#225;, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypericin+fluorescence+kinetics+in+the+presence+of+low+density+lipoproteins:+study+on+quail+CAM+assay+for+topical+delivery.">Hypericin fluorescence kinetics in the presence of low density lipoproteins: study on quail CAM assay for topical delivery.</a> General Physiology and Biophysic. 35 (4), 459-468 (2016).</li><li>Lenkavska, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Benefits+of+hypericin+transport+and+delivery+by+low-+and+high-density+lipoproteins+to+cancer+cells:+From+in+vitro+to+ex+ovo.">Benefits of hypericin transport and delivery by low- and high-density lipoproteins to cancer cells: From in vitro to ex ovo.</a> Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. 25, 214-224 (2019).</li><li>R&#252;ck, A., B&#246;hmler, A., Steiner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PDT+with+TOOKAD+studied+in+the+chorioallantoic+membrane+of+fertilized+eggs.">PDT with TOOKAD studied in the chorioallantoic membrane of fertilized eggs.</a> Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. 2 (1), 79-90 (2005).</li><li>Gottfried, V., Davidi, R., Averbuj, C., Kimel, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+damage+to+chorioallantoic+membrane+blood+vessels+by+porphycene-induced+photodynamic+therapy.">In vivo damage to chorioallantoic membrane blood vessels by porphycene-induced photodynamic therapy.</a> Journal of Photochemistry and Photobiology, B: Biology. 30 (2-3), 115-121 (1995).</li><li>Buzz&#225;, H. H., Silva, L. V., Moriyama, L. T., Bagnato, V. S., Kurachi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+vascular+effect+of+Photodynamic+Therapy+in+chorioallantoic+membrane+using+different+photosensitizers.">Evaluation of vascular effect of Photodynamic Therapy in chorioallantoic membrane using different photosensitizers.</a> Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology. 138, 1-7 (2014).</li><li>Dougherty, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photodynamic+therapy.">Photodynamic therapy.</a> Journal of the National Cancer Institute. 90, 889-905 (1998).</li><li>Xiang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+optoacoustic+monitoring+of+vascular+damage+during+photodynamic+therapy+treatment+of+tumor.">Real-time optoacoustic monitoring of vascular damage during photodynamic therapy treatment of tumor.</a> Journal of Biomedical Optics. 12 (1), 01400-01408 (2007).</li><li>Foty, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+hanging+drop+cell+culture+protocol+for+generation+of+3D+spheroids.">A simple hanging drop cell culture protocol for generation of 3D spheroids.</a> Journal of Visualized Experiments. (51), 2720 (2011).</li><li>Abramoff, M. D., Magelhaes, P. J., Ram, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Image+Processing+with+ImageJ.">Image Processing with ImageJ.</a> Biophotonics International. 11 (7), 36-42 (2004).</li><li>Chomczynski, P., Sacchi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-step+method+of+RNA+isolation+by+acid+guanidium+thiocyanate-phenol-chloroform+extraction.">Single-step method of RNA isolation by acid guanidium thiocyanate-phenol-chloroform extraction.</a> Analytical Biochemistry. 162 (1), 156-159 (1987).</li><li>M&#225;&#269;ajov&#225;, M., &#268;avarga, I., S&#253;korov&#225;, M., Valachovi&#269;, M., Novotn&#225;, V., Bil&#269;&#237;k, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+angiogenesis+by+topical+application+of+leptin+and+high+and+low+molecular+heparin+using+the+Japanese+quail+chorioallantoic+membrane+model.">Modulation of angiogenesis by topical application of leptin and high and low molecular heparin using the Japanese quail chorioallantoic membrane model.</a> Saudi Journal of Biological Sciences. 27 (6), 1488-1493 (2020).</li><li>Mangir, N., Dikici, S., Claeyssens, F., MacNeil, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+Ex+Ovo+chick+chorioallantoic+membrane+(CAM)+assay+to+evaluate+the+biocompatibility+and+angiogenic+response+to+biomaterials.">Using Ex Ovo chick chorioallantoic membrane (CAM) assay to evaluate the biocompatibility and angiogenic response to biomaterials.</a> ACS Biomaterials Science Engineering. 5 (7), 3190-3200 (2019).</li><li>Marshall, K. M., Kanczler, J. M., Oreffo, R. O. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolving+applications+of+the+egg:+chorioallantoic+membrane+assay+and+ex+vivo+organotypic+culture+of+materials+for+bone+tissue+engineering.">Evolving applications of the egg: chorioallantoic membrane assay and ex vivo organotypic culture of materials for bone tissue engineering.</a> Journal of Tissue Engineering. 11, 1-25 (2020).</li><li>Merlos Rodrigo, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extending+the+applicability+of+in+ovo+and+ex+ovo+chicken+chorioallantoic+membrane+assays+to+study+cytostatic+activity+in+neuroblastoma+cells.">Extending the applicability of in ovo and ex ovo chicken chorioallantoic membrane assays to study cytostatic activity in neuroblastoma cells.</a> Frontiers in Oncology. 11, 1-10 (2021).</li><li>Meta, M., Kundekov&#225;, B., Bil&#269;&#237;k, B., M&#225;&#269;ajov&#225;, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+silicone+ring+application+on+CAM+vasculature+in+Japanese+Quail+(Coturnix+japonica).">The effect of silicone ring application on CAM vasculature in Japanese Quail (Coturnix japonica).</a> Proceedings of the Student Scientific Conference Faculty of Natural Sciences of Comenius University, Bratislava, Slovakia. , 385-390 (2019).</li><li>Kohli, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-screening+the+intrinsic+angiogenic+capacity+of+biomaterials+in+an+optimised+ex+ovo+chorioallantoic+membrane+model.">Pre-screening the intrinsic angiogenic capacity of biomaterials in an optimised ex ovo chorioallantoic membrane model.</a> Journal of Tissue Engineering. 11, 1-15 (2020).</li><li>Kundekov&#225;, B., M&#225;&#269;ajov&#225;, M., Meta, M., &#268;avarga, I., Bil&#269;&#237;k, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chorioallantoic+membrane+models+of+various+avian+species+differences+and+applications.">Chorioallantoic membrane models of various avian species differences and applications.</a> Biology-Basel. 10 (4), 301 (2021).</li><li>Parsons-Wingerter, P., Elliott, K. E., Clark, J. I., Farr, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblast+growth+factor-2+selectively+stimulates+angiogenesis+of+small+vessels+in+arterial+tree.">Fibroblast growth factor-2 selectively stimulates angiogenesis of small vessels in arterial tree.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis and Vascular Biology. 20 (5), 1250-1256 (2000).</li><li>Buzz&#225;, H. H., Zangirolami, A. C., Davis, A., G&#243;mez-Garc&#237;a, P. B., Kurachi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+analysis+of+a+tumor+model+in+the+chorioallantoic+membrane+used+for+the+evaluation+of+different+photosensitizers+for+photodynamic+therapy.">Fluorescence analysis of a tumor model in the chorioallantoic membrane used for the evaluation of different photosensitizers for photodynamic therapy.</a> Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. 19, 78-83 (2017).</li></ol>

성공적인 exovo 재배를 위해서는 위의 프로토콜을 따르는 것이 중요합니다. 또한, 계란이 충분히 조심스럽게 열리지 않거나 재배 중에 습도가 충분하지 않으면 노른자 자루가 껍질에 달라 붙어 종종 파열됩니다. 약 60 시간의 난자 배양시 ex ovo 재배의 시작은 이미 취급에서 생존 할 수있을만큼 충분히 크기 때문에 배아의 높은 생존율을 보장합니다. 후기 발달 단계에서 CAM은 더 얇아지?...

닭 융모막 막 (CAM) 모델은 잘 알려져 있으며 다양한 연구 분야에서 널리 사용됩니다. 그것은 가스 교환 및 광물 수송을 제공하는 풍부한 혈관 화 된 배아 외 기관입니다1. 이 막의 투명성과 접근성으로 인해 개별 혈관과 그 구조적 변화를 실시간으로 관찰 할 수 있습니다2. 장점에도 불구하고 병아리 CAM에는 다른 조류 종을 사용하여 피할 수 있는 몇 가지 제한 사항(예: 더 큰 사육 시설, 계란 생산 및 사료 소비)이 있습니다. 이 프로토콜에서는 일본 메추라기 (Coturnix japonica) 배아를 사용하는 대안적인 ex ovo CAM 모델이 설명됩니다. 크기가 작기 때문에 닭 CAM보다 훨씬 많은 수의 실험 개체를 사용할 수 있습니다. 또한, 메추라기 배아의 짧은 16 일 배아 발달은 또 다른 이점이다. 메추라기 CAM의 첫 번째 큰 혈관은 배아 일 (ED) 7에 나타납니다. 이것은 병아리 배아 발달 (4-35 단계)과 직접 비교할 수 있습니다. 그러나 발달의 후기 단계는 더 이상 비교할 수 없으며 메추라기 배아3에 더 적은 시간을 필요로합니다. 흥미로운 것은 닭 CAM 4,5,6과 유사한 미세 혈관 분기의 규칙적인 발생입니다. 빠른 성적 성숙, 높은 계란 생산 및 저비용 번식은이 실험 모델7의 사용을 선호하는 다른 예입니다.
조류 CAM 모델은 종종 광 역학 치료 (PDT) 연구에 사용됩니다8. PDT는 여러 형태의 암 (작은 국소 종양) 및 기타 비 종양학 질환을 치료하는 데 사용됩니다. 그 원리는 형광 약물인 감광제(PS)를 손상된 조직에 전달하고 적절한 파장의 빛으로 활성화하는 것입니다. 연구에 사용 된 한 가지 전향 적 PS는 원래 약용 식물 세인트 존스 워트 (Hypericum perforatum)9에서 분리 된 하이퍼 리신입니다. 이 화합물의 강력한 감광성 효과는 광화학적 및 광물리적 특성을 기반으로 합니다. 이들은 약 600 nm에서 형광의 방출을 유도하는 400-600 nm 범위의 다중 형광 여기 피크를 특징으로합니다. 스펙트럼 대역 내에서 하이퍼리신의 흡수 최대값은 540-590nm 범위에 있고, 형광 최대값은 590-640nm범위입니다9. 이러한 감광성 효과를 달성하기 위해, hypericin은 국소 투여 후 405 nm의 파장에서 레이저 광에 의해 여기된다10. 빛의 존재 하에서, 하이퍼 리신은 바이러스 성, 항 증식 성 및 세포 독성 효과11를 나타낼 수 있지만, 전신 독성은 없으며, 유기체로부터 빠르게 방출된다. Hypericin은 수 불용성, 비 형광 응집체를 형성하는 친 유성 물질이므로 고분자 나노 입자 12,13 또는 고밀도 및 저밀도 지단백질 (HDL, LDL)14,15와 같은 여러 유형의 나노 운반체가 세포로의 전달 및 침투를 돕는 데 사용됩니다. CAM은 자연적으로 면역 결핍 시스템이기 때문에 종양 세포를 막 표면에 직접 이식 할 수 있습니다. 이 모델은 또한 정의 된 점수16,17에 따라 PDT 유발 혈관 손상의 정도를 기록하는 데 매우 적합합니다. PDT에 비해 낮은 강도의 빛은 광역학 진단(PDD)에 사용할 수 있습니다. 보라색 여기 LED 광 하에서 조직을 모니터링하는 것은 또한 형광 광의 방출을 초래하는 광민감제18,19,20의 광활성화로 이어지지만, PDT 반응을 시작하고 세포를 손상시키기에 충분한 에너지를 제공하지 않습니다. 종양 시각화 및 진단 또는 사용 된 PS14,15의 약물 동력학 모니터링에 좋은 도구입니다.
이 기사에서는 생존율이 80 % 이상인 메추라기 ex ovo CAM 분석의 준비에 대해 설명합니다. 이 ex ovo 배양은 많은 실험에서 성공적으로 적용되었습니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>6-Well Cell Culture Plate</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>83.392</td>
			<td>Transparent polystyrene, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 Incubator ESCO CCL-0508</td>
			<td>ESCO, Singapore</td>
			<td>CCL-050B-8</td>
			<td>CO2 cell culture incubator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cryocut Leica CM 1800</td>
			<td>Reichert-Jung, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>digital camera Canon EOS 6D II</td>
			<td>Canon, Japan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>diode laser 405 nm</td>
			<td>Ocean Optics, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>67-68-5</td>
			<td>dimethyl sulfoxid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eosin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>15086-94-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ethanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fine brush size 2</td>
			<td>Faber-Castell</td>
			<td>281802</td>
			<td>brush for CAM separation and manipulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glutaraldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>111-30-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hematoxylin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>517-28-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hypericin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>84082-80-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>incubator Bios Midi</td>
			<td>Bios Sedl<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/63422/63422eq01.jpg" style="margin: auto;" />any, Czech Republic</td>
			<td></td>
			<td>Forced draught incubator for initial incubation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>incubator Memmert IF160</td>
			<td>Memmert, Germany</td>
			<td></td>
			<td>Forced air circulation incubator for CAM incubation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kaiser slimlite plano, LED light box</td>
			<td>Kaiser, Germany</td>
			<td>2453</td>
			<td>Transilluminator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LED light 405 nm</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>custom made circular LED light</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>macro lens Canon MP- E 65 mm f/2.8</td>
			<td>Canon, Japan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microscope Kapa 2000</td>
			<td>Kvant, Slovakia</td>
			<td></td>
			<td>optical microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microtome Auxilab 508</td>
			<td>Auxilab, Spain</td>
			<td></td>
			<td>manual rotary microtome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>30525-89-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraplast Plus</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3683</td>
			<td>parafin medium for tissue embedding</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4417</td>
			<td>Phosphate saline buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>scissors Castroviejo</td>
			<td>Orimed</td>
			<td>&#160;OR66-108</td>
			<td>micro scissors for CAM separation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>software ImageJ 1.53</td>
			<td>public domain</td>
			<td></td>
			<td>image processing and analysis program</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stock solution HDL</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>437641-10MG</td>
			<td>high density lipoproteins</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stock solution LDL</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>437644-10MG</td>
			<td>low density lipoproteins</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek O.C.T. Compound</td>
			<td>Sakura Finetek</td>
			<td>4583</td>
			<td>Optimal Cutting Temperature Compound 118 mL squeeze bottles</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quail chorioallantoic membrane - a tool for photodynamic diagnosis and therapy

조류 배아의 융모막 막 (CAM)은 일차 호흡 기관으로 기능하는 얇은 배아 외 막입니다. 그 특성은 혈관 신생, 종양 성장, 약물 전달 시스템 또는 광 역학 진단 (PDD) 및 광 역학 치료 (PDT)를 연구하기위한 우수한 생체 내 실험 모델입니다. 동시에이 모델은 실험 동물을 적절한 대안으로 대체하기위한 요구 사항을 해결합니다. Ex ovo 배양 배아는 물질 적용, 접근, 모니터링 및 문서화가 용이합니다. 가장 자주 사용되는 것은 병아리 CAM입니다. 그러나이 기사에서는 일본 메추라기 CAM의 장점을 저비용 및 고 처리량 모델로 설명합니다. 또 다른 장점은 더 짧은 배아 발달로 더 높은 실험 회전율을 허용합니다. 암 및 미생물 감염의 PDD 및 PDT에 대한 메추라기 CAM의 적합성은 여기에서 탐구됩니다. 예로서, 전달 시스템으로서 지단백질 또는 나노입자와 조합된 광감작제 하이페리신의 사용이 설명된다. 백색광 이미지의 손상 점수와 보라색 빛(405nm) 하에서 CAM 조직의 형광 강도 변화를 조직학적 절편의 분석과 함께 결정했습니다. 메추라기 CAM은 PDT가 혈관구조와 조직에 미치는 영향을 명확하게 보여주었습니다. 또한 모세 혈관 출혈, 혈전증, 작은 혈관의 용해 및 큰 혈관의 출혈과 같은 변화가 관찰 될 수 있습니다. 일본 메추라기 CAM은 광역학 진단 및 치료 연구를 위한 유망한 생체 내 모델로, 종양 혈관신생, 항혈관 및 항균 요법 연구에 적용됩니다.

CAM 표면에서 종양의 국소화는 백색광에서 어렵습니다. PDD에 사용되는 광감작제(여기서, 하이퍼리신)는 종양에 의해 선택적으로 흡수될 것으로 예상되며, 종양을 시각화하는 것을 돕는다. 하이페리신의 첨가 및 형광광(예를 들어, 405 nm)의 사용은 종양(편평 세포 TE1) 위치를 매우 잘 나타내었다(도 6A). 조직 학적 분석은 중요한 종양 세포가 건강한 조직을 침범하는 것으로 나타...

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Quail Chorioallantoic Membrane - A Tool for Photodynamic Diagnosis and Therapy

조류 배아의 융모막 막 (CAM)은 다양한 연구 분야에 매우 유용하고 적용 가능한 도구입니다. 일본 메추라기 CAM의 특수 ex ovo 모델은 광 역학 치료 조사에 적합합니다.

메추라기 융모막 막 - 광 역학 진단 및 치료를위한 도구

The chorioallantoic membrane (CAM) of an avian embryo is a thin, extraembryonic membrane that functions as a primary respiratory organ. Its properties ...

우리는 당신에게 보여줄 것입니다 일본 메추라기 ex ovo 배양을 준비하는 방법과 암이나 미생물 감염의 광역학 진단 및 치료를 위해 융모막 막 또는 CAM을 약자로 사용하는 방법. 이 방법의 장점은 빠른 발달 성장, 작은 크기, 조직에 대한 좋은 접근 및 쉬운 취급입니다. 또한 동물 연구를 수행하기위한 3R 규칙의 원칙을 존중합니다.방광, 폐 또는 태반과 같은 점막과의 구조적 유사성으로 인해 잠재적 약물의 생체 내 테스트, 독성 테스트 또는 이식 연구에 적합합니다. 절차를 시연하는 것은 Barbora Kundekova와 Majlinda Meta, 내 실험실의 박사 과정 학생이 될 것입니다. 시작하려면 배양 시작 전 최대 4-5 일 동안 섭씨 10도에서 15도까지 신선하거나 보관 된 수정 된 메추라기 알을 사용하십시오.깨끗하고 손상되지 않은 알만 사용한 다음 계란 회전을 끈 상태에서 수평으로 놓인 약 54시간 동안 습도 50-60%, 섭씨 37.5도의 강제 초안 인큐베이터에서 알을 배양합니다. 계란을 회전시키지 않고 70 % 에탄올로 계란 표면을 소독하십시오. 다음으로, 장갑을 끼고 멸균 층류 캐비닛에서 작은 멸균 수술 가위를 사용하여 달걀 껍질을 열고 내용물을 6웰 배양 플레이트로 옮깁니다.각 계란 후에 70 % 에탄올로 가위를 소독하십시오. CAM이 마르는 것을 방지하기 위해 습도가 필수적이므로 6웰 플레이트의 틈새에 약 5ml의 멸균수를 추가합니다. 다음으로, 부적절하게 기울어진 배아 또는 수정되지 않은 난자를 진공 흡인기로 흡인한 다음 80-90%습도에서 섭씨 37도의 온도를 유지하면서 추가 실험이 있을 때까지 배아를 인큐베이터에 넣습니다.CAM이 충분히 발달되면, 보통 배아 7 일째부터 주요 혈관을 피하면서 작은 모세 혈관을 따라 CAM 표면에 멸균 된 실리콘 링을 놓습니다. 무균 조건 하에서, 실리콘 링에 30 마이크로 리터의 적절한 양의 하이퍼 리신 용액을 적용하고 80-90 % 습도에서 섭씨 37 도의 인큐베이터에 배아를 보관하십시오. 광 역학 진단을 수행하려면 보라색 여기 광을 사용하여 CAM을 조명하고 하이퍼 리신 투여 후 다른 시간 간격으로 디지털 카메라로 하이퍼 리신 및 CAM 조직 및 종양 세포의 형광을 기록합니다.연구에 백색광에서 CAM의 이미지가 필요한 경우 빛이 hypericin의 광 활성화를 유발하므로 하이퍼 리신 투여 전과 조직 고정 직전 실험 종료 시 CAM을 기록하십시오. 하이퍼리신 도포 후 광역학 치료를 수행하려면 레이저 빔이 실리콘 링 내의 전체 영역을 덮을 수 있도록 광섬유 아래에 CAM을 놓습니다. 생체 내 조사를 수행한 후, 이 특별한 경우 제곱센티미터당 285밀리와트의 플루언스 속도로 405나노미터 레이저 광을 사용하여 광역학 치료 전후에 백색광 및/또는 형광등을 사용하여 CAM을 기록합니다.CAM 조직을 PBS의 4% 파라포름알데히드로 배양 플레이트에 최소 2시간에서 최대 밤새 고정한 다음 파라포름알데히드를 제거하고 CAM에서 실리콘 링 내 조직의 일부를 조심스럽게 잘라냅니다. 이 모든 단계는 흄 후드에서 수행해야합니다. CAM 조직으로부터 절단된 부분을 물에 10분 동안 세척한 다음, CAM 조직을 70%에탄올에 3분 동안, 에오신 용액에 2분, 트로신 96%에탄올에 5분, 100%에탄올을 5분 동안, 그리고 크실렌에서 10분 동안 2회 넣어 오름차순 알코올 계열에서 탈수시킨다.이어서, 주걱 또는 얇은 브러시를 사용하여 페트리 접시에 용해 된 파라핀으로 가능한 한 빨리 샘플을 옮깁니다. 24시간 후 조직을 조직학적 몰드에 넣고 파라핀 매입 배지로 채우고 냉장고에서 응고시킨 다음 매립 매체에서 응고된 CAM을 절단하고 트레이에서 90도 돌린 다음 매립 배지로 다시 채우고 응고시킵니다. PDT 유발 손상을 결정하기 위해 조직 병리학 적 분석을 위해 마이크로 톰에 5-10 마이크로 미터 섹션을 준비하십시오.조직학을 위해 냉동 CAM 섹션을 준비하려면 유리 슬라이드에 네이티브 또는 4 % 파라 포름 알데히드 고정 CAM을 조심스럽게 장착하고 임베딩 몰드를 OCT로 절반으로 채우고 액체 질소 또는 드라이 아이스와 에탄올의 혼합물에서 동결시킵니다. 동결 후 유리 슬라이드에서 CAM을 조심스럽게 기울여 동결된 OCT 매체의 상단으로 밉니다. 금형에 다시 넣고 OCT 매체로 덮고 앞에서 설명한 대로 얼립니다.CAM 혈관 구조를 분석하려면 전체 CAM 샘플이 필요합니다. 층류 캐비닛에서 4% 파라포름 알데히드와 PBS의 2% 글루타르알데히드의 예열된 고정 용액으로 CAM을 오버플로한 다음 48시간 후에 고정 용액을 제거합니다. 그런 다음 마이크로 가위와 미세한 브러시로 CAM을 배아에서 조심스럽게 분리하고 PBS로 씻은 다음 세척 된 CAM을 유리 슬라이드에 장착하고 천천히 건조시킵니다.그런 다음 트랜스 일루미네이터의 디지털 카메라를 사용하여 균일 한 백색광의 소스로 슬라이드를 촬영합니다. CAM 표면에서 종양의 위치는 하이퍼리신 첨가시 백색광 및 형광광 아래에서 시각화되었습니다. 조직 학적 분석은 부종 및 막 비후를 동반 한 건강한 조직을 침범하는 비정상적인 편평 세포의 동심원 구조를 보여주었습니다.PDT로 처리 한 후, 링 내부와 주변 영역의 혈관 밀도의 명확한 차이가 관찰되었습니다. 광감작제의 존재가 없는 레이저 방사선은 어떠한 치료도 없이 대조군에 필적하는 어떠한 손상도 일으키지 않았다. 하이퍼 리신으로 3 시간 배양 한 후, 레이저 조사는 응집 된 하이퍼 리신의 단량체화로 인한 형광을 초래하여 혈관 구조에 광범위한 손상을 입혔습니다.조직학적 분석 결과, 처리되지 않은 대조군 CAM은 비교적 균일한 두께를 가졌다. 그러나 PDT 치료로 인해 CAM이 더 얇아지고 깨지기 쉬워졌습니다. 방금 메추라기 ex ovo CAM 분석을 준비하는 방법과 사용 방법을 시연했습니다.지침을 유지하면서 이 방법론은 마스터하기 쉽고 빠른 결과를 증명할 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Anticancer Efficacy of Photodynamic Therapy with Lung Cancer-Targeted Nanoparticles

폐암 표적 나노 입자와 광 역학 치료의 항암 효능

Photodynamic therapy (PDT) is a non-invasive and non-surgical method representing an attractive alternative choice for lung cancer treatment. ...

연구

암 연구학

The Colon-26 Carcinoma Tumor-bearing Mouse as a Model for the Study of Cancer Cachexia

콜론-26 암 종양 베어링 암 악액질의 연구를위한 모델로 마우스를

Cancer cachexia is the progressive loss of skeletal muscle mass and adipose tissue, negative nitrogen balance, anorexia, fatigue, inflammation, and ...

Induction and Diagnosis of Tumors in Drosophila Imaginal Disc Epithelia

Induction and Diagnosis of Tumors in Drosophila Imaginal Disc Epithelia

종양의 유도 및 진단<em&gt; Drosophila</em&gt; 상피 디스크 상피 세포

In the early stages of cancer, transformed mutant cells show cytological abnormalities, begin uncontrolled overgrowth, and progressively disrupt tissue ...

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RNAi 게놈 넓은 검사 Oncolytic 바이러스 치료 변조 호스트 요소를 식별 하

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Dried Blood and Serum Spots As A Useful Tool for Sample Storage to Evaluate Cancer Biomarkers

샘플 저장소 암 바이오 마커의 평가를 위한 유용한 툴으로 말린 혈액 및 혈 청 관광 명소

Blood sample quality is crucial to ensure accurate downstream analyses such as real-time PCR or ELISA. Correct storage of biological materials is the ...

A Three-dimensional Thymic Culture System to Generate Murine Induced Pluripotent Stem Cell-derived Tumor Antigen-specific Thymic Emigrants

뮤린 유도 만능 줄기 세포 유래 종양 항원 특이적 흉선 유이주자를 생성하는 3차원 흉선 배양 시스템

The inheritance of pre-rearranged T cell receptors (TCRs) and their epigenetic rejuvenation make induced pluripotent stem cell (iPSC)-derived T cells a ...

A Spheroid Killing Assay by CAR T Cells

자동차 T 세포에 의해 회전 타원 체 살인 분석 결과

Immunotherapy has become a field of growing interest in the fight against cancer otherwise untreatable. Among all immunotherapeutic methods, chimeric ...

Comparing Metastatic Clear Cell Renal Cell Carcinoma Model Established in Mouse Kidney and on Chicken Chorioallantoic Membrane

마우스 신장과 닭 융모알란투암 막에 설립된 전이성 맑은 세포 신장 세포 암종 모델 비교

Metastatic clear cell renal cell carcinoma (ccRCC) is the most common subtype of kidney cancer. Localized ccRCC has a favorable surgical outcome. However, ...

Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers

비보 모델에서 닭 융모난토암 막을 사용하여 부인과 및 비뇨기과 암을 연구

Mouse models are the benchmark tests for in vivo cancer studies. However, cost, time, and ethical considerations have led to calls for alternative in vivo ...