Name: a modified surgical technique for kidney transplantation in mice
Uploaded: 2022-07-22T13:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Modified Surgical Technique for Kidney Transplantation in Mice at JoVE.com

Vi takker Dr. Tiantian Bai-teamet for hjælp med voice over, frøken Mian Pao for hendes hjælp med medicinsk illustration. Dette arbejde blev delvist støttet af den tyske forskningsfond (DFG) for at fremme internationale samarbejder (HO2581/4-1 til AH) og National Science Foundation of China (NSFC; #81760291 til FJ).

Alle dyreforsøg blev udført i overensstemmelse med retningslinjerne i Europa-Parlamentets direktiv 2010/63/EU om beskyttelse af dyr, der anvendes til videnskabelige formål (Dyreetikkort: Niedersachsens ministerium for fødevaresikkerhed, #33.9-42502-04-11/0492). Udfør procedurer ved hjælp af sterile kirurgiske instrumenter og forbrugsstoffer (autoklaveret) og prøv at holde operationsområdet så sterilt som muligt.
BEMÆRK: C57BL/6J hanmus fungerede som donorer og modtagere (syngeneisk t...

<ol>
	<li>Skoskiewicz, M., Chase, C., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kidney+transplants+between+mice+of+graded+immunogenetic+diversity.">Kidney transplants between mice of graded immunogenetic diversity.</a> Transplantation Proceedings. 5 (1), 721-725 (1973).</li><li>Jiang, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+assessment+of+renal+fibrosis+with+magnetization+transfer+MR+imaging:+Validation+and+evaluation+in+murine+renal+artery+stenosis.">Noninvasive assessment of renal fibrosis with magnetization transfer MR imaging: Validation and evaluation in murine renal artery stenosis.</a> Radiology. 283 (1), 77-86 (2017).</li><li>Tse, G. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+kidney+transplantation:+Models+of+allograft+rejection.">Mouse kidney transplantation: Models of allograft rejection.</a> Journal of Visualized Experiments. (92), e52163 (2014).</li><li>Okazaki, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=et+al.Costimulatory+blockade-mediated+lung+allograft+acceptance+is+abrogated+by+overexpression+of+Bcl-2+in+the+recipient.">et al.Costimulatory blockade-mediated lung allograft acceptance is abrogated by overexpression of Bcl-2 in the recipient.</a> Transplantation Proceedings. 41 (1), 385-387 (2009).</li><li>Chuck, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=et+al.Ultra-short+echo-time+magnetic+resonance+imaging+distinguishes+ischemia/reperfusion+injury+from+acute+rejection+in+a+mouse+lung+transplantation+model.">et al.Ultra-short echo-time magnetic resonance imaging distinguishes ischemia/reperfusion injury from acute rejection in a mouse lung transplantation model.</a> Transplant International. 29 (1), 108-118 (2016).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pattern+of+liver,+kidney,+heart,+and+intestine+allograft+rejection+in+different+mouse+strain+combinations.">Pattern of liver, kidney, heart, and intestine allograft rejection in different mouse strain combinations.</a> Transplantation. 62 (9), 1267-1272 (1996).</li><li>Wang, J., Hockenheimer, S., Bickerstaff, A. A., Hadley, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+renal+transplantation+procedure.">Murine renal transplantation procedure.</a> Journal of Visualized Experiments. (29), e1150 (2009).</li><li>Plenter, R., Jain, S., Ruller, C. M., Nydam, T. L., Jani, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+kidney+transplant+technique.">Murine kidney transplant technique.</a> Journal of Visualized Experiments. (104), e52848 (2015).</li><li>Plenter, R. J., Jain, S., Nydam, T. L., Jani, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revised+arterial+anastomosis+for+improving+murine+kidney+transplant+outcomes.">Revised arterial anastomosis for improving murine kidney transplant outcomes.</a> Journal of Investigative Surgery. 28 (4), 208-214 (2015).</li><li>Rong, S., Lewis, A. G., Kunter, U., Haller, H., Gueler, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+knotless+technique+for+kidney+transplantation+in+the+mouse.">A knotless technique for kidney transplantation in the mouse.</a> Journal of Transplantation. , 127215 (2012).</li><li>Kreimann, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemia+reperfusion+injury+triggers+CXCL13+release+and+B-cell+recruitment+after+allogenic+kidney+transplantation.">Ischemia reperfusion injury triggers CXCL13 release and B-cell recruitment after allogenic kidney transplantation.</a> Frontiers in Immunology. 11, 1204 (2020).</li><li>Schmidbauer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diffusion-Weighted+imaging+and+mapping+of+T1+and+T2+relaxation+time+for+evaluation+of+chronic+renal+allograft+rejection+in+a+translational+mouse+model.">Diffusion-Weighted imaging and mapping of T1 and T2 relaxation time for evaluation of chronic renal allograft rejection in a translational mouse model.</a> Journal of Clinical Medicine. 10 (19), 4318 (2021).</li><li>Wu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+technique+for+blood+circuit+reconstruction+in+mouse+heart+transplantation+model.">Novel technique for blood circuit reconstruction in mouse heart transplantation model.</a> Microsurgery. 26, 594-598 (2006).</li><li>Haas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+allograft+nephropathy+or+interstitial+fibrosis+and+tubular+atrophy:+what+is+in+a+name.">Chronic allograft nephropathy or interstitial fibrosis and tubular atrophy: what is in a name.</a> Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 23 (3), 245-250 (2014).</li><li>Dang, Z., MacKinnon, A., Marson, L. P., Sethi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tubular+atrophy+and+interstitial+fibrosis+after+renal+transplantation+is+dependent+on+galectin-3.">Tubular atrophy and interstitial fibrosis after renal transplantation is dependent on galectin-3.</a> Transplantation. 93 (5), 477-484 (2012).</li><li>Yin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+circuit+reconstruction+in+an+abdominal+mouse+heart+transplantation+model.">Blood circuit reconstruction in an abdominal mouse heart transplantation model.</a> Journal of Visualized Experiments. (172), e62007 (2021).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+techniques+for+kidney+transplantation+in+mice.">Improved techniques for kidney transplantation in mice.</a> Microsurgery. 16 (2), 103-109 (1995).</li><li>Mannon, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+rejection+of+mouse+kidney+allografts.">Chronic rejection of mouse kidney allografts.</a> Kidney International. 55 (5), 1935-1944 (1999).</li><li>Coffman, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+renal+function+in+mouse+kidney+allografts+lacking+MHC+class+I+antigens.">Improved renal function in mouse kidney allografts lacking MHC class I antigens.</a> Journal of Immunology. 151 (1), 425-435 (1993).</li><li>Martins, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Learning+curve,+surgical+results+and+operative+complications+for+kidney+transplantation+in+mice.">Learning curve, surgical results and operative complications for kidney transplantation in mice.</a> Microsurgery. 26 (8), 590-593 (2006).</li></ol>

Mens hudtransplantationsmodellen hos mus er enkel og nem at udføre for at studere alloimmune afvisningshændelser, har de kirurgiske teknikker til mere specifikt at undersøge de alloimmunrelaterede inflammatoriske ændringer efter hjerte16 og nyretransplantation10 vist sig at være komplekse og meget krævende. Fra transplantationsnepsebustens synspunkt har etableringen af en effektiv og langsigtet stabil musenyretransplantationsmodel stadig en uerstattelig betydning for ...

Siden Sakowitz et al. udviklede musemodeller for nyretransplantation i 1973 for første gang1, har det vist sig at være et vigtigt eksperimentelt redskab til at studere mekanismerne for transplantation iskæmisk skade og alloimmun afvisning samt til at udvikle nye behandlinger med det formål at forlænge allograftoverlevelsen og muligvis opnå immunologisk tolerance. Den kirurgiske teknik har imidlertid vist sig at være kompleks og meget krævende, undertiden med komplikationer såsom vaskulære anastomotiske strikturer, der fører til præerenal ikke-immunologisknyretransplantationssvigt 2, postrenal svigt forårsaget af iskæmi og efterfølgende nekrose af den transplanterede urinleder, strikturer af anastomosen i den transplanterede urinleder og / eller modtagerens urinblære, der fører til en forstyrrelse af urinudstrømningen. Alt dette er grunden til, at nyretransplantation i mus ikke er blevet videreudviklet og derfor ikke er meget udbredt. Etablering af en effektiv og langsigtet stabil musenyretransplantationsmodel uden vaskulære og urinvejskomplikationer har stadig uerstattelig betydning for mange undersøgelser på transplantationsområdet med fokus på de nyreimmunmedierede, men også infektionssygdomme3. Sammenlignet med andre organtransplantationer i murinmodeller som lunge-, hjerte- og tarmtransplantation 4,5 giver musenyretransplantationsmodellen desuden en chance for at studere langsigtet overlevelse, selv i indstillingen af større histokompatibilitetsantigenforskel 3,6. Det har også vist sig, at i samme indstilling af donor-modtager-stammekombinationer er forskellige organtransplantationer såsom hjerte eller nyre karakteriseret ved forskellige dynamikker og udbrud af allograftafstødning3. Desuden er det fra nefrologisk synspunkt en mere egnet model til at studere parenkymmedierede immunreguleringsmekanismer i forbindelse med akutte og kroniske afstødningshændelser end enkle hudtransplantationsforsøg.
På baggrund af tidligere rapporter om den kirurgiske teknik til nyretransplantation hos mus 3,7,8,9 demonstrerer vi her følgende pålidelige forbedringer, der med succes er blevet anvendt i løbet af de sidste 10 år inden for vores gruppe10,11,12: For det første bevares urinpulsåren sikkert, da nyrearterien resekteres en bloc sammen med den respektive del af abdominal aorta. For det andet en ny, enkel og hurtig teknik til en knudeløs vaskulær anastomose, hvor den endelige søm af anastomose ikke er bundet med enden af det øvre slips som den traditionelle tilgang, men forbliver fri. Denne teknik gør det muligt at øge eller formindske størrelsen af anastomosen efter nyrereperfusion for at undgå karstriktur og intraabdominal blødning. For det tredje blev 21 G og 30 G sprøjtenåle anvendt som et hjælpeværktøj til punktering for at implantere donoruretanden i modtagerens blærevæg, hvilket reducerede skaden på modtagerens blære og lettede dannelsen af strikturfri anastomose.
I denne rapport sammenlignede vi også den traditionelle, udbredte teknik med den modificerede, der er etableret i vores laboratorium og fandt ingen signifikant forskel i graden af nyretubulær atrofi og nyretransplantation interstitiel vævsfibrose. I tidligere undersøgelser sammenlignede vi desuden resultaterne af denne nye teknik med den konventionelle metode med hensyn til lokal blødning, trombose, tid til at udføre karanastomose og overlevelsesrate. Vi fandt forbedringer såsom signifikante reduktioner af lokale trombosehændelser (1,1% versus 6,6%), en reduceret tid for anastomoseproceduren og en meget reproducerbar nyre syngeneisk transplantat langsigtet overlevelse (95% versus 84% med den klassiske tilgang)10.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>30G-needles</td>
			<td>Braun</td>
			<td>456300</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>acepromazine</td>
			<td>CP Pharma</td>
			<td>Tranquisol P</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bepanthen eye ointment</td>
			<td>Haus-Apotheke</td>
			<td>PZN 01578675</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bonn Micro Forceps</td>
			<td>FST</td>
			<td>11083-07</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Box for insulation and oxygen supply device</td>
			<td>RUSKINN</td>
			<td>INVIV</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6J&#160; mice</td>
			<td>Charles River. Germany</td>
			<td>no catalog number</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprofen</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>Rimadyl 50 mg/ml</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CATHETER-FEP 26G</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>Surflo-W</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clip Applicator Forceps Style</td>
			<td>FST</td>
			<td>18057-14</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved forceps</td>
			<td>WPI</td>
			<td>14114-G</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cutasept skin disinfection</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BODL980365</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dehydrator</td>
			<td>DIAPATH</td>
			<td>Donatello</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>electrosurgical pen</td>
			<td>Bovie</td>
			<td>CHANGE-A-TIP</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding machine</td>
			<td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td>
			<td>JB-P5</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Sinopharm Group Chemical Reagent Co. LtD</td>
			<td>100092683</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frozen platform</td>
			<td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td>
			<td>JB-L5</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gauze pads, cotton swabs</td>
			<td>Lohmann-Rauscher</td>
			<td>13353</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass slide</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>G6004</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HE dye solution set</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>G1003</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating mat</td>
			<td>THERMO MAT PRO 30W</td>
			<td>HTP-30</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hemostatic sponge</td>
			<td>CuraSpon</td>
			<td>J1276A</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>heparine-solution</td>
			<td>Haus-Apotheke</td>
			<td>PZN 03029820</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ice box</td>
			<td>PETZ</td>
			<td>No Catalog Number available</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaging system</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Nikon DS-U3</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inhalation anesthesia device</td>
			<td>GROPPLER</td>
			<td>BKGM 0616</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isoflurane</td>
			<td>CP Pharma</td>
			<td>Isofluran CP 1 ml/ml</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ketamine</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>no catalog numer</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Masson dye solution set</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>G1006</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>metamizole</td>
			<td>WDT</td>
			<td>no catalog numer</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>15000-00,15000-10</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Serrefine ( Clamp ) Angled / 16 mm</td>
			<td>FST</td>
			<td>18055-06</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>LEICAMZ6</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope light</td>
			<td>SCHOTT</td>
			<td>KL2500LED</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral gum</td>
			<td>SCRC</td>
			<td>10004160</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oven</td>
			<td>Tianjin Laibo Rui Instrument Equipment Co., Ltd</td>
			<td>GFL-230</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pathology slicer</td>
			<td>Shanghai Leica Instrument Co., Ltd</td>
			<td>RM2016</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline solution (NaCl 0.9 %)</td>
			<td>Haus-Apotheke</td>
			<td>PZN 06178437</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>scissors</td>
			<td>Peha Instruments</td>
			<td>991083/4</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slides</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>small Petri dish</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>8,33,900</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>straight forceps</td>
			<td>WPI</td>
			<td>14113-G</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>surgical tape</td>
			<td>BSN</td>
			<td>4120</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture Tying Forceps - 10 cm</td>
			<td>FST</td>
			<td>18025-10</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures(10-0)</td>
			<td>Medtronic</td>
			<td>N2540</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures(4-0)</td>
			<td>ETHILON</td>
			<td>V4940H</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures(7-0)</td>
			<td>ETHILON</td>
			<td>1647H</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe (0,3 mL)</td>
			<td>BD</td>
			<td>324826</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe (1 mL)</td>
			<td>BD</td>
			<td>320801</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue spreader</td>
			<td>Zhejiang Kehua Instrument Co., Ltd</td>
			<td>KD-P</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Upright optical microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Nikon Eclipse E100</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>xylazine</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>Rompun</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Sinopharm Group Chemical Reagent Co. LtD</td>
			<td>10023418</td>
			<td>-</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a modified surgical technique for kidney transplantation in mice

Nyretransplantation hos mus er en kompliceret og udfordrende operationsprocedure. Der er meget få publikationer, der viser de vigtigste trin i denne operation. Derfor introducerer denne artikel teknikken og påpeger de kirurgiske forbehold, der er forbundet med denne operation. Derudover demonstreres vigtige ændringer i forhold til den konventionelle procedure. For det første skæres og forberedes en plet af abdominal aorta således, at de proksimale bifurkationer af nyrearterien, herunder urinlederarterien, transekteres sammen med donornyreen en blok. Dette reducerer risikoen for en urinledernekrose og undgår udviklingen af en urinvejsokklusion. For det andet demonstreres en ny metode til vaskulær anastomose, der gør det muligt for operatøren fleksibelt at øge eller mindske størrelsen af anastomosen, efter at nyretransplantationsreperfusion allerede er påbegyndt. Dette undgår udviklingen af karstrikturer og intraabdominal blødning. For det tredje vises en teknik, der muliggør anastomose af den sarte donorurerør og modtagerblæren, der ikke forårsager et traume. Vedtagelse af denne protokol kan forkorte driftstiden og reducere skaden på modtagerens blære og derved øge operationens succesrate for modtagermusene betydeligt.

Fire uger efter transplantationen viste både den modificerede teknik såvel som den konventionelle teknik moderate tegn på nyretubulær atrofi14,15 sammenlignet med de indfødte modtagerkontolatrale nyrer (figur 1). Graden af nyretubuli atrofi viste ingen signifikant forskel mellem de to forskellige teknikker. Masson Goldners trikromfarvning14,15 af nyrerne 12 uger efter tr...

Watch this Scientific Journal Video about A Modified Surgical Technique for Kidney Transplantation in Mice at JoVE.com

A Modified Surgical Technique for Kidney Transplantation in Mice

Denne protokol præsenterer en ny kirurgisk teknik til musenyretransplantation med fokus på en modificeret arteriel anastomosestrategi. En vaskulær suturteknik, herunder en enkel og sikrere ureter-blære anastomose metode er også præsenteret. Disse ændringer forkorter operationstiden og forbedrer succesraten for musens nyretransplantationsprocedure.

En modificeret kirurgisk teknik til nyretransplantation hos mus

Kidney transplantation in mice is a complicated and challenging surgery procedure. There are very few publications demonstrating the key steps of this ...

Nyretransplantation hos mus er afgørende for undersøgelse af mekanismer for akut og kronisk allograftafstødning. Her introducerer vi en ny kirurgisk teknik til karanastomose og ureteral implantation i abdominal nyretransplantationsmodel hos mus. I traditionelle musenyretransplantationsmodeller er den øverste del af aorta ligeret tilnærmelsesvis til nyrearterierne.Donorens venstre nyrevene transekteres ved vena cava, og donorens aorta fordeles ligeligt under nyrearterien for senere at blive anastomose til modtagerens abdominale aorta. I denne modificerede teknik til musenyretransplantation transsekteres donorens venstre nyrevene også ved vena cava, men donoren aorta skæres over afkom af nyrearterien og dens anastomose til modtageren abdominal aorta. Mens donorenden af aorta er ligeret, bevares urinlederarterien bevidst.Nu starter vi demonstrationen af den kirurgiske procedure. Til anæstesi skal musen placeres i kassen til indånding af isofluran ca. 40 til 60 sekunder for at fremkalde bevidstløshed. Når musen er anæstesi, skal musen vejes.Ifølge musens vægt gives intraperitoneal injektion af ketamin, xylazin, acepromazin til den anæstetiserede mus. Når anæstesi er trådte i kraft, klip mavepelsen. Fastgør og desinficer derefter musen på operationsbordet.Skær huden ved hjælp af tværsnittet på tværs af maven. Skær musklerne i abdominalvæggen. Derefter skal du forsigtigt flytte indvoldene væk med en saltvand imbibed gasbind.Udsæt venstre nyre, aorta og ringere vena cava. Cauterize venstre lændehvirvelvener, herunder deres underliggende grene og andre små kar, herunder venstre binyrekar omhyggeligt. Mobiliser aortaområdet mellem venstre og højre nyrearterier cirka to millimeter i længden.Adskil den infrarøde ringere vena cava og aorta. Og pass buede tang under aorta for at placere et løst slips på 7,06 sutur omkring dette fartøj. Krydsklemme området af aorta under højre nyrearterie og den ringere vena cava ved hjælp af to fem millimeter mikrovaskulære klemmer.Transekter den venstre nyrevene fra vena cava. Skyl aorta med en milliliter heparinopløsning. Stram ligaturen og skær aorta under ligaturen såvel som under den proksimale klemme.Forbered dig omhyggeligt, så den sarte ureterale arterie er fuldstændig bevaret. frigør venstre nyre og tilhørende kar fuldstændigt ved forsigtigt at cauterisere alle kar, der omgiver væv. Fjern nyren og opbevar den i cellelinjeopløsning ved fire grader.De indledende operationstrin svarer til dem, der tidligere er vist for donormusen, herunder anæstesi og desinfektion. Åbn maven via median snit, og dæk derefter abdominale organer med en våd gasbind ved hjælp af saltopløsning. Bevar omhyggeligt den infrarøde aorta og sørg for, at hver stor kargren er cauterized.Brug den elektriske cautery til at dissekere den venstre urinleder forsigtigt i en position, der er proksimal til nyrebækkenet. Fjern derefter den venstre nyre. Udsæt den ringere vena cava og abdominal aorta og løsn dem fra det omgivende fedtvæv ca. over fire millimeter i længden.Kryds derefter klemme hver med to mikrovaskulære klemmer omtrent og distally af dem. Brug en mikronåleholder til at styre en 10/0 monofilament suturnål, som placeres gennem aortavæggen fra proksimal til distal måde. En elliptisk arteriotomi på ca. en millimeter opnås ved blid opadgående trækkraft af suturen, mens den skæres direkte under nålens underside med fin, buet saks.Udfør donor-modtager aorta anastomose på en ende-til-side måde. Sy de proksimale og distale ender af anastomosen. Sidste sting ved hjælp af to separate 10,0 suturer.Efter binding skal du lade de to lange suturer, inklusive nålen, være på plads. Sy venstre side af anastomosens aortalvæg kontinuerligt med to jævnt fordelte sting i en distal-proksimal retning. Efter den sidste sting skal du lede suturen gennem en delvis tykkelse af karvæggen over det øvre suturbånd og samtidig udøve blid trækkraft til den korte ende af det nedre suturbånd.Bemærk, i denne nye knudeløse teknik er den sidste søm ikke bundet til den korte ende af det øverste slips. Vend den transplanterede nyre til sin normale position. Sy nu kontinuerligt den højre væg af aortal anastomose på en proksimal til distal måde ved hjælp af tre sting på en proksimal til distal måde.Bemærk, sammenlignet med den konventionelle kirurgiske teknik, er den sidste sutur fusioneret med det distale slips i nærheden. Bind det ikke til enden af den nederste sutur, skær det for at efterlade en fri længde på omkring to til tre millimeter i stedet. Skær den ringere vena cava langsgående med tilstrækkelig længde på ca. 1,5 millimeter.Placer dette snit lidt under dets aorta-modstykke. Udfør den venøse anastomose ved hjælp af den samme sutureringsprocedure som tidligere beskrevet med den forskel, at der er behov for fire til fem sting for hver side af anastomosen. Den endelige søm efterlades som en fri ende af samme længde svarende til den ovenfor beskrevne aortale anastomose.Og den nye knudeløse anastomoseteknik, den sidste søm er ikke bundet, men efterladt fri. Dette forkorter operationstiden, og det lader kirurgen øge eller mindske størrelsen af anastomosen. Denne forbedring reducerer vanskeligheden og komplikationerne efter operationen af den vaskulære anastomose.Når du har afsluttet begge anastomoser, skal du bruge en tør vatpind til at udøve et blidt tryk mod det suturerede område i ca. 10 til 20 sekunder. Derefter kan begge klemmer fjernes. Penetrer gennem modtagerens urinblære ved hjælp af en lige nål med 10,0 sutur og indsæt den i en 21 G nålelumen til vejledning.Før nu 21 G-nålen til at sy et hul på stedet for den forrige nålepåføring og træk nålen ud. Sy den trimmede ureterende og perforer blæren med denne 10,0 sutur igen på indgangsstedet. Træk 10,0-glødetråden og urinlederen ind i urinblæren gennem det konstruerede hul.Anastomose donorens urinleder til modtagerens urinblære. Her skal du forbinde urinlederens ydre membran til blærevæggens ydre membran og udføre intermitterende suturer med tre til fire sting. Træk trækkraftsuturen ud.Placer tarmene tilbage i bughulen. Udfør to-lags suturer, først mavemusklerne efterfulgt af huden for at lukke mavesåret. Placer de transplanterede mus i et ilt- og temperaturkontrolleret kammer til genopretning efter operationen.Giv tilstrækkelig postoperativ analgesi fire på hinanden følgende dage efter operationen. Udfør kontralateral nefrektomi af modtagermusen fem dage efter transplantationsbedøvelse. Hæv og optag musens tilstand.Vi sammenlignede de konventionelle og modificerede transplantationsteknikker ved at vurdere histologiske ændringer af de transplanterede isograftnyrer versus de indfødte modtagerkontolatrale nyrer. Både graden af trofæet i nyretubuli og renal interstitiel fibrose viste sig ikke at være signifikant forskellig henholdsvis fire og 12 uger efter transplantationen. Vi har tidligere undersøgt resultatet af denne nye knudeløse teknik og sammenlignet den med den klassiske tilgang med hensyn til tekniske aspekter af proceduren interoperative og postoperative komplikationer.Modificeret teknik, der er vist her, var forbundet med en lavere forekomst af intragraft arterielle venøse trombotiske hændelser. Tiden til at udføre stenose var signifikant mindre, og en fremragende nyre isograft, langsigtet overlevelse blev opnået. Nyretransplantationen hos mus er en kompliceret og banebrydende procedure.Dette er en ny kirurgisk teknik til en karanastomose og nyreimplantation, der er forpligtet til at forbedre den samlede succesrate, hvilket gør det til et pålideligt værktøj til at studere det autoimmune respons efter nyretransplantation.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

4D Multimodalitet Imaging af<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Infektioner i mus

This protocol outlines the steps required to  longitudinally monitor a bioluminescent bacterial infection using composite 3D diffuse light imaging ...

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

Langtids kronisk<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; Luftvejsinfektion i mus

A mouse model of chronic airway infection is a key asset in cystic fibrosis (CF) research, although there are a number of concerns regarding the model ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

Transplantation af Tail Hud til Study Allogen CD4 T-celle respons i mus

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

In Vitro and In Vivo Assessment of T, B and Myeloid Cells Suppressive Activity and Humoral Responses from Transplant Recipients

In Vitro and In Vivo Assessment of T, B and Myeloid Cells Suppressive Activity and Humoral Responses from Transplant Recipients

In Vitro og In Vivo evaluering af T, B og myeloide celler smittespredningshæmmende aktivitet og humorale svar fra transplanterede

The main concern in transplantation is to achieve specific tolerance through induction of regulatory cells. The understanding of tolerance mechanisms ...

Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

Induktion af lammelse og visuelle System skade i mus af T celler specifik for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

Measuring Deformability and Red Cell Heterogeneity in Blood by Ektacytometry

Måling af Deformability og roede blodlegemer heterogenitet i blodet ved Ektacytometry

Decreased red cell deformability is characteristic of several disorders. In some cases, the extent of defective deformability can predict severity of ...

Printed Glycan Array: A Sensitive Technique for the Analysis of the Repertoire of Circulating Anti-carbohydrate Antibodies in Small Animals

Trykte Glycan matrix: En følsom teknik til analyse af Repertoire af cirkulerende anti-kulhydrat antistoffer i små dyr

The repertoire of circulating anti-carbohydrate antibodies of a given individual is often associated with its immunological status. Not only the ...

Renal Subcapsular Transplantation of 2'-Deoxyguanosine-Treated Murine Embryonic Thymus in Nude Mice

Renal subkapsulær transplantation af 2 '-Deoxyguanosin-behandlede murine embryonale thymus i Nude mus

The thymus is an important central immune organ, which plays an essential role in the development and differentiation of T cells. Thymus transplantation ...

An Immunological Model for Heterotopic Heart and Cardiac Muscle Cell Transplantation in Rats

En immunologisk model for heterotopisk hjerte- og hjertemuskelcelletransplantation hos rotter

Heterotopic heart transplantation in rats has been a commonly used model for diverse immunological studies for more than 50 years. Several modifications ...

Optimization of the Cuff Technique for Murine Heart Transplantation

Optimering af cuffteknikken til Murine hjertetransplantation

Murine cardiac transplantation has been performed for more than 40 years. With advancements in microsurgery, certain new techniques have been used to ...