Name: quail chorioallantoic membrane - a tool for photodynamic diagnosis and therapy
Uploaded: 2022-04-28T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quail Chorioallantoic Membrane - A Tool for Photodynamic Diagnosis and Therapy at JoVE.com

Arbetet stöddes av VEGA 2/0042/21 och APVV 20-0129. V. Huntošovás bidrag är resultatet av projektets genomförande: Open scientific community for modern interdisciplinary research in medicine (Akronym: OPENMED), ITMS2014+: 313011V455 som stöds av det operativa programmet Integrated Infrastructure, finansierat av ERUF.

Forskningen utfördes i enlighet med institutionella riktlinjer. All utrustning och reagens måste autoklaveras eller steriliseras med 70% etanol eller UV-ljus.
1. Inkubation av ägg
<ol><li>Förvara befruktade vaktelägg vid 10-15 °C i högst 4-5 dagar innan inkubationen påbörjas. Använd endast rena och oskadade ägg.</li>
	<li>Inkubera äggen i en tvångsdragsinkubator i ~ 53-54 h. Lägg äggen horisontellt med äggrotationen avstängd, vid 50%-60% luftfuktighet och 37...

<ol>
	<li>Nowak-Sliwinska, P., van Beijnum, J. R., van Berkel, M., vanden Bergh, H., Grif&#64257;oen, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+regrowth+following+photodynamic+therapy+in+the+chicken+embryo+chorioallantoic+membrane.">Vascular regrowth following photodynamic therapy in the chicken embryo chorioallantoic membrane.</a> Angiogenesis. 13 (4), 281-292 (2010).</li><li>van Leengoed, H. L. L. M., vander Veen, N., Versteeg, A. A. C., Ouellet, R., van Lier, J. E., Star, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-vivo+photodynamic+effects+of+phthalocyanines+in+a+skin-fold+observation+chamber+model:+role+of+central+metal+ion+and+degree+of+sulfonation.">In-vivo photodynamic effects of phthalocyanines in a skin-fold observation chamber model: role of central metal ion and degree of sulfonation.</a> Photochemistry Photobiology. 58 (4), 575-580 (1993).</li><li>Ainsworth, S. J., Stanley, R. L., Evans, D. J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+stages+of+the+Japanese+quail.">Developmental stages of the Japanese quail.</a> Journal of Anatomy. 216 (1), 3 (2010).</li><li>De Fouw, D. O., Rizzo, V. J., Steinfeld, R., Feinberg, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+of+the+microcirculation+in+the+chick+chorioallantoic+membrane+during+normal+angiogenesis.">Mapping of the microcirculation in the chick chorioallantoic membrane during normal angiogenesis.</a> Microvascular Research. 38 (2), 136-147 (1989).</li><li>Sandau, K., Kurz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modelling+of+vascular+growth+processes:+a+stochastic+biophysical+approach+to+embryonic+angiogenesis.">Modelling of vascular growth processes: a stochastic biophysical approach to embryonic angiogenesis.</a> Journal of Microscopy. 175 (3), 205-213 (1994).</li><li>Kurz, H., Ambrosy, S., Wilting, J., Marm&#233;, D., Christ, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proliferation+pattern+of+capillary+endothelial+cells+in+chorioallantoic+membrane+development+indicates+local+growth+control,+which+is+counteracted+by+vascular+endothelial+growth+factor+application.">Proliferation pattern of capillary endothelial cells in chorioallantoic membrane development indicates local growth control, which is counteracted by vascular endothelial growth factor application.</a> Developmental Dynamics. 203 (2), 174-186 (1995).</li><li>Huss, D., Poynter, G., Lansford, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Japanese+quail+(Coturnix+japonica)+as+laboratory+animal+model.">Japanese quail (Coturnix japonica) as laboratory animal model.</a> Lab Animal. 37 (11), 513-519 (2008).</li><li>Gottfried, V., Lindenbaum, E. S., Kimel, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chick+chorioallantoic+membrane+(CAM)+as+an+in-vivo+model+for+photodynamic+therapy.">The chick chorioallantoic membrane (CAM) as an in-vivo model for photodynamic therapy.</a> Journal of Photochemistry and Photobiology, B: Biology. 12 (2), 204-207 (1992).</li><li>Mi&#353;kovsk&#253;, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypericin+-+a+new+antiviral+and+antitumor+photosensitizer:+mechanism+of+action+and+interaction+with+biological+molecules.">Hypericin - a new antiviral and antitumor photosensitizer: mechanism of action and interaction with biological molecules.</a> Current Drug Targets. 3 (1), 55-84 (2002).</li><li>&#268;avarga, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photodynamic+effect+of+hypericin+after+topical+application+in+the+ex+ovo+quail+chorioallantoic+membrane+model.">Photodynamic effect of hypericin after topical application in the ex ovo quail chorioallantoic membrane model.</a> Planta Medica. 80 (1), 56-62 (2014).</li><li>Martinez-Poveda, B., Quesada, A. R., Medina, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypericin+in+the+dark+inhibits+key+steps+of+angiogenesis+in+vitro.">Hypericin in the dark inhibits key steps of angiogenesis in vitro.</a> Europan Journal of Pharmacology. 516 (2), 97-103 (2005).</li><li>Datta, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unravelling+the+excellent+chemical+stability+and+bioavailability+of+solvent+responsive+curcumin-loaded+2-ethyl-2-oxazoline-grad-2-(4-dodecyloxyphenyl)-+2-oxazoline+copolymer+nanoparticles+for+drug+delivery.">Unravelling the excellent chemical stability and bioavailability of solvent responsive curcumin-loaded 2-ethyl-2-oxazoline-grad-2-(4-dodecyloxyphenyl)- 2-oxazoline copolymer nanoparticles for drug delivery.</a> Biomacromolecules. 19 (7), 2459-2471 (2018).</li><li>Hunto&#353;ov&#225;, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alkyl+Chain+length+in+poly(2-oxazoline)-based+amphiphilic+gradient+copolymers+regulates+the+delivery+of+hydrophobic+molecules:+a+case+of+the+biodistribution+and+the+photodynamic+activity+of+the+photosensitizer+hypericin.">Alkyl Chain length in poly(2-oxazoline)-based amphiphilic gradient copolymers regulates the delivery of hydrophobic molecules: a case of the biodistribution and the photodynamic activity of the photosensitizer hypericin.</a> Biomacromolecules. 22 (10), 4199-4216 (2021).</li><li>Bur&#237;kov&#225;, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypericin+fluorescence+kinetics+in+the+presence+of+low+density+lipoproteins:+study+on+quail+CAM+assay+for+topical+delivery.">Hypericin fluorescence kinetics in the presence of low density lipoproteins: study on quail CAM assay for topical delivery.</a> General Physiology and Biophysic. 35 (4), 459-468 (2016).</li><li>Lenkavska, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Benefits+of+hypericin+transport+and+delivery+by+low-+and+high-density+lipoproteins+to+cancer+cells:+From+in+vitro+to+ex+ovo.">Benefits of hypericin transport and delivery by low- and high-density lipoproteins to cancer cells: From in vitro to ex ovo.</a> Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. 25, 214-224 (2019).</li><li>R&#252;ck, A., B&#246;hmler, A., Steiner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PDT+with+TOOKAD+studied+in+the+chorioallantoic+membrane+of+fertilized+eggs.">PDT with TOOKAD studied in the chorioallantoic membrane of fertilized eggs.</a> Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. 2 (1), 79-90 (2005).</li><li>Gottfried, V., Davidi, R., Averbuj, C., Kimel, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+damage+to+chorioallantoic+membrane+blood+vessels+by+porphycene-induced+photodynamic+therapy.">In vivo damage to chorioallantoic membrane blood vessels by porphycene-induced photodynamic therapy.</a> Journal of Photochemistry and Photobiology, B: Biology. 30 (2-3), 115-121 (1995).</li><li>Buzz&#225;, H. H., Silva, L. V., Moriyama, L. T., Bagnato, V. S., Kurachi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+vascular+effect+of+Photodynamic+Therapy+in+chorioallantoic+membrane+using+different+photosensitizers.">Evaluation of vascular effect of Photodynamic Therapy in chorioallantoic membrane using different photosensitizers.</a> Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology. 138, 1-7 (2014).</li><li>Dougherty, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photodynamic+therapy.">Photodynamic therapy.</a> Journal of the National Cancer Institute. 90, 889-905 (1998).</li><li>Xiang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+optoacoustic+monitoring+of+vascular+damage+during+photodynamic+therapy+treatment+of+tumor.">Real-time optoacoustic monitoring of vascular damage during photodynamic therapy treatment of tumor.</a> Journal of Biomedical Optics. 12 (1), 01400-01408 (2007).</li><li>Foty, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+hanging+drop+cell+culture+protocol+for+generation+of+3D+spheroids.">A simple hanging drop cell culture protocol for generation of 3D spheroids.</a> Journal of Visualized Experiments. (51), 2720 (2011).</li><li>Abramoff, M. D., Magelhaes, P. J., Ram, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Image+Processing+with+ImageJ.">Image Processing with ImageJ.</a> Biophotonics International. 11 (7), 36-42 (2004).</li><li>Chomczynski, P., Sacchi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-step+method+of+RNA+isolation+by+acid+guanidium+thiocyanate-phenol-chloroform+extraction.">Single-step method of RNA isolation by acid guanidium thiocyanate-phenol-chloroform extraction.</a> Analytical Biochemistry. 162 (1), 156-159 (1987).</li><li>M&#225;&#269;ajov&#225;, M., &#268;avarga, I., S&#253;korov&#225;, M., Valachovi&#269;, M., Novotn&#225;, V., Bil&#269;&#237;k, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+angiogenesis+by+topical+application+of+leptin+and+high+and+low+molecular+heparin+using+the+Japanese+quail+chorioallantoic+membrane+model.">Modulation of angiogenesis by topical application of leptin and high and low molecular heparin using the Japanese quail chorioallantoic membrane model.</a> Saudi Journal of Biological Sciences. 27 (6), 1488-1493 (2020).</li><li>Mangir, N., Dikici, S., Claeyssens, F., MacNeil, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+Ex+Ovo+chick+chorioallantoic+membrane+(CAM)+assay+to+evaluate+the+biocompatibility+and+angiogenic+response+to+biomaterials.">Using Ex Ovo chick chorioallantoic membrane (CAM) assay to evaluate the biocompatibility and angiogenic response to biomaterials.</a> ACS Biomaterials Science Engineering. 5 (7), 3190-3200 (2019).</li><li>Marshall, K. M., Kanczler, J. M., Oreffo, R. O. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolving+applications+of+the+egg:+chorioallantoic+membrane+assay+and+ex+vivo+organotypic+culture+of+materials+for+bone+tissue+engineering.">Evolving applications of the egg: chorioallantoic membrane assay and ex vivo organotypic culture of materials for bone tissue engineering.</a> Journal of Tissue Engineering. 11, 1-25 (2020).</li><li>Merlos Rodrigo, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extending+the+applicability+of+in+ovo+and+ex+ovo+chicken+chorioallantoic+membrane+assays+to+study+cytostatic+activity+in+neuroblastoma+cells.">Extending the applicability of in ovo and ex ovo chicken chorioallantoic membrane assays to study cytostatic activity in neuroblastoma cells.</a> Frontiers in Oncology. 11, 1-10 (2021).</li><li>Meta, M., Kundekov&#225;, B., Bil&#269;&#237;k, B., M&#225;&#269;ajov&#225;, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+silicone+ring+application+on+CAM+vasculature+in+Japanese+Quail+(Coturnix+japonica).">The effect of silicone ring application on CAM vasculature in Japanese Quail (Coturnix japonica).</a> Proceedings of the Student Scientific Conference Faculty of Natural Sciences of Comenius University, Bratislava, Slovakia. , 385-390 (2019).</li><li>Kohli, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-screening+the+intrinsic+angiogenic+capacity+of+biomaterials+in+an+optimised+ex+ovo+chorioallantoic+membrane+model.">Pre-screening the intrinsic angiogenic capacity of biomaterials in an optimised ex ovo chorioallantoic membrane model.</a> Journal of Tissue Engineering. 11, 1-15 (2020).</li><li>Kundekov&#225;, B., M&#225;&#269;ajov&#225;, M., Meta, M., &#268;avarga, I., Bil&#269;&#237;k, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chorioallantoic+membrane+models+of+various+avian+species+differences+and+applications.">Chorioallantoic membrane models of various avian species differences and applications.</a> Biology-Basel. 10 (4), 301 (2021).</li><li>Parsons-Wingerter, P., Elliott, K. E., Clark, J. I., Farr, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblast+growth+factor-2+selectively+stimulates+angiogenesis+of+small+vessels+in+arterial+tree.">Fibroblast growth factor-2 selectively stimulates angiogenesis of small vessels in arterial tree.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis and Vascular Biology. 20 (5), 1250-1256 (2000).</li><li>Buzz&#225;, H. H., Zangirolami, A. C., Davis, A., G&#243;mez-Garc&#237;a, P. B., Kurachi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+analysis+of+a+tumor+model+in+the+chorioallantoic+membrane+used+for+the+evaluation+of+different+photosensitizers+for+photodynamic+therapy.">Fluorescence analysis of a tumor model in the chorioallantoic membrane used for the evaluation of different photosensitizers for photodynamic therapy.</a> Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. 19, 78-83 (2017).</li></ol>

För framgångsrik ex ovo-odling är det viktigt att följa protokollet ovan. Dessutom, om äggen inte öppnas tillräckligt noggrant eller det inte finns tillräcklig fuktighet under odlingen, fastnar äggula säcken på skalet och brister ofta. Starten av en ex ovo-odling vid tidpunkten för cirka 60 timmars ägginkubation säkerställer embryonas höga överlevnad, eftersom de redan är tillräckligt stora för att överleva hanteringen. Vid de senare utvecklingsstadierna blir CAM tunnare och fäster...

Kycklingkorioallantoiskt membran (CAM) -modellen är välkänd och används ofta inom olika forskningsområden. Det är ett rikt vaskulärt extraembryoniskt organ som ger gasutbyte och mineraltransport1. På grund av transparensen och tillgängligheten hos detta membran kan enskilda blodkärl och deras strukturella förändringar observeras i realtid2. Trots fördelarna har chick CAM också vissa begränsningar (t.ex. större avelsanläggningar, äggproduktion och foderkonsumtion) som kan undvikas genom att använda andra fågelarter. I detta protokoll beskrivs en alternativ ex ovo CAM-modell med japanskt vaktel (Coturnix japonica) embryo. På grund av sin lilla storlek tillåter den användning av ett mycket större antal experimentella individer än kyckling CAM. Dessutom är den kortare 16-dagars embryonala utvecklingen av vaktelembryon en annan fördel. De första större fartygen på vaktel CAM visas på embryonal dag (ED) 7. Detta kan jämföras direkt med kycklingembryoutveckling (steg 4-35); De senare utvecklingsstadierna är emellertid inte längre jämförbara och kräver mindre tid för vaktelembryot3. Av intresse är den regelbundna förekomsten av mikrovaskulär förgrening som liknar den för kyckling CAMs 4,5,6. Snabb sexuell mognad, hög äggproduktion och lågkostnadsuppfödning är andra exempel som gynnar användningen av denna experimentella modell7.
En aviär CAM-modell används ofta i fotodynamisk terapi (PDT) studier8. PDT används för att behandla flera former av cancer (små lokaliserade tumörer) och andra icke-onkologiska sjukdomar. Dess princip är vid leverans av ett fluorescerande läkemedel, en fotosensibiliserare (PS), till den skadade vävnaden och dess aktivering med ljus med lämplig våglängd. En prospektiv PS som används i forskning är hypericin, ursprungligen isolerad från den medicinska växten Johannesört (Hypericum perforatum)9. De starka fotosensibiliserande effekterna av denna förening är baserade på dess fotokemiska och fotofysiska egenskaper. Dessa kännetecknas av flera fluorescensexcitationstoppar i intervallet 400-600 nm, vilket inducerar utsläpp av fluorescens vid ca 600 nm. Absorptionsmaxima för hypericin inom spektralbandet ligger i intervallet 540-590 nm, och fluorescensmaxima liggeri intervallet 590-640 nm 9. För att uppnå dessa fotosensibiliserande effekter exciteras hypericin av laserljus vid en våglängd på 405 nm efter lokal administration10. I närvaro av ljus kan hypericin uppvisa virucida, antiproliferativa och cytotoxiska effekter11, medan det inte finns någon systemisk toxicitet, och det frigörs snabbt från organismen. Hypericin är en lipofil substans som bildar vattenolösliga, icke-fluorescerande aggregat, varför flera typer av nanobärare, såsom polymera nanopartiklar 12,13 eller lipoproteiner med hög och låg densitet (HDL, LDL)14,15, används för att hjälpa dess leverans och penetration i cellerna. Eftersom CAM är ett naturligt immunbristsystem kan tumörceller implanteras direkt på membranytan. Modellen är också väl lämpad för att registrera omfattningen av PDT-inducerad vaskulär skada enligt en definierad poäng16,17. Ljus med lägre intensitet jämfört med PDT kan användas för fotodynamisk diagnos (PDD). Övervakning av vävnaden under violett excitation LED-ljus leder också till fotoaktivering av fotosensibiliserare18,19,20 som resulterar i en utsläpp av fluorescerande ljus, men det ger inte tillräckligt med energi för att starta en PDT-reaktion och skada cellerna. Det gör det till ett bra verktyg för tumörvisualisering och diagnos eller övervakning av farmakokinetiken för använda PSs14,15.
Denna artikel beskriver beredningen av vaktel ex ovo CAM-analysen med överlevnadsnivåer över 80%. Denna ex ovo-kultur tillämpades framgångsrikt i ett stort antal experiment.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>6-Well Cell Culture Plate</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>83.392</td>
			<td>Transparent polystyrene, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 Incubator ESCO CCL-0508</td>
			<td>ESCO, Singapore</td>
			<td>CCL-050B-8</td>
			<td>CO2 cell culture incubator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cryocut Leica CM 1800</td>
			<td>Reichert-Jung, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>digital camera Canon EOS 6D II</td>
			<td>Canon, Japan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>diode laser 405 nm</td>
			<td>Ocean Optics, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>67-68-5</td>
			<td>dimethyl sulfoxid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eosin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>15086-94-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ethanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fine brush size 2</td>
			<td>Faber-Castell</td>
			<td>281802</td>
			<td>brush for CAM separation and manipulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glutaraldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>111-30-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hematoxylin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>517-28-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hypericin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>84082-80-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>incubator Bios Midi</td>
			<td>Bios Sedl<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/63422/63422eq01.jpg" style="margin: auto;" />any, Czech Republic</td>
			<td></td>
			<td>Forced draught incubator for initial incubation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>incubator Memmert IF160</td>
			<td>Memmert, Germany</td>
			<td></td>
			<td>Forced air circulation incubator for CAM incubation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kaiser slimlite plano, LED light box</td>
			<td>Kaiser, Germany</td>
			<td>2453</td>
			<td>Transilluminator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LED light 405 nm</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>custom made circular LED light</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>macro lens Canon MP- E 65 mm f/2.8</td>
			<td>Canon, Japan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microscope Kapa 2000</td>
			<td>Kvant, Slovakia</td>
			<td></td>
			<td>optical microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microtome Auxilab 508</td>
			<td>Auxilab, Spain</td>
			<td></td>
			<td>manual rotary microtome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>30525-89-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraplast Plus</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3683</td>
			<td>parafin medium for tissue embedding</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4417</td>
			<td>Phosphate saline buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>scissors Castroviejo</td>
			<td>Orimed</td>
			<td>&#160;OR66-108</td>
			<td>micro scissors for CAM separation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>software ImageJ 1.53</td>
			<td>public domain</td>
			<td></td>
			<td>image processing and analysis program</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stock solution HDL</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>437641-10MG</td>
			<td>high density lipoproteins</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stock solution LDL</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>437644-10MG</td>
			<td>low density lipoproteins</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek O.C.T. Compound</td>
			<td>Sakura Finetek</td>
			<td>4583</td>
			<td>Optimal Cutting Temperature Compound 118 mL squeeze bottles</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quail chorioallantoic membrane - a tool for photodynamic diagnosis and therapy

Det korioallantoiska membranet (CAM) hos ett fågelembryo är ett tunt, extraembryoniskt membran som fungerar som ett primärt andningsorgan. Dess egenskaper gör det till en utmärkt in vivo experimentell modell för att studera angiogenes, tumörtillväxt, läkemedelsleveranssystem eller fotodynamisk diagnos (PDD) och fotodynamisk terapi (PDT). Samtidigt tillgodoser denna modell kravet på att försöksdjur ersätts med ett lämpligt alternativ. Ex ovo odlat embryo möjliggör enkel substansapplikation, åtkomst, övervakning och dokumentation. Den mest använda är chick CAM; Denna artikel beskriver dock fördelarna med den japanska vaktel-CAM som en billig och hög genomströmningsmodell. En annan fördel är den kortare embryonala utvecklingen, vilket möjliggör högre experimentell omsättning. Lämpligheten av vaktel CAM för PDD och PDT för cancer och mikrobiella infektioner undersöks här. Som ett exempel beskrivs användningen av fotosensibiliseraren hypericin i kombination med lipoproteiner eller nanopartiklar som ett leveranssystem. Skadepoängen från bilder i vitt ljus och förändringar i fluorescensintensiteten hos CAM-vävnaden under violett ljus (405 nm) bestämdes, tillsammans med analys av histologiska sektioner. Vaktel-CAM visade tydligt effekten av PDT på vaskulaturen och vävnaden. Dessutom kunde förändringar som kapillärblödning, trombos, lys av små kärl och blödning av större kärl observeras. Japansk vaktel CAM är en lovande in vivo-modell för fotodynamisk diagnos och terapiforskning, med tillämpningar i studier av tumörangiogenes samt antivaskulär och antimikrobiell terapi.

Lokaliseringen av tumören på CAM-ytan är svår i vitt ljus. Fotosensibiliserare (här hypericin) som används i PDD förväntas tas upp selektivt av tumören och hjälper till att visualisera tumören. Tillsatsen av hypericin och användningen av fluorescerande ljus (t.ex. 405 nm) visade att tumören (skivepitelcancer TE1) fungerar mycket bra (figur 6A). Histologisk analys visade vitala tumörceller som invaderade friska vävnader. Koncentriska strukturer av onormala skivepitelceller, som...

Watch this Scientific Journal Video about Quail Chorioallantoic Membrane - A Tool for Photodynamic Diagnosis and Therapy at JoVE.com

Quail Chorioallantoic Membrane - A Tool for Photodynamic Diagnosis and Therapy

Det korioallantoiska membranet (CAM) hos det aviära embryot är ett mycket användbart och tillämpligt verktyg för olika forskningsområden. En speciell ex ovo-modell av japansk vaktel CAM är lämplig för fotodynamisk behandlingsundersökning.

Quail Chorioallantoic Membrane - ett verktyg för fotodynamisk diagnos och terapi

The chorioallantoic membrane (CAM) of an avian embryo is a thin, extraembryonic membrane that functions as a primary respiratory organ. Its properties ...

Vi kommer att visa dig hur du förbereder japansk vaktel ex ovo-kultur och hur du använder chorioallantoiskt membran eller CAM kort sagt för fotodynamisk diagnos och behandling av cancer eller mikrobiella infektioner. Fördelarna med denna metod är snabb utvecklingstillväxt, liten storlek, god tillgång till vävnaden och enkel hantering. Det respekterar också principerna i 3R-regeln för att utföra djurförsök.På grund av dess strukturella likhet med slemhinnorna såsom urinblåsan, lungorna eller moderkakan är den lämplig för in vivo-testning av potentiella läkemedel, toxicitetstestning eller transplantationsstudier. Demonstrerar proceduren kommer att vara Barbora Kundekova och Majlinda Meta, doktorander från mitt laboratorium. Börja med att använda befruktade vaktelägg, färska eller lagrade vid 10 till 15 grader Celsius i högst 4 till 5 dagar före inkubationens början.Använd endast rena och oskadade ägg och inkubera sedan äggen i en tvångsdragsinkubator vid 50 till 60% luftfuktighet och 37,5 grader Celsius i cirka 54 timmar placerade horisontellt med äggrotationerna avstängda. Desinficera äggytan med 70% etanol utan att rotera ägget. Därefter, i ett sterilt laminärt flödesskåp medan du bär handskar, öppna äggskalet med en liten steril kirurgisk sax och överför innehållet till en 6-brunns odlingsplatta.Efter varje ägg, desinficera saxen med 70% etanol. Tillsätt cirka 5 ml sterilt vatten till luckorna i 6-brunnsplattan eftersom fuktighet är avgörande för att förhindra att CAM torkar ut. Därefter aspirera felaktigt tippade embryon eller obefruktade ägg med en vakuumsugare, placera sedan embryonerna i en inkubator tills ytterligare experiment samtidigt som en temperatur på 37 grader Celsius bibehålls i 80 till 90% fuktighet.När CAM är tillräckligt utvecklad, vanligtvis från embryonal dag 7, placera en steriliserad silikonring på CAM-ytan längs de små kapillärerna samtidigt som du undviker större blodkärl. Under sterila förhållanden, applicera en lämplig volym hypericinlösning 30 mikroliter på silikonringen och håll embryona i en inkubator vid 37 grader Celsius i 80 till 90% fuktighet. För att utföra fotodynamisk diagnos, belysa CAM med violett excitationsljus och registrera fluorescensen av hypericin- och CAM-vävnad och tumörceller med en digitalkamera med olika tidsintervall efter hypericinadministration.Om forskningen kräver en bild av CAM i vitt ljus, registrera CAM före hypericinadministration och i slutet av experimentet strax före vävnadsfixeringen, eftersom ljuset utlöser fotoaktivering av hypericin. För att utföra den fotodynamiska terapin efter hypericinapplikation, placera CAM under den optiska fibern för laserstrålen för att täcka hela området inom silikonringen. Efter att ha utfört bestrålning in vivo, i detta specifika fall med ett laserljus på 405 nanometer med en flythastighet på 285 milliwatt per centimeter kvadrat, registrera CAM med vitt ljus och/eller fluorescerande ljus före och efter fotodynamisk behandling.Fixera CAM-vävnaden i en odlingsplatta med 4% paraformaldehyd i PBS i minst 2 timmar och högst över natten, ta sedan bort paraformaldehyden och skär försiktigt ut en del av vävnaden i silikonringen från CAM. Alla dessa steg bör göras i en rökhuv. Tvätta skuren del från CAM-vävnaden i vatten i 10 minuter och torka därefter ut i stigande alkoholserie genom att placera CAM-vävnaden i 70% etanol i 3 minuter, eosinlösning i 2 minuter, throcin 96% etanol i 5 minuter, 100% etanol i 5 minuter och två gånger i xylen i 10 minuter i en ny petriskål.Därefter överför proverna så snabbt som möjligt till det upplösta paraffinet i petriskålar med en spatel eller tunn borste. Efter 24 timmar, placera vävnaden i histologisk form, fyll den med ett paraffinbäddningsmedium och låt den stelna i kylskåpet, skär sedan den stelnade CAM från inbäddningsmediet, vrid den i brickan med 90 grader, fyll den igen med inbäddningsmediet och låt den stelna. Förbered 5 till 10 mikrometersektioner på en mikrotom för histopatologisk analys för att bestämma PDT-inducerad skada.För att förbereda de frysta CAM-sektionerna för histologi, montera försiktigt inbyggt eller 4% paraformaldehydfixerat CAM på glasskivan, fyll inbäddningsformen till hälften med OCT och frys i flytande kväve eller en blandning av torris och etanol. Efter frysning, luta försiktigt och skjut CAM från glasskivan på toppen av det frysta OCT-mediet. Lägg igen i formen, täck den med OCT-medium och frys enligt beskrivningen ovan.För analys av CAM-vaskulatur behövs hela CAM-prover. I det laminära flödesskåpet, överflöde CAM med en förvärmd fixeringslösning av 4% paraformaldehyd och 2% glutaraldehyd i PBS, ta sedan bort fixeringslösningen efter 48 timmar. Separera sedan CAM försiktigt från embryot med mikrosax och en fin borste och tvätta den i PBS, montera sedan den tvättade CAM på en glasskiva och låt den sakta torka.Fotografera sedan bilden med en digitalkamera i en transilluminator som en källa till homogent vitt ljus. Tumörens placering på CAM-ytan visualiserades under vitt ljus och fluorescerande ljus vid tillsats av hypericin. Histologisk analys visade koncentriska strukturer av onormala skivepitelceller som invaderar de friska vävnaderna åtföljda av ödem och membranförtjockning.Efter behandling med PDT observerades en tydlig skillnad i kärltäthet inuti ringen och det omgivande området. Laserstrålningen utan närvaro av fotosensibiliserare orsakade ingen skada som var jämförbar med kontrollen utan någon behandling. Efter 3 timmars inkubation med hypericin resulterade laserbestrålning i fluorescens orsakad av monomerisering av det aggregerade hypericinet med omfattande skador på kärlen.Histologisk analys visade att obehandlad kontroll CAM hade relativt jämn tjocklek. PDT-behandling gjorde dock att CAM blev tunnare och skörare. Vi visade bara hur man förbereder vaktel ex ovo CAM-analys och hur man använder den.Samtidigt som riktlinjerna upprätthålls är denna metod lätt att behärska och kan visa sig vara snabba resultat.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Anticancer Efficacy of Photodynamic Therapy with Lung Cancer-Targeted Nanoparticles

Anticancer Effekten av fotodynamisk terapi med lungcancer-Targeted Nanopartiklar

Photodynamic therapy (PDT) is a non-invasive and non-surgical method representing an attractive alternative choice for lung cancer treatment. ...

The Colon-26 Carcinoma Tumor-bearing Mouse as a Model for the Study of Cancer Cachexia

Colon-26 karcinom tumörbärande mus som en modell för studier av cancerkakexi

Cancer cachexia is the progressive loss of skeletal muscle mass and adipose tissue, negative nitrogen balance, anorexia, fatigue, inflammation, and ...

Induction and Diagnosis of Tumors in Drosophila Imaginal Disc Epithelia

Induction and Diagnosis of Tumors in Drosophila Imaginal Disc Epithelia

Induktion och diagnos av tumörer i<em&gt; Drosophila</em&gt; Imaginal Disc Epithelia

In the early stages of cancer, transformed mutant cells show cytological abnormalities, begin uncontrolled overgrowth, and progressively disrupt tissue ...

Genome-wide RNAi Screening to Identify Host Factors That Modulate Oncolytic Virus Therapy

Genome-wide RNAi Screening att identifiera värd faktorer som modulerar onkolytisk Virus terapi

High-throughput genome-wide RNAi (RNA interference) screening technology has been widely used for discovering host factors that impact&#160;virus ...

Therapy Testing in a Spheroid-based 3D Cell Culture Model for Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

Terapi testning i sfäroid-baserat 3D Cell kultur modell för huvud och hals skivepitelcancer

Current treatment options for advanced and recurrent head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) enclose radiation and chemo-radiation approaches with ...

Dried Blood and Serum Spots As A Useful Tool for Sample Storage to Evaluate Cancer Biomarkers

Torkat blod och Serum ställen som ett användbart verktyg att utvärdera Cancer biomarkörer lagring på prov

Blood sample quality is crucial to ensure accurate downstream analyses such as real-time PCR or ELISA. Correct storage of biological materials is the ...

A Three-dimensional Thymic Culture System to Generate Murine Induced Pluripotent Stem Cell-derived Tumor Antigen-specific Thymic Emigrants

Ett tredimensionellt thymic kultur system för att generera murin inducerad pluripotenta stamcells härledda tumör antigen-specifika thymic emigranter

The inheritance of pre-rearranged T cell receptors (TCRs) and their epigenetic rejuvenation make induced pluripotent stem cell (iPSC)-derived T cells a ...

A Spheroid Killing Assay by CAR T Cells

En sfäroid dödande analys av CAR T-celler

Immunotherapy has become a field of growing interest in the fight against cancer otherwise untreatable. Among all immunotherapeutic methods, chimeric ...

Comparing Metastatic Clear Cell Renal Cell Carcinoma Model Established in Mouse Kidney and on Chicken Chorioallantoic Membrane

Jämföra metastaserande clear cell njurcellscancer modell etablerad i mus njure och på kyckling chorioallantoic membranet

Metastatic clear cell renal cell carcinoma (ccRCC) is the most common subtype of kidney cancer. Localized ccRCC has a favorable surgical outcome. However, ...

Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers

Använda Kyckling chorioallantoic Membrane In Vivo modell för att studera gynekologiska och urologiska cancerformer

Mouse models are the benchmark tests for in vivo cancer studies. However, cost, time, and ethical considerations have led to calls for alternative in vivo ...