Name: a modified surgical technique for kidney transplantation in mice
Uploaded: 2022-07-22T13:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Modified Surgical Technique for Kidney Transplantation in Mice at JoVE.com

نشكر فريق الدكتور تيانتيان باي على المساعدة في التعليق الصوتي ، والآنسة ميان باو على مساعدتها في التوضيح الطبي. تم دعم هذا العمل جزئيا من قبل مؤسسة الأبحاث الألمانية (DFG) لتعزيز التعاون الدولي (HO2581/4-1 إلى AH) والمؤسسة الوطنية للعلوم في الصين (NSFC ؛ # 81760291 إلى FJ).

أجريت جميع التجارب على الحيوانات وفقا للمبادئ التوجيهية الصادرة عن التوجيه 2010/63/EU الصادر عن البرلمان الأوروبي بشأن حماية الحيوانات المستخدمة للأغراض العلمية (بطاقة أخلاقيات الحيوان: وزارة سلامة الأغذية والأدوية في ولاية سكسونيا السفلى ، # 33.9-42502-04-11/0492). قم بإجراء الإجراءات باستخدام الأدو...

<ol>
	<li>Skoskiewicz, M., Chase, C., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kidney+transplants+between+mice+of+graded+immunogenetic+diversity.">Kidney transplants between mice of graded immunogenetic diversity.</a> Transplantation Proceedings. 5 (1), 721-725 (1973).</li><li>Jiang, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+assessment+of+renal+fibrosis+with+magnetization+transfer+MR+imaging:+Validation+and+evaluation+in+murine+renal+artery+stenosis.">Noninvasive assessment of renal fibrosis with magnetization transfer MR imaging: Validation and evaluation in murine renal artery stenosis.</a> Radiology. 283 (1), 77-86 (2017).</li><li>Tse, G. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+kidney+transplantation:+Models+of+allograft+rejection.">Mouse kidney transplantation: Models of allograft rejection.</a> Journal of Visualized Experiments. (92), e52163 (2014).</li><li>Okazaki, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=et+al.Costimulatory+blockade-mediated+lung+allograft+acceptance+is+abrogated+by+overexpression+of+Bcl-2+in+the+recipient.">et al.Costimulatory blockade-mediated lung allograft acceptance is abrogated by overexpression of Bcl-2 in the recipient.</a> Transplantation Proceedings. 41 (1), 385-387 (2009).</li><li>Chuck, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=et+al.Ultra-short+echo-time+magnetic+resonance+imaging+distinguishes+ischemia/reperfusion+injury+from+acute+rejection+in+a+mouse+lung+transplantation+model.">et al.Ultra-short echo-time magnetic resonance imaging distinguishes ischemia/reperfusion injury from acute rejection in a mouse lung transplantation model.</a> Transplant International. 29 (1), 108-118 (2016).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pattern+of+liver,+kidney,+heart,+and+intestine+allograft+rejection+in+different+mouse+strain+combinations.">Pattern of liver, kidney, heart, and intestine allograft rejection in different mouse strain combinations.</a> Transplantation. 62 (9), 1267-1272 (1996).</li><li>Wang, J., Hockenheimer, S., Bickerstaff, A. A., Hadley, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+renal+transplantation+procedure.">Murine renal transplantation procedure.</a> Journal of Visualized Experiments. (29), e1150 (2009).</li><li>Plenter, R., Jain, S., Ruller, C. M., Nydam, T. L., Jani, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+kidney+transplant+technique.">Murine kidney transplant technique.</a> Journal of Visualized Experiments. (104), e52848 (2015).</li><li>Plenter, R. J., Jain, S., Nydam, T. L., Jani, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revised+arterial+anastomosis+for+improving+murine+kidney+transplant+outcomes.">Revised arterial anastomosis for improving murine kidney transplant outcomes.</a> Journal of Investigative Surgery. 28 (4), 208-214 (2015).</li><li>Rong, S., Lewis, A. G., Kunter, U., Haller, H., Gueler, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+knotless+technique+for+kidney+transplantation+in+the+mouse.">A knotless technique for kidney transplantation in the mouse.</a> Journal of Transplantation. , 127215 (2012).</li><li>Kreimann, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemia+reperfusion+injury+triggers+CXCL13+release+and+B-cell+recruitment+after+allogenic+kidney+transplantation.">Ischemia reperfusion injury triggers CXCL13 release and B-cell recruitment after allogenic kidney transplantation.</a> Frontiers in Immunology. 11, 1204 (2020).</li><li>Schmidbauer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diffusion-Weighted+imaging+and+mapping+of+T1+and+T2+relaxation+time+for+evaluation+of+chronic+renal+allograft+rejection+in+a+translational+mouse+model.">Diffusion-Weighted imaging and mapping of T1 and T2 relaxation time for evaluation of chronic renal allograft rejection in a translational mouse model.</a> Journal of Clinical Medicine. 10 (19), 4318 (2021).</li><li>Wu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+technique+for+blood+circuit+reconstruction+in+mouse+heart+transplantation+model.">Novel technique for blood circuit reconstruction in mouse heart transplantation model.</a> Microsurgery. 26, 594-598 (2006).</li><li>Haas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+allograft+nephropathy+or+interstitial+fibrosis+and+tubular+atrophy:+what+is+in+a+name.">Chronic allograft nephropathy or interstitial fibrosis and tubular atrophy: what is in a name.</a> Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 23 (3), 245-250 (2014).</li><li>Dang, Z., MacKinnon, A., Marson, L. P., Sethi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tubular+atrophy+and+interstitial+fibrosis+after+renal+transplantation+is+dependent+on+galectin-3.">Tubular atrophy and interstitial fibrosis after renal transplantation is dependent on galectin-3.</a> Transplantation. 93 (5), 477-484 (2012).</li><li>Yin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+circuit+reconstruction+in+an+abdominal+mouse+heart+transplantation+model.">Blood circuit reconstruction in an abdominal mouse heart transplantation model.</a> Journal of Visualized Experiments. (172), e62007 (2021).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+techniques+for+kidney+transplantation+in+mice.">Improved techniques for kidney transplantation in mice.</a> Microsurgery. 16 (2), 103-109 (1995).</li><li>Mannon, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+rejection+of+mouse+kidney+allografts.">Chronic rejection of mouse kidney allografts.</a> Kidney International. 55 (5), 1935-1944 (1999).</li><li>Coffman, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+renal+function+in+mouse+kidney+allografts+lacking+MHC+class+I+antigens.">Improved renal function in mouse kidney allografts lacking MHC class I antigens.</a> Journal of Immunology. 151 (1), 425-435 (1993).</li><li>Martins, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Learning+curve,+surgical+results+and+operative+complications+for+kidney+transplantation+in+mice.">Learning curve, surgical results and operative complications for kidney transplantation in mice.</a> Microsurgery. 26 (8), 590-593 (2006).</li></ol>

في حين أن نموذج زراعة الجلد في الفئران بسيط وسهل الأداء لدراسة أحداث الرفض المناعي ، فقد ثبت أن التقنيات الجراحية للتحقيق بشكل أكثر تحديدا في التغيرات الالتهابية المرتبطة بالمناعة بعد القلب16 وزرع الكلى10 معقدة ومتطلبة للغاية. من وجهة نظر أخصائي أمراض الكلى المزر...

منذ أن طور Sakowitz et al. نماذج الفئران لزرع الكلى في عام 1973 لأول مرة1 ، فقد ثبت أنه أداة تجريبية مهمة لدراسة آليات الإصابة الإقفارية المزروعة والرفض المناعي وكذلك لتطوير علاجات جديدة تهدف إلى إطالة أمد البقاء على قيد الحياة وربما لتحقيق التسامح المناعي. ومع ذلك ، فقد أثبتت التقنية الجراحية أنها معقدة ومتطلبة للغاية ، وأحيانا لها مضاعفات مثل تضيقات مفاغرة الأوعية الدموية التي تؤدي إلى فشل زرع الكلى غير المناعي قبل الكلوي2 ، والفشل الكلوي الناجم عن نقص التروية والنخر اللاحق للحالب المزروع ، وتضيقات مفاغرة الحالب المزروع و / أو المثانة البول لدى المتلقي مما يؤدي إلى اضطراب في تدفق البول. كل هذه هي الأسباب التي تجعل زراعة الكلى في الفئران لم يتم تطويرها بشكل أكبر وبالتالي لا تستخدم على نطاق واسع. لا يزال إنشاء نموذج فعال ومستقر طويل الأجل لزراعة كلى الفئران دون مضاعفات الأوعية الدموية والمسالك البولية له أهمية لا يمكن الاستغناء عنها للعديد من الدراسات في مجال زراعة الأعضاء مع التركيز على المناعة الكلوية بوساطة ولكن أيضا الأمراض المعدية3. بالإضافة إلى ذلك ، بالمقارنة مع عمليات زرع الأعضاء الأخرى في نماذج الفئران مثل زراعة الرئة والقلب والأمعاء4,5 ، يوفر نموذج زراعة الكلى للفأر فرصة لدراسة البقاء على قيد الحياة على المدى الطويل حتى في وضع التباين الرئيسي في مستضد التوافق النسيجي 3,6. وقد تبين أيضا أنه في نفس بيئة مجموعات الإجهاد بين المتبرع والمتلقي ، تتميز عمليات زرع الأعضاء المختلفة مثل القلب أو الكلى بديناميكيات وبداية مختلفة لرفض allograft3. علاوة على ذلك ، من وجهة نظر أمراض الكلى ، فهو نموذج أكثر ملاءمة لدراسة الآليات التنظيمية المناعية بوساطة المتني في سياق أحداث الرفض الحاد والمزمن من تجارب زراعة الجلد البسيطة.
على أساس التقارير السابقة حول التقنية الجراحية لزرع الكلى في الفئران3،7،8،9 ، نوضح هنا التحسينات الموثوقة التالية التي تم تطبيقها بنجاح خلال السنوات العشر الماضية ضمن مجموعتنا 10،11،12: أولا ، يتم الحفاظ على الشريان الحالبي بأمان حيث يتم استئصال الشريان الكلوي في كتلة واحدة. جنبا إلى جنب مع الجزء المعني من الشريان الأورطي البطني. ثانيا ، تقنية جديدة وبسيطة وسريعة لمفاغرة الأوعية الدموية بدون عقدة حيث لا يتم ربط الغرزة النهائية من المفاغرة بنهاية التعادل العلوي مثل النهج التقليدي ولكنها تظل حرة. تمكن هذه التقنية من زيادة أو تقليل حجم المفاغرة بعد التروية الكلوية لتجنب تضيق الأوعية الدموية والنزيف داخل البطن. ثالثا ، تم استخدام إبر حقنة 21 جم و 30 جم كأداة توجيه ثقب مساعدة من أجل زرع الحالب المانح في جدار المثانة المتلقي مما يقلل من الضرر الذي يلحق بالمثانة المتلقي ويسهل تكوين مفاغرة خالية من التضيق.
في هذا التقرير ، قارنا أيضا التقنية التقليدية المستخدمة على نطاق واسع مع التقنية المعدلة التي تم إنشاؤها في مختبرنا ولم نجد فرقا كبيرا في درجة ضمور الكلى الأنبوبي وتليف الأنسجة الخلالية لزرع الكلى. في الدراسات السابقة ، قارنا أيضا نتائج هذه التقنية الجديدة بالطريقة التقليدية من حيث النزيف الموضعي والجلطة ووقت إجراء مفاغرة الأوعية ومعدل البقاء على قيد الحياة. وجدنا تحسينات مثل التخفيضات الكبيرة في أحداث الجلطة المحلية (1.1٪ مقابل 6.6٪) ، وتقليل الوقت لإجراء المفاغرة ، والكسب غير المشروع الجيني للكلى القابل للتكرار على المدى الطويل (95٪ مقابل 84٪ مع النهج الكلاسيكي)10.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>30G-needles</td>
			<td>Braun</td>
			<td>456300</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>acepromazine</td>
			<td>CP Pharma</td>
			<td>Tranquisol P</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bepanthen eye ointment</td>
			<td>Haus-Apotheke</td>
			<td>PZN 01578675</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bonn Micro Forceps</td>
			<td>FST</td>
			<td>11083-07</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Box for insulation and oxygen supply device</td>
			<td>RUSKINN</td>
			<td>INVIV</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6J&#160; mice</td>
			<td>Charles River. Germany</td>
			<td>no catalog number</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprofen</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>Rimadyl 50 mg/ml</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CATHETER-FEP 26G</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>Surflo-W</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clip Applicator Forceps Style</td>
			<td>FST</td>
			<td>18057-14</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved forceps</td>
			<td>WPI</td>
			<td>14114-G</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cutasept skin disinfection</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BODL980365</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dehydrator</td>
			<td>DIAPATH</td>
			<td>Donatello</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>electrosurgical pen</td>
			<td>Bovie</td>
			<td>CHANGE-A-TIP</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding machine</td>
			<td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td>
			<td>JB-P5</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Sinopharm Group Chemical Reagent Co. LtD</td>
			<td>100092683</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frozen platform</td>
			<td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td>
			<td>JB-L5</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gauze pads, cotton swabs</td>
			<td>Lohmann-Rauscher</td>
			<td>13353</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass slide</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>G6004</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HE dye solution set</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>G1003</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating mat</td>
			<td>THERMO MAT PRO 30W</td>
			<td>HTP-30</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hemostatic sponge</td>
			<td>CuraSpon</td>
			<td>J1276A</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>heparine-solution</td>
			<td>Haus-Apotheke</td>
			<td>PZN 03029820</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ice box</td>
			<td>PETZ</td>
			<td>No Catalog Number available</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaging system</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Nikon DS-U3</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inhalation anesthesia device</td>
			<td>GROPPLER</td>
			<td>BKGM 0616</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isoflurane</td>
			<td>CP Pharma</td>
			<td>Isofluran CP 1 ml/ml</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ketamine</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>no catalog numer</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Masson dye solution set</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>G1006</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>metamizole</td>
			<td>WDT</td>
			<td>no catalog numer</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>15000-00,15000-10</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Serrefine ( Clamp ) Angled / 16 mm</td>
			<td>FST</td>
			<td>18055-06</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>LEICAMZ6</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope light</td>
			<td>SCHOTT</td>
			<td>KL2500LED</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral gum</td>
			<td>SCRC</td>
			<td>10004160</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oven</td>
			<td>Tianjin Laibo Rui Instrument Equipment Co., Ltd</td>
			<td>GFL-230</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pathology slicer</td>
			<td>Shanghai Leica Instrument Co., Ltd</td>
			<td>RM2016</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline solution (NaCl 0.9 %)</td>
			<td>Haus-Apotheke</td>
			<td>PZN 06178437</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>scissors</td>
			<td>Peha Instruments</td>
			<td>991083/4</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slides</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>small Petri dish</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>8,33,900</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>straight forceps</td>
			<td>WPI</td>
			<td>14113-G</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>surgical tape</td>
			<td>BSN</td>
			<td>4120</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture Tying Forceps - 10 cm</td>
			<td>FST</td>
			<td>18025-10</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures(10-0)</td>
			<td>Medtronic</td>
			<td>N2540</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures(4-0)</td>
			<td>ETHILON</td>
			<td>V4940H</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures(7-0)</td>
			<td>ETHILON</td>
			<td>1647H</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe (0,3 mL)</td>
			<td>BD</td>
			<td>324826</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe (1 mL)</td>
			<td>BD</td>
			<td>320801</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue spreader</td>
			<td>Zhejiang Kehua Instrument Co., Ltd</td>
			<td>KD-P</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Upright optical microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Nikon Eclipse E100</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>xylazine</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>Rompun</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Sinopharm Group Chemical Reagent Co. LtD</td>
			<td>10023418</td>
			<td>-</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a modified surgical technique for kidney transplantation in mice

زرع الكلى في الفئران هو إجراء جراحي معقد وصعب. وهناك عدد قليل جدا من المنشورات التي تبين الخطوات الرئيسية لهذه العملية. لذلك ، تقدم هذه المقالة التقنية وتشير إلى المحاذير الجراحية المرتبطة بهذه العملية. بالإضافة إلى ذلك ، يتم توضيح تعديلات مهمة مقارنة بالإجراء التقليدي. أولا ، يتم قطع رقعة من الشريان الأورطي البطني وإعدادها بحيث يتم نقل التشعبات القريبة من الشريان الكلوي ، بما في ذلك الشريان الحالبي مع الكلى المانحة في كتلة. هذا يقلل من خطر نخر الحالب ويتجنب تطور انسداد المسالك البولية. ثانيا ، تم إثبات طريقة جديدة لمفاغرة الأوعية الدموية تسمح للمشغل بزيادة أو تقليل حجم المفاغرة بمرونة بعد بدء تروية زرع الكلى بالفعل. هذا يتجنب تطور تضيقات الأوعية الدموية والنزيف داخل البطن. ثالثا ، يتم عرض تقنية تمكن من مفاغرة الحالب المانح الحساس والمثانة المتلقية التي لا تسبب صدمة. يمكن أن يؤدي اعتماد هذا البروتوكول إلى تقصير وقت التشغيل وتقليل الضرر الذي يلحق بمثانة المتلقي ، وبالتالي زيادة كبيرة في معدل نجاح العملية للفئران المتلقية.

بعد أربعة أسابيع من الزرع ، أظهرت كل من التقنية المعدلة وكذلك التقنية التقليدية علامات معتدلة على ضمور أنبوبي كلوي14,15 عند مقارنتها بالكلى المعاكسة الأصلية (الشكل 1). لم تظهر درجة ضمور الأنابيب الكلوية أي فرق كبير بين التقنيتين المختلفتين. أظ...

Watch this Scientific Journal Video about A Modified Surgical Technique for Kidney Transplantation in Mice at JoVE.com

A Modified Surgical Technique for Kidney Transplantation in Mice

يقدم هذا البروتوكول تقنية جراحية جديدة لزراعة كلى الفئران مع التركيز على استراتيجية مفاغرة شريانية معدلة. كما يتم تقديم تقنية خياطة الأوعية الدموية بما في ذلك طريقة بسيطة وأكثر أمانا لمفاغرة الحالب والمثانة. هذه التعديلات تقصر وقت العملية وتحسن معدل نجاح عملية زرع الكلى بالفئران.

تقنية جراحية معدلة لزراعة الكلى في الفئران

Kidney transplantation in mice is a complicated and challenging surgery procedure. There are very few publications demonstrating the key steps of this ...

زرع الكلى في الفئران ضروري لدراسة آليات رفض اللوغراف الحاد والمزمن. هنا نقدم تقنية جراحية جديدة لمفاغرة الأوعية الدموية وزرع الحالب في نموذج زرع الكلى البطنية في الفئران. في نماذج زراعة الكلى التقليدية للفئران، يتم ربط الجزء العلوي من الشريان الأورطي تقريبا بالشرايين الكلوية.يتم نقل الوريد الكلوي الأيسر للمتبرع عند الوريد الأجوف ويتم تقسيم الشريان الأورطي المتبرع بالتساوي أسفل الشريان الكلوي ليكون لاحقا مفاغرة إلى الشريان الأورطي البطني للمتلقي. في هذه التقنية المعدلة لزرع كلى الفأر ، يتم أيضا نقل الوريد الكلوي الأيسر للمتبرع في الوريد الأجوف ، ولكن يتم قطع الشريان الأورطي المتبرع فوق نسل الشريان الكلوي ومفاغرته إلى الشريان الأورطي البطني المتلقي. في حين يتم ربط نهاية الشريان الأورطي المانحة ، يتم الحفاظ على الشريان الحالبي عمدا.الآن نبدأ عرض الإجراء الجراحي. للتخدير ، ضع الماوس في الصندوق لاستنشاق الأيزوفلوران حوالي 40 إلى 60 ثانية من أجل الحث على فقدان الوعي. بمجرد تخدير الماوس ، قم بوزن الماوس.وفقا لوزن الفأر ، يتم إعطاء الحقن داخل الصفاق من الكيتامين ، زيلازين ، الأسيبرومازين للفأر المخدر. عندما يصبح التخدير ساري المفعول ، قم بقص فرو البطن. ثم قم بإصلاح الماوس وتطهيره على جدول العمليات.قطع الجلد باستخدام شق البطن المتقاطع. قطع عضلات جدار البطن. بعد ذلك ، قم بتغطية الأحشاء بحذر بعيدا بشاش ملحي مشرب.كشف الكلى اليسرى والشريان الأورطي والوريد الأجوف السفلي. قم بكي الأوردة القطنية اليسرى ، بما في ذلك فروعها الأساسية والأوعية الصغيرة الأخرى بما في ذلك الأوعية الكظرية اليسرى بعناية. تعبئة المنطقة الأبهرية بين الشرايين الكلوية اليسرى واليمنى حوالي مليمترين في الطول.افصل الوريد الأجوف السفلي الرقيق والشريان الأورطي. وتمرير ملقط منحني تحت الشريان الأورطي لوضع ربطة عنق فضفاضة من خياطة 7.06 حول هذا الوعاء. عبر المشبك منطقة الشريان الأورطي أسفل الشريان الكلوي الأيمن والوريد الأجوف السفلي باستخدام اثنين من المشابك الوعائية الدقيقة خمسة ملليمتر.انقل الوريد الكلوي الأيسر من الوريد الأجوف. اغسل الشريان الأورطي بملليلتر واحد من محلول الهيبارين. شد الرباط وقطع الشريان الأورطي أسفل الرباط وكذلك تحت المشبك القريب.تحضير بعناية ، بحيث يتم الحفاظ على الشريان الحالبي الحساس تماما. حرر الكلى اليسرى والأوعية المرتبطة بها تماما عن طريق كي جميع الأوعية المحيطة بالأنسجة بحذر. إزالة الكلى وتخزينها في محلول خط الخلية في أربع درجات.تشبه خطوات العملية الأولية تلك الموضحة سابقا للفأر المتبرع ، بما في ذلك التخدير والتطهير. افتح البطن عن طريق شق متوسط ، ثم قم بتغطية أعضاء البطن بشاش رطب باستخدام محلول ملحي. حافظ بعناية على الشريان الأورطي اللعابي وتأكد من كي كل فرع من فروع الأوعية الكبيرة.استخدم الكي الكهربائي لتشريح الحالب الأيسر بعناية في وضع قريب من حوض الكلى. ثم، قم بإزالة الكلى اليسرى. كشف الوريد الأجوف السفلي والشريان الأورطي البطني وفصلهما عن الأنسجة الدهنية المحيطة التي يزيد طولها عن أربعة ملليمترات تقريبا.ثم عبر المشبك مع اثنين من المشابك الأوعية الدموية الدقيقة تقريبا وبعيدا عنهم. استخدم حامل إبرة صغير لتوجيه إبرة خياطة أحادية الخيوط 10/0 ، والتي يتم وضعها عبر جدار الشريان الأورطي من الطريقة القريبة إلى البعيدة. يتم تحقيق بضع الشرايين البيضاوي بمقدار ملليمتر واحد تقريبا عن طريق الجر التصاعدي اللطيف للخياطة ، مع القطع مباشرة أسفل الوجه السفلي للإبرة باستخدام مقص منحني دقيق.إجراء مفاغرة الشريان الأورطي بين المتبرع والمتلقي بطريقة شاملة. غرز الأطراف القريبة والبعيدة من المفاغرة. الغرزة الأخيرة باستخدام اثنين من الغرز 10.0 منفصلة.بعد الربط ، اترك الغرز الطويلة ، بما في ذلك الإبرة ، في مكانها. خياطة الجانب الأيسر من الجدار الأبهري للمفاغرة باستمرار مع اثنين من الغرز متباعدة بالتساوي في اتجاه بعيد قريب. بعد الغرزة الأخيرة ، قم بتوجيه الخيط من خلال سمك جزئي لجدار الوعاء فوق ربطة الخياطة العلوية ومارس في نفس الوقت الجر اللطيف إلى الطرف القصير من ربطة الخياطة السفلية.لاحظ ، في هذه التقنية الجديدة بدون عقدة ، لا ترتبط الغرزة الأخيرة بالطرف القصير من ربطة العنق العلوية. اقلب الكلى المزروعة إلى وضعها الطبيعي. الآن خياطة باستمرار الجدار الأيمن من مفاغرة الأبهر بطريقة قريبة إلى بعيدة باستخدام ثلاث غرز بطريقة قريبة إلى بعيدة.لاحظ ، مقارنة بالتقنية الجراحية التقليدية ، يتم دمج الخيط الأخير مع ربطة العنق البعيدة القريبة. لا تربطه بنهاية الخيط السفلي ، بل اقطعه ليترك طولا حرا يتراوح من حوالي 2 إلى 3 ملليمترات بدلا من ذلك. قطع الوريد الأجوف السفلي طولي بطول كاف يبلغ حوالي 1.5 ملم.ضع هذا الشق أقل قليلا من نظيره الأبهري. قم بإجراء المفاغرة الوريدية باستخدام نفس إجراء الخياطة كما هو موضح سابقا مع اختلاف الحاجة إلى أربع إلى خمس غرز لكل جانب من جوانب المفاغرة. يتم ترك الغرزة النهائية كنهاية حرة بطول مماثل لمفاغرة الأبهر الموصوفة أعلاه.وتقنية المفاغرة الجديدة بدون عقدة ، لا يتم ربط الغرزة الأخيرة ولكن تركها حرة. هذا يقصر وقت العملية ويسمح للجراح بزيادة أو تقليل حجم المفاغرة. هذا التحسن يقلل من صعوبة ومضاعفات ما بعد العملية من مفاغرة الأوعية الدموية.بعد الانتهاء من كل من المفاغرة ، استخدم مسحة جافة لممارسة ضغط لطيف نحو المنطقة المخيطة لمدة 10 إلى 20 ثانية. بعد ذلك ، يمكن إزالة كلا المشابك. اخترق مثانة بول المتلقي باستخدام إبرة مستقيمة مع خياطة 10.0 وأدخلها في تجويف إبرة 21 G للإرشاد.الآن قم بتوجيه إبرة 21 G لخياطة ثقب في مكان تطبيق الإبرة السابق وسحب الإبرة. قم بخياطة نهاية الحالب المشذبة وثقبت المثانة باستخدام هذه الخياطة 10.0 مرة أخرى في مكان دخولها. اسحب خيوط 10.0 والحالب إلى المثانة البولية من خلال الثقب المبني.مفاغرة الحالب المتبرع إلى المثانة البول المتلقي. هنا ، قم بتوصيل الغشاء الخارجي للحالب بالغشاء الخارجي لجدار المثانة وإجراء خيوط متقطعة بثلاث إلى أربع غرز. اسحب خياطة الجر.ضع الأمعاء مرة أخرى في تجويف البطن. إجراء خيوط من طبقتين ، أولا عضلات البطن تليها الجلد لإغلاق جرح البطن. ضع الفئران المزروعة في غرفة الأكسجين والتحكم في درجة الحرارة للتعافي بعد الجراحة.إعطاء مسكن كاف بعد العملية الجراحية بعد أربعة أيام متتالية من العملية. إجراء استئصال الكلية المعاكس للفأر المتلقي بعد خمسة أيام من تخدير الزرع. رفع وتسجيل حالة الماوس.قارنا تقنيات الزرع التقليدية والمعدلة من خلال تقييم التغيرات النسيجية للكلى المتساوية الطعم المزروعة مقابل الكلى المعاكسة الأصلية المتلقية. لم يتم العثور على كل من درجة كأس الأنابيب الكلوية والتليف الخلالي الكلوي مختلفة اختلافا كبيرا بعد أربعة أسابيع و 12 أسبوعا من الزرع على التوالي. لقد حققنا سابقا في نتائج هذه التقنية الجديدة الخالية من العقد وقارناها بالنهج الكلاسيكي من حيث الجوانب التقنية للمضاعفات العملية الجراحية وما بعد الجراحة.ارتبطت التقنية المعدلة الموضحة هنا بانخفاض حدوث أحداث الجلطات الوريدية الشريانية داخل التطعيم. كان الوقت اللازم لإجراء التضيق أقل بكثير وتم تحقيق متساوي الطعم الممتاز للكلى ، والبقاء على قيد الحياة على المدى الطويل. زرع الكلى في الفئران هو إجراء معقد ومتطور.هذه تقنية جراحية جديدة لمفاغرة الأوعية الدموية وزرع الكلى ملتزمة بتحسين معدل النجاح الكلي ، مما يجعلها أداة موثوقة لدراسة استجابة المناعة الذاتية بعد زرع الكلى.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

4D التصوير تعدد الوسائط من<em&gt; الليمونية rodentium</em&gt; التهابات في الفئران

This protocol outlines the steps required to  longitudinally monitor a bioluminescent bacterial infection using composite 3D diffuse light imaging ...

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

على المدى الطويل المزمن<em&gt; الزائفة الزنجارية</em&gt; عدوى مجرى الهواء في الفئران

A mouse model of chronic airway infection is a key asset in cystic fibrosis (CF) research, although there are a number of concerns regarding the model ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

زرع الجلد الذيل لدراسة خيفي CD4 T الردود الخليوي في الفئران

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

In Vitro and In Vivo Assessment of T, B and Myeloid Cells Suppressive Activity and Humoral Responses from Transplant Recipients

In Vitro and In Vivo Assessment of T, B and Myeloid Cells Suppressive Activity and Humoral Responses from Transplant Recipients

في المختبر و في فيفو التقييم تي وب وخلايا النقوي النشاط القمعية واستجابات خلطيه من المتلقين زرع

The main concern in transplantation is to achieve specific tolerance through induction of regulatory cells. The understanding of tolerance mechanisms ...

Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

التعريفي للشلل وإصابة النظام المرئي في الفئران التي تي الخلايا المحددة للبصري المياليني أقوابورين أوتوانتيجين-4

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

Measuring Deformability and Red Cell Heterogeneity in Blood by Ektacytometry

قياس ديفورمابيليتي وعدم تجانس الخلايا الحمراء في الدم من اكتاسيتوميتري

Decreased red cell deformability is characteristic of several disorders. In some cases, the extent of defective deformability can predict severity of ...

Printed Glycan Array: A Sensitive Technique for the Analysis of the Repertoire of Circulating Anti-carbohydrate Antibodies in Small Animals

المطبوعة جليكان الصفيف: تقنية حساسة لتحليل مرجع تعميم الأجسام المضادة الكربوهيدرات في الحيوانات الصغيرة

The repertoire of circulating anti-carbohydrate antibodies of a given individual is often associated with its immunological status. Not only the ...

Renal Subcapsular Transplantation of 2'-Deoxyguanosine-Treated Murine Embryonic Thymus in Nude Mice

زرع تحت القبعات الكلوية من الغدة الصعترية الجنينية Murine المعالجة 2'-ديوكسيغوانوسين في الفئران عارية

The thymus is an important central immune organ, which plays an essential role in the development and differentiation of T cells. Thymus transplantation ...

An Immunological Model for Heterotopic Heart and Cardiac Muscle Cell Transplantation in Rats

نموذج مناعي لزرع خلايا القلب الهيترولوجي وخلايا عضلة القلب في الفئران

Heterotopic heart transplantation in rats has been a commonly used model for diverse immunological studies for more than 50 years. Several modifications ...

Optimization of the Cuff Technique for Murine Heart Transplantation

تحسين تقنية الكفة لزراعة القلب مورين

Murine cardiac transplantation has been performed for more than 40 years. With advancements in microsurgery, certain new techniques have been used to ...