Name: development of organoids from mouse pituitary as in vitro model to explore pituitary stem cell biology
Uploaded: 2022-02-25T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Development of Organoids from Mouse Pituitary as In Vitro Model to Explore Pituitary Stem Cell Biology at JoVE.com

تم دعم هذا العمل من خلال منح من صندوق أبحاث KU Leuven وصندوق البحث العلمي (FWO) - فلاندرز. يتم دعم E.L. (11A3320N) ، و C.N. (1S14218N) من خلال زمالة الدكتوراه من FWO / FWO-SB.

تمت الموافقة على التجارب على الحيوانات لهذه الدراسة من قبل لجنة KU Leuven الأخلاقية للتجارب على الحيوانات (P153/2018). تم إيواء جميع الفئران في منشأة الحيوانات في الجامعة في ظل ظروف موحدة (درجة حرارة ثابتة تبلغ 23 ± 1.5 درجة مئوية ، والرطوبة النسبية 40٪ -60٪ ، ودورة نهارية / ليلية من 12 ساعة) ، مع إمكانية ا?...

<ol>
	<li>Melmed, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The pituitary. 3rd ed. , 1 (2011).</li><li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adult+pituitary+contains+a+cell+population+displaying+stem/progenitor+cell+and+early-embryonic+characteristics.">The adult pituitary contains a cell population displaying stem/progenitor cell and early-embryonic characteristics.</a> Endocrinology. 146 (9), 3985-3998 (2005).</li><li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pituitary+progenitor+cells+tracked+down+by+side+population+dissection.">Pituitary progenitor cells tracked down by side population dissection.</a> Stem Cells. 27 (5), 1182-1195 (2009).</li><li>Fauquier, T., Rizzoti, K., Dattani, M., Lovell-Badge, R., Robinson, I. C. A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SOX2-expressing+progenitor+cells+generate+all+of+the+major+cell+types+in+the+adult+mouse+pituitary+gland.">SOX2-expressing progenitor cells generate all of the major cell types in the adult mouse pituitary gland.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (8), 2907-2912 (2008).</li><li>Rizzoti, K., Akiyama, H., Lovell-Badge, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mobilized+adult+pituitary+stem+cells+contribute+to+endocrine+regeneration+in+response+to+physiological+demand.">Mobilized adult pituitary stem cells contribute to endocrine regeneration in response to physiological demand.</a> Cell Stem Cell. 13 (4), 419-432 (2013).</li><li>Andoniadou, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sox2++stem/progenitor+cells+in+the+adult+mouse+pituitary+support+organ+homeostasis+and+have+tumor-inducing+potential.">Sox2+ stem/progenitor cells in the adult mouse pituitary support organ homeostasis and have tumor-inducing potential.</a> Cell Stem Cell. 13 (4), 433-445 (2013).</li><li>Nys, C., Vankelecom, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pituitary+disease+and+recovery:+How+are+stem+cells+involved.">Pituitary disease and recovery: How are stem cells involved.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 525 (4), 111176 (2021).</li><li>Schneider, H. J., Aimaretti, G., Kreitschmann-Andermahr, I., Stalla, G. K., Ghigo, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypopituitarism.">Hypopituitarism.</a> Lancet. 369 (9571), 1461-1470 (2007).</li><li>Fu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adult+pituitary+shows+stem/progenitor+cell+activation+in+response+to+injury+and+is+capable+of+regeneration.">The adult pituitary shows stem/progenitor cell activation in response to injury and is capable of regeneration.</a> Endocrinology. 153 (7), 3224-3235 (2012).</li><li>Willems, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+in+the+pituitary+after+cell-ablation+injury:+time-related+aspects+and+molecular+analysis.">Regeneration in the pituitary after cell-ablation injury: time-related aspects and molecular analysis.</a> Endocrinology. 157 (2), 705-721 (2016).</li><li>Gremeaux, L., Fu, Q., Chen, J., Vankelecom, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activated+phenotype+of+the+pituitary+stem/progenitor+cell+compartment+during+the+early-postnatal+maturation+phase+of+the+gland.">Activated phenotype of the pituitary stem/progenitor cell compartment during the early-postnatal maturation phase of the gland.</a> Stem Cells and Development. 21 (5), 801-813 (2012).</li><li>Zhu, X., Tollkuhn, J., Taylor, H., Rosenfeld, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch-dependent+pituitary+SOX2++stem+cells+exhibit+a+timed+functional+extinction+in+regulation+of+the+postnatal+gland.">Notch-dependent pituitary SOX2+ stem cells exhibit a timed functional extinction in regulation of the postnatal gland.</a> Stem Cell Reports. 5 (6), 1196-1209 (2015).</li><li>Russell, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pituitary+stem+cells+produce+paracrine+WNT+signals+to+control+the+expansion+of+their+descendant+progenitor+cells.">Pituitary stem cells produce paracrine WNT signals to control the expansion of their descendant progenitor cells.</a> eLife. 10 (1), 59142 (2021).</li><li>Vennekens, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-6+is+an+activator+of+pituitary+stem+cells+upon+local+damage,+a+competence+quenched+in+the+aging+gland.">Interleukin-6 is an activator of pituitary stem cells upon local damage, a competence quenched in the aging gland.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 118 (25), 2100052118 (2021).</li><li>Mertens, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pituitary+tumors+contain+a+side+population+with+tumor+stem+cell-associated+characteristics.">Pituitary tumors contain a side population with tumor stem cell-associated characteristics.</a> Endocrine-Related Cancer. 22 (4), 481-504 (2015).</li><li>Laporte, E., Vennekens, A., Vankelecom, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pituitary+remodeling+throughout+life:+are+resident+stem+cells+involved.">Pituitary remodeling throughout life: are resident stem cells involved.</a> Frontiers in Endocrinology. 11 (1), 604519 (2021).</li><li>Yoshida, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+adult+pituitary+stem/progenitor+cell+clusters+located+in+the+parenchyma+of+the+rat+anterior+lobe.">Isolation of adult pituitary stem/progenitor cell clusters located in the parenchyma of the rat anterior lobe.</a> Stem Cell Research. 17 (2), 318-329 (2016).</li><li>Cox, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoids+from+pituitary+as+novel+research+model+to+study+pituitary+stem+cell+biology.">Organoids from pituitary as novel research model to study pituitary stem cell biology.</a> Journal of Endocrinology. 240 (2), 287-308 (2019).</li><li>Denef, C., Hautekeete, E., De Wolf, A., Vanderschueren, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pituitary+basophils+from+immature+male+and+female+rats:+distribution+of+gonadotrophs+and+thyrotrophs+as+studied+by+unit+gravity+sedimentation.">Pituitary basophils from immature male and female rats: distribution of gonadotrophs and thyrotrophs as studied by unit gravity sedimentation.</a> Endocrinology. 130 (3), 724-735 (1978).</li><li>Vander Schueren, B., Denef, C., Cassiman, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructural+and+functional+characteristics+of+rat+pituitary+cell+aggregates.">Ultrastructural and functional characteristics of rat pituitary cell aggregates.</a> Endocrinology. 110 (2), 513-523 (1982).</li><li>Claes, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+stem+cell-derived+monocytes+and+microglia-like+cells+reveal+impaired+amyloid+plaque+clearance+upon+heterozygous+or+homozygous+loss+of+TREM2.">Human stem cell-derived monocytes and microglia-like cells reveal impaired amyloid plaque clearance upon heterozygous or homozygous loss of TREM2.</a> Alzheimer's and Dementia. 15 (3), 453-464 (2019).</li><li>Trompeter, H. -. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNAs+miR-26a,+miR-26b,+and+miR-29b+accelerate+osteogenic+differentiation+of+unrestricted+somatic+stem+cells+from+human+cord+blood.">MicroRNAs miR-26a, miR-26b, and miR-29b accelerate osteogenic differentiation of unrestricted somatic stem cells from human cord blood.</a> BMC Genomics. 14, 111 (2013).</li><li>Suga, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-formation+of+functional+adenohypophysis+in+three-dimensional+culture.">Self-formation of functional adenohypophysis in three-dimensional culture.</a> Nature. 480 (7375), 57-62 (2011).</li><li>Matsumoto, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Congenital+pituitary+hypoplasia+model+demonstrates+hypothalamic+OTX2+regulation+of+pituitary+progenitor+cells.">Congenital pituitary hypoplasia model demonstrates hypothalamic OTX2 regulation of pituitary progenitor cells.</a> Journal of Clinical Investigation. 130 (2), 641-654 (2019).</li><li>Kanie, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+anti-PIT-1+antibody+syndrome:+PIT-1+presentation+by+HLA+class+I+on+anterior+pituitary+cells.">Pathogenesis of anti-PIT-1 antibody syndrome: PIT-1 presentation by HLA class I on anterior pituitary cells.</a> Journal of the Endocrine Society. 3 (11), 1969-1978 (2019).</li><li>Lee, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+evolution+and+drug+response+in+patient-derived+organoid+models+of+bladder+cancer.">Tumor evolution and drug response in patient-derived organoid models of bladder cancer.</a> Cell. 173 (2), 515-528 (2018).</li><li>Yan, H. H. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comprehensive+human+gastric+cancer+organoid+biobank+captures+tumor+subtype+heterogeneity+and+enables+therapeutic+screening.">A comprehensive human gastric cancer organoid biobank captures tumor subtype heterogeneity and enables therapeutic screening.</a> Cell Stem Cell. 23 (6), 882-897 (2018).</li><li>Nolan, L. A., Kavanagh, E., Lightman, S. L., Levy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anterior+pituitary+cell+population+control:+basal+cell+turnover+and+the+effects+of+adrenalectomy+and+dexamethasone+treatment.">Anterior pituitary cell population control: basal cell turnover and the effects of adrenalectomy and dexamethasone treatment.</a> Journal of Neuroendocrinology. 10 (3), 207-215 (1998).</li></ol>

تمثل المواد العضوية المشتقة من AL ، كما هو موضح هنا ، نموذجا بحثيا قويا لدراسة الخلايا الجذعية النخامية في المختبر. في الوقت الحاضر ، هذا النهج العضوي هو الأداة الوحيدة المتاحة لنمو وتوسيع الخلايا الجذعية الأولية للنخامة بشكل موثوق وقوي. وقد أبلغ سابقا عن نموذج عضوي للغدة النخامية مش?...

الغدة النخامية هي غدة صماء صغيرة تقع في قاعدة الدماغ ، حيث ترتبط بمنطقة ما تحت المهاد. تدمج الغدة المدخلات الطرفية والمركزية (تحت المهاد) لتوليد إطلاق هرمون مضبوط ومنسق ، وبالتالي تنظيم أعضاء الغدد الصماء المستهدفة في المصب (مثل الغدد الكظرية والغدد التناسلية) لإنتاج الهرمونات المناسبة في الوقت المناسب. الغدة النخامية هي المنظم الرئيسي لنظام الغدد الصماء ، وبالتالي يطلق عليها بحق الغدة الرئيسية1.
تتكون الغدة النخامية للفأر من ثلاثة فصوص (الشكل 1) ، أي الفص الأمامي (AL) ، والفص الوسيط (IL) ، والفص الخلفي (PL). الغدد الصماء الرئيسية AL يحتوي على خمسة أنواع من الخلايا الهرمونية, بما في ذلك somatotropes التي تنتج هرمون النمو (GH); اللاكتوتروبات التي تولد البرولاكتين (PRL) ؛ القشرية التي تفرز هرمون قشر الكظر (ACTH) ؛ الثيروتروب المسؤول عن إنتاج هرمون تحفيز الغدة الدرقية (TSH) ؛ والغدد التناسلية التي تصنع الهرمون الملوتن (LH) والهرمون المنبه للجريب (FSH). يتكون PL من إسقاطات محورية من منطقة ما تحت المهاد حيث يتم تخزين هرمونات الأوكسيتوسين وفاسوبريسين (هرمون مضاد لإدرار البول). يقع IL بين AL و PL ويضم الميلانوتروب التي تنتج هرمون تحفيز الخلايا الصباغية (MSH). في الغدة النخامية البشرية ، يتراجع IL أثناء التطور ، وتنتشر الميلانوتروب داخل AL1. بالإضافة إلى خلايا الغدد الصماء ، تحتوي الغدة النخامية أيضا على مجموعة من الخلايا الجذعية ، تتميز بشكل أساسي بعامل النسخ SOX2 2,3,4,5,6. تقع خلايا SOX2+ هذه في المنطقة الهامشية (MZ) ، البطانة الظهارية للشق (تجويف بقايا جنينية بين AL و IL) ، أو تنتشر كمجموعات في جميع أنحاء حمة AL ، مما يقترح اثنين من منافذ الخلايا الجذعية في الغدة (الشكل 1) 2،3،4،5،6.
بالنظر إلى الطبيعة التي لا غنى عنها للغدة النخامية ، يرتبط خلل في الغدة بأمراض خطيرة. يمكن أن يحدث فرط الغدة النخامية (الذي يتميز بالإفراط في إفراز واحد أو أكثر من الهرمونات) وقصور الغدة النخامية (إنتاج معيب أو مفقود لواحد أو أكثر من الهرمونات) بسبب أورام الغدد الصماء العصبية النخامية (PitNETs ؛ على سبيل المثال ، الأورام المنتجة ل ACTH التي تؤدي إلى مرض كوشينغ) أو بسبب العيوب الوراثية (على سبيل المثال ، نقص هرمون النمو مما يؤدي إلى التقزم)7. بالإضافة إلى ذلك ، فإن جراحة الغدة النخامية (على سبيل المثال ، لإزالة الأورام) ، والالتهابات (على سبيل المثال ، السل تحت المهاد والغدة النخامية ، أو العدوى التي تلي التهاب السحايا الجرثومي أو التهاب الدماغ) ، ومتلازمة شيهان (نخر بسبب عدم كفاية تدفق الدم بسبب فقدان الدم الشديد عند الولادة) ، وسكتة الغدة النخامية وإصابة الدماغ الرضحية هي أسباب مهمة أخرى لنقص وظائف الغدة النخامية8 . وقد تبين أن الغدة النخامية للفأر تمتلك القدرة التجديدية ، حيث تكون قادرة على إصلاح الضرر المحلي الناجم عن الاستئصال المعدل وراثيا لخلايا الغدد الصماء 9,10. تتفاعل الخلايا الجذعية SOX2+ بشكل حاد مع الإصابة التي تظهر نمطا ظاهريا نشطا ، يتميز بانتشار معزز (مما يؤدي إلى توسع الخلايا الجذعية) وزيادة التعبير عن العوامل والمسارات المرتبطة بالجذعية (على سبيل المثال ، WNT / NOTCH). علاوة على ذلك ، تبدأ الخلايا الجذعية في التعبير عن الهرمون المبتور ، مما يؤدي في النهاية إلى استعادة كبيرة لمجموعة الخلايا المستنفدة على مدى الأشهر التالية (5 إلى 6) 9,10. أيضا ، خلال مرحلة نضج حديثي الولادة للغدة (أول 3 أسابيع بعد الولادة) ، تزدهر الخلايا الجذعية النخامية في حالة تنشيط 6,11,12,13 ، في حين ترتبط الشيخوخة العضوية بانخفاض وظائف الخلايا الجذعية في الموقع ، بسبب زيادة البيئة الالتهابية (الدقيقة) عند الشيخوخة (أو "الالتهاب")10,14 . بالإضافة إلى ذلك ، يرتبط تكوين الورم في الغدة أيضا بتنشيط الخلايا الجذعية 7,15. على الرغم من اكتشاف تنشيط الخلايا الجذعية في العديد من حالات إعادة تشكيل الغدة النخامية (تمت مراجعتها في 7,16) ، إلا أن الآليات الأساسية لا تزال غير واضحة. نظرا لأن النهج في الجسم الحي (مثل تتبع النسب في الفئران المعدلة وراثيا) لم تقدم صورة واضحة أو شاملة للخلايا الجذعية للنخامة ، فإن تطوير نماذج موثوقة في المختبر لاستكشاف بيولوجيا الخلايا الجذعية في الغدة النخامية الطبيعية والمريضة أمر ضروري. لا تزال الزراعة القياسية في المختبر للخلايا الجذعية الأولية للنخامة غير كافية بسبب قدرة النمو المحدودة للغاية والظروف غير الفسيولوجية (2D) مع الفقدان السريع للنمط الظاهري (للحصول على نظرة عامة أكثر تفصيلا ، انظر16). تم إنشاء مزارع المجال ثلاثي الأبعاد (pituispheres) من الخلايا الجذعية النخامية كما تم تحديدها من قبل السكان الجانبيين والنمط الظاهري SOX2 + 2,3,4. تنمو البيتيسفير بشكل مستنسخ من الخلايا الجذعية ، وتعبر عن علامات الجذعية وتظهر قدرة التمايز في أنواع خلايا الغدد الصماء. ومع ذلك ، فإنها لا تتوسع بشكل كبير بينما تظهر فقط قابلية مرور محدودة (2-3 مقاطع) 3,4. كما تم الحصول على هياكل تشبه الكرة من مجموعات الخلايا الجذعية النخامية غير المنفصلة عند استزراعها في 50٪ من Matrigel المخفف لمدة أسبوع واحد ، ولكن لم تظهر قابلية التوسع17. يستخدم نهج البيتوسفير في الغالب كأداة قراءة لأعداد الخلايا الجذعية ، ولكن التطبيقات الأخرى محدودة بقدرة توسع أقل شأنا16.
لمعالجة هذه العيوب والتغلب عليها ، تم مؤخرا إنشاء نموذج 3D جديد ، أي المواد العضوية ، بدءا من AL الغدد الصماء الرئيسية للفئران التي تحتوي على MZ والخلايا الجذعية المتني. وقد تبين أن المواد العضوية مشتقة بالفعل من الخلايا الجذعية للغدة النخامية وتلخص بأمانة نمطها الظاهري18. علاوة على ذلك ، فإن المواد العضوية قابلة للتوسع على المدى الطويل ، مع الحفاظ بقوة على طبيعتها الجذعية. لذلك ، فإنها توفر طريقة موثوقة لتوسيع الخلايا الجذعية الأولية للنخامة للاستكشاف العميق. مثل هذا الاستكشاف غير قابل للتحقيق مع العدد المحدود من الخلايا الجذعية التي يمكن عزلها من الغدة النخامية ، والتي هي أيضا غير قابلة للتوسيع في ظروف ثنائية الأبعاد16. وقد تبين أن المواد العضوية هي أدوات قيمة وموثوقة للكشف عن ميزات الخلايا الجذعية النخامية الجديدة (يمكن ترجمتها إلى الجسم الحي)14،18. الأهم من ذلك ، أن النموذج العضوي يعكس بأمانة حالة تنشيط الخلايا الجذعية النخامية كما يحدث أثناء تلف الأنسجة المحلية ونضج حديثي الولادة ، مما يدل على تعزيز كفاءة التكوين وتكرار المسارات الجزيئية غير المنظمة14،18. وبالتالي ، فإن نموذج العضوية المشتق من الغدة النخامية هو نموذج بحثي مبتكر وقوي لبيولوجيا الخلايا الجذعية النخامية بالإضافة إلى أداة قراءة تنشيط الخلايا الجذعية.
يصف هذا البروتوكول بالتفصيل إنشاء المواد العضوية المشتقة من الغدة النخامية للفئران. تحقيقا لهذا الهدف ، يتم عزل AL وفصله إلى خلايا مفردة ، والتي يتم تضمينها في مصفوفة محاكاة خارج الخلية Matrigel (يشار إليها هنا باسم ECM). ثم يتم استزراع مجموعة الخلايا ECM في وسط محدد ، يحتوي بشكل أساسي على عوامل نمو الخلايا الجذعية ومنظمات الغدة النخامية الجنينية (يشار إليها أيضا باسم "وسط الغدة النخامية" العضوي (PitOM)18 ؛ الجدول 1). بمجرد اكتمال تطوير المواد العضوية (بعد 10-14 يوما) ، يمكن توسيعها بشكل أكبر من خلال المرور المتسلسل للحوض الصغير وإخضاعها لاستكشاف مكثف في اتجاه المصب (على سبيل المثال ، التألق المناعي ، RT-qPCR ، والنسخ السائبة أو أحادية الخلية ؛ الشكل 1). على المدى الطويل ، من المتوقع أن تمهد الخلايا الجذعية النخامية العضوية الطريق لنهج إصلاح الأنسجة والطب التجديدي.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M6250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>48-well plates, TC treated, individually wrapped</td>
			<td>Costar</td>
			<td>734-1607</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A83-01</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>SML0788</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Advanced DMEM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12491023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumin Bovine (cell culture grade)</td>
			<td>Serva</td>
			<td>47330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-27 Supplement (50X), minus vitamin A</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12587010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Base moulds</td>
			<td>VWR</td>
			<td>720-1918</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buffer RLT</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>79216</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cassettes, Q Path Microtwin</td>
			<td>VWR</td>
			<td>720-2191</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer, 40 &#181;m mesh, disposable</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholera Toxin from Vibrio cholerae</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C8052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deoxyribonuclease I from bovine pancreas</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D5025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-glucose</td>
			<td>Merck</td>
			<td>108342</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethylsulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D2650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM, powder, high glucose</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>52100039</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Safe-Lock Tubes, 1.5 mL</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30120086</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epredia SuperFrost Plus Adhesion slides</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>J1800AMNZ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epredia HistoStar Embedding Workstation, 220 to 240Vac</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12587976</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol Absolute 99.8+%</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10342652</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F7524</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlutaMAX Supplement</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>35050061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H4034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES Buffer Solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15630056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InSolution Y-27632</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>688001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine (200 mM)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25030081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel Growth Factor Reduced (GFR) Basement Membrane Matrix, LDEV-Free</td>
			<td>Corning</td>
			<td>15505739</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mr. Frosty Freezing Container</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>5100-0001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-2 Supplement (100X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17502048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-Acetyl-L-cysteine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A7250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc Biobanking and Cell Culture Cryogenic Tubes</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>375353</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde for synthesis (PFA)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>818715</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS, pH 7.4</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin G sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol red</td>
			<td>Merck</td>
			<td>107241</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride (KCl)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>104936</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human EGF Protein, CF</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>236-EG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human FGF basic/FGF2/bFGF (157 aa) Protein</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>234-FSE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human FGF-10</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>100-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human IGF-1</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>100-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human IL-6</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>200-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human Noggin</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>120-10C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human R-Spondin-1</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>120-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human/Murine FGF-8b</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>100-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Mouse Sonic Hedgehog/Shh (C25II) N-Terminus</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>464-SH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy micro kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SB202190</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S7067</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SeaKem LE Agarose</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>50004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride (NaCl)</td>
			<td>BDH</td>
			<td>102415K</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium di-Hydrogen Phosphate 1-hydrate</td>
			<td>PanReac-AppliChem</td>
			<td>A1047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydrogen Carbonate (NaHCO3)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>106329</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium-Pyruvate (C3H3NaO3)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5280</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stericup-GP, 0.22 &#181;m</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SCGPU02RE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steriflip-GP Sterile Centrifuge Tube Top Filter Unit, 0.22 &#956;m</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SCGP00525</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile water</td>
			<td>Fresenius</td>
			<td>B230531</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptomycin sulfate salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S6501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, with BD Microlance needle with intradermal bevel, 26G</td>
			<td>BD Plastipak</td>
			<td>BDAM303176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific Excelsior ES Tissue Processor</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>12505356</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Titriplex III</td>
			<td>Merck</td>
			<td>108418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypL Express Enzyme (1X), phenol red</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12605028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin inhibitor from Glycine max (soybean)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T9003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin solution 2.5 %</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15090046</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

development of organoids from mouse pituitary as in vitro model to explore pituitary stem cell biology

الغدة النخامية هي الغدة الصماء الرئيسية التي تنظم العمليات الفسيولوجية الرئيسية ، بما في ذلك نمو الجسم ، والتمثيل الغذائي ، والنضج الجنسي ، والتكاثر ، والاستجابة للإجهاد. منذ أكثر من عقد من الزمان ، تم تحديد الخلايا الجذعية في الغدة النخامية. ومع ذلك ، على الرغم من تطبيق مناهج المعدلة وراثيا في الجسم الحي ، إلا أن نمطها الظاهري والبيولوجيا ودورها لا يزال غير واضح. لمعالجة هذا اللغز ، تم تطوير نموذج عضوي جديد ومبتكر في المختبر لكشف بيولوجيا الخلايا الجذعية النخامية بعمق. تمثل المواد العضوية هياكل الخلايا 3D التي ، في ظل ظروف ثقافة محددة ، تتطور ذاتيا من الخلايا الجذعية (الظهارية) للأنسجة وتلخص علامات مميزة متعددة لتلك الخلايا الجذعية وأنسجتها. يظهر هنا أن المواد العضوية المشتقة من الغدة النخامية للفئران تتطور من الخلايا الجذعية للغدة وتلخص بأمانة خصائصها الظاهرية والوظيفية في الجسم الحي . من بين أمور أخرى ، فإنها تعيد إنتاج حالة تنشيط الخلايا الجذعية كما هو الحال في الجسم الحي التي تحدث استجابة للضرر الموضعي المعدل وراثيا. المواد العضوية قابلة للتوسع على المدى الطويل مع الاحتفاظ بقوة بنمطها الظاهري الجذعي. ويعد النموذج البحثي الجديد ذا قيمة عالية لفك رموز النمط الظاهري للخلايا الجذعية وسلوكها خلال الظروف الرئيسية لإعادة تشكيل الغدة النخامية، بدءا من نضج حديثي الولادة إلى التلاشي المرتبط بالشيخوخة، ومن الغدد الصحية إلى الغدد المريضة. هنا ، يتم تقديم بروتوكول مفصل لإنشاء المواد العضوية المشتقة من الغدة النخامية للفئران ، والتي توفر أداة قوية للغوص في عالم الخلايا الجذعية النخامية الغامض.

بعد عزل وتفكك AL ، يتم زرع الخلايا المفردة التي تم الحصول عليها في ECM وتنمو في PitOM (الشكل 1 ، الجدول 1). ويبين الشكل 3 ألف زراعة الخلايا وكثافتها عند البذر (اليوم 0). قد يكون بعض الحطام الصغير موجودا (الشكل 3A ، رؤوس الأسهم البيضاء) ، لكنه سي?...

Watch this Scientific Journal Video about Development of Organoids from Mouse Pituitary as In Vitro Model to Explore Pituitary Stem Cell Biology at JoVE.com

Development of Organoids from Mouse Pituitary as In Vitro Model to Explore Pituitary Stem Cell Biology

الغدة النخامية هي المنظم الرئيسي لنظام الغدد الصماء في الجسم. تصف هذه المقالة تطور المواد العضوية من الغدة النخامية للفأر كنموذج 3D جديد في المختبر لدراسة مجموعة الخلايا الجذعية في الغدة التي لا تزال البيولوجيا والوظيفة غير مفهومة بشكل جيد.

تطوير المواد العضوية من الغدة النخامية الفأر كما في المختبر نموذج لاستكشاف بيولوجيا الخلايا الجذعية النخامية

The pituitary is the master endocrine gland regulating key physiological processes, including body growth, metabolism, sexual maturation, reproduction, ...

نموذجنا العضوي ذو قيمة عالية لاستكشاف بيولوجيا الخلايا الجذعية النخامية في ظروف إعادة تشكيل الغدة النخامية وكذلك في ظروف إعادة تشكيل الغدة النخامية ، مثل نضج الغدة عند حديثي الولادة ، والتدهور الوظيفي المرتبط بالشيخوخة ، ونمو الورم في الغدة. حتى الآن ، تعد تقنية الغدة النخامية العضوية لدينا هي الأداة الوحيدة المتاحة لنمو وتوسيع الخلايا الجذعية النخامية الأولية للفئران بشكل موثوق وقوي. سيوضح الإجراء إيما لابورت وشارلوت نيس ، طالبات الدكتوراه في مجموعتي البحثية.للبدء ، اغسل رأس الماوس بالماء منزوع الأيونات لإزالة الدم. رش 70٪ من الإيثانول على الرأس لتوليد بيئة معقمة. ثم قم بإزالة الجلد بين الأذنين باستخدام أدوات جراحية معقمة.لفتح الجمجمة ، اكسر جسر الأنف بمقص معقم. مزيد من فتح الجمجمة بدءا من جسر الأنف نحو الأذنين على كلا الجانبين. إزالة الجمجمة والدماغ مع ملاقط معقمة دون لمس الغدة النخامية.إزالة الحجاب الحاجز sellae مع ملاقط حادة. ثم ، تحت المجهر المجسم ، افصل الفص الأمامي عن الفصوص الخلفية والوسيطة. اعزل الفص الأمامي بعناية باستخدام ملاقط حادة واجمعها في قارورة Erlenmeyer سعة 10 ملليلتر تحتوي على ثلاثة ملليلترات من A.أضف ملليلترين من محلول التربسين المسخن مسبقا بنسبة 2.5٪.تحضن عند 37 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. أضف ملليلترين من محلول الحمض النووي المسخن مسبقا وقم بتدوير قارورة Erlenmeyer 10 مرات. دع الغدة النخامية تغرق في القاع وإزالة supernatant.أضف ملليلترين من محلول مثبط التربسين المسخن مسبقا واحتضنه عند 37 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. إزالة supernatant عندما تغرق الغدة النخامية في القاع. أضف ملليلترين من الوسط B المسخن مسبقا واحتضنه لمدة خمس دقائق.أضف ملليلترين من الوسط C المسخن مسبقا إلى هذا واحتضنه لمدة 15 دقيقة. دع الغدة النخامية تغرق في القاع وإزالة supernatant. ثم اشطفيه ثلاث مرات بوسط C.Add ملليلتر من الوسط المسخن مسبقا C.Aspirate وطرد الغدة النخامية باستخدام ماصة باستور معقمة ومصقولة باللهب عدة مرات حتى لا تكون الشظايا مرئية بعد الآن.انقل التعليق إلى أنبوب سعة 15 ملليلتر يحتوي على 4.5 ملليلتر من محلول الحمض النووي المسخن مسبقا. شطف القارورة ثلاث مرات مع اثنين من ملليلتر من الوسط C المسخن مسبقا ونقل التعليق إلى الأنبوب. امزج تعليق الخلية الذي تم جمعه وقم بتصفيته من خلال مصفاة خلية 40 ميكرون في أنبوب سعة 30 ملليلتر.شطف الأنبوب ومصفاة الخلية ثلاث مرات مع اثنين من ملليلتر من C المتوسطة ونقل التعليق إلى الأنبوب. املأ ماصة باستور الزجاجية بملليلترين من BSA. ضع طرف الماصة في أسفل الأنبوب وقم بإخراجها برفق لتشكيل طبقة كثافة مرئية.جهاز طرد مركزي عند 190 مرة G لمدة 10 دقائق عند أربع درجات مئوية. قم بإزالة المادة الفائقة وأعد تعليق حبيبة الخلية في ملليلتر واحد من DMEM / F-12 المتقدم على الجليد البارد. ثم، قم بقياس الخلايا باستخدام عداد خلايا.الطرد المركزي تعليق الخلية في 190 مرة G لمدة 10 دقائق عند أربع درجات مئوية وإزالة supernatant. أعد تعليق حبيبات الخلايا في DMEM / F-12 المتقدم للوصول إلى كثافة خلية تبلغ 1.1 في 10 إلى الخلايا السادسة لكل ملليلتر. أضف ECM إلى الحجم المطلوب من تعليق الخلية بنسبة 30:70 واخلطه جيدا.قم بإيداع قطرة 30 ميكرولتر من هذا الخليط في كل بئر من صفيحة 48 بئرا تم تسخينها مسبقا. اقلب اللوحة رأسا على عقب واترك ECM يتصلب عند 37 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. بعد الحضانة ، أضف بعناية 250 ميكرولتر من وسط الغدة النخامية العضوي المسخن مسبقا مع مثبط ROCK 10-micromolar.كل يومين إلى ثلاثة أيام ، قم بتغيير الوسط بدون مثبط ROCK لمدة 10 إلى 14 يوما حتى تنمو المواد العضوية بالكامل. لتمرير المواد العضوية ، قم أولا بشفط الوسط بلطف وإضافة 400 ميكرولتر من DMEM / F-12 المتقدم من الجليد البارد لتفكيك ECM. ثم ، جمع المواد العضوية في أنبوب الطرد المركزي الدقيق.اغسل البئر ب 400 ميكرولتر من DMEM / F-12 المتقدم من الثلج البارد. جهاز طرد مركزي للأنبوب بسرعة 200 مرة G لمدة خمس دقائق عند أربع درجات مئوية. قم بإزالة المادة الفائقة وإضافة 400 ميكرولتر من إنزيم TrypLE Express الذي تم تسخينه مسبقا.اخلطي الأنبوب عن طريق عكس الأنبوب عدة مرات واحتضنيه عند 37 درجة مئوية لمدة خمس دقائق. أضف 400 ميكرولتر من DMEM / F-12 المتقدم من الجليد البارد. جهاز طرد مركزي بسرعة 200 مرة G لمدة خمس دقائق عند أربع درجات مئوية وإزالة supernatant.أعد تعليق الكريات مع 100 ميكرولتر من DMEM / F-12 المتقدم من الجليد البارد. قم بتضييق طرف P-200 واستخدم الطرف لفصل المواد العضوية عن طريق السحب بقوة حتى يتم الحصول على شظايا عضوية. أضف 800 ميكرولتر من DMEM / F-12 المتقدم.جهاز طرد مركزي عند 190 مرة G لمدة 10 دقائق عند أربع درجات مئوية وإزالة supernatant. لتمرير المواد العضوية ، أعد تعليق الكريات في حجم مناسب من DMEM / F-12 المتقدم وأضف ECM بنسبة 30: 70. تخلط جيدا.الاستمرار في زرع وزراعة المواد العضوية كما هو موضح في مخطوطة النص. تم زرع الخلايا المفردة المنفصلة عن الفص الأمامي في ECM ونمت في وسط عضوي في الغدة النخامية. بعد 14 يوما من البذر ، تم تطوير المواد العضوية بالكامل ووصل قطرها إلى 500 ميكرومتر.في هذه المرحلة ، أظهرت المواد العضوية مورفولوجيا كيسية مع طبقة ظهارية تحيط بتجويف. لا ينصح باستخدام الآبار التي تظهر فيها الهياكل الكثيفة بعد النمو. للمرور ، تم استخدام شظايا العضوية للبذر.بعد سبعة أيام من المرور ، لوحظ إعادة نمو عضوي موات مع الهياكل الكيسي. يجب التخلص من المواد العضوية الكثيفة ، حيث قد تستحوذ المواد العضوية غير المواتية على الثقافة. أكد تحليل تلطيخ التألق المناعي للعلامات الظهارية E-cadherin و cytokeratins 8 و 18 الطابع الظهاري للعضويات.أظهر التعبير عن علامات الخلايا الجذعية النخامية Sox2 و Trop2 الجذعية ، وأظهرت العلامة الخاصة بالغدة النخامية LHX3 النمط الظاهري للغدة النخامية للعضويات. أظهر التعبير عن العلامة Ki67 أن الخلايا المكونة للعضويات في حالة تكاثرية. أظهر تحليل RTQ PCR تعبيرا أعلى عن علامات الجذعية في المواد العضوية مقارنة بالفص الأمامي حتى بعد مرور عدة ، مما يؤكد صحة إثراء الخلايا الجذعية.من المهم وضع العدد المناسب من الخلايا المفردة في قبة ECM عند البذر الأولي ، وعند تمرير المواد العضوية ، يجب على المرء أن يتذكر إعادة زرع الشظايا وليس الخلايا المفردة.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Development of Organoids from Mouse Pituitary as In Vitro Model to Explore Pituitary Stem Cell Biology

Epigenetic Conversion as a Safe and Simple Method to Obtain Insulin-secreting Cells from Adult Skin Fibroblasts

تحويل جينية كطريقة آمنة وبسيطة للحصول على خلايا إفراز الأنسولين من الخلايا الليفية الجلد الكبار

Regenerative medicine requires new, fully functional cells that are delivered to patients in order to repair degenerated or damaged tissues. When such ...

Effective Isolation of Functional Islets from Neonatal Mouse Pancreas

عزل فعال من الجزر وظيفية من الأطفال حديثي الولادة البنكرياس ماوس

Perfusion-based islet-isolation protocols from large mammalian pancreata are well established. Such protocols are readily conducted in many laboratories ...

Derivation of Stem Cell Lines from Mouse Preimplantation Embryos

اشتقاق خطوط الخلايا الجذعية من الأجنة الجيني الماوس

Mouse embryonic stem cell (mESC) derivation is the process by which pluripotent cell lines are established from preimplantation embryos. These lines ...

Dissection and Coronal Slice Preparation of Developing Mouse Pituitary Gland

تشريح وإعداد شريحة الاكليلية وضع الغدة النخامية الماوس

The pituitary gland or hypophysis is an important endocrine organ secreting hormones essential for homeostasis. It consists of two glands with separate ...

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

جيل بانكريتويدس التعبير عن الأنسولين خالية من السقالة، ثلاثي الأبعاد من الماوس المتكفل البنكرياس في المختبر

The pancreas is a complex organ composed of many different cell types that work together to regulate blood glucose homeostasis and digestion. These cell ...

Analysis of Cardiac Chamber Development During Mouse Embryogenesis Using Whole Mount Epifluorescence

تحليل لتطوير دائرة القلب أثناء Embryogenesis الماوس باستخدام كامل جبل ابيفلوريسسينسي

The goal of this protocol is to describe a method for the dissection of mouse embryos and visualization of embryonic mouse ventricular chambers during ...

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C (UV-C) Damage

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C UV-C Damage

تقييم الضرر التأكسدي في الخلايا السطحية الرئيسية للفأرة /الخلايا الجذعية استجابة للأضرار فوق البنفسجية-C (UV-C)

The ocular surface is subjected to regular wear and tear due to various environmental factors. Exposure to UV-C radiation constitutes an occupational ...

A Static Self-Directed Method for Generating Brain Organoids from Human Embryonic Stem Cells

طريقة ثابتة ذاتية التوجيه لتوليد الأعضاء الدماغية من الخلايا الجذعية الجنينية البشرية

Human brain organoids differentiated from embryonic stem cells offer the unique opportunity to study complicated interactions of multiple cell types in a ...

Preparation of Small RNA Libraries for Sequencing from Early Mouse Embryos

إعداد مكتبات RNA الصغيرة لتسلسل من أجنة الماوس المبكر

MicroRNAs (miRNAs) are important for the complex regulation of cell fate decisions and developmental timing. In vivo studies of the contribution of miRNAs ...