Name: development of organoids from mouse pituitary as in vitro model to explore pituitary stem cell biology
Uploaded: 2022-02-25T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Development of Organoids from Mouse Pituitary as In Vitro Model to Explore Pituitary Stem Cell Biology at JoVE.com

이 작업은 KU Leuven Research Fund와 FWO (Fund for Scientific Research) - Flanders의 보조금으로 지원되었습니다. E.L. (11A3320N) 및 C.N. (1S14218N)은 FWO / FWO-SB 박사 학위 펠로우십의 지원을 받습니다.

본 연구를 위한 동물실험은 KU 루벤 동물실험윤리위원회(P153/2018)의 승인을 받았다. 모든 마우스는 표준화 된 조건 (23 ± 1.5 °C의 항온, 상대 습도 40 % -60 % 및 12 시간의 주야간 사이클)하에 대학의 동물 시설에 수용되어 물과 음식 광고 리비툼에 접근 할 수있었습니다.
1. 생쥐
<ol><li>젊은 성인 연령 (8-12 주령)의 C57BL/6J 마우스와 같은 시판 마우스 균주를 사용?...

<ol>
	<li>Melmed, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The pituitary. 3rd ed. , 1 (2011).</li><li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adult+pituitary+contains+a+cell+population+displaying+stem/progenitor+cell+and+early-embryonic+characteristics.">The adult pituitary contains a cell population displaying stem/progenitor cell and early-embryonic characteristics.</a> Endocrinology. 146 (9), 3985-3998 (2005).</li><li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pituitary+progenitor+cells+tracked+down+by+side+population+dissection.">Pituitary progenitor cells tracked down by side population dissection.</a> Stem Cells. 27 (5), 1182-1195 (2009).</li><li>Fauquier, T., Rizzoti, K., Dattani, M., Lovell-Badge, R., Robinson, I. C. A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SOX2-expressing+progenitor+cells+generate+all+of+the+major+cell+types+in+the+adult+mouse+pituitary+gland.">SOX2-expressing progenitor cells generate all of the major cell types in the adult mouse pituitary gland.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (8), 2907-2912 (2008).</li><li>Rizzoti, K., Akiyama, H., Lovell-Badge, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mobilized+adult+pituitary+stem+cells+contribute+to+endocrine+regeneration+in+response+to+physiological+demand.">Mobilized adult pituitary stem cells contribute to endocrine regeneration in response to physiological demand.</a> Cell Stem Cell. 13 (4), 419-432 (2013).</li><li>Andoniadou, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sox2++stem/progenitor+cells+in+the+adult+mouse+pituitary+support+organ+homeostasis+and+have+tumor-inducing+potential.">Sox2+ stem/progenitor cells in the adult mouse pituitary support organ homeostasis and have tumor-inducing potential.</a> Cell Stem Cell. 13 (4), 433-445 (2013).</li><li>Nys, C., Vankelecom, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pituitary+disease+and+recovery:+How+are+stem+cells+involved.">Pituitary disease and recovery: How are stem cells involved.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 525 (4), 111176 (2021).</li><li>Schneider, H. J., Aimaretti, G., Kreitschmann-Andermahr, I., Stalla, G. K., Ghigo, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypopituitarism.">Hypopituitarism.</a> Lancet. 369 (9571), 1461-1470 (2007).</li><li>Fu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adult+pituitary+shows+stem/progenitor+cell+activation+in+response+to+injury+and+is+capable+of+regeneration.">The adult pituitary shows stem/progenitor cell activation in response to injury and is capable of regeneration.</a> Endocrinology. 153 (7), 3224-3235 (2012).</li><li>Willems, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+in+the+pituitary+after+cell-ablation+injury:+time-related+aspects+and+molecular+analysis.">Regeneration in the pituitary after cell-ablation injury: time-related aspects and molecular analysis.</a> Endocrinology. 157 (2), 705-721 (2016).</li><li>Gremeaux, L., Fu, Q., Chen, J., Vankelecom, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activated+phenotype+of+the+pituitary+stem/progenitor+cell+compartment+during+the+early-postnatal+maturation+phase+of+the+gland.">Activated phenotype of the pituitary stem/progenitor cell compartment during the early-postnatal maturation phase of the gland.</a> Stem Cells and Development. 21 (5), 801-813 (2012).</li><li>Zhu, X., Tollkuhn, J., Taylor, H., Rosenfeld, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch-dependent+pituitary+SOX2++stem+cells+exhibit+a+timed+functional+extinction+in+regulation+of+the+postnatal+gland.">Notch-dependent pituitary SOX2+ stem cells exhibit a timed functional extinction in regulation of the postnatal gland.</a> Stem Cell Reports. 5 (6), 1196-1209 (2015).</li><li>Russell, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pituitary+stem+cells+produce+paracrine+WNT+signals+to+control+the+expansion+of+their+descendant+progenitor+cells.">Pituitary stem cells produce paracrine WNT signals to control the expansion of their descendant progenitor cells.</a> eLife. 10 (1), 59142 (2021).</li><li>Vennekens, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-6+is+an+activator+of+pituitary+stem+cells+upon+local+damage,+a+competence+quenched+in+the+aging+gland.">Interleukin-6 is an activator of pituitary stem cells upon local damage, a competence quenched in the aging gland.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 118 (25), 2100052118 (2021).</li><li>Mertens, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pituitary+tumors+contain+a+side+population+with+tumor+stem+cell-associated+characteristics.">Pituitary tumors contain a side population with tumor stem cell-associated characteristics.</a> Endocrine-Related Cancer. 22 (4), 481-504 (2015).</li><li>Laporte, E., Vennekens, A., Vankelecom, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pituitary+remodeling+throughout+life:+are+resident+stem+cells+involved.">Pituitary remodeling throughout life: are resident stem cells involved.</a> Frontiers in Endocrinology. 11 (1), 604519 (2021).</li><li>Yoshida, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+adult+pituitary+stem/progenitor+cell+clusters+located+in+the+parenchyma+of+the+rat+anterior+lobe.">Isolation of adult pituitary stem/progenitor cell clusters located in the parenchyma of the rat anterior lobe.</a> Stem Cell Research. 17 (2), 318-329 (2016).</li><li>Cox, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoids+from+pituitary+as+novel+research+model+to+study+pituitary+stem+cell+biology.">Organoids from pituitary as novel research model to study pituitary stem cell biology.</a> Journal of Endocrinology. 240 (2), 287-308 (2019).</li><li>Denef, C., Hautekeete, E., De Wolf, A., Vanderschueren, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pituitary+basophils+from+immature+male+and+female+rats:+distribution+of+gonadotrophs+and+thyrotrophs+as+studied+by+unit+gravity+sedimentation.">Pituitary basophils from immature male and female rats: distribution of gonadotrophs and thyrotrophs as studied by unit gravity sedimentation.</a> Endocrinology. 130 (3), 724-735 (1978).</li><li>Vander Schueren, B., Denef, C., Cassiman, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructural+and+functional+characteristics+of+rat+pituitary+cell+aggregates.">Ultrastructural and functional characteristics of rat pituitary cell aggregates.</a> Endocrinology. 110 (2), 513-523 (1982).</li><li>Claes, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+stem+cell-derived+monocytes+and+microglia-like+cells+reveal+impaired+amyloid+plaque+clearance+upon+heterozygous+or+homozygous+loss+of+TREM2.">Human stem cell-derived monocytes and microglia-like cells reveal impaired amyloid plaque clearance upon heterozygous or homozygous loss of TREM2.</a> Alzheimer's and Dementia. 15 (3), 453-464 (2019).</li><li>Trompeter, H. -. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNAs+miR-26a,+miR-26b,+and+miR-29b+accelerate+osteogenic+differentiation+of+unrestricted+somatic+stem+cells+from+human+cord+blood.">MicroRNAs miR-26a, miR-26b, and miR-29b accelerate osteogenic differentiation of unrestricted somatic stem cells from human cord blood.</a> BMC Genomics. 14, 111 (2013).</li><li>Suga, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-formation+of+functional+adenohypophysis+in+three-dimensional+culture.">Self-formation of functional adenohypophysis in three-dimensional culture.</a> Nature. 480 (7375), 57-62 (2011).</li><li>Matsumoto, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Congenital+pituitary+hypoplasia+model+demonstrates+hypothalamic+OTX2+regulation+of+pituitary+progenitor+cells.">Congenital pituitary hypoplasia model demonstrates hypothalamic OTX2 regulation of pituitary progenitor cells.</a> Journal of Clinical Investigation. 130 (2), 641-654 (2019).</li><li>Kanie, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+anti-PIT-1+antibody+syndrome:+PIT-1+presentation+by+HLA+class+I+on+anterior+pituitary+cells.">Pathogenesis of anti-PIT-1 antibody syndrome: PIT-1 presentation by HLA class I on anterior pituitary cells.</a> Journal of the Endocrine Society. 3 (11), 1969-1978 (2019).</li><li>Lee, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+evolution+and+drug+response+in+patient-derived+organoid+models+of+bladder+cancer.">Tumor evolution and drug response in patient-derived organoid models of bladder cancer.</a> Cell. 173 (2), 515-528 (2018).</li><li>Yan, H. H. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comprehensive+human+gastric+cancer+organoid+biobank+captures+tumor+subtype+heterogeneity+and+enables+therapeutic+screening.">A comprehensive human gastric cancer organoid biobank captures tumor subtype heterogeneity and enables therapeutic screening.</a> Cell Stem Cell. 23 (6), 882-897 (2018).</li><li>Nolan, L. A., Kavanagh, E., Lightman, S. L., Levy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anterior+pituitary+cell+population+control:+basal+cell+turnover+and+the+effects+of+adrenalectomy+and+dexamethasone+treatment.">Anterior pituitary cell population control: basal cell turnover and the effects of adrenalectomy and dexamethasone treatment.</a> Journal of Neuroendocrinology. 10 (3), 207-215 (1998).</li></ol>

여기에 기술된 바와 같이 AL 유래 오가노이드는 시험관내에서 뇌하수체 줄기 세포를 연구하는 강력한 연구 모델을 나타낸다. 현재이 오가노이드 접근법은 일차 뇌하수체 줄기 세포를 안정적이고 견고하게 성장하고 확장 할 수있는 유일한 도구입니다. 배아 줄기 세포 (ESC) 또는 유도 만능 줄기 세포 (iPSC)로부터 유래 된 뇌하수체 오가노이드 모델이 이전에 보고되었으며, 이는 뇌하수체 배아...

뇌하수체는 시상 하부와 연결된 뇌 기저부에 위치한 작은 내분비선입니다. 땀샘은 말초 및 중추(시상 하부) 입력을 통합하여 조정되고 조정된 호르몬 방출을 생성함으로써 적절한 시간에 적절한 호르몬을 생산하기 위한 하류 표적 내분비 기관(예: 부신 땀샘 및 생식선)을 조절합니다. 뇌하수체는 내분비 시스템의 핵심 조절자이므로 당연히 마스터 글 랜드1이라고 불립니다.
마우스 뇌하수체는 세 개의 엽(도 1), 즉 전엽(AL), 중간엽(IL), 및 후엽(PL)으로 구성된다. 주요 내분비 AL은 성장 호르몬 (GH)을 생산하는 somatotropes를 포함하여 다섯 가지 호르몬 세포 유형을 포함; 프로락틴(PRL)을 생성하는 락토트로프; 부신피질자극호르몬(ACTH)을 분비하는 피질염 호르몬; 갑상선 자극 호르몬 (TSH) 생산을 담당하는 갑상선 로프; 황체 형성 호르몬 (LH)과 여포 자극 호르몬 (FSH)을 만드는 생식선 로프. PL은 호르몬 옥시토신과 바소프레신 (항 이뇨 호르몬)이 저장되는 시상 하부의 축삭 돌기로 구성됩니다. IL은 AL과 PL 사이에 위치하고 있으며 멜라노사이트 자극 호르몬 (MSH)을 생산하는 멜라노로프를 수용합니다. 인간 뇌하수체에서, IL은 발달 중에 퇴행하고, 멜라노트로프는AL1 내에 퍼진다. 내분비 세포 이외에, 뇌하수체는 또한 줄기 세포의 풀을 포함하고, 본질적으로 전사 인자 SOX2 2,3,4,5,6에 의해 표시된다. 이들 SOX2+ 세포는 구순구개열의 상피 내벽(AL과 IL 사이의 배아 잔여 내강)인 한계 구역(MZ)에 위치하거나, AL의 실질에 걸쳐 클러스터로서 확산되어, 샘 내에 2개의 줄기 세포 틈새를 제안한다(도 1)2,3,4,5,6.
뇌하수체의 필수 불가결 한 특성을 감안할 때, 땀샘의 오작동은 심각한 이환과 관련이 있습니다. 과뇌하수체증(하나 이상의 호르몬의 과다 분비를 특징으로 함) 및 뇌하수체 기능 저하증(하나 이상의 호르몬의 결함 또는 누락된 생산)은 뇌하수체 신경내분비 종양(PitNETs; 예를 들어, 쿠싱병으로 이어지는 ACTH 생성 종양) 또는 유전적 결함(예를 들어, 왜소증을 초래하는 GH 결핍)7에 의해 야기될 수 있다. 또한, 뇌하수체 수술 (예를 들어, 종양을 제거하기 위해), 감염 (예를 들어, 시상 하부 - 뇌하수체 결핵, 또는 세균성 수막염 또는 뇌염에 따른 감염), Sheehan 증후군 (출생시 심한 혈액 손실로 인한 불충분 한 혈류로 인한 괴사), 뇌하수체 졸중 및 외상성 뇌 손상은 뇌하수체 기능 저하의 다른 중요한 원인입니다8 . 마우스 뇌하수체는 재생 능력을 가지고 있으며, 내분비 세포 9,10의 트랜스제닉 절제에 의해 도입 된 국소 손상을 복구 할 수 있음이 밝혀졌습니다. SOX2+ 줄기 세포는 활성화된 표현형을 나타내는 가해진 손상에 급격하게 반응하며, 이는 향상된 증식(줄기 세포 확장의 결과)과 줄기 관련 인자 및 경로(예: WNT/NOTCH)의 발현 증가로 특징지어집니다. 더욱이, 줄기 세포는 절제 호르몬을 발현하기 시작하여, 최종적으로 9,10개월 후(5 내지 6)개월에 걸쳐 고갈된 세포 집단의 실질적인 회복을 초래한다. 또한, 땀샘의 신생아 성숙 단계 (출생 후 처음 3 주) 동안, 뇌하수체 줄기 세포는활성화 된 상태에서 번성하는 반면, 유기체 노화는 노화 (또는 '화염')시 염증 (미세) 환경 증가로 인해 계내 줄기 세포 기능 저하와 관련이 있습니다 (또는 '화염')10,14 . 또한, 선에서의 종양발생은 또한 줄기 세포 활성화 7,15와 관련된다. 줄기 세포 활성화가 뇌하수체 리모델링의 여러 상황에서 발견되었지만 (7,16에서 검토), 근본적인 메커니즘은 불분명하다. 생체 내 접근법 (예 : 트랜스제닉 마우스의 계보 추적)은 뇌하수체 줄기 세포의 명확하거나 포괄적 인 그림을 전달하지 못했기 때문에 정상 및 병든 뇌하수체에서 줄기 세포 생물학을 탐구하기위한 신뢰할 수있는 시험관 내 모델의 개발이 필수적입니다. 원발성 뇌하수체 줄기 세포의 표준 시험관내 배양은 표현형의 급속한 손실을 갖는 매우 제한된 성장 능력 및 비생리학적 (2D) 조건 때문에 부적절하게 남아있다(보다 상세한 개요를 위해,16 참조). 3D 구체 배양물(pituispheres)은 측면 집단 및 SOX2+ 표현형 2,3,4에 의해 확인된 바와 같이 뇌하수체 줄기 세포로부터 확립되었다. 뇌하수구는 줄기 세포로부터 clonally 성장하고, 줄기 마커를 발현하고, 내분비 세포 유형으로의 분화 능력을 나타낸다. 그러나, 그것들은 제한된 통과 가능성 (2-3 구절)만을 보여주면서 상당히 확장되지 않습니다 3,4. 구형 구조체는 또한 50% 희석된 마트리겔에서 1주일 동안 배양하였을 때 해리되지 않은 뇌하수체 줄기세포 클러스터로부터 수득되었으나 확장성은 나타나지 않았다(도 17). 뇌하수구 접근법은 주로 줄기 세포 번호에 대한 판독 도구로 사용되지만, 추가 적용은 열등한 확장 용량(16)에 의해 제한된다.
이러한 단점을 해결하고 극복하기 위해, MZ 및 실질 줄기 세포를 함유하는 마우스의 주요 내분비 AL로부터 시작하는 새로운 3D 모델, 즉 오가노이드가 최근에 확립되었다. 오가노이드는 실제로 뇌하수체의 줄기 세포에서 유래하고 그들의 표현형18을 충실하게 재구성하는 것으로 나타났습니다. 또한, 오가노이드는 장기간 확장 가능하며 줄기 성질을 견고하게 유지합니다. 따라서, 그들은 심오한 탐구를 위해 일차 뇌하수체 줄기 세포를 확장하는 신뢰할 수있는 방법을 제공합니다. 이러한 탐색은 뇌하수체로부터 분리될 수 있는 제한된 수의 줄기 세포로는 달성될 수 없으며, 이는 또한 2D 조건(16)에서 팽창가능하지 않다. 오가노이드는 새로운 뇌하수체 줄기 세포 특징 (생체 내에서 번역 가능)을 밝히는 데 유용하고 신뢰할 수있는 도구임을 보여주었습니다 (생체 내에서 번역 가능)14,18. 중요하게도, 오가노이드 모델은 국소 조직 손상 및 신생아 성숙 동안 발생하는 것으로서 뇌하수체 줄기 세포 활성화 상태를 충실하게 반영하여, 향상된 형성 효율을 나타내고 상향조절된 분자 경로를 복제한다(14,18). 따라서 뇌하수체 유래 오가노이드 모델은 혁신적이고 강력한 뇌하수체 줄기 세포 생물학 연구 모델이자 줄기 세포 활성화 판독 도구입니다.
이 프로토콜은 마우스 뇌하수체 유래 오가노이드의 확립을 상세히 기술한다. 이러한 목적을 위해, AL은 단리되고 단일 세포로 해리되며, 이는 세포외 매트릭스-모방 매트릭스(이하 ECM으로 지칭됨)에 매립된다. 세포-ECM 어셈블리는 이어서 줄기 세포 성장 인자 및 뇌하수체 배아 조절제를 본질적으로 함유하는 정의된 배지에서 배양된다 (추가로 '뇌하수체 오가노이드 배지'(PitOM)로 지칭됨)18; 표 1). 일단 오가노이드가 완전히 발달되면(10-14일 후), 이들은 순차적 계대통과 골짜기를 더욱 확장시킬 수 있고 광범위한 하류 탐사를 거칠 수 있다(예를 들어, 면역형광, RT-qPCR, 및 벌크 또는 단일 세포 전사체; 그림 1). 장기적으로 뇌하수체 줄기 세포 오가노이드가 조직 복구 접근법과 재생 의학의 길을 열어 줄 것으로 예상됩니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M6250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>48-well plates, TC treated, individually wrapped</td>
			<td>Costar</td>
			<td>734-1607</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A83-01</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>SML0788</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Advanced DMEM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12491023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumin Bovine (cell culture grade)</td>
			<td>Serva</td>
			<td>47330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-27 Supplement (50X), minus vitamin A</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12587010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Base moulds</td>
			<td>VWR</td>
			<td>720-1918</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buffer RLT</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>79216</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cassettes, Q Path Microtwin</td>
			<td>VWR</td>
			<td>720-2191</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer, 40 &#181;m mesh, disposable</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholera Toxin from Vibrio cholerae</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C8052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deoxyribonuclease I from bovine pancreas</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D5025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-glucose</td>
			<td>Merck</td>
			<td>108342</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethylsulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D2650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM, powder, high glucose</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>52100039</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Safe-Lock Tubes, 1.5 mL</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30120086</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epredia SuperFrost Plus Adhesion slides</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>J1800AMNZ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epredia HistoStar Embedding Workstation, 220 to 240Vac</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12587976</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol Absolute 99.8+%</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10342652</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F7524</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlutaMAX Supplement</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>35050061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H4034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES Buffer Solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15630056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InSolution Y-27632</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>688001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine (200 mM)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25030081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel Growth Factor Reduced (GFR) Basement Membrane Matrix, LDEV-Free</td>
			<td>Corning</td>
			<td>15505739</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mr. Frosty Freezing Container</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>5100-0001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-2 Supplement (100X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17502048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-Acetyl-L-cysteine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A7250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc Biobanking and Cell Culture Cryogenic Tubes</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>375353</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde for synthesis (PFA)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>818715</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS, pH 7.4</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin G sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol red</td>
			<td>Merck</td>
			<td>107241</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride (KCl)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>104936</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human EGF Protein, CF</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>236-EG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human FGF basic/FGF2/bFGF (157 aa) Protein</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>234-FSE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human FGF-10</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>100-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human IGF-1</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>100-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human IL-6</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>200-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human Noggin</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>120-10C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human R-Spondin-1</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>120-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human/Murine FGF-8b</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>100-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Mouse Sonic Hedgehog/Shh (C25II) N-Terminus</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>464-SH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy micro kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SB202190</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S7067</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SeaKem LE Agarose</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>50004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride (NaCl)</td>
			<td>BDH</td>
			<td>102415K</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium di-Hydrogen Phosphate 1-hydrate</td>
			<td>PanReac-AppliChem</td>
			<td>A1047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydrogen Carbonate (NaHCO3)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>106329</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium-Pyruvate (C3H3NaO3)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5280</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stericup-GP, 0.22 &#181;m</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SCGPU02RE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steriflip-GP Sterile Centrifuge Tube Top Filter Unit, 0.22 &#956;m</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SCGP00525</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile water</td>
			<td>Fresenius</td>
			<td>B230531</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptomycin sulfate salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S6501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, with BD Microlance needle with intradermal bevel, 26G</td>
			<td>BD Plastipak</td>
			<td>BDAM303176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific Excelsior ES Tissue Processor</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>12505356</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Titriplex III</td>
			<td>Merck</td>
			<td>108418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypL Express Enzyme (1X), phenol red</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12605028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin inhibitor from Glycine max (soybean)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T9003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin solution 2.5 %</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15090046</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

development of organoids from mouse pituitary as in vitro model to explore pituitary stem cell biology

뇌하수체는 신체 성장, 신진 대사, 성적 성숙, 생식 및 스트레스 반응을 포함한 주요 생리 과정을 조절하는 마스터 내분비선입니다. 십여 년 전, 뇌하수체에서 줄기 세포가 확인되었습니다. 그러나, 생체내 트랜스제닉 접근법의 적용에도 불구하고, 이들의 표현형, 생물학 및 역할은 불분명하다. 이러한 수수께끼를 해결하기 위해 뇌하수체 줄기 세포 생물학을 깊이 풀기 위해 새롭고 혁신적인 오가노이드 시험관 내 모델이 개발되었습니다. 오가노이드는 정의된 배양 조건 하에서 조직(상피) 줄기 세포로부터 자가발전하고 그 줄기 세포와 그 조직의 여러 특징을 재검토하는 3D 세포 구조를 나타낸다. 마우스 뇌하수체 유래 오가노이드가 땀샘의 줄기 세포로부터 발달하고 생체 내 표현형 및 기능적 특성을 충실하게 재구성한다는 것이 여기에서 보여집니다. 그 중에서도, 이들은 이식성으로 가해진 국소 손상에 반응하여 발생하는 생체내에서 줄기 세포의 활성화 상태를 재현한다. 오가노이드는 줄기 표현형을 견고하게 유지하면서 장기간 확장 가능합니다. 새로운 연구 모델은 신생아 성숙에서 노화와 관련된 퇴색, 건강에서 병든 땀샘에 이르기까지 뇌하수체 리모델링의 주요 조건 동안 줄기 세포의 표현형과 행동을 해독하는 데 매우 중요합니다. 여기에서, 마우스 뇌하수체 유래 오가노이드를 확립하기 위한 상세한 프로토콜이 제시되며, 이는 뇌하수체 줄기 세포의 수수께끼 같은 세계로 뛰어들 수 있는 강력한 도구를 제공한다.

AL의 단리 및 해리 후, 수득된 단일 세포를 ECM에 시딩하고 PitOM에서 성장시킨다(도 1, 표 1). 도 3A는 시딩에서의 세포 배양 및 밀도를 표시한다(Day 0). 일부 작은 파편이 존재할 수 있지만(그림 3A, 흰색 화살촉), 통과 시 사라집니다. 시딩 후 14일 후, AL 유래 오가노이드가 완전히 발달한다(그림 3A). 오...

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Development of Organoids from Mouse Pituitary as In Vitro Model to Explore Pituitary Stem Cell Biology

뇌하수체는 신체의 내분비 시스템의 핵심 조절자입니다. 이 기사는 생물학과 기능이 제대로 이해되지 않은 땀샘의 줄기 세포 집단을 연구하기 위해 새로운 3D 시험관 내 모델로서 마우스 뇌하수체에서 오가노이드의 발달을 설명합니다.

뇌하수체 줄기 세포 생물학을 탐구하기 위해 시험관 내 모델로 마우스 뇌하수체에서 오가노이드 개발

The pituitary is the master endocrine gland regulating key physiological processes, including body growth, metabolism, sexual maturation, reproduction, ...

우리의 오가노이드 모델은 항상성뿐만 아니라 신생아의 신생아 성숙, 노화 관련 기능 감소 및 땀샘의 종양 성장과 같은 뇌하수체 리모델링 조건에서의 뇌하수체 줄기 세포 생물학을 탐구하는 데 매우 중요합니다. 현재까지 우리의 뇌하수체 오가노이드 기술은 일차 마우스 뇌하수체 줄기 세포를 안정적이고 견고하게 성장하고 확장 할 수있는 유일한 도구입니다. 이 절차를 시연하는 것은 Emma Laporte와 Charlotte Nys, 내 연구 그룹의 박사 과정 학생들입니다.시작하려면 마우스 머리를 탈 이온수로 씻어 혈액을 제거하십시오. 머리에 70 % 에탄올을 뿌려 멸균 환경을 조성하십시오. 그런 다음 멸균 수술 도구를 사용하여 귀 사이의 피부를 제거하십시오.두개골을 열려면 멸균 된 가위로 코 다리를 부러 뜨립니다. 코 다리에서 시작하여 양쪽의 귀쪽으로 두개골을 더 엽니 다. 뇌하수체를 만지지 않고 멸균 핀셋으로 두개골과 뇌를 제거하십시오.무딘 핀셋으로 다이어프마 셀레를 제거하십시오. 그런 다음 입체 현미경으로 전엽을 후엽 및 중간 엽에서 분리하십시오. 둔한 핀셋으로 전엽을 조심스럽게 분리하고 3 밀리리터의 중간 A.Prewarmed 2.5 % 트립신 용액 2 밀리리터가 들어있는 10 밀리리터 삼각 플라스크에 수집하십시오.섭씨 37도에서 15 분 동안 배양하십시오. 미리 예열 된 DNAse 용액 두 밀리리터를 넣고 삼각 플라스크를 10 번 소용돌이 치십시오. 뇌하수체가 바닥에 가라 앉게하고 상층액을 제거하십시오.미리 가온된 트립신 억제제 용액 두 밀리리터를 넣고 섭씨 37도에서 10분 동안 배양한다. 뇌하수체가 바닥에 가라 앉을 때 상층액을 제거하십시오. 미리 예열 된 배지 B 두 밀리리터를 넣고 다섯 분 동안 배양하십시오.여기에 미리 예열 된 배지 C 두 밀리리터를 넣고 15 분 동안 배양하십시오. 뇌하수체가 바닥에 가라 앉게하고 상층액을 제거하십시오. 그런 다음 미리 데운 배지 C.Aspirate로 세 번 헹구고 미리 데운 배지 C.Aspirate의 두 밀리리터를 추가하고 조각이 더 이상 보이지 않을 때까지 멸균되고 화염으로 연마 된 파스퇴르 피펫으로 뇌하수체를 여러 번 배출하십시오.현탁액을 4.5 밀리리터의 미리 예열된 DNAse 용액이 들어있는 15밀리리터 튜브로 옮깁니다. 미리 예열 된 배지 C 두 밀리리터로 플라스크를 세 번 헹구고 현탁액을 튜브로 옮깁니다. 수집된 세포 현탁액을 혼합하고 40미크론 세포 스트레이너를 통해 30밀리리터 튜브로 여과한다.튜브와 세포 스트레이너를 두 밀리리터의 배지 C로 세 번 헹구고 현탁액을 튜브로 옮깁니다. 유리 파스퇴르 피펫을 두 밀리리터의 BSA로 채 웁니다. 피펫의 끝을 튜브 바닥에 놓고 부드럽게 피펫을 꺼내 가시 밀도 층을 형성하십시오.섭씨 네 도에서 10분 동안 190배 G에서 원심분리한다. 상청액을 제거하고 세포 펠릿을 얼음처럼 차가운 고급 DMEM/F-12 1밀리리터에 재현탁합니다. 그런 다음 세포 카운터로 세포를 정량화하십시오.세포 현탁액을 섭씨 네 도에서 10분 동안 190배 G에서 원심분리하고 상층액을 제거하였다. 세포 펠릿을 고급 DMEM/F-12에 재현탁하여 밀리리터당 1.1배 10~6번째 셀의 셀 밀도에 도달합니다. ECM을 30:70의 비율로 원하는 부피의 세포 현탁액에 첨가하고 잘 섞는다.이 혼합물의 30 마이크로 리터 방울을 미리 데운 48 웰 플레이트의 각 웰에 증착하십시오. 플레이트를 거꾸로 돌리고 ECM을 섭씨 37도에서 20 분 동안 응고시킵니다. 인큐베이션 후, 10-마이크로몰 ROCK 억제제로 보충된 250 마이크로리터의 미리 가온된 뇌하수체 오가노이드 배지를 조심스럽게 첨가한다.2 내지 삼일마다 오가노이드가 완전히 성장할 때까지 10 내지 14일 동안 ROCK 억제제가 없는 배지를 변경한다. 오가노이드를 통과하려면 먼저 배지를 부드럽게 흡인하고 400 마이크로 리터의 얼음처럼 차가운 고급 DMEM / F-12를 첨가하여 ECM을 분해하십시오. 이어서, 오가노이드를 마이크로원심분리 튜브에 수집한다.400 마이크로 리터의 얼음처럼 차가운 고급 DMEM / F-12로 우물을 씻으십시오. 튜브를 섭씨 네 도에서 다섯 분 동안 200배 G에서 원심분리한다. 상청액을 제거하고 미리 가온된 TrypLE Express 효소 400 마이크로리터를 첨가한다.튜브를 여러 번 뒤집어 혼합하고 섭씨 37도에서 5 분 동안 배양하십시오. 400 마이크로 리터의 얼음처럼 차가운 고급 DMEM / F-12를 추가하십시오. 섭씨 네 도에서 5분 동안 200배 G에서 원심분리하고 상층액을 제거하였다.펠렛을 100 마이크로리터의 얼음처럼 차가운 고급 DMEM/F-12로 재현탁하십시오. P-200 팁을 좁히고 팁을 사용하여 오가노이드 단편이 얻어질 때까지 격렬하게 피펫팅하여 오가노이드를 해리시킵니다. 800 마이크로 리터의 고급 DMEM / F-12를 추가하십시오.섭씨 네 도에서 10분 동안 190배 G에서 원심분리하고 상층액을 제거하였다. 오가노이드를 통과하려면 펠렛을 적절한 부피의 고급 DMEM / F-12에 재현탁하고 ECM을 30:70의 비율로 첨가하십시오. 잘 섞는다.텍스트 원고에 설명 된대로 오가노이드를 계속 시드하고 배양하십시오. 전엽으로부터 해리된 단일 세포를 ECM에 시딩하고 뇌하수체 오가노이드 배지에서 성장시켰다. 시딩 후 14 일 후, 오가노이드가 완전히 발달되어 최대 500 마이크로 미터의 직경에 도달했습니다.이 단계에서, 오가노이드는 내강을 둘러싸고있는 상피층이있는 낭성 형태를 나타내었다. 성장 후 조밀 한 구조가 나타나는 우물을 사용하지 않는 것이 좋습니다. 계대배양을 위해, 오가노이드 단편을 시딩에 사용하였다.통과 후 칠일 후, 유리한 오가노이드 재성장이 낭성 구조로 관찰되었다. 조밀 한 오가노이드는 바람직하지 않은 오가노이드가 문화를 장악 할 수 있으므로 폐기해야합니다. 상피 마커 E-cadherin 및 사이토케라틴 8 및 18에 대한 면역형광 염색 분석을 통해 오가노이드의 상피 특성을 확인하였다.뇌하수체 줄기 세포 마커 Sox2 및 Trop2의 발현은 줄기를 입증하였고, 뇌하수체 특이적 마커 LHX3는 오가노이드의 뇌하수체 표현형을 나타내었다. 마커 Ki67의 발현은 오가노이드를 구성하는 세포가 증식성 상태에 있음을 보여주었다. RTQ PCR 분석은 다중 계대 후에도 전엽에서보다 오가노이드에서 줄기 마커의 발현이 더 높은 것으로 나타났으며, 이는 줄기 세포의 농축을 검증하였다.초기 시딩시 ECM 돔에 적절한 수의 단일 세포를 플레이트하는 것이 중요하며, 오가노이드를 통과 할 때 단일 세포가 아닌 단편을 다시 시드하는 것을 기억해야합니다.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Development of Organoids from Mouse Pituitary as In Vitro Model to Explore Pituitary Stem Cell Biology

Epigenetic Conversion as a Safe and Simple Method to Obtain Insulin-secreting Cells from Adult Skin Fibroblasts

성인 피부 섬유 아 세포에서 인슐린 분비 세포를 얻을 수있는 안전하고 간단한 방법으로 성적인 변환

Regenerative medicine requires new, fully functional cells that are delivered to patients in order to repair degenerated or damaged tissues. When such ...

연구

발생학

Effective Isolation of Functional Islets from Neonatal Mouse Pancreas

신생아 마우스 췌장의 기능 독도의 효과적인 분리

Perfusion-based islet-isolation protocols from large mammalian pancreata are well established. Such protocols are readily conducted in many laboratories ...

Derivation of Stem Cell Lines from Mouse Preimplantation Embryos

마우스 Preimplantation 배아에서 줄기 세포 라인의

Mouse embryonic stem cell (mESC) derivation is the process by which pluripotent cell lines are established from preimplantation embryos. These lines ...

Dissection and Coronal Slice Preparation of Developing Mouse Pituitary Gland

해 부 및 마우스 뇌 개발의 코로나 슬라이스 준비

The pituitary gland or hypophysis is an important endocrine organ secreting hormones essential for homeostasis. It consists of two glands with separate ...

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

비 계, 3 차원 인슐린 표현 Pancreatoids 마우스 췌 장 창시자에 체 외에서 의 세대

The pancreas is a complex organ composed of many different cell types that work together to regulate blood glucose homeostasis and digestion. These cell ...

Analysis of Cardiac Chamber Development During Mouse Embryogenesis Using Whole Mount Epifluorescence

전체 산 Epifluorescence를 사용 하 여 마우스 Embryogenesis 동안 심장 챔버의 분석

The goal of this protocol is to describe a method for the dissection of mouse embryos and visualization of embryonic mouse ventricular chambers during ...

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C (UV-C) Damage

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C UV-C Damage

자외선-C (UV-C) 손상에 응하여 1 차 마우스 안구 표면 세포/줄기 세포에 있는 산화 손상의 평가

The ocular surface is subjected to regular wear and tear due to various environmental factors. Exposure to UV-C radiation constitutes an occupational ...

A Static Self-Directed Method for Generating Brain Organoids from Human Embryonic Stem Cells

인간 배아 줄기 세포에서 뇌 오르가노이드를 생성하기위한 정적 자기 지향 방법

Human brain organoids differentiated from embryonic stem cells offer the unique opportunity to study complicated interactions of multiple cell types in a ...

Preparation of Small RNA Libraries for Sequencing from Early Mouse Embryos

초기 마우스 배아에서 시퀀싱을 위한 작은 RNA 라이브러리 의 준비

MicroRNAs (miRNAs) are important for the complex regulation of cell fate decisions and developmental timing. In vivo studies of the contribution of miRNAs ...