Name: quail chorioallantoic membrane - a tool for photodynamic diagnosis and therapy
Uploaded: 2022-04-28T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quail Chorioallantoic Membrane - A Tool for Photodynamic Diagnosis and Therapy at JoVE.com

Arbeidet ble støttet av VEGA 2/0042/21 og APVV 20-0129. Bidraget fra V. Huntošová er resultatet av prosjektgjennomføringen: Åpent vitenskapelig samfunn for moderne tverrfaglig forskning i medisin (Akronym: OPENMED), ITMS2014+: 313011V455 støttet av Operational Program Integrated Infrastructure, finansiert av ERDF.

Forskningen ble utført i samsvar med institusjonelle retningslinjer. Alt utstyr og reagenser må autoklaveres eller steriliseres med 70% etanol eller UV-lys.
1. Egg inkubasjon
<ol><li>Oppbevar befruktede vaktelegg ved 10-15 °C i maksimalt 4-5 dager før inkubasjonen starter. Bruk bare rene og uskadede egg.</li>
	<li>Inkuber eggene i en tvungen trekkinkubator i ~ 53-54 timer. Legg eggene horisontalt med eggrotasjonen slått av, ved 50% -60% fuktighet og 37,5 ° C inkubasjon...

<ol>
	<li>Nowak-Sliwinska, P., van Beijnum, J. R., van Berkel, M., vanden Bergh, H., Grif&#64257;oen, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+regrowth+following+photodynamic+therapy+in+the+chicken+embryo+chorioallantoic+membrane.">Vascular regrowth following photodynamic therapy in the chicken embryo chorioallantoic membrane.</a> Angiogenesis. 13 (4), 281-292 (2010).</li><li>van Leengoed, H. L. L. M., vander Veen, N., Versteeg, A. A. C., Ouellet, R., van Lier, J. E., Star, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-vivo+photodynamic+effects+of+phthalocyanines+in+a+skin-fold+observation+chamber+model:+role+of+central+metal+ion+and+degree+of+sulfonation.">In-vivo photodynamic effects of phthalocyanines in a skin-fold observation chamber model: role of central metal ion and degree of sulfonation.</a> Photochemistry Photobiology. 58 (4), 575-580 (1993).</li><li>Ainsworth, S. J., Stanley, R. L., Evans, D. J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+stages+of+the+Japanese+quail.">Developmental stages of the Japanese quail.</a> Journal of Anatomy. 216 (1), 3 (2010).</li><li>De Fouw, D. O., Rizzo, V. J., Steinfeld, R., Feinberg, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+of+the+microcirculation+in+the+chick+chorioallantoic+membrane+during+normal+angiogenesis.">Mapping of the microcirculation in the chick chorioallantoic membrane during normal angiogenesis.</a> Microvascular Research. 38 (2), 136-147 (1989).</li><li>Sandau, K., Kurz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modelling+of+vascular+growth+processes:+a+stochastic+biophysical+approach+to+embryonic+angiogenesis.">Modelling of vascular growth processes: a stochastic biophysical approach to embryonic angiogenesis.</a> Journal of Microscopy. 175 (3), 205-213 (1994).</li><li>Kurz, H., Ambrosy, S., Wilting, J., Marm&#233;, D., Christ, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proliferation+pattern+of+capillary+endothelial+cells+in+chorioallantoic+membrane+development+indicates+local+growth+control,+which+is+counteracted+by+vascular+endothelial+growth+factor+application.">Proliferation pattern of capillary endothelial cells in chorioallantoic membrane development indicates local growth control, which is counteracted by vascular endothelial growth factor application.</a> Developmental Dynamics. 203 (2), 174-186 (1995).</li><li>Huss, D., Poynter, G., Lansford, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Japanese+quail+(Coturnix+japonica)+as+laboratory+animal+model.">Japanese quail (Coturnix japonica) as laboratory animal model.</a> Lab Animal. 37 (11), 513-519 (2008).</li><li>Gottfried, V., Lindenbaum, E. S., Kimel, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chick+chorioallantoic+membrane+(CAM)+as+an+in-vivo+model+for+photodynamic+therapy.">The chick chorioallantoic membrane (CAM) as an in-vivo model for photodynamic therapy.</a> Journal of Photochemistry and Photobiology, B: Biology. 12 (2), 204-207 (1992).</li><li>Mi&#353;kovsk&#253;, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypericin+-+a+new+antiviral+and+antitumor+photosensitizer:+mechanism+of+action+and+interaction+with+biological+molecules.">Hypericin - a new antiviral and antitumor photosensitizer: mechanism of action and interaction with biological molecules.</a> Current Drug Targets. 3 (1), 55-84 (2002).</li><li>&#268;avarga, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photodynamic+effect+of+hypericin+after+topical+application+in+the+ex+ovo+quail+chorioallantoic+membrane+model.">Photodynamic effect of hypericin after topical application in the ex ovo quail chorioallantoic membrane model.</a> Planta Medica. 80 (1), 56-62 (2014).</li><li>Martinez-Poveda, B., Quesada, A. R., Medina, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypericin+in+the+dark+inhibits+key+steps+of+angiogenesis+in+vitro.">Hypericin in the dark inhibits key steps of angiogenesis in vitro.</a> Europan Journal of Pharmacology. 516 (2), 97-103 (2005).</li><li>Datta, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unravelling+the+excellent+chemical+stability+and+bioavailability+of+solvent+responsive+curcumin-loaded+2-ethyl-2-oxazoline-grad-2-(4-dodecyloxyphenyl)-+2-oxazoline+copolymer+nanoparticles+for+drug+delivery.">Unravelling the excellent chemical stability and bioavailability of solvent responsive curcumin-loaded 2-ethyl-2-oxazoline-grad-2-(4-dodecyloxyphenyl)- 2-oxazoline copolymer nanoparticles for drug delivery.</a> Biomacromolecules. 19 (7), 2459-2471 (2018).</li><li>Hunto&#353;ov&#225;, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alkyl+Chain+length+in+poly(2-oxazoline)-based+amphiphilic+gradient+copolymers+regulates+the+delivery+of+hydrophobic+molecules:+a+case+of+the+biodistribution+and+the+photodynamic+activity+of+the+photosensitizer+hypericin.">Alkyl Chain length in poly(2-oxazoline)-based amphiphilic gradient copolymers regulates the delivery of hydrophobic molecules: a case of the biodistribution and the photodynamic activity of the photosensitizer hypericin.</a> Biomacromolecules. 22 (10), 4199-4216 (2021).</li><li>Bur&#237;kov&#225;, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypericin+fluorescence+kinetics+in+the+presence+of+low+density+lipoproteins:+study+on+quail+CAM+assay+for+topical+delivery.">Hypericin fluorescence kinetics in the presence of low density lipoproteins: study on quail CAM assay for topical delivery.</a> General Physiology and Biophysic. 35 (4), 459-468 (2016).</li><li>Lenkavska, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Benefits+of+hypericin+transport+and+delivery+by+low-+and+high-density+lipoproteins+to+cancer+cells:+From+in+vitro+to+ex+ovo.">Benefits of hypericin transport and delivery by low- and high-density lipoproteins to cancer cells: From in vitro to ex ovo.</a> Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. 25, 214-224 (2019).</li><li>R&#252;ck, A., B&#246;hmler, A., Steiner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PDT+with+TOOKAD+studied+in+the+chorioallantoic+membrane+of+fertilized+eggs.">PDT with TOOKAD studied in the chorioallantoic membrane of fertilized eggs.</a> Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. 2 (1), 79-90 (2005).</li><li>Gottfried, V., Davidi, R., Averbuj, C., Kimel, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+damage+to+chorioallantoic+membrane+blood+vessels+by+porphycene-induced+photodynamic+therapy.">In vivo damage to chorioallantoic membrane blood vessels by porphycene-induced photodynamic therapy.</a> Journal of Photochemistry and Photobiology, B: Biology. 30 (2-3), 115-121 (1995).</li><li>Buzz&#225;, H. H., Silva, L. V., Moriyama, L. T., Bagnato, V. S., Kurachi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+vascular+effect+of+Photodynamic+Therapy+in+chorioallantoic+membrane+using+different+photosensitizers.">Evaluation of vascular effect of Photodynamic Therapy in chorioallantoic membrane using different photosensitizers.</a> Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology. 138, 1-7 (2014).</li><li>Dougherty, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photodynamic+therapy.">Photodynamic therapy.</a> Journal of the National Cancer Institute. 90, 889-905 (1998).</li><li>Xiang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+optoacoustic+monitoring+of+vascular+damage+during+photodynamic+therapy+treatment+of+tumor.">Real-time optoacoustic monitoring of vascular damage during photodynamic therapy treatment of tumor.</a> Journal of Biomedical Optics. 12 (1), 01400-01408 (2007).</li><li>Foty, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+hanging+drop+cell+culture+protocol+for+generation+of+3D+spheroids.">A simple hanging drop cell culture protocol for generation of 3D spheroids.</a> Journal of Visualized Experiments. (51), 2720 (2011).</li><li>Abramoff, M. D., Magelhaes, P. J., Ram, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Image+Processing+with+ImageJ.">Image Processing with ImageJ.</a> Biophotonics International. 11 (7), 36-42 (2004).</li><li>Chomczynski, P., Sacchi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-step+method+of+RNA+isolation+by+acid+guanidium+thiocyanate-phenol-chloroform+extraction.">Single-step method of RNA isolation by acid guanidium thiocyanate-phenol-chloroform extraction.</a> Analytical Biochemistry. 162 (1), 156-159 (1987).</li><li>M&#225;&#269;ajov&#225;, M., &#268;avarga, I., S&#253;korov&#225;, M., Valachovi&#269;, M., Novotn&#225;, V., Bil&#269;&#237;k, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+angiogenesis+by+topical+application+of+leptin+and+high+and+low+molecular+heparin+using+the+Japanese+quail+chorioallantoic+membrane+model.">Modulation of angiogenesis by topical application of leptin and high and low molecular heparin using the Japanese quail chorioallantoic membrane model.</a> Saudi Journal of Biological Sciences. 27 (6), 1488-1493 (2020).</li><li>Mangir, N., Dikici, S., Claeyssens, F., MacNeil, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+Ex+Ovo+chick+chorioallantoic+membrane+(CAM)+assay+to+evaluate+the+biocompatibility+and+angiogenic+response+to+biomaterials.">Using Ex Ovo chick chorioallantoic membrane (CAM) assay to evaluate the biocompatibility and angiogenic response to biomaterials.</a> ACS Biomaterials Science Engineering. 5 (7), 3190-3200 (2019).</li><li>Marshall, K. M., Kanczler, J. M., Oreffo, R. O. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolving+applications+of+the+egg:+chorioallantoic+membrane+assay+and+ex+vivo+organotypic+culture+of+materials+for+bone+tissue+engineering.">Evolving applications of the egg: chorioallantoic membrane assay and ex vivo organotypic culture of materials for bone tissue engineering.</a> Journal of Tissue Engineering. 11, 1-25 (2020).</li><li>Merlos Rodrigo, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extending+the+applicability+of+in+ovo+and+ex+ovo+chicken+chorioallantoic+membrane+assays+to+study+cytostatic+activity+in+neuroblastoma+cells.">Extending the applicability of in ovo and ex ovo chicken chorioallantoic membrane assays to study cytostatic activity in neuroblastoma cells.</a> Frontiers in Oncology. 11, 1-10 (2021).</li><li>Meta, M., Kundekov&#225;, B., Bil&#269;&#237;k, B., M&#225;&#269;ajov&#225;, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+silicone+ring+application+on+CAM+vasculature+in+Japanese+Quail+(Coturnix+japonica).">The effect of silicone ring application on CAM vasculature in Japanese Quail (Coturnix japonica).</a> Proceedings of the Student Scientific Conference Faculty of Natural Sciences of Comenius University, Bratislava, Slovakia. , 385-390 (2019).</li><li>Kohli, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-screening+the+intrinsic+angiogenic+capacity+of+biomaterials+in+an+optimised+ex+ovo+chorioallantoic+membrane+model.">Pre-screening the intrinsic angiogenic capacity of biomaterials in an optimised ex ovo chorioallantoic membrane model.</a> Journal of Tissue Engineering. 11, 1-15 (2020).</li><li>Kundekov&#225;, B., M&#225;&#269;ajov&#225;, M., Meta, M., &#268;avarga, I., Bil&#269;&#237;k, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chorioallantoic+membrane+models+of+various+avian+species+differences+and+applications.">Chorioallantoic membrane models of various avian species differences and applications.</a> Biology-Basel. 10 (4), 301 (2021).</li><li>Parsons-Wingerter, P., Elliott, K. E., Clark, J. I., Farr, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblast+growth+factor-2+selectively+stimulates+angiogenesis+of+small+vessels+in+arterial+tree.">Fibroblast growth factor-2 selectively stimulates angiogenesis of small vessels in arterial tree.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis and Vascular Biology. 20 (5), 1250-1256 (2000).</li><li>Buzz&#225;, H. H., Zangirolami, A. C., Davis, A., G&#243;mez-Garc&#237;a, P. B., Kurachi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+analysis+of+a+tumor+model+in+the+chorioallantoic+membrane+used+for+the+evaluation+of+different+photosensitizers+for+photodynamic+therapy.">Fluorescence analysis of a tumor model in the chorioallantoic membrane used for the evaluation of different photosensitizers for photodynamic therapy.</a> Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. 19, 78-83 (2017).</li></ol>

For vellykket ex ovo-dyrking er det viktig å følge protokollen ovenfor. Videre, hvis eggene ikke åpnes forsiktig nok eller det ikke er tilstrekkelig fuktighet under dyrking, stikker eggeplommesekken til skallet og brister ofte. Starten på en ex ovo-dyrking på tidspunktet for ca. 60 timers egginkubasjon sikrer den høye overlevelsesgraden til embryoene, da de allerede er store nok til å overleve håndteringen. I de senere utviklingsstadiene blir CAM tynnere og fester seg til eggeskallet, noe som f?...

Kylling chorioallantoic membran (CAM) modellen er kjent og mye brukt i ulike forskningsområder. Det er et rikt vaskularisert ekstraembryonisk organ som gir gassutveksling og mineraltransport1. På grunn av gjennomsiktigheten og tilgjengeligheten til denne membranen, kan individuelle blodkar og deres strukturelle endringer observeres i sanntid2. Til tross for fordelene har kylling CAM også noen begrensninger (f.eks. Større avlsanlegg, eggproduksjon og fôrforbruk) som kan unngås ved å bruke andre fuglearter. I denne protokollen beskrives en alternativ ex ovo CAM-modell ved bruk av japansk vaktel (Coturnix japonica) embryo. På grunn av sin lille størrelse tillater det bruk av et mye større antall eksperimentelle individer enn kylling CAM. Videre er den kortere 16-dagers embryonale utviklingen av vaktelembryoer en annen fordel. De første større fartøyene på vaktel CAM vises på embryonal dag (ED) 7. Dette kan sammenlignes direkte med kyllingembryoutvikling (trinn 4-35); Imidlertid er de senere utviklingsstadiene ikke lenger sammenlignbare og krever mindre tid for vaktelembryoet3. Av interesse er den vanlige forekomsten av mikrovaskulær forgrening som ligner på kylling CAMs 4,5,6. Rask kjønnsmodning, høy eggproduksjon og lavprisavl er andre eksempler som favoriserer bruken av denne eksperimentelle modellen7.
En aviær CAM-modell brukes ofte i fotodynamisk terapi (PDT) studier8. PDT brukes til å behandle flere former for kreft (små lokaliserte svulster) og andre ikke-onkologiske sykdommer. Dens prinsipp er i levering av et fluorescerende stoff, en fotosensibilisator (PS), til det skadede vevet og dets aktivering med lys av riktig bølgelengde. En prospektiv PS som brukes i forskning er hypericin, opprinnelig isolert fra den medisinske planten St. John's wort (Hypericum perforatum)9. De sterke fotosensibiliserende effektene av denne forbindelsen er basert på dens fotokjemiske og fotofysiske egenskaper. Disse er preget av flere fluorescenseksitasjonstopper i området 400-600 nm, noe som induserer utslipp av fluorescens ved ca. 600 nm. Absorpsjonsmaksimumet for hypericin i spektralbåndet er i området 540-590 nm, og fluorescensmaksima er i området 590-640 nm9. For å oppnå disse fotosensibiliserende effektene, blir hypericin begeistret av laserlys ved en bølgelengde på 405 nm etter lokal administrasjon10. I nærvær av lys kan hypericin utvise virucidale, antiproliferative og cytotoksiske effekter11, mens det ikke er systemisk toksisitet, og det frigjøres raskt fra organismen. Hypericin er et lipofilt stoff som danner vannuoppløselige, ikke-fluorescerende aggregater, og derfor brukes flere typer nanobærere, for eksempel polymere nanopartikler 12,13 eller lipoproteiner med høy og lav tetthet (HDL, LDL) 14,15, for å hjelpe levering og penetrasjon i cellene. Siden CAM er et naturlig immunsviktende system, kan tumorceller implanteres direkte på membranoverflaten. Modellen er også godt egnet til å registrere omfanget av PDT-indusert vaskulær skade i henhold til en definert skår16,17. Lys med lavere intensitet sammenlignet med PDT kan brukes til fotodynamisk diagnose (PDD). Overvåking av vevet under fiolett eksitasjon LED-lys fører også til fotoaktivering av fotosensibilisatorer18,19,20 som resulterer i utslipp av fluorescerende lys, men det gir ikke nok energi til å starte en PDT-reaksjon og skade cellene. Det gjør det til et godt verktøy for tumorvisualisering og diagnose eller overvåking av farmakokinetikken til brukt PSs14,15.
Denne artikkelen beskriver utarbeidelsen av vaktelen ex ovo CAM-analysen med overlevelsesrater over 80%. Denne ex ovo-kulturen ble vellykket brukt i et stort antall eksperimenter.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>6-Well Cell Culture Plate</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>83.392</td>
			<td>Transparent polystyrene, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 Incubator ESCO CCL-0508</td>
			<td>ESCO, Singapore</td>
			<td>CCL-050B-8</td>
			<td>CO2 cell culture incubator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cryocut Leica CM 1800</td>
			<td>Reichert-Jung, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>digital camera Canon EOS 6D II</td>
			<td>Canon, Japan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>diode laser 405 nm</td>
			<td>Ocean Optics, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>67-68-5</td>
			<td>dimethyl sulfoxid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eosin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>15086-94-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ethanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fine brush size 2</td>
			<td>Faber-Castell</td>
			<td>281802</td>
			<td>brush for CAM separation and manipulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glutaraldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>111-30-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hematoxylin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>517-28-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hypericin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>84082-80-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>incubator Bios Midi</td>
			<td>Bios Sedl<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/63422/63422eq01.jpg" style="margin: auto;" />any, Czech Republic</td>
			<td></td>
			<td>Forced draught incubator for initial incubation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>incubator Memmert IF160</td>
			<td>Memmert, Germany</td>
			<td></td>
			<td>Forced air circulation incubator for CAM incubation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kaiser slimlite plano, LED light box</td>
			<td>Kaiser, Germany</td>
			<td>2453</td>
			<td>Transilluminator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LED light 405 nm</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>custom made circular LED light</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>macro lens Canon MP- E 65 mm f/2.8</td>
			<td>Canon, Japan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microscope Kapa 2000</td>
			<td>Kvant, Slovakia</td>
			<td></td>
			<td>optical microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microtome Auxilab 508</td>
			<td>Auxilab, Spain</td>
			<td></td>
			<td>manual rotary microtome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>30525-89-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraplast Plus</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3683</td>
			<td>parafin medium for tissue embedding</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4417</td>
			<td>Phosphate saline buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>scissors Castroviejo</td>
			<td>Orimed</td>
			<td>&#160;OR66-108</td>
			<td>micro scissors for CAM separation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>software ImageJ 1.53</td>
			<td>public domain</td>
			<td></td>
			<td>image processing and analysis program</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stock solution HDL</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>437641-10MG</td>
			<td>high density lipoproteins</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stock solution LDL</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>437644-10MG</td>
			<td>low density lipoproteins</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek O.C.T. Compound</td>
			<td>Sakura Finetek</td>
			<td>4583</td>
			<td>Optimal Cutting Temperature Compound 118 mL squeeze bottles</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quail chorioallantoic membrane - a tool for photodynamic diagnosis and therapy

Den chorioallantoiske membranen (CAM) til et aviært embryo er en tynn, ekstraembryonisk membran som fungerer som et primært respiratorisk organ. Egenskapene gjør den til en utmerket in vivo eksperimentell modell for å studere angiogenese, tumorvekst, legemiddelleveringssystemer eller fotodynamisk diagnose (PDD) og fotodynamisk terapi (PDT). Samtidig adresserer denne modellen kravet om erstatning av forsøksdyr med et egnet alternativ. Ex ovo dyrket embryo tillater enkel stoffpåføring, tilgang, overvåking og dokumentasjon. Den mest brukte er chick CAM; Denne artikkelen beskriver imidlertid fordelene med den japanske vaktelen CAM som en lavpris- og høykapasitetsmodell. En annen fordel er den kortere embryonale utviklingen, noe som gir høyere eksperimentell omsetning. Egnetheten av vaktel CAM for PDD og PDT av kreft og mikrobielle infeksjoner er utforsket her. Som et eksempel beskrives bruken av fotosensibilisatorhypericin i kombinasjon med lipoproteiner eller nanopartikler som et leveringssystem. Skadeskår fra bilder i hvitt lys og endringer i fluorescensintensitet i CAM-vevet under fiolett lys (405 nm) ble fastslått, sammen med analyse av histologiske snitt. Vaktelen CAM viste tydelig effekten av PDT på vaskulatur og vev. Videre kunne endringer som kapillærblødning, trombose, lysis av små kar og blødning av større kar observeres. Japansk vaktel CAM er en lovende in vivo modell for fotodynamisk diagnose og terapiforskning, med anvendelser i studier av tumorangiogenese, samt antivaskulær og antimikrobiell terapi.

Lokaliseringen av svulsten på CAM-overflaten er vanskelig i hvitt lys. Fotosensibilisator (her, hypericin) som brukes i PDD forventes å bli tatt opp selektivt av svulsten og bidrar til å visualisere svulsten. Tillegg av hypericin og bruk av fluorescerende lys (f.eks. 405 nm) viste tumorens (plateepitelkarsinom TE1) posisjon svært godt (figur 6A). Histologisk analyse viste vitale tumorceller som invaderte sunt vev. Konsentriske strukturer av unormale plateepitelceller, ofte beskrevet i pl...

Watch this Scientific Journal Video about Quail Chorioallantoic Membrane - A Tool for Photodynamic Diagnosis and Therapy at JoVE.com

Quail Chorioallantoic Membrane - A Tool for Photodynamic Diagnosis and Therapy

Den chorioallantoiske membranen (CAM) til fugleembryoet er et svært nyttig og anvendelig verktøy for ulike forskningsområder. En spesiell ex ovo-modell av japansk vaktel CAM er egnet for fotodynamisk behandlingsundersøkelse.

Quail Chorioallantoic Membrane - Et verktøy for fotodynamisk diagnose og terapi

The chorioallantoic membrane (CAM) of an avian embryo is a thin, extraembryonic membrane that functions as a primary respiratory organ. Its properties ...

Vi skal vise deg hvordan du forbereder japansk vaktel ex ovo-kultur og hvordan du bruker chorioallantoisk membran eller CAM kort sagt for fotodynamisk diagnose og behandling av kreft eller mikrobielle infeksjoner. Fordelene med denne metoden er rask utviklingsvekst, liten størrelse, god tilgang til vevet og enkel håndtering. Den respekterer også prinsippene i 3R-regelen for å utføre dyreforsøk.På grunn av sin strukturelle likhet med slimhinnene som blæren, lungene eller morkaken, er den egnet for in vivo testing av potensielle stoffer, toksisitetstesting eller transplantasjonsstudier. Demonstrere prosedyren vil være Barbora Kundekova og Majlinda Meta, PhD-studenter fra laboratoriet mitt. Til å begynne med, bruk befruktede vaktelegg, friske eller lagret ved 10 til 15 grader Celsius i maksimalt 4 til 5 dager før inkubasjonsstart.Bruk bare rene og uskadede egg, og inkluder eggene i en tvungen trekkinkubator ved 50 til 60% fuktighet og 37,5 grader Celsius i omtrent 54 timer plassert horisontalt med eggrotasjonene slått av. Desinfiser eggoverflaten med 70% etanol uten å rotere egget. Deretter, i et sterilt laminært strømningsskap mens du bruker hansker, åpner eggeskallet med liten steril kirurgisk saks og overfører innholdet til en 6-brønns kulturplate.Etter hvert egg desinfiserer du saksen med 70% etanol. Tilsett omtrent 5 ml sterilt vann til hullene i 6-brønnsplaten, da fuktighet er viktig for å forhindre at CAM tørker ut. Deretter aspirerer du feil tippede embryoer eller ubefruktede egg med en vakuumaspirator, og plasser deretter embryoene i en inkubator til ytterligere eksperimenter mens du opprettholder en temperatur på 37 grader Celsius i 80 til 90% fuktighet.Når CAM er utviklet nok, vanligvis fra embryonal dag 7, plasser en sterilisert silikonring på CAM-overflaten langs de små kapillærene samtidig som du unngår store blodkar. Under sterile forhold, bruk et passende volum hypericinoppløsning 30 mikroliter til silikonringen og hold embryoene i en inkubator ved 37 grader Celsius i 80 til 90% fuktighet. For å utføre fotodynamisk diagnose, belyse CAM ved hjelp av fiolett eksitasjonslys og registrere fluorescensen av hypericin og CAM-vev og tumorceller med et digitalt kamera med forskjellige tidsintervaller etter hypericinadministrasjon.Hvis forskningen krever et bilde av CAM i hvitt lys, registrer CAM før hypericinadministrasjon og ved slutten av forsøket kort tid før vevfiksering, da lyset utløser fotoaktivering av hypericin. For å utføre fotodynamisk terapi etter hypericinapplikasjon, plasser CAM under den optiske fiberen for laserstrålen for å dekke hele området i silikonringen. Etter å ha utført in vivo bestråling, i dette tilfellet med et 405 nanometer laserlys med en strømningshastighet på 285 milliwatt per centimeter kvadrat, ta opp CAM ved hjelp av hvitt lys og / eller fluorescerende lys før og etter fotodynamisk behandling.Fest CAM-vevet i en dyrkingsplate med 4% paraformaldehyd i PBS i minst 2 timer og maksimalt over natten, fjern deretter paraformaldehydet og kutt forsiktig ut fra CAM en del av vevet i silikonringen. Alle disse trinnene skal gjøres i en avtrekkshette. Vask kuttet del fra CAM-vevet i vann i 10 minutter og dehydrer deretter i stigende alkoholserier ved å plassere CAM-vevet i 70% etanol i 3 minutter, eosinoppløsning i 2 minutter, trocin 96% etanol i 5 minutter, 100% etanol i 5 minutter og to ganger i xylen i 10 minutter i en ny petriskål.Deretter overfører du prøvene så raskt som mulig til oppløst parafin i petriskåler ved hjelp av en slikkepott eller tynn børste. Etter 24 timer, legg vevet i histologisk form, fyll det med et parafininnbyggingsmedium og la det størkne i kjøleskapet, kutt deretter den størknede CAM fra innebyggingsmediet, vri den i skuffen 90 grader, fyll den igjen med innebyggingsmediet og la den stivne. Forbered 5 til 10 mikrometer seksjoner på en mikrotom for histopatologisk analyse for å bestemme PDT-indusert skade.For å forberede de frosne CAM-seksjonene for histologi, monter forsiktig innfødt eller 4% paraformaldehydfast CAM på glassglasset, fyll den innebygde formen til halvparten med OCT og frys i flytende nitrogen eller en blanding av tørris og etanol. Etter frysing, vipp forsiktig og skyv CAM fra glassglasset på toppen av det frosne OCT-mediet. Plasser igjen i formen, dekk den med OCT-medium og frys som beskrevet tidligere.For analyse av CAM-vaskulatur er det nødvendig med hele CAM-prøver. I laminær strømningsskap, overløp CAM med en forvarmet fikseringsløsning av 4% paraform aldehyd og 2% glutaraldehyd i PBS, fjern deretter fikseringsløsningen etter 48 timer. Deretter skiller du CAM forsiktig fra embryoet med mikrosaks og en fin børste og vasker den i PBS, monterer deretter den vasket CAM på et glassglass og la det tørke sakte.Etterpå fotograferer du lysbildet ved hjelp av et digitalt kamera i en transilluminator som en kilde til homogent hvitt lys. Plasseringen av svulsten på CAM-overflaten ble visualisert under hvitt lys og fluorescerende lys ved tilsetning av hypericin. Histologisk analyse viste konsentriske strukturer av unormale plateepitelceller som invaderte det friske vevet ledsaget av ødem og membrantykkelse.Etter behandling med PDT ble det observert en klar forskjell i kartetthet inne i ringen og området rundt. Laserstrålingen uten tilstedeværelse av fotosensibilisator forårsaket ingen skade som kan sammenlignes med kontrollen uten behandling. Etter 3 timers inkubasjon med hypericin resulterte laserbestråling i fluorescens forårsaket av monomerisering av det aggregerte hypericin med omfattende skade på vaskulaturen.Histologisk analyse viste at ubehandlet kontroll-CAM hadde relativt jevn tykkelse. PDT-behandling førte imidlertid til at alternativ behandling ble tynnere og mer skjør. Vi har nettopp demonstrert hvordan du forbereder vaktel ex ovo CAM-analyse og hvordan du bruker den.Samtidig som retningslinjene opprettholdes, er denne metoden enkel å mestre og kan vise seg å være raske resultater.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Anticancer Efficacy of Photodynamic Therapy with Lung Cancer-Targeted Nanoparticles

Anticancer Effekten av fotodynamisk behandling med Lung Cancer-Målrettet Nanopartikler

Photodynamic therapy (PDT) is a non-invasive and non-surgical method representing an attractive alternative choice for lung cancer treatment. ...

The Colon-26 Carcinoma Tumor-bearing Mouse as a Model for the Study of Cancer Cachexia

Colon-26 karsinom Tumor-bærende mus som en modell for studier av kreft kakeksi

Cancer cachexia is the progressive loss of skeletal muscle mass and adipose tissue, negative nitrogen balance, anorexia, fatigue, inflammation, and ...

Induction and Diagnosis of Tumors in Drosophila Imaginal Disc Epithelia

Induction and Diagnosis of Tumors in Drosophila Imaginal Disc Epithelia

Induksjon og diagnose av tumorer i<em&gt; Drosophila</em&gt; Imaginal Disc Epithelia

In the early stages of cancer, transformed mutant cells show cytological abnormalities, begin uncontrolled overgrowth, and progressively disrupt tissue ...

Genome-wide RNAi Screening to Identify Host Factors That Modulate Oncolytic Virus Therapy

Genomet hele RNAi Screening å identifisere vert faktorer som modulerer kan viruset terapi

High-throughput genome-wide RNAi (RNA interference) screening technology has been widely used for discovering host factors that impact&#160;virus ...

Therapy Testing in a Spheroid-based 3D Cell Culture Model for Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

Terapi Testing i en Spheroid-basert 3D celle kultur modell for hodet og nakken Squamous celle Carcinoma

Current treatment options for advanced and recurrent head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) enclose radiation and chemo-radiation approaches with ...

Dried Blood and Serum Spots As A Useful Tool for Sample Storage to Evaluate Cancer Biomarkers

Tørket blod og Serum flekker som et nyttig verktøy for eksempel Storage evaluere kreft Biomarkers

Blood sample quality is crucial to ensure accurate downstream analyses such as real-time PCR or ELISA. Correct storage of biological materials is the ...

A Three-dimensional Thymic Culture System to Generate Murine Induced Pluripotent Stem Cell-derived Tumor Antigen-specific Thymic Emigrants

En tredimensjonal Tymusatrofi kultur system for å generere murine indusert pluripotent Stem Cell-avledet tumor antigen-spesifikke Tymusatrofi nybyggere

The inheritance of pre-rearranged T cell receptors (TCRs) and their epigenetic rejuvenation make induced pluripotent stem cell (iPSC)-derived T cells a ...

A Spheroid Killing Assay by CAR T Cells

En Spheroid drapet analysen av bilen T celler

Immunotherapy has become a field of growing interest in the fight against cancer otherwise untreatable. Among all immunotherapeutic methods, chimeric ...

Comparing Metastatic Clear Cell Renal Cell Carcinoma Model Established in Mouse Kidney and on Chicken Chorioallantoic Membrane

Sammenligne metastatisk klar celle nyrecelle karsinom modell etablert i mus nyre og på kylling chorioallantoic membran

Metastatic clear cell renal cell carcinoma (ccRCC) is the most common subtype of kidney cancer. Localized ccRCC has a favorable surgical outcome. However, ...

Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers

Bruke kylling chorioallantoic membran i Vivo modell for å studere gynekologiske og urologiske kreftformer

Mouse models are the benchmark tests for in vivo cancer studies. However, cost, time, and ethical considerations have led to calls for alternative in vivo ...