Name: a modified surgical technique for kidney transplantation in mice
Uploaded: 2022-07-22T13:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Modified Surgical Technique for Kidney Transplantation in Mice at JoVE.com

We bedanken het Dr. Tiantian Bai-team voor hulp bij voice-over, Miss Mian Pao voor haar hulp bij medische illustratie. Dit werk werd gedeeltelijk ondersteund door de German Research Foundation (DFG) om internationale samenwerkingen (HO2581/4-1 tot AH) en de National Science Foundation of China (NSFC; #81760291 aan FJ) te bevorderen.

Alle dierproeven werden uitgevoerd volgens de richtlijnen van de richtlijn 2010/63/EU van het Europees Parlement inzake de bescherming van dieren die voor wetenschappelijke doeleinden worden gebruikt (Dierethiekkaart: Nedersaksisch Ministerie van Voedsel- en Geneesmiddelenveiligheid, #33.9-42502-04-11/0492). Voer procedures uit met behulp van steriele chirurgische instrumenten en verbruiksartikelen (geautoclaveerd) en probeer het operatiegebied zo steriel mogelijk te houden.
OPMERKING: C57BL /...

<ol>
	<li>Skoskiewicz, M., Chase, C., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kidney+transplants+between+mice+of+graded+immunogenetic+diversity.">Kidney transplants between mice of graded immunogenetic diversity.</a> Transplantation Proceedings. 5 (1), 721-725 (1973).</li><li>Jiang, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+assessment+of+renal+fibrosis+with+magnetization+transfer+MR+imaging:+Validation+and+evaluation+in+murine+renal+artery+stenosis.">Noninvasive assessment of renal fibrosis with magnetization transfer MR imaging: Validation and evaluation in murine renal artery stenosis.</a> Radiology. 283 (1), 77-86 (2017).</li><li>Tse, G. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+kidney+transplantation:+Models+of+allograft+rejection.">Mouse kidney transplantation: Models of allograft rejection.</a> Journal of Visualized Experiments. (92), e52163 (2014).</li><li>Okazaki, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=et+al.Costimulatory+blockade-mediated+lung+allograft+acceptance+is+abrogated+by+overexpression+of+Bcl-2+in+the+recipient.">et al.Costimulatory blockade-mediated lung allograft acceptance is abrogated by overexpression of Bcl-2 in the recipient.</a> Transplantation Proceedings. 41 (1), 385-387 (2009).</li><li>Chuck, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=et+al.Ultra-short+echo-time+magnetic+resonance+imaging+distinguishes+ischemia/reperfusion+injury+from+acute+rejection+in+a+mouse+lung+transplantation+model.">et al.Ultra-short echo-time magnetic resonance imaging distinguishes ischemia/reperfusion injury from acute rejection in a mouse lung transplantation model.</a> Transplant International. 29 (1), 108-118 (2016).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pattern+of+liver,+kidney,+heart,+and+intestine+allograft+rejection+in+different+mouse+strain+combinations.">Pattern of liver, kidney, heart, and intestine allograft rejection in different mouse strain combinations.</a> Transplantation. 62 (9), 1267-1272 (1996).</li><li>Wang, J., Hockenheimer, S., Bickerstaff, A. A., Hadley, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+renal+transplantation+procedure.">Murine renal transplantation procedure.</a> Journal of Visualized Experiments. (29), e1150 (2009).</li><li>Plenter, R., Jain, S., Ruller, C. M., Nydam, T. L., Jani, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+kidney+transplant+technique.">Murine kidney transplant technique.</a> Journal of Visualized Experiments. (104), e52848 (2015).</li><li>Plenter, R. J., Jain, S., Nydam, T. L., Jani, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revised+arterial+anastomosis+for+improving+murine+kidney+transplant+outcomes.">Revised arterial anastomosis for improving murine kidney transplant outcomes.</a> Journal of Investigative Surgery. 28 (4), 208-214 (2015).</li><li>Rong, S., Lewis, A. G., Kunter, U., Haller, H., Gueler, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+knotless+technique+for+kidney+transplantation+in+the+mouse.">A knotless technique for kidney transplantation in the mouse.</a> Journal of Transplantation. , 127215 (2012).</li><li>Kreimann, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemia+reperfusion+injury+triggers+CXCL13+release+and+B-cell+recruitment+after+allogenic+kidney+transplantation.">Ischemia reperfusion injury triggers CXCL13 release and B-cell recruitment after allogenic kidney transplantation.</a> Frontiers in Immunology. 11, 1204 (2020).</li><li>Schmidbauer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diffusion-Weighted+imaging+and+mapping+of+T1+and+T2+relaxation+time+for+evaluation+of+chronic+renal+allograft+rejection+in+a+translational+mouse+model.">Diffusion-Weighted imaging and mapping of T1 and T2 relaxation time for evaluation of chronic renal allograft rejection in a translational mouse model.</a> Journal of Clinical Medicine. 10 (19), 4318 (2021).</li><li>Wu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+technique+for+blood+circuit+reconstruction+in+mouse+heart+transplantation+model.">Novel technique for blood circuit reconstruction in mouse heart transplantation model.</a> Microsurgery. 26, 594-598 (2006).</li><li>Haas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+allograft+nephropathy+or+interstitial+fibrosis+and+tubular+atrophy:+what+is+in+a+name.">Chronic allograft nephropathy or interstitial fibrosis and tubular atrophy: what is in a name.</a> Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 23 (3), 245-250 (2014).</li><li>Dang, Z., MacKinnon, A., Marson, L. P., Sethi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tubular+atrophy+and+interstitial+fibrosis+after+renal+transplantation+is+dependent+on+galectin-3.">Tubular atrophy and interstitial fibrosis after renal transplantation is dependent on galectin-3.</a> Transplantation. 93 (5), 477-484 (2012).</li><li>Yin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+circuit+reconstruction+in+an+abdominal+mouse+heart+transplantation+model.">Blood circuit reconstruction in an abdominal mouse heart transplantation model.</a> Journal of Visualized Experiments. (172), e62007 (2021).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+techniques+for+kidney+transplantation+in+mice.">Improved techniques for kidney transplantation in mice.</a> Microsurgery. 16 (2), 103-109 (1995).</li><li>Mannon, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+rejection+of+mouse+kidney+allografts.">Chronic rejection of mouse kidney allografts.</a> Kidney International. 55 (5), 1935-1944 (1999).</li><li>Coffman, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+renal+function+in+mouse+kidney+allografts+lacking+MHC+class+I+antigens.">Improved renal function in mouse kidney allografts lacking MHC class I antigens.</a> Journal of Immunology. 151 (1), 425-435 (1993).</li><li>Martins, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Learning+curve,+surgical+results+and+operative+complications+for+kidney+transplantation+in+mice.">Learning curve, surgical results and operative complications for kidney transplantation in mice.</a> Microsurgery. 26 (8), 590-593 (2006).</li></ol>

Hoewel het huidtransplantatiemodel bij muizen eenvoudig en gemakkelijk uit te voeren is om alloimmune afstotingsgebeurtenissen te bestuderen, is bewezen dat de chirurgische technieken voor het onderzoeken van meer specifiek de alloimmune-gerelateerde ontstekingsveranderingen na hart16 en niertransplantatie10 complex en zeer veeleisend zijn. Vanuit het oogpunt van de transplantatienefroloog heeft de oprichting van een effectief en langdurig stabiel muisniertransplantatiemode...

Sinds Sakowitz et al. in 1973 voor het eerst muismodellen van niertransplantatie ontwikkelden1, heeft het bewezen als een belangrijk experimenteel hulpmiddel om de mechanismen van transplantatie ischemische schade en alloimmune afstoting te bestuderen, evenals voor het ontwikkelen van nieuwe behandelingen gericht op het verlengen van allograft overleving en mogelijk om immunologische tolerantie te bereiken. De chirurgische techniek is echter complex en zeer veeleisend gebleken, soms met complicaties zoals vasculaire anastomotische stricturen die leiden tot prerenaal niet-immunologisch niertransplantatiefalen2, postrenaal falen veroorzaakt door ischemie en daaropvolgende necrose van de getransplanteerde urineleider, stricturen van de anastomose van de getransplanteerde urineleider en / of de urineblaas van de ontvanger die leidt tot een verstoring van de urine-uitstroom. Dit zijn allemaal redenen waarom niertransplantatie bij muizen niet verder is ontwikkeld en daarom niet veel wordt gebruikt. Het opzetten van een effectief en langdurig stabiel niertransplantatiemodel voor muizen zonder vasculaire en urinewegcomplicaties heeft nog steeds onvervangbare betekenis voor veel studies op het gebied van transplantatie met focus op de nierimmuun gemedieerde maar ook infectieziekten3. Bovendien biedt het muisniertransplantatiemodel, in vergelijking met andere orgaantransplantaties in muizenmodellen zoals long-, hart- en darmtransplantatie 4,5, een kans om overleving op lange termijn te bestuderen, zelfs in de setting van grote histocompatibiliteitsantigeenongelijkheid 3,6. Het is ook aangetoond dat in dezelfde setting van donor-ontvanger stamcombinaties verschillende orgaantransplantaties zoals hart of nier worden gekenmerkt door verschillende dynamieken en aanvallen van allograftafstoting3. Bovendien is het vanuit nefrologisch oogpunt een geschikter model voor het bestuderen van parenchymale gemedieerde immuunregulerende mechanismen in de context van acute en chronische afstotingsgebeurtenissen dan eenvoudige huidtransplantatie-experimenten.
Op basis van eerdere rapporten over de chirurgische techniek van niertransplantatie bij muizen 3,7,8,9, tonen we hier de volgende betrouwbare verbeteringen aan die de afgelopen 10 jaar met succes zijn toegepast binnen onze groep 10,11,12: Ten eerste wordt de ureterslagader veilig geconserveerd terwijl de nierslagader en bloc wordt gereseceerd samen met het respectieve deel van de abdominale aorta. Ten tweede, een nieuwe, eenvoudige en snelle techniek van een knooploze vasculaire anastomose waarbij de laatste steek van anastomose niet wordt gebonden aan het uiteinde van de bovenband zoals de traditionele aanpak, maar vrij blijft. Deze techniek maakt het mogelijk om de grootte van de anastomose na nierreperfusie te vergroten of te verkleinen om vaatvernauwing en intraabdominale bloedingen te voorkomen. Ten derde werden 21 G en 30 G spuitnaalden gebruikt als een hulppunctiegeleidingstool om de donorureter in de blaaswand van de ontvanger te implanteren, waardoor de schade aan de blaas van de ontvanger werd verminderd en de vorming van strictuurvrije anastomose werd vergemakkelijkt.
In dit rapport vergeleken we ook de traditionele, veel gebruikte techniek met de gemodificeerde die in ons laboratorium is vastgesteld en vonden we geen significant verschil in de mate van renale tubulaire atrofie en niertransplantatie interstitiële weefselfibrose. In eerdere studies vergeleken we bovendien de resultaten van deze nieuwe techniek met de conventionele methode in termen van lokale bloedingen, trombose, tijd voor het uitvoeren van de vaatanastomose en overlevingskans. We vonden verbeteringen zoals significante verminderingen van lokale trombosegebeurtenissen (1,1% versus 6,6%), een kortere tijd voor de anastomoseprocedure en een zeer reproduceerbare nier syngeneïsche transplantaatoverleving op lange termijn (95% versus 84% met de klassieke benadering)10.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>30G-needles</td>
			<td>Braun</td>
			<td>456300</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>acepromazine</td>
			<td>CP Pharma</td>
			<td>Tranquisol P</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bepanthen eye ointment</td>
			<td>Haus-Apotheke</td>
			<td>PZN 01578675</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bonn Micro Forceps</td>
			<td>FST</td>
			<td>11083-07</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Box for insulation and oxygen supply device</td>
			<td>RUSKINN</td>
			<td>INVIV</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6J&#160; mice</td>
			<td>Charles River. Germany</td>
			<td>no catalog number</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprofen</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>Rimadyl 50 mg/ml</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CATHETER-FEP 26G</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>Surflo-W</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clip Applicator Forceps Style</td>
			<td>FST</td>
			<td>18057-14</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved forceps</td>
			<td>WPI</td>
			<td>14114-G</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cutasept skin disinfection</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BODL980365</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dehydrator</td>
			<td>DIAPATH</td>
			<td>Donatello</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>electrosurgical pen</td>
			<td>Bovie</td>
			<td>CHANGE-A-TIP</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding machine</td>
			<td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td>
			<td>JB-P5</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Sinopharm Group Chemical Reagent Co. LtD</td>
			<td>100092683</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frozen platform</td>
			<td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td>
			<td>JB-L5</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gauze pads, cotton swabs</td>
			<td>Lohmann-Rauscher</td>
			<td>13353</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass slide</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>G6004</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HE dye solution set</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>G1003</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating mat</td>
			<td>THERMO MAT PRO 30W</td>
			<td>HTP-30</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hemostatic sponge</td>
			<td>CuraSpon</td>
			<td>J1276A</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>heparine-solution</td>
			<td>Haus-Apotheke</td>
			<td>PZN 03029820</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ice box</td>
			<td>PETZ</td>
			<td>No Catalog Number available</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaging system</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Nikon DS-U3</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inhalation anesthesia device</td>
			<td>GROPPLER</td>
			<td>BKGM 0616</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isoflurane</td>
			<td>CP Pharma</td>
			<td>Isofluran CP 1 ml/ml</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ketamine</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>no catalog numer</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Masson dye solution set</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>G1006</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>metamizole</td>
			<td>WDT</td>
			<td>no catalog numer</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>15000-00,15000-10</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Serrefine ( Clamp ) Angled / 16 mm</td>
			<td>FST</td>
			<td>18055-06</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>LEICAMZ6</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope light</td>
			<td>SCHOTT</td>
			<td>KL2500LED</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral gum</td>
			<td>SCRC</td>
			<td>10004160</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oven</td>
			<td>Tianjin Laibo Rui Instrument Equipment Co., Ltd</td>
			<td>GFL-230</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pathology slicer</td>
			<td>Shanghai Leica Instrument Co., Ltd</td>
			<td>RM2016</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline solution (NaCl 0.9 %)</td>
			<td>Haus-Apotheke</td>
			<td>PZN 06178437</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>scissors</td>
			<td>Peha Instruments</td>
			<td>991083/4</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slides</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>small Petri dish</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>8,33,900</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>straight forceps</td>
			<td>WPI</td>
			<td>14113-G</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>surgical tape</td>
			<td>BSN</td>
			<td>4120</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture Tying Forceps - 10 cm</td>
			<td>FST</td>
			<td>18025-10</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures(10-0)</td>
			<td>Medtronic</td>
			<td>N2540</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures(4-0)</td>
			<td>ETHILON</td>
			<td>V4940H</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures(7-0)</td>
			<td>ETHILON</td>
			<td>1647H</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe (0,3 mL)</td>
			<td>BD</td>
			<td>324826</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe (1 mL)</td>
			<td>BD</td>
			<td>320801</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue spreader</td>
			<td>Zhejiang Kehua Instrument Co., Ltd</td>
			<td>KD-P</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Upright optical microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Nikon Eclipse E100</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>xylazine</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>Rompun</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Sinopharm Group Chemical Reagent Co. LtD</td>
			<td>10023418</td>
			<td>-</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a modified surgical technique for kidney transplantation in mice

Niertransplantatie bij muizen is een gecompliceerde en uitdagende chirurgische procedure. Er zijn zeer weinig publicaties die de belangrijkste stappen van deze operatie aantonen. Daarom introduceert dit artikel de techniek en wijst op de chirurgische kanttekeningen die bij deze operatie horen. Bovendien worden belangrijke wijzigingen ten opzichte van de conventionele procedure aangetoond. Ten eerste wordt een pleister van de abdominale aorta gesneden en voorbereid zodat de proximale bifurcaties van de nierslagader, inclusief de ureterslagader, samen met de donornier en bloc worden doorsneden. Dit vermindert het risico op een urineleidernecrose en voorkomt de ontwikkeling van een urinewegocclusie. Ten tweede wordt een nieuwe methode van de vasculaire anastomose aangetoond waarmee de operator de grootte van de anastomose flexibel kan vergroten of verkleinen nadat de niertransplantatiereperfusie al is gestart. Dit voorkomt de ontwikkeling van vaatvernauwingen en intraabdominale bloedingen. Ten derde wordt een techniek getoond die de anastomose van de delicate donorureter en de ontvangende blaas mogelijk maakt die geen trauma veroorzaakt. Het aannemen van dit protocol kan de operatietijd verkorten en vermindert de schade aan de blaas van de ontvanger, waardoor het succespercentage van de operatie voor de ontvangende muizen aanzienlijk toeneemt.

Vier weken na de transplantatie vertoonden zowel de gemodificeerde techniek als de conventionele techniek matige tekenen van renale tubulaire atrofie14,15 in vergelijking met de contralaterale nieren van de inheemse ontvanger (figuur 1). De mate van atrofie van de niertubuli toonde geen significant verschil tussen de twee verschillende technieken. Masson Goldner's trichrome kleuring 14,15<sup class=...

Watch this Scientific Journal Video about A Modified Surgical Technique for Kidney Transplantation in Mice at JoVE.com

A Modified Surgical Technique for Kidney Transplantation in Mice

Dit protocol presenteert een nieuwe chirurgische techniek van niertransplantatie bij muizen, gericht op een aangepaste arteriële anastomosestrategie. Een vasculaire hechttechniek inclusief een eenvoudige en veiligere ureter-blaas anastomose methode wordt ook gepresenteerd. Deze wijzigingen verkorten de operatietijd en verbeteren het slagingspercentage van de niertransplantatieprocedure bij muizen.

Een aangepaste chirurgische techniek voor niertransplantatie bij muizen

Kidney transplantation in mice is a complicated and challenging surgery procedure. There are very few publications demonstrating the key steps of this ...

Niertransplantatie bij muizen is essentieel voor de studie van mechanismen van acute en een chronische allograftafstoting. Hier introduceren we een nieuwe chirurgische techniek voor vaatanastomose en de ureterale implantatie in het abdominale niertransplantatiemodel bij muizen. In traditionele muisniertransplantatiemodellen wordt het bovenste deel van de aorta ongeveer geligeerd aan de nierslagaders.De linker nierader van de donor wordt getransecteerd bij de vena cava en de donoraorta wordt gelijkelijk verdeeld onder de nierslagader om later anastomose te zijn naar de abdominale aorta van de ontvanger. Bij deze aangepaste techniek van de niertransplantatie van de muis wordt de linker nierader van de donor ook doorgesneden bij de vena cava, maar de donoraorta wordt boven de nakomelingen van de nierslagader en zijn anastomose naar de ontvangende abdominale aorta gesneden. Terwijl het donoruiteinde van aorta wordt geligeerd, wordt de urineleider opzettelijk bewaard.Nu beginnen we met de demonstratie van de chirurgische ingreep. Voor anesthesie plaatst u de muis ongeveer 40 tot 60 seconden in de doos voor inademing van isofluraan om bewusteloosheid te induceren. Zodra de muis is verdoofd, weegt u de muis.Volgens het muisgewicht wordt intraperitoneale injectie van ketamine, xylazine, acepromazine aan de verdoofde muis gegeven. Wanneer de anesthesie is ingetreden, knipt u de buikvacht. Bevestig en desinfecteer vervolgens de muis op de operatietafel.Snijd de huid met behulp van de kruisablanke incisie. Snijd de spieren van de buikwand door. Bedek vervolgens voorzichtig de ingewanden met een zout gaasje.Stel de linker nier, aorta en inferieure vena cava bloot. Cauteriseer de linker lumbale aderen, inclusief hun onderliggende takken en andere kleine bloedvaten, waaronder het linker bijniervat zorgvuldig. Mobiliseer het aortagebied tussen de linker- en rechter nierslagaders met een lengte van ongeveer twee millimeter.Scheid de infrarood inferieure vena cava en aorta. En passeer gebogen tang onder de aorta om een losse stropdas van 7,06 hechtdraad rond dit vat te plaatsen. Kruisklem het gebied van de aorta onder de rechter nierslagader en de inferieure vena cava met behulp van twee microvasculaire klemmen van vijf millimeter.Transect de linker nierader van de vena cava. Spoel de aorta met één milliliter heparine-oplossing. Span de ligatuur aan en snijd de aorta zowel onder de ligatuur als onder de proximale klem.Bereid je zorgvuldig voor, zodat de delicate urineleider volledig behouden blijft. bevrijd de linker nier en bijbehorende bloedvaten volledig door voorzichtig alle bloedvaten rondom weefsel dicht te schroeien. Verwijder de nier en bewaar deze in cellijnoplossing bij vier graden.De eerste operatiestappen zijn vergelijkbaar met die eerder getoond voor de donormuis, inclusief anesthesie en desinfectie. Open de buik via een mediane incisie en bedek vervolgens de buikorganen met een nat gaasje met een zoutoplossing. Bewaar de infrarode aorta zorgvuldig en zorg ervoor dat elke grote vaattak is dichtgeschroeid.Gebruik de elektrische cautery om de linker urineleider zorgvuldig te ontleden op een positie proximaal van het nierbekken. Verwijder vervolgens de linkernier. Leg de inferieure vena cava en abdominale aorta bloot en maak ze los van het omliggende vetweefsel van ongeveer vier millimeter lang.Kruis vervolgens kruisklem elk met twee microvasculaire klemmen ongeveer en distaal van hen. Gebruik een micronaaldhouder om een 10/0 monofilament hechtnaald te begeleiden, die door de aortawand van proximale naar distale wijze wordt geplaatst. Een elliptische artepriotomie van ongeveer een millimeter wordt bereikt door zachte opwaartse tractie van de hechtdraad, terwijl direct onder het onderste gezicht van de naald wordt gesneden met een fijne, gebogen schaar.Voer de donor-ontvanger aorta anastomose op een end-to-side manier uit. Steek de proximale en distale uiteinden van de anastomose. Laatste steek met behulp van twee afzonderlijke 10.0 hechtingen.Laat na het binden de twee lange hechtingen, inclusief de naald, op hun plaats. Naai de linkerkant van de aortale wand van de anastomose continu met twee gelijkmatig verdeelde steken in een distale-proximale richting. Na de laatste steek leidt u de hechtdraad door een gedeeltelijke dikte van de vaatwand boven de bovenste hechtband en oefent u tegelijkertijd zachte tractie uit naar het korte uiteinde van de onderste hechtingsband.Let op, bij deze nieuwe knooploze techniek is de laatste steek niet gebonden aan het korte uiteinde van de bovenste das. Draai de getransplanteerde nier om naar zijn normale positie. Naai nu continu de rechterwand van de aortale anastomose op een proximale tot distale manier met behulp van drie hechtingen op een proximale tot distale manier.Merk op dat in vergelijking met de conventionele chirurgische techniek de laatste hechting wordt samengevoegd met de distale binding in de buurt. Bind het niet aan het uiteinde van de onderste hechtdraad, knip het in plaats daarvan om een vrije lengte van ongeveer twee tot drie millimeter over te houden. Snijd de inferieure vena cava in de lengterichting met voldoende lengte van ongeveer 1,5 millimeter.Plaats deze incisie iets onder zijn aorta-tegenhanger. Voer de veneuze anastomose uit met dezelfde hechtingsprocedure als eerder beschreven met het verschil dat vier tot vijf hechtingen nodig zijn voor elke kant van de anastomose. De laatste steek wordt achtergelaten als een vrij uiteinde van vergelijkbare lengte vergelijkbaar met de hierboven beschreven aortale anastomose.En de nieuwe knooploze anastomosetechniek, de laatste steek wordt niet gebonden maar vrij gelaten. Dit verkort de operatietijd en het stelt de chirurg in staat om de grootte van de anastomose te vergroten of te verkleinen. Deze verbetering vermindert de moeilijkheid en complicaties na de operatie van de vasculaire anastomose.Gebruik na het voltooien van beide anastomosen een droog wattenstaafje om gedurende ongeveer 10 tot 20 seconden zachte druk uit te oefenen op het hechte gebied. Daarna kunnen beide klemmen worden verwijderd. Penetreer door de urineblaas van de ontvanger met behulp van een rechte naald met 10,0 hechtdraad en breng deze in een naaldlumen van 21 G in voor begeleiding.Leid nu de naald van 21 G om een gat te naaien op de plaats van de vorige naaldtoepassing en trek de naald eruit. Steek het getrimde urineleideruiteinde en perforeer de blaas met deze 10.0 hechting opnieuw op de plaats van binnenkomst. Trek de 10.0-gloeidraad en de urineleider door het geconstrueerde gat in de urineblaas.Anastomose de urineleider van de donor naar de urineblaas van de ontvanger. Verbind hier het buitenmembraan van de urineleider met het buitenmembraan van de blaaswand en voer intermitterende hechtingen uit met drie tot vier hechtingen. Trek de tractienaad eruit.Plaats de darmen terug in de buikholte. Voer tweelaagse hechtingen uit, eerst de buikspieren gevolgd door de huid om de buikwond te sluiten. Plaats de getransplanteerde muizen in een zuurstof- en temperatuurgecontroleerde kamer om te herstellen na de operatie.Geef voldoende postoperatieve analgesie vier opeenvolgende dagen na de operatie. Voer contralaterale nefrectomie uit van de ontvangende muis vijf dagen na transplantatie-anesthesie. Verhoog en noteer de status van de muis.We vergeleken de conventionele en gemodificeerde transplantatietechnieken door histologische veranderingen van de getransplanteerde isograftnieren te beoordelen ten opzichte van de contralaterale nieren van de inheemse ontvanger. Zowel de mate van de trofee van de niertubuli als de renale interstitiële fibrose bleken respectievelijk vier en 12 weken na transplantatie niet significant te verschillen. We onderzochten eerder de uitkomst van deze nieuwe knooploze techniek en vergeleken deze met de klassieke benadering in termen van technische aspecten van de procedure interoperatieve en postoperatieve complicaties.Gemodificeerde techniek die hier wordt getoond, was geassocieerd met een lager voorkomen van intra-transplantaat arteriële veneuze trombotische gebeurtenissen. De tijd om de stenose uit te voeren was significant minder en een uitstekend nierisograft, overleving op lange termijn werd bereikt. De niertransplantatie bij muizen is een gecompliceerde en geavanceerde procedure.Dit is een nieuwe chirurgische techniek voor een vaatanastomose en nierimplantatie die zich inzet om het algehele slagingspercentage te verbeteren, waardoor het een betrouwbaar hulpmiddel is voor het bestuderen van de auto-immuunrespons na niertransplantatie.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

4D multimodale beeldvorming van<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Infecties in Muizen

This protocol outlines the steps required to  longitudinally monitor a bioluminescent bacterial infection using composite 3D diffuse light imaging ...

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

Long Term Chronische<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; Luchtweginfectie in Muizen

A mouse model of chronic airway infection is a key asset in cystic fibrosis (CF) research, although there are a number of concerns regarding the model ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

Transplantatie van Tail Skin aan allogene CD4 T-cel responsen bij muizen

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

In Vitro and In Vivo Assessment of T, B and Myeloid Cells Suppressive Activity and Humoral Responses from Transplant Recipients

In Vitro and In Vivo Assessment of T, B and Myeloid Cells Suppressive Activity and Humoral Responses from Transplant Recipients

In Vitro en In Vivo beoordeling van T-, B- en myeloïde cellen onderdrukkende activiteit en humorale reacties van transplantatie ontvangers

The main concern in transplantation is to achieve specific tolerance through induction of regulatory cells. The understanding of tolerance mechanisms ...

Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

Inductie van verlamming en visuele systeem schade in muizen door T cellen specifiek voor Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

Measuring Deformability and Red Cell Heterogeneity in Blood by Ektacytometry

Meten van vervormbaarheid en rode cel heterogeniteit in bloed door Ektacytometry

Decreased red cell deformability is characteristic of several disorders. In some cases, the extent of defective deformability can predict severity of ...

Printed Glycan Array: A Sensitive Technique for the Analysis of the Repertoire of Circulating Anti-carbohydrate Antibodies in Small Animals

Gedrukte Glycan Array: Een gevoelige techniek voor de analyse van het Repertoire van circulerende anti-koolhydraten antilichamen in kleine dieren

The repertoire of circulating anti-carbohydrate antibodies of a given individual is often associated with its immunological status. Not only the ...

Renal Subcapsular Transplantation of 2'-Deoxyguanosine-Treated Murine Embryonic Thymus in Nude Mice

Renale Subcapsulaire transplantatie van 2 '-Deoxyguanosine-behandelde Muriene embryonale Thymus in naakt muizen

The thymus is an important central immune organ, which plays an essential role in the development and differentiation of T cells. Thymus transplantation ...

An Immunological Model for Heterotopic Heart and Cardiac Muscle Cell Transplantation in Rats

Een immunologisch model voor heterotopische hart- en hartspierceltransplantatie bij ratten

Heterotopic heart transplantation in rats has been a commonly used model for diverse immunological studies for more than 50 years. Several modifications ...

Optimization of the Cuff Technique for Murine Heart Transplantation

Optimalisatie van de Cuff Techniek voor Murine Heart Transplantation

Murine cardiac transplantation has been performed for more than 40 years. With advancements in microsurgery, certain new techniques have been used to ...