Name: quail chorioallantoic membrane - a tool for photodynamic diagnosis and therapy
Uploaded: 2022-04-28T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quail Chorioallantoic Membrane - A Tool for Photodynamic Diagnosis and Therapy at JoVE.com

Çalışma VEGA 2/0042/21 ve APVV 20-0129 tarafından desteklenmiştir. V. Huntošová'nın katkısı, proje uygulamasının sonucudur: Tıpta modern disiplinlerarası araştırmalar için açık bilimsel topluluk (Kısaltma: OPENMED), ITMS2014+: 313011V455, ERDF tarafından finanse edilen Operasyonel Program Entegre Altyapısı tarafından desteklenmektedir.

Araştırma kurumsal kılavuzlara uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Tüm ekipman ve reaktifler otoklavlanmalı veya %70 etanol veya UV ışığı ile sterilize edilmelidir.
1. Yumurta inkübasyonu
<ol><li>Döllenmiş bıldırcın yumurtalarını kuluçkaya başlamadan önce en fazla 4-5 gün boyunca 10-15 ° C'de saklayın. Sadece temiz ve hasarsız yumurtalar kullanın.</li>
	<li>Yumurtaları ~ 53-54 saat boyunca zorla çekilen bir inkübatörde inkübe edin. Yumurtalar...

<ol>
	<li>Nowak-Sliwinska, P., van Beijnum, J. R., van Berkel, M., vanden Bergh, H., Grif&#64257;oen, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+regrowth+following+photodynamic+therapy+in+the+chicken+embryo+chorioallantoic+membrane.">Vascular regrowth following photodynamic therapy in the chicken embryo chorioallantoic membrane.</a> Angiogenesis. 13 (4), 281-292 (2010).</li><li>van Leengoed, H. L. L. M., vander Veen, N., Versteeg, A. A. C., Ouellet, R., van Lier, J. E., Star, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-vivo+photodynamic+effects+of+phthalocyanines+in+a+skin-fold+observation+chamber+model:+role+of+central+metal+ion+and+degree+of+sulfonation.">In-vivo photodynamic effects of phthalocyanines in a skin-fold observation chamber model: role of central metal ion and degree of sulfonation.</a> Photochemistry Photobiology. 58 (4), 575-580 (1993).</li><li>Ainsworth, S. J., Stanley, R. L., Evans, D. J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+stages+of+the+Japanese+quail.">Developmental stages of the Japanese quail.</a> Journal of Anatomy. 216 (1), 3 (2010).</li><li>De Fouw, D. O., Rizzo, V. J., Steinfeld, R., Feinberg, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+of+the+microcirculation+in+the+chick+chorioallantoic+membrane+during+normal+angiogenesis.">Mapping of the microcirculation in the chick chorioallantoic membrane during normal angiogenesis.</a> Microvascular Research. 38 (2), 136-147 (1989).</li><li>Sandau, K., Kurz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modelling+of+vascular+growth+processes:+a+stochastic+biophysical+approach+to+embryonic+angiogenesis.">Modelling of vascular growth processes: a stochastic biophysical approach to embryonic angiogenesis.</a> Journal of Microscopy. 175 (3), 205-213 (1994).</li><li>Kurz, H., Ambrosy, S., Wilting, J., Marm&#233;, D., Christ, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proliferation+pattern+of+capillary+endothelial+cells+in+chorioallantoic+membrane+development+indicates+local+growth+control,+which+is+counteracted+by+vascular+endothelial+growth+factor+application.">Proliferation pattern of capillary endothelial cells in chorioallantoic membrane development indicates local growth control, which is counteracted by vascular endothelial growth factor application.</a> Developmental Dynamics. 203 (2), 174-186 (1995).</li><li>Huss, D., Poynter, G., Lansford, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Japanese+quail+(Coturnix+japonica)+as+laboratory+animal+model.">Japanese quail (Coturnix japonica) as laboratory animal model.</a> Lab Animal. 37 (11), 513-519 (2008).</li><li>Gottfried, V., Lindenbaum, E. S., Kimel, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chick+chorioallantoic+membrane+(CAM)+as+an+in-vivo+model+for+photodynamic+therapy.">The chick chorioallantoic membrane (CAM) as an in-vivo model for photodynamic therapy.</a> Journal of Photochemistry and Photobiology, B: Biology. 12 (2), 204-207 (1992).</li><li>Mi&#353;kovsk&#253;, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypericin+-+a+new+antiviral+and+antitumor+photosensitizer:+mechanism+of+action+and+interaction+with+biological+molecules.">Hypericin - a new antiviral and antitumor photosensitizer: mechanism of action and interaction with biological molecules.</a> Current Drug Targets. 3 (1), 55-84 (2002).</li><li>&#268;avarga, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photodynamic+effect+of+hypericin+after+topical+application+in+the+ex+ovo+quail+chorioallantoic+membrane+model.">Photodynamic effect of hypericin after topical application in the ex ovo quail chorioallantoic membrane model.</a> Planta Medica. 80 (1), 56-62 (2014).</li><li>Martinez-Poveda, B., Quesada, A. R., Medina, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypericin+in+the+dark+inhibits+key+steps+of+angiogenesis+in+vitro.">Hypericin in the dark inhibits key steps of angiogenesis in vitro.</a> Europan Journal of Pharmacology. 516 (2), 97-103 (2005).</li><li>Datta, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unravelling+the+excellent+chemical+stability+and+bioavailability+of+solvent+responsive+curcumin-loaded+2-ethyl-2-oxazoline-grad-2-(4-dodecyloxyphenyl)-+2-oxazoline+copolymer+nanoparticles+for+drug+delivery.">Unravelling the excellent chemical stability and bioavailability of solvent responsive curcumin-loaded 2-ethyl-2-oxazoline-grad-2-(4-dodecyloxyphenyl)- 2-oxazoline copolymer nanoparticles for drug delivery.</a> Biomacromolecules. 19 (7), 2459-2471 (2018).</li><li>Hunto&#353;ov&#225;, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alkyl+Chain+length+in+poly(2-oxazoline)-based+amphiphilic+gradient+copolymers+regulates+the+delivery+of+hydrophobic+molecules:+a+case+of+the+biodistribution+and+the+photodynamic+activity+of+the+photosensitizer+hypericin.">Alkyl Chain length in poly(2-oxazoline)-based amphiphilic gradient copolymers regulates the delivery of hydrophobic molecules: a case of the biodistribution and the photodynamic activity of the photosensitizer hypericin.</a> Biomacromolecules. 22 (10), 4199-4216 (2021).</li><li>Bur&#237;kov&#225;, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypericin+fluorescence+kinetics+in+the+presence+of+low+density+lipoproteins:+study+on+quail+CAM+assay+for+topical+delivery.">Hypericin fluorescence kinetics in the presence of low density lipoproteins: study on quail CAM assay for topical delivery.</a> General Physiology and Biophysic. 35 (4), 459-468 (2016).</li><li>Lenkavska, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Benefits+of+hypericin+transport+and+delivery+by+low-+and+high-density+lipoproteins+to+cancer+cells:+From+in+vitro+to+ex+ovo.">Benefits of hypericin transport and delivery by low- and high-density lipoproteins to cancer cells: From in vitro to ex ovo.</a> Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. 25, 214-224 (2019).</li><li>R&#252;ck, A., B&#246;hmler, A., Steiner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PDT+with+TOOKAD+studied+in+the+chorioallantoic+membrane+of+fertilized+eggs.">PDT with TOOKAD studied in the chorioallantoic membrane of fertilized eggs.</a> Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. 2 (1), 79-90 (2005).</li><li>Gottfried, V., Davidi, R., Averbuj, C., Kimel, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+damage+to+chorioallantoic+membrane+blood+vessels+by+porphycene-induced+photodynamic+therapy.">In vivo damage to chorioallantoic membrane blood vessels by porphycene-induced photodynamic therapy.</a> Journal of Photochemistry and Photobiology, B: Biology. 30 (2-3), 115-121 (1995).</li><li>Buzz&#225;, H. H., Silva, L. V., Moriyama, L. T., Bagnato, V. S., Kurachi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+vascular+effect+of+Photodynamic+Therapy+in+chorioallantoic+membrane+using+different+photosensitizers.">Evaluation of vascular effect of Photodynamic Therapy in chorioallantoic membrane using different photosensitizers.</a> Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology. 138, 1-7 (2014).</li><li>Dougherty, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photodynamic+therapy.">Photodynamic therapy.</a> Journal of the National Cancer Institute. 90, 889-905 (1998).</li><li>Xiang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+optoacoustic+monitoring+of+vascular+damage+during+photodynamic+therapy+treatment+of+tumor.">Real-time optoacoustic monitoring of vascular damage during photodynamic therapy treatment of tumor.</a> Journal of Biomedical Optics. 12 (1), 01400-01408 (2007).</li><li>Foty, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+hanging+drop+cell+culture+protocol+for+generation+of+3D+spheroids.">A simple hanging drop cell culture protocol for generation of 3D spheroids.</a> Journal of Visualized Experiments. (51), 2720 (2011).</li><li>Abramoff, M. D., Magelhaes, P. J., Ram, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Image+Processing+with+ImageJ.">Image Processing with ImageJ.</a> Biophotonics International. 11 (7), 36-42 (2004).</li><li>Chomczynski, P., Sacchi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-step+method+of+RNA+isolation+by+acid+guanidium+thiocyanate-phenol-chloroform+extraction.">Single-step method of RNA isolation by acid guanidium thiocyanate-phenol-chloroform extraction.</a> Analytical Biochemistry. 162 (1), 156-159 (1987).</li><li>M&#225;&#269;ajov&#225;, M., &#268;avarga, I., S&#253;korov&#225;, M., Valachovi&#269;, M., Novotn&#225;, V., Bil&#269;&#237;k, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+angiogenesis+by+topical+application+of+leptin+and+high+and+low+molecular+heparin+using+the+Japanese+quail+chorioallantoic+membrane+model.">Modulation of angiogenesis by topical application of leptin and high and low molecular heparin using the Japanese quail chorioallantoic membrane model.</a> Saudi Journal of Biological Sciences. 27 (6), 1488-1493 (2020).</li><li>Mangir, N., Dikici, S., Claeyssens, F., MacNeil, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+Ex+Ovo+chick+chorioallantoic+membrane+(CAM)+assay+to+evaluate+the+biocompatibility+and+angiogenic+response+to+biomaterials.">Using Ex Ovo chick chorioallantoic membrane (CAM) assay to evaluate the biocompatibility and angiogenic response to biomaterials.</a> ACS Biomaterials Science Engineering. 5 (7), 3190-3200 (2019).</li><li>Marshall, K. M., Kanczler, J. M., Oreffo, R. O. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolving+applications+of+the+egg:+chorioallantoic+membrane+assay+and+ex+vivo+organotypic+culture+of+materials+for+bone+tissue+engineering.">Evolving applications of the egg: chorioallantoic membrane assay and ex vivo organotypic culture of materials for bone tissue engineering.</a> Journal of Tissue Engineering. 11, 1-25 (2020).</li><li>Merlos Rodrigo, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extending+the+applicability+of+in+ovo+and+ex+ovo+chicken+chorioallantoic+membrane+assays+to+study+cytostatic+activity+in+neuroblastoma+cells.">Extending the applicability of in ovo and ex ovo chicken chorioallantoic membrane assays to study cytostatic activity in neuroblastoma cells.</a> Frontiers in Oncology. 11, 1-10 (2021).</li><li>Meta, M., Kundekov&#225;, B., Bil&#269;&#237;k, B., M&#225;&#269;ajov&#225;, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+silicone+ring+application+on+CAM+vasculature+in+Japanese+Quail+(Coturnix+japonica).">The effect of silicone ring application on CAM vasculature in Japanese Quail (Coturnix japonica).</a> Proceedings of the Student Scientific Conference Faculty of Natural Sciences of Comenius University, Bratislava, Slovakia. , 385-390 (2019).</li><li>Kohli, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-screening+the+intrinsic+angiogenic+capacity+of+biomaterials+in+an+optimised+ex+ovo+chorioallantoic+membrane+model.">Pre-screening the intrinsic angiogenic capacity of biomaterials in an optimised ex ovo chorioallantoic membrane model.</a> Journal of Tissue Engineering. 11, 1-15 (2020).</li><li>Kundekov&#225;, B., M&#225;&#269;ajov&#225;, M., Meta, M., &#268;avarga, I., Bil&#269;&#237;k, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chorioallantoic+membrane+models+of+various+avian+species+differences+and+applications.">Chorioallantoic membrane models of various avian species differences and applications.</a> Biology-Basel. 10 (4), 301 (2021).</li><li>Parsons-Wingerter, P., Elliott, K. E., Clark, J. I., Farr, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblast+growth+factor-2+selectively+stimulates+angiogenesis+of+small+vessels+in+arterial+tree.">Fibroblast growth factor-2 selectively stimulates angiogenesis of small vessels in arterial tree.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis and Vascular Biology. 20 (5), 1250-1256 (2000).</li><li>Buzz&#225;, H. H., Zangirolami, A. C., Davis, A., G&#243;mez-Garc&#237;a, P. B., Kurachi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+analysis+of+a+tumor+model+in+the+chorioallantoic+membrane+used+for+the+evaluation+of+different+photosensitizers+for+photodynamic+therapy.">Fluorescence analysis of a tumor model in the chorioallantoic membrane used for the evaluation of different photosensitizers for photodynamic therapy.</a> Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. 19, 78-83 (2017).</li></ol>

Başarılı ex ovo yetiştiriciliği için, yukarıdaki protokolü takip etmek önemlidir. Ayrıca, yumurtalar yeterince dikkatli açılmazsa veya ekim sırasında yetersiz nem varsa, yumurta sarısı çuvalı kabuğa yapışır ve sıklıkla yırtılır. Yaklaşık 60 saatlik yumurta inkübasyonu sırasında bir ex ovo yetiştiriciliğinin başlaması, embriyoların yüksek hayatta kalma oranını sağlar, çünkü bunlar zaten kullanımdan kurtulacak kadar büyüktür. Daha sonraki gelişim aşamalar?...

Tavuk koryoalantoik membran (CAM) modeli iyi bilinmektedir ve çeşitli araştırma alanlarında yaygın olarak kullanılmaktadır. Gaz değişimi ve mineral taşınımı sağlayan zengin vaskülarize ekstraembriyonik bir organdır1. Bu zarın şeffaflığı ve erişilebilirliği nedeniyle, bireysel kan damarları ve yapısal değişiklikleri gerçek zamanlı olarak gözlemlenebilir2. Avantajlarına rağmen, civciv CAM'ın diğer kuş türlerini kullanarak önlenebilecek bazı sınırlamaları (örneğin, daha büyük üreme tesisleri, yumurta üretimi ve yem tüketimi) vardır. Bu protokolde, Japon bıldırcın (Coturnix japonica) embriyosunu kullanan alternatif bir ex ovo CAM modeli tanımlanmıştır. Küçük boyutu nedeniyle, tavuk CAM'den çok daha fazla sayıda deneysel bireyin kullanılmasına izin verir. Ayrıca, bıldırcın embriyolarının 16 günlük embriyonik gelişiminin daha kısa olması başka bir avantajdır. Bıldırcın CAM üzerindeki ilk büyük damarlar embriyonik günde (ED) 7'de ortaya çıkar. Bu doğrudan civciv embriyo gelişimi ile karşılaştırılabilir (aşama 4-35); Bununla birlikte, gelişimin sonraki aşamaları artık karşılaştırılabilir değildir ve bıldırcın embriyosu3 için daha az zaman gerektirir. İlgi çekici olan, tavuk CAM'lerinin 4,5,6'sına benzer mikrovasküler dallanmanın düzenli olarak ortaya çıkmasıdır. Hızlı cinsel olgunlaşma, yüksek yumurta üretimi ve düşük maliyetli üreme, bu deneysel modelin kullanımını destekleyen diğer örneklerdir7.
Bir kuş CAM modeli genellikle fotodinamik terapi (PDT) çalışmalarında kullanılır8. PDT, çeşitli kanser türlerini (küçük lokalize tümörler) ve diğer onkolojik olmayan hastalıkları tedavi etmek için kullanılır. İlkesi, bir floresan ilacın, bir fotosensitizörün (PS) hasarlı dokuya verilmesi ve uygun dalga boyundaki ışıkla aktivasyonudur. Araştırmada kullanılan prospektif PS, başlangıçta tıbbi bitki St. John's wort'tan (Hypericum perforatum) izole edilen hiperisindir9. Bu bileşiğin güçlü ışığa duyarlı etkileri, fotokimyasal ve fotofiziksel özelliklerine dayanmaktadır. Bunlar, yaklaşık 600 nm'de floresan emisyonunu indükleyen 400-600 nm aralığında çoklu floresan uyarma zirveleri ile karakterize edilir. Spektral bant içindeki hiperisin absorpsiyon maksimumu 540-590 nm aralığındadır ve floresan maksimumu 590-640 nm aralığında9'dur. Bu ışığa duyarlı etkileri elde etmek için, hiperisin, yerel uygulamadan sonra 405 nm dalga boyunda lazer ışığı tarafından uyarılır10. Işık varlığında, hiperisin virücidal, antiproliferatif ve sitotoksik etkiler gösterebilir11, sistemik toksisite yoktur ve organizmadan hızla salınır. Hiperisin, suda çözünmeyen, floresan olmayan agregalar oluşturan lipofilik bir maddedir, bu nedenle polimerik nanopartiküller 12,13 veya yüksek ve düşük yoğunluklu lipoproteinler (HDL, LDL) 14,15 gibi çeşitli nanotaşıyıcı tipleri, hücrelere verilmesine ve nüfuz etmesine yardımcı olmak için kullanılır. TAT doğal olarak immün yetmezlikli bir sistem olduğundan, tümör hücreleri doğrudan membran yüzeyine implante edilebilir. Model ayrıca, PDT'ye bağlı vasküler hasarın derecesini tanımlanmış bir skor 16,17'ye göre kaydetmek için de çok uygundur. Fotodinamik tanı (PDD) için PDT'ye kıyasla daha düşük yoğunluklu ışık kullanılabilir. Menekşe uyarım LED ışığı altında dokunun izlenmesi aynı zamanda fotosensitizörlerin fotoaktivasyonuna yol açar18,19,20 Bu da floresan ışık emisyonuna neden olur, ancak bir PDT reaksiyonu başlatmak ve hücrelere zarar vermek için yeterli enerji sağlamaz. Tümör görselleştirme ve kullanılmış PSs14,15'in farmakokinetiğini teşhis etmek veya izlemek için iyi bir araçtır.
Bu makalede, bıldırcın ex ovo CAM testinin% 80'in üzerinde hayatta kalma oranları ile hazırlanması anlatılmaktadır. Bu ex ovo kültürü çok sayıda deneyde başarıyla uygulanmıştır.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>6-Well Cell Culture Plate</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>83.392</td>
			<td>Transparent polystyrene, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 Incubator ESCO CCL-0508</td>
			<td>ESCO, Singapore</td>
			<td>CCL-050B-8</td>
			<td>CO2 cell culture incubator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cryocut Leica CM 1800</td>
			<td>Reichert-Jung, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>digital camera Canon EOS 6D II</td>
			<td>Canon, Japan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>diode laser 405 nm</td>
			<td>Ocean Optics, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>67-68-5</td>
			<td>dimethyl sulfoxid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eosin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>15086-94-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ethanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fine brush size 2</td>
			<td>Faber-Castell</td>
			<td>281802</td>
			<td>brush for CAM separation and manipulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glutaraldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>111-30-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hematoxylin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>517-28-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hypericin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>84082-80-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>incubator Bios Midi</td>
			<td>Bios Sedl<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/63422/63422eq01.jpg" style="margin: auto;" />any, Czech Republic</td>
			<td></td>
			<td>Forced draught incubator for initial incubation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>incubator Memmert IF160</td>
			<td>Memmert, Germany</td>
			<td></td>
			<td>Forced air circulation incubator for CAM incubation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kaiser slimlite plano, LED light box</td>
			<td>Kaiser, Germany</td>
			<td>2453</td>
			<td>Transilluminator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LED light 405 nm</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>custom made circular LED light</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>macro lens Canon MP- E 65 mm f/2.8</td>
			<td>Canon, Japan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microscope Kapa 2000</td>
			<td>Kvant, Slovakia</td>
			<td></td>
			<td>optical microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microtome Auxilab 508</td>
			<td>Auxilab, Spain</td>
			<td></td>
			<td>manual rotary microtome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>30525-89-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraplast Plus</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3683</td>
			<td>parafin medium for tissue embedding</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4417</td>
			<td>Phosphate saline buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>scissors Castroviejo</td>
			<td>Orimed</td>
			<td>&#160;OR66-108</td>
			<td>micro scissors for CAM separation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>software ImageJ 1.53</td>
			<td>public domain</td>
			<td></td>
			<td>image processing and analysis program</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stock solution HDL</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>437641-10MG</td>
			<td>high density lipoproteins</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stock solution LDL</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>437644-10MG</td>
			<td>low density lipoproteins</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek O.C.T. Compound</td>
			<td>Sakura Finetek</td>
			<td>4583</td>
			<td>Optimal Cutting Temperature Compound 118 mL squeeze bottles</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quail chorioallantoic membrane - a tool for photodynamic diagnosis and therapy

Bir kuş embriyosunun koryoalantoik zarı (CAM), birincil solunum organı olarak işlev gören ince, ekstraembriyonik bir zardır. Özellikleri, anjiyogenez, tümör büyümesi, ilaç dağıtım sistemleri veya fotodinamik tanı (PDD) ve fotodinamik tedaviyi (PDT) incelemek için mükemmel bir in vivo deneysel model olmasını sağlar. Aynı zamanda, bu model deney hayvanlarının uygun bir alternatifle değiştirilmesi gerekliliğini de ele almaktadır. Ex ovo ekili embriyo, kolay madde uygulaması, erişimi, izleme ve dokümantasyon sağlar. En sık kullanılan civciv CAM'dir; ancak, bu makalede, Japon bıldırcın CAM'in düşük maliyetli ve yüksek verimli bir model olarak avantajları açıklanmaktadır. Diğer bir avantaj, daha yüksek deneysel ciroya izin veren daha kısa embriyonik gelişmedir. Bıldırcın TAT'ının kanser ve mikrobiyal enfeksiyonların PDD ve PDT'sine uygunluğu burada araştırılmıştır. Örnek olarak, fotosensitizör hiperisinin lipoproteinler veya nanopartiküller ile kombinasyon halinde bir dağıtım sistemi olarak kullanımı açıklanmaktadır. Beyaz ışıktaki görüntülerden kaynaklanan hasar skoru ve mor ışık altında (405 nm) CAM dokusunun floresan yoğunluğundaki değişiklikler, histolojik kesitlerin analizi ile birlikte belirlendi. Bıldırcın TAT PDT'nin vaskülatür ve doku üzerindeki etkisini açıkça göstermiştir. Ayrıca, kılcal kanama, tromboz, küçük damarların lizisi ve daha büyük damarların kanaması gibi değişiklikler gözlenebilir. Japon bıldırcın TAT fotodinamik tanı ve tedavi araştırmaları için umut verici bir in vivo modeldir ve tümör anjiyogenezinin yanı sıra antivasküler ve antimikrobiyal tedavi çalışmalarında da uygulamalar vardır.

Tümörün TAT yüzeyindeki lokalizasyonu beyaz ışıkta zordur. PDD'de kullanılan fotosensitizörün (burada, hiperisin) tümör tarafından seçici olarak alınması beklenir, ve tümörün görselleştirilmesine yardımcı olur. Hiperisin ilavesi ve floresan ışık kullanımı (örneğin, 405 nm) tümörün (skuamöz hücreli karsinom TE1) pozisyonunu çok iyi göstermiştir (Şekil 6A). Histolojik analiz, sağlıklı dokuları istila eden hayati tümör hücrelerini gösterdi. Genelli...

Watch this Scientific Journal Video about Quail Chorioallantoic Membrane - A Tool for Photodynamic Diagnosis and Therapy at JoVE.com

Quail Chorioallantoic Membrane - A Tool for Photodynamic Diagnosis and Therapy

Kuş embriyosunun koryoallantoik membranı (CAM), çeşitli araştırma alanları için çok yararlı ve uygulanabilir bir araçtır. Japon bıldırcın CAM'in özel bir ex ovo modeli, fotodinamik tedavi araştırması için uygundur.

Bıldırcın Korioallantoik Membran - Fotodinamik Tanı ve Tedavi için Bir Araç

The chorioallantoic membrane (CAM) of an avian embryo is a thin, extraembryonic membrane that functions as a primary respiratory organ. Its properties ...

Japon bıldırcın ex ovo kültürünün nasıl hazırlanacağını ve kanser veya mikrobiyal enfeksiyonların fotodinamik teşhisi ve tedavisi için kısaca koryoallantoik membran veya TAT'ın nasıl kullanılacağını göstereceğiz. Bu yöntemin avantajları hızlı gelişimsel büyüme, küçük boyut, dokuya iyi erişim ve kolay kullanımdır. Ayrıca, hayvan araştırması yapmak için 3R kuralının ilkelerine saygı duyar.Mesane, akciğerler veya plasenta gibi mukoza zarlarına yapısal benzerliği nedeniyle, potansiyel ilaçların in vivo testi, toksisite testi veya transplantasyon çalışmaları için uygundur. Prosedürü gösterenler, laboratuvarımdan doktora öğrencileri olan Barbora Kundekova ve Majlinda Meta olacak. Başlamak için, döllenmiş bıldırcın yumurtası kullanın, taze veya inkübasyonun başlamasından en fazla 4 ila 5 gün önce 10 ila 15 santigrat derecede saklanır.Sadece temiz ve hasarsız yumurtalar kullanın, daha sonra yumurtaları% 50 ila% 60 nem ve 37.5 santigrat derecede zorla çekilen bir inkübatörde, yumurta rotasyonları kapalıyken yatay olarak yerleştirilmiş yaklaşık 54 saat boyunca kuluçkaya yatırın. Yumurtayı döndürmeden yumurta yüzeyini% 70 etanol ile dezenfekte edin. Daha sonra, eldiven giyerken steril bir laminer akış kabininde, küçük steril cerrahi makas kullanarak yumurta kabuğunu açın ve içeriği 6 delikli bir kültür plakasına aktarın.Her yumurtadan sonra, makasları% 70 etanol ile dezenfekte edin. 6 delikli plakadaki boşluklara yaklaşık 5 mililitre steril su ekleyin, çünkü CAM'ın kurumasını önlemek için nem gereklidir. Daha sonra, yanlış uçlanmış embriyoları veya döllenmemiş yumurtaları bir vakum aspiratörü ile aspire edin, daha sonra% 80 ila% 90 nemde 37 santigrat derece sıcaklığı korurken embriyoları daha fazla deneye kadar bir inkübatöre yerleştirin.TAT yeterince geliştiğinde, genellikle embriyonik 7. günden itibaren, büyük kan damarlarından kaçınırken, küçük kılcal damarlar boyunca CAM yüzeyine sterilize edilmiş bir silikon halka yerleştirin. Steril koşullar altında, silikon halkaya uygun miktarda hiperisin çözeltisi 30 mikrolitre uygulayın ve embriyoları% 80 ila% 90 nemde 37 santigrat derecede bir inkübatörde tutun. Fotodinamik tanı koymak için, mor uyarım ışığı kullanarak TAT aydınlatın ve hiperisin uygulamasından sonra farklı zaman aralıklarında hiperisin ve CAM doku ve tümör hücrelerinin floresansını dijital kamera ile kaydedin.Araştırma TAT'ın beyaz ışıkta bir görüntüsünü gerektiriyorsa, ışık hiperisinin fotoaktivasyonunu tetiklediğinden, CAM'ı hiperisin uygulamasından önce ve doku fiksasyonundan kısa bir süre önce deneyin sonunda kaydedin. Hiperisin uygulamasından sonra fotodinamik tedaviyi gerçekleştirmek için, lazer ışınının silikon halka içindeki tüm alanı kaplaması için CAM'i optik fiberin altına yerleştirin. İn vivo ışınlama gerçekleştirdikten sonra, bu özel durumda, santimetre kare başına 285 miliwatt'lık bir akıcılık hızında 405 nanometrelik bir lazer ışığı ile, fotodinamik işlemden önce ve sonra beyaz ışık ve / veya floresan ışık kullanarak CAM'ı kaydedin.CAM dokusunu PBS'de% 4 paraformaldehit içeren bir yetiştirme plakasına en az 2 saat ve maksimum bir gece boyunca sabitleyin, ardından paraformaldehiti çıkarın ve CAM'den silikon halka içindeki dokunun bir kısmını dikkatlice kesin. Bütün bu adımlar bir duman davlumbazında yapılmalıdır. CAM dokusundan kesilen kısmı 10 dakika suda yıkayın ve daha sonra CAM dokusunu 3 dakika boyunca% 70 etanol, 2 dakika boyunca eozin çözeltisi, 5 dakika boyunca trosin% 96 etanol, 5 dakika boyunca% 100 etanol ve yeni bir Petri kabında 10 dakika boyunca iki kez ksilen içinde yerleştirerek artan alkol serisinde dehidratasyon yapın.Daha sonra, numuneleri bir spatula veya ince bir fırça kullanarak Petri kaplarındaki çözünmüş parafine mümkün olduğunca çabuk aktarın. 24 saat sonra, dokuyu histolojik kalıba yerleştirin, bir parafin gömme ortamı ile doldurun ve buzdolabında katılaşmasına izin verin, ardından katılaşmış CAM'i gömme ortamından kesin, tepsiye 90 derece çevirin, gömme ortamıyla tekrar doldurun ve katılaşmasına izin verin. PDT'ye bağlı hasarı belirlemek için histopatolojik analiz için bir mikrotom üzerinde 5 ila 10 mikrometrelik bölümler hazırlayın.Dondurulmuş CAM bölümlerini histolojiye hazırlamak için, cam kızağa doğal veya% 4 paraformaldehit sabit CAM'i dikkatlice monte edin, gömme kalıbını OCT ile ikiye kadar doldurun ve sıvı azot veya kuru buz ve etanol karışımında dondurun. Dondurulduktan sonra, CAM'ı dikkatlice eğin ve cam kaydırağından donmuş OCT ortamının üstüne kaydırın. Tekrar kalıba yerleştirin, OCT ortamı ile örtün ve daha önce açıklandığı gibi dondurun.CAM vaskülatürünün analizi için tüm CAM örneklerine ihtiyaç vardır. Laminer akış kabininde,% 4'lük bir paraform aldehit ve% 2 glutaraldehit önceden ısıtılmış bir fiksasyon çözeltisi ile taşma CAM, daha sonra 48 saat sonra fiksasyon çözeltisini çıkarın. Daha sonra, CAM'i mikro makas ve ince bir fırça ile embriyodan dikkatlice ayırın ve PBS'de yıkayın, ardından yıkanmış CAM'i bir cam slayta monte edin ve yavaşça kurumasını bekleyin.Daha sonra, homojen beyaz ışık kaynağı olarak bir transilluminatorda dijital kamera kullanarak slaytın fotoğrafını çekin. Tümörün TAT yüzeyindeki yeri, hiperisin ilavesi üzerine beyaz ışık ve floresan ışık altında görselleştirildi. Histolojik analiz, ödem ve membran kalınlaşması eşliğinde sağlıklı dokuları istila eden anormal skuamöz hücrelerin konsantrik yapılarını gösterdi.PDT ile tedaviden sonra, halka içindeki ve çevresindeki damar yoğunluğunda belirgin bir fark gözlendi. Fotosensitizörün varlığı olmayan lazer radyasyonu, herhangi bir tedavi olmaksızın kontrolle karşılaştırılabilir herhangi bir hasara neden olmadı. Hiperisin ile 3 saatlik inkübasyondan sonra, lazer ışınlaması, vaskülatüre büyük hasar veren agrega hiperisinin monomerizasyonunun neden olduğu floresan ile sonuçlandı.Histolojik analiz, tedavi edilmemiş kontrol TAT'ının nispeten eşit kalınlığa sahip olduğunu ortaya koymuştur. Bununla birlikte, PDT tedavisi TAT'ın daha ince ve daha kırılgan hale gelmesine neden olmuştur. Bıldırcın ex ovo CAM testinin nasıl hazırlanacağını ve nasıl kullanılacağını gösterdik.Yönergeleri korurken, bu metodolojinin ustalaşması kolaydır ve hızlı sonuçlar verebilir.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Anticancer Efficacy of Photodynamic Therapy with Lung Cancer-Targeted Nanoparticles

Akciğer Kanseri Hedefli Nanopartiküller ile Fotodinamik Tedavi antikanser Etkinliği

Photodynamic therapy (PDT) is a non-invasive and non-surgical method representing an attractive alternative choice for lung cancer treatment. ...

The Colon-26 Carcinoma Tumor-bearing Mouse as a Model for the Study of Cancer Cachexia

Kolon-26 Karsinoma Tümör taşıyan Kanser Kaşeksi Araştırmaları Modeli Olarak Fare

Cancer cachexia is the progressive loss of skeletal muscle mass and adipose tissue, negative nitrogen balance, anorexia, fatigue, inflammation, and ...

Induction and Diagnosis of Tumors in Drosophila Imaginal Disc Epithelia

Induction and Diagnosis of Tumors in Drosophila Imaginal Disc Epithelia

Tümörlerin İndüksiyon ve Teşhisi<em&gt; Drosophila</em&gt; Imaginal Disk Epiteli

In the early stages of cancer, transformed mutant cells show cytological abnormalities, begin uncontrolled overgrowth, and progressively disrupt tissue ...

Genome-wide RNAi Screening to Identify Host Factors That Modulate Oncolytic Virus Therapy

Tedavi Oncolytic virusu modüle ana faktörleri tanımlamak için genom çapında RNAi tarama

High-throughput genome-wide RNAi (RNA interference) screening technology has been widely used for discovering host factors that impact&#160;virus ...

Therapy Testing in a Spheroid-based 3D Cell Culture Model for Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

Baş ve boyun Skuamöz hücreli karsinom için bir küresel tabanlı 3D hücre kültür modelinde test terapi

Current treatment options for advanced and recurrent head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) enclose radiation and chemo-radiation approaches with ...

Dried Blood and Serum Spots As A Useful Tool for Sample Storage to Evaluate Cancer Biomarkers

Kan ve Serum lekeler kanser biyolojik değerlendirmek örnek depolama için yararlı bir araç olarak kurutulmuş

Blood sample quality is crucial to ensure accurate downstream analyses such as real-time PCR or ELISA. Correct storage of biological materials is the ...

A Three-dimensional Thymic Culture System to Generate Murine Induced Pluripotent Stem Cell-derived Tumor Antigen-specific Thymic Emigrants

Üç boyutlu Timik Kültür Sistemi Murine indüklenen Pluripotent Kök Hücre kaynaklı Tümör Antijen-spesifik Timik Emigrants oluşturmak için

The inheritance of pre-rearranged T cell receptors (TCRs) and their epigenetic rejuvenation make induced pluripotent stem cell (iPSC)-derived T cells a ...

A Spheroid Killing Assay by CAR T Cells

Bir küresel öldürme tahlil araba T hücreleri tarafından

Immunotherapy has become a field of growing interest in the fight against cancer otherwise untreatable. Among all immunotherapeutic methods, chimeric ...

Comparing Metastatic Clear Cell Renal Cell Carcinoma Model Established in Mouse Kidney and on Chicken Chorioallantoic Membrane

Fare Böbreği ve Tavuk Koryoallantoik Membranda Kurulan Metastatik Berrak Hücreli Renal Hücreli Karsinom Modelinin Karşılaştırılması

Metastatic clear cell renal cell carcinoma (ccRCC) is the most common subtype of kidney cancer. Localized ccRCC has a favorable surgical outcome. However, ...

Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers

Jinekolojik ve Ürolojik Kanserleri Incelemek Için Vivo Modelinde Tavuk Chorioallantoic Membran Kullanma

Mouse models are the benchmark tests for in vivo cancer studies. However, cost, time, and ethical considerations have led to calls for alternative in vivo ...