Name: large-scale, automated production of adipose-derived stem cell spheroids for 3d bioprinting
Uploaded: 2022-03-31T13:30:00
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Nous remercions l’Institut national de métrologie, de qualité et de technologie (INMETRO, RJ, Brésil) pour l’utilisation de ses installations. Cette étude a été partiellement soutenue par la Fondation Carlos Chagas Filho pour le soutien à la recherche de l’État de Rio de Janeiro (Faperj) (code financier: E26/202.682/2018 et E-26/010.001771/2019), le Conseil national pour le développement scientifique et technologique (CNPq) (code financier: 307460/2019-3) et l’Office de la recherche navale (ONR) (code financier: N62909-21-1-2091). Ce travail a été partiellement soutenu par le National Center of Science and Technology on Regenerative Medicine-INCT Regenera (http://www.inctregenera.org.br/).

Les ASC utilisés dans cette étude ont déjà été isolés à partir de donneurs humains en bonne santé et cryoconservés comme décrit14 selon le Comité d’éthique de la recherche de l’hôpital universitaire Clementino Fraga Filho, Université fédérale de Rio de Janeiro, Brésil (25818719.4.0000.5257). Voir le tableau des matériaux pour plus de détails concernant tous les matériaux et équipements utilisés dans cette étude.
1. Tryp...

<ol>
	<li>Gentile, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Filling+the+gaps+between+the+in+vivo+and+in+vitro+microenvironment:+Engineering+of+spheroids+for+stem+cell+technology.">Filling the gaps between the in vivo and in vitro microenvironment: Engineering of spheroids for stem cell technology.</a> Current Stem Cell Research &amp; Therapy. 11 (8), 652-665 (2016).</li><li>Bartosh, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aggregation+of+human+mesenchymal+stromal+cells+(MSCs)+into+3D+spheroids+enhances+their+antiinflammatory+properties.">Aggregation of human mesenchymal stromal cells (MSCs) into 3D spheroids enhances their antiinflammatory properties.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (31), 13724-13729 (2010).</li><li>Frith, J. E., Thomson, B., Genever, P. 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A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=label-free+and+nozzle-free+biofabrication+technology+using+magnetic+levitational+assembly.">label-free and nozzle-free biofabrication technology using magnetic levitational assembly.</a> Biofabrication. 10 (3), 034104 (2018).</li><li>Laschke, M. W., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Life+is+3D:+Boosting+spheroid+function+for+tissue+engineering.">Life is 3D: Boosting spheroid function for tissue engineering.</a> Trends in Biotechnology. 35 (2), 133-144 (2017).</li><li>Gutzweiler, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large+scale+production+and+controlled+deposition+of+single+HUVEC+spheroids+for+bioprinting+applications.">Large scale production and controlled deposition of single HUVEC spheroids for bioprinting applications.</a> Biofabrication. 9 (2), 025027 (2017).</li><li>Lin, H., Li, Q., Lei, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+tissues+using+human+pluripotent+stem+cell+spheroids+as+biofabrication+building+blocks.">Three-dimensional tissues using human pluripotent stem cell spheroids as biofabrication building blocks.</a> Biofabrication. 9 (2), 025007 (2017).</li><li>Groll, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biofabrication:+reappraising+the+definition+of+an+evolving+field.">Biofabrication: reappraising the definition of an evolving field.</a> Biofabrication. 8 (1), 013001 (2016).</li><li>Baptista, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+alternative+method+for+the+isolation+of+mesenchymal+stromal+cells+derived+from+lipoaspirate+samples.">An alternative method for the isolation of mesenchymal stromal cells derived from lipoaspirate samples.</a> Cytotherapy. 11 (6), 706-715 (2009).</li><li>Conway, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scalable+96-well+plate+based+iPSC+culture+and+production+using+a+robotic+liquid+handling+system.">Scalable 96-well plate based iPSC culture and production using a robotic liquid handling system.</a> Journal of Visualized Experiments:JoVE. (99), e52755 (2015).</li><li>Moutsatsou, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automation+in+cell+and+gene+therapy+manufacturing:+from+past+to+future.">Automation in cell and gene therapy manufacturing: from past to future.</a> Biotechnology Letters. 41 (11), 1245-1253 (2019).</li><li>Doulgkeroglou, M. -. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automation,+monitoring,+and+standardization+of+cell+product+manufacturing.">Automation, monitoring, and standardization of cell product manufacturing.</a> Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 8, 811 (2020).</li><li>Bhise, N. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+liver-on-a-chip+platform+with+bioprinted+hepatic+spheroids.">A liver-on-a-chip platform with bioprinted hepatic spheroids.</a> Biofabrication. 8 (1), 014101 (2016).</li><li>Daly, A. C., Kelly, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biofabrication+of+spatially+organised+tissues+by+directing+the+growth+of+cellular+spheroids+within+3D+printed+polymeric+microchambers.">Biofabrication of spatially organised tissues by directing the growth of cellular spheroids within 3D printed polymeric microchambers.</a> Biomaterials. 197, 194-206 (2019).</li><li>Lopa, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+biofabrication+of+3D+multicellular+spheroids+by+modulation+of+non-geometrical+parameters.">Microfluidic biofabrication of 3D multicellular spheroids by modulation of non-geometrical parameters.</a> Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 8, 366 (2020).</li><li>Meseguer-Ripolles, J., Kasarinaite, A., Lucendo-Villarin, B., Hay, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protocol+for+automated+production+of+human+stem+cell+derived+liver+spheres.">Protocol for automated production of human stem cell derived liver spheres.</a> STAR Protocols. 2 (2), 100502 (2021).</li><li>Lee, G. -. H., Suh, Y., Park, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+paired+bead+and+magnet+array+for+molding+microwells+with+variable+concave+geometries.">A paired bead and magnet array for molding microwells with variable concave geometries.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (131), e55548 (2018).</li><li>Becerra, D., Wu, T., Jeffs, S., Ott, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+culture+method+of+induced+pluripotent+stem+cell-derived+alveolar+epithelial+cells.">High-throughput culture method of induced pluripotent stem cell-derived alveolar epithelial cells.</a> Tissue Engineering Part C - Methods. 27 (12), 639-648 (2021).</li><li>Mironov, V., Kasyanov, V., Markwald, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+printing:+from+bioprinter+to+organ+biofabrication+line.">Organ printing: from bioprinter to organ biofabrication line.</a> Current Opinion Biotechnology. 22 (5), 667-673 (2011).</li><li>De Moor, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+fabrication+of+vascularized+spheroids+for+bioprinting.">High-throughput fabrication of vascularized spheroids for bioprinting.</a> Biofabrication. 10 (3), 035009 (2018).</li></ol>

Cet article présente la génération à grande échelle de sphéroïdes ASC à l’aide d’un système de pipette automatisé. L’étape critique du protocole consiste à configurer avec précision le logiciel pour assurer le volume correct de suspension de cellule, la vitesse et la distance pour le pipetage. Les paramètres décrits dans le protocole ont été déterminés après un certain nombre d’essais afin d’optimiser la distribution de la suspension de cellules ASC dans les puits de plaques de 12 puits cont...

Les sphéroïdes sont considérés comme une approche sans échafaudage dans l’ingénierie tissulaire. Les ASC sont capables de former des sphéroïdes par le processus d’auto-assemblage. La microarchitecture 3D du sphéroïde augmente le potentiel de régénération des ASC, y compris la capacité de différenciation en plusieurs lignées 1,2,3. Ce groupe de recherche a travaillé avec des sphéroïdes ASC pour l’ingénierie du cartilage et des tissus osseux 4,5,6. Plus important encore, les sphéroïdes sont considérés comme des éléments constitutifs de la biofabrication des tissus et des organes, principalement en raison de leur capacité de fusion.
L’utilisation des sphéroïdes pour la formation des tissus dépend de trois points principaux: (1) le développement de méthodes robotiques standardisées et évolutives pour leur biofabrication7, (2) le phénotypage systématique des sphéroïdes tissulaires8, (3) le développement de méthodes pour l’assemblage de tissus 3D9. Ces sphéroïdes peuvent être formés avec différents types de cellules et obtenus par diverses méthodes, y compris la goutte suspendue, la réagrégation, la microfluidique et les micromoules 8,9,10. Chacune de ces méthodes présente des avantages et des inconvénients liés à l’homogénéité de la taille et de la forme des sphéroïdes, à la récupération des sphéroïdes après leur formation, au nombre de sphéroïdes produits, à l’automatisation des processus, à l’intensité de la main-d’œuvre et aux coûts11.
Dans la méthode du micromoulage, les cellules sont distribuées et déposées au fond du micromoulage en raison de la gravité. L’hydrogel non adhésif ne permet pas aux cellules d’adhérer au fond, et les interactions cellule-à-cellule conduisent à la formation d’un seul sphéroïde par récession 8,12. Cette méthode de biofabrication génère des sphéroïdes de taille homogène et contrôlée, peut être robotisée pour une production à grande échelle de manière rapide avec un minimum d’effort, et présente de bons facteurs critiques de rentabilité dans la conception d’une biofabrication de sphéroïde tissulaire 7,8. Cette méthode peut être appliquée pour former des sphéroïdes de n’importe quelle lignée cellulaire afin de préparer un nouveau type de tissu avec des caractéristiques prévisibles, optimales et contrôlables8.
La biofabrication est définie comme « la génération automatisée de produits biologiquement fonctionnels avec une organisation structurelle... »13. Par conséquent, la production automatisée de sphéroïdes est considérée comme la première étape obligatoire pour le développement d’une ligne de biofabrication, qui se poursuit dans le processus de bio-impression 3D et se termine par la maturation complète du tissu bioimprimé par fusion sphéroïde. Dans cette étude, pour améliorer l’évolutivité de la biofabrication des sphéroïdes ASC, nous utilisons un système de pipetage automatisé pour ensemencer la suspension cellulaire, assurant ainsi l’homogénéité de la taille et de la forme des sphéroïdes. Cet article montre qu’il était possible de produire un grand nombre (des milliers) de sphéroïdes nécessaires aux approches de bio-impression 3D pour biofabriquer des modèles tissulaires plus complexes.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>12-well plastic plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3512</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL centrifuge tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS430828</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EpMotion 5070</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5070000282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>epT.I.P.S. Motion</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30015231</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15576028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10082147</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low Glucose Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium (DMEM LOW)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>31600034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroTissues 3D Petri Dish micro-mold spheroids - 16 x 16 array</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Z764000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroTissues 3D Petri Dish micro-mold spheroids - 9 x 9 array</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Z764019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phosphate saline buffer (PBS)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>806552</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S8776</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tissue culture flask</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430720U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>trypan</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>17-942E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>trypsin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>27250018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ultrapure agarose</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>16500100</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

large-scale, automated production of adipose-derived stem cell spheroids for 3d bioprinting

Les cellules stromales/souches (ASC) dérivées des adiposes sont une sous-population de cellules présentes dans la fraction vasculaire stromale du tissu adipeux sous-cutané humain reconnu comme une source classique de cellules stromales/souches mésenchymateuses. De nombreuses études ont été publiées avec des ASC pour des approches d’ingénierie tissulaire basées sur des échafaudages, qui ont principalement exploré le comportement de ces cellules après leur ensemencement sur des échafaudages bioactifs. Cependant, des approches sans échafaudage émergent pour concevoir des tissus in vitro et in vivo, principalement en utilisant des sphéroïdes, afin de surmonter les limites des approches basées sur des échafaudages.
Les sphéroïdes sont des microtissus 3D formés par le processus d’auto-assemblage. Ils peuvent mieux imiter l’architecture et le microenvironnement des tissus natifs, principalement en raison du grossissement des interactions de cellule à cellule et de matrice de cellule à extracellulaire. Récemment, les sphéroïdes sont principalement explorés en tant que modèles de maladies, études de dépistage de médicaments et éléments constitutifs de la bioimpression 3D. Cependant, pour les approches de bio-impression 3D, de nombreux sphéroïdes, de taille et de forme homogènes, sont nécessaires pour biofabriquer des modèles complexes de tissus et d’organes. De plus, lorsque les sphéroïdes sont produits automatiquement, il y a peu de risques de contamination microbiologique, ce qui augmente la reproductibilité de la méthode.
La production à grande échelle de sphéroïdes est considérée comme la première étape obligatoire pour le développement d’une ligne de biofabrication, qui se poursuit dans le processus de bioimpression 3D et se termine par la maturation complète de la construction tissulaire dans les bioréacteurs. Cependant, le nombre d’études qui ont exploré la production de sphéroïdes ASC à grande échelle est encore rare, ainsi que le nombre d’études qui ont utilisé des sphéroïdes ASC comme éléments constitutifs de la bioimpression 3D. Par conséquent, cet article vise à montrer la production à grande échelle de sphéroïdes ASC à l’aide d’une technique d’hydrogel micromoulé non adhésif répandant des sphéroïdes ASC comme éléments constitutifs pour les approches de bioimpression 3D.

Le système de pipette automatique peut ensemencer la suspension de la cellule ASC dans 12 puits d’une plaque de 12 puits en 15 min. L’utilisation des 81 hydrogels micromoulés non adhérents produira 972 sphéroïdes à la fin du protocole. L’utilisation des 256 hydrogels micromoulés non adhérents produira 3 072 sphéroïdes à la fin du protocole. Les sphéroïdes ASC ont été analysés pour l’homogénéité de leur taille et de leur forme. Les sphéroïdes ASC des micromoules avec 81 récessions ont montré...

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Large-Scale, Automated Production of Adipose-Derived Stem Cell Spheroids for 3D Bioprinting

Ici, nous décrivons la production à grande échelle de sphéroïdes stromaux / cellules souches (ASC) dérivés des adipeux à l’aide d’un système de pipetage automatisé pour ensemencer la suspension cellulaire, assurant ainsi l’homogénéité de la taille et de la forme des sphéroïdes. Ces sphéroïdes ASC peuvent être utilisés comme blocs de construction pour les approches de bio-impression 3D.

Production automatisée à grande échelle de sphéroïdes de cellules souches dérivées de cellules adipeuses pour la bioimpression 3D

Adipose-derived stromal/stem cells (ASCs) are a subpopulation of cells found in the stromal vascular fraction of human subcutaneous adipose tissue ...

L’importance du protocole repose sur la réduction des erreurs humaines et de la contamination microbiologique. En outre, responsable de produire des milliers de sphéroïdes pour les approches de bio-impression 3D. Le principal avantage de cette question, cependant, est qu’il est optimisé les heures de travail.Les paramètres logiciels sont cruciaux car ils peuvent influencer la qualité finale des sphéroïdes. Et le meilleur conseil serait d’effectuer des tests uniquement avec des milieux de culture cellulaire. La démonstration visuelle de cette méthode est essentielle car il s’agit d’une ancienne méthode traditionnelle de culture cellulaire 3D basée sur Begin en récoltant la suspension de cellules souches avec une pipette sérologique de 10 millilitres et en la transférant dans un tube de centrifugeuse de 50 millilitres.Ensuite, centrifugez à 400 RCF pendant 5 minutes pour obtenir la pastille ASC. Remettez en suspension la pastille de cellule en utilisant DMEM-Low contenant 10% FBS. Après avoir effectué le comptage cellulaire, prenez les ASC dans des tubes centrifuges séparés de 15 millilitres pour ensemencer les récessions 81 et 256 micromoulées avec de l’hydrogel non adhérent.Reportez-vous au manuscrit textuel pour plus de détails sur le nombre de cellules utilisées. Ajouter 500 microlitres de solution stérile d’agarose ultra pure à 2% au centre d’un moule en silicone contenant 81 ou 256 renfoncements circulaires. Après 40 minutes, démoulez l’agarose ultra pure du moule en silicone et placez-la dans un puits d’une plaque en plastique à 12 puits.Ajouter deux millilitres de DMEM-Low dans le puits avec l’agarose micromoulée et incuber à 37 degrés Celsius avec un apport en dioxyde de carbone atmosphérique de 5% pendant au moins 12 heures avant d’ensemencer les ASC. Assurez-vous que le flux laminaire est activé et que le flux d’air de l’armoire fonctionne correctement. Vérifiez que l’équipement est connecté à la tension correcte et que la tablette est connectée à l’équipement.Vérifiez si la hauteur du verre de protection de l’armoire est au même niveau que le marquage du capteur de l’équipement. Appuyez sur le bouton marche ou arrêt sur le côté gauche de l’équipement. Ensuite, attendez que la tablette et l’équipement démarrent.Placez les boîtes de pointe, le rack pour les tubes centrifuges et la plaque contenant l’hydrogel d’agarose micromoulé dans l’espace de travail de l’équipement. Dans le logiciel ouvert sur la tablette, cliquez sur LabWare Editor. Installez une table de travail virtuelle et choisissez les positions des pipettes, des boîtes à embouts, du rack pour les tubes en plastique et des plaques.Cliquez sur le bouton « passer à la procédure » pour inclure tous les paramètres et commandes effectués par l’équipement tout au long de l’expérience. Attendez qu’une barre d’outils et une liste de procédures s’ouvrent dans le logiciel. Initialement, pour indiquer les commandes, incorporez le nombre d’échantillons à pipeter et faites-le glisser vers la liste des procédures.Ensuite, cliquez sur le bouton de commande transfert de réactif sur le logiciel pour transférer la suspension ASC vers les puits de la plaque de 12 puits contenant les micro-moules et faites-la glisser vers la liste des procédures. Cliquez sur propriétés pour configurer les positions de début et de fin de l’équipement pour transférer l’échantillon. Attendez que le logiciel revienne à la page Table de travail.Configurez les paramètres d’ensemencement automatisé des ASC comme décrit dans le manuscrit textuel. Sélectionnez l’eau comme type de liquide standard. Cliquez sur le bouton options pour configurer les paramètres afin de créer une suspension homogène des ASC comme décrit dans le manuscrit textuel.Cliquez sur le bouton avec un symbole de coche sur la barre supérieure du logiciel pour vous assurer qu’il n’y a pas d’erreur de programmation. Cliquez sur le bouton de lecture dans la barre supérieure du logiciel pour démarrer le programme. Laissez l’équipement démarrer comme prévu.Et attendez qu’il fasse un son indiquant qu’il a terminé. Collectez la plaque de 12 puits puis incubez-la à 37 degrés Celsius avec un apport en dioxyde de carbone atmosphérique de 5% pendant au moins 18 heures, pour permettre la formation de sphéroïdes complets et compacts. Récoltez manuellement les sphéroïdes après un, trois et sept jours de culture pour analyse.Rincez le milieu avec une micro pipette pour libérer les sphéroïdes de l’hydrogel d’agarose micromoulé non adhérent. Collectez les sphéroïdes manuellement à l’aide d’une micro pipette et transférez-les dans un tube de centrifugeuse de 15 millilitres. Au total, 85 et 160 sphéroïdes ont été mesurés à partir d’hydrogels non adhésifs micromoulés avec respectivement 81 et 256 récessions circulaires.Le système de pipette automatique a ensemencé la suspension de la cellule ASC dans 12 puits d’une seule plaque de 12 puits en 15 minutes. En utilisant les 81 hydrogels micromoulés non adhérents, produit 972 sphéroïdes dans cette étude. Alors que les 256 hydrogels micromoulés non adhérents, ont produit 3072 sphéroïdes.Les sphéroïdes ASC ont été analysés pour l’homogénéité de leur taille et de leur forme. Les stéroïdes ASC provenant de micro-moules avec 81 récessions ont montré un diamètre homogène pendant la période de culture. Contrairement aux stéroïdes ASC provenant de micro-moules avec 256 récessions, le ratio de diamètres le plus petit et le plus grand était proche de un dans les sphéroïdes ASC de micro-moules avec 81 et 256 récessions.Les analyses de viabilité, de morphologie et de force ont fourni des preuves de la production réussie à grande échelle de sphéroïdes ASC. La plupart des cas est de s’assurer que le problème a été résolu brusquement sans erreurs.

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High-capacity adenoviral vectors (HCAdV) devoid of all viral coding sequences represent one of the most advanced gene delivery vectors due to their high ...

Micropatterning and Assembly of 3D Microvessels

Micromodelage et l&#39;Assemblée des microvaisseaux 3D

In vitro platforms to study endothelial cells and vascular biology are largely limited to 2D endothelial cell culture, flow chambers with polymer or glass ...

Automated Robotic Dispensing Technique for Surface Guidance and Bioprinting of Cells

Automated Robotic Dispensing Technique d&#39;orientation de surface et Bioprinting de cellules

This manuscript describes the introduction of cell guidance features followed by the direct delivery of cells to these features in a hydrogel bioink using ...

Creation of Cardiac Tissue Exhibiting Mechanical Integration of Spheroids Using 3D Bioprinting

Création d&#39;un tissu cardiaque exposant l&#39;intégration mécanique des sphéroïdes à l&#39;aide de la bioprinterie 3D

This protocol describes 3D bioprinting of cardiac tissue without the use of biomaterials, using only cells. Cardiomyocytes, endothelial cells and ...

Bioprinting of Cartilage and Skin Tissue Analogs Utilizing a Novel Passive Mixing Unit Technique for Bioink Precellularization

Bioprinting du Cartilage et peau tissus analogues utilisant un roman passif unité Technique de mélange pour Bioink Precellularization

Bioprinting is a powerful technique for the rapid and reproducible fabrication of constructs for tissue engineering applications. In this study, both ...

Direct Bioprinting of 3D Multicellular Breast Spheroids onto Endothelial Networks

Bioimpression directe de sphéroïdes mammaires multicellulaires 3D sur les réseaux endothéliales

Bioprinting is emerging as a promising tool to fabricate 3D human cancer models that better recapitulate critical hallmarks of in vivo tissue ...

Preparation and Characterization of Graphene-Based 3D Biohybrid Hydrogel Bioink for Peripheral Neuroengineering

Préparation et caractérisation de bio-encre d’hydrogel biohybride 3D à base de graphène pour la neuro-ingénierie périphérique

Peripheral neuropathies can occur as a result of axonal damage, and occasionally due to demyelinating diseases. Peripheral nerve damage is a global ...

Formulating and Characterizing an Exosome-based Dopamine Carrier System

Formulation et caractérisation d’un système de transport de dopamine à base d’exosomes

Exosomes between 40 and 200 nm in size constitute the smallest subgroup of extracellular vesicles. These bioactive vesicles secreted by cells play an ...