Name: a modified surgical technique for kidney transplantation in mice
Uploaded: 2022-07-22T13:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Modified Surgical Technique for Kidney Transplantation in Mice at JoVE.com

אנו מודים לצוות ד"ר טיאנטיאן באי על העזרה בקריינות, מיס מיאן פאו על עזרתה באיור רפואי. עבודה זו נתמכה בחלקה על ידי קרן המחקר הגרמנית (DFG) לקידום שיתופי פעולה בינלאומיים (HO2581/4-1 עד AH) והקרן הלאומית למדע של סין (NSFC; #81760291 ל- FJ).

כל הניסויים בבעלי חיים נערכו על פי הנחיות ההנחיה 2010/63/EU של הפרלמנט האירופי בנושא הגנה על בעלי חיים המשמשים למטרות מדעיות (כרטיס אתיקה לבעלי חיים: המשרד לבטיחות מזון ותרופות בסקסוניה התחתונה, #33.9-42502-04-11/0492). בצע הליכים באמצעות כלי ניתוח סטריליים וחומרים מתכלים (autoclaved) ונסה לשמור על אזור הניתו...

<ol>
	<li>Skoskiewicz, M., Chase, C., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kidney+transplants+between+mice+of+graded+immunogenetic+diversity.">Kidney transplants between mice of graded immunogenetic diversity.</a> Transplantation Proceedings. 5 (1), 721-725 (1973).</li><li>Jiang, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+assessment+of+renal+fibrosis+with+magnetization+transfer+MR+imaging:+Validation+and+evaluation+in+murine+renal+artery+stenosis.">Noninvasive assessment of renal fibrosis with magnetization transfer MR imaging: Validation and evaluation in murine renal artery stenosis.</a> Radiology. 283 (1), 77-86 (2017).</li><li>Tse, G. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+kidney+transplantation:+Models+of+allograft+rejection.">Mouse kidney transplantation: Models of allograft rejection.</a> Journal of Visualized Experiments. (92), e52163 (2014).</li><li>Okazaki, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=et+al.Costimulatory+blockade-mediated+lung+allograft+acceptance+is+abrogated+by+overexpression+of+Bcl-2+in+the+recipient.">et al.Costimulatory blockade-mediated lung allograft acceptance is abrogated by overexpression of Bcl-2 in the recipient.</a> Transplantation Proceedings. 41 (1), 385-387 (2009).</li><li>Chuck, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=et+al.Ultra-short+echo-time+magnetic+resonance+imaging+distinguishes+ischemia/reperfusion+injury+from+acute+rejection+in+a+mouse+lung+transplantation+model.">et al.Ultra-short echo-time magnetic resonance imaging distinguishes ischemia/reperfusion injury from acute rejection in a mouse lung transplantation model.</a> Transplant International. 29 (1), 108-118 (2016).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pattern+of+liver,+kidney,+heart,+and+intestine+allograft+rejection+in+different+mouse+strain+combinations.">Pattern of liver, kidney, heart, and intestine allograft rejection in different mouse strain combinations.</a> Transplantation. 62 (9), 1267-1272 (1996).</li><li>Wang, J., Hockenheimer, S., Bickerstaff, A. A., Hadley, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+renal+transplantation+procedure.">Murine renal transplantation procedure.</a> Journal of Visualized Experiments. (29), e1150 (2009).</li><li>Plenter, R., Jain, S., Ruller, C. M., Nydam, T. L., Jani, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+kidney+transplant+technique.">Murine kidney transplant technique.</a> Journal of Visualized Experiments. (104), e52848 (2015).</li><li>Plenter, R. J., Jain, S., Nydam, T. L., Jani, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revised+arterial+anastomosis+for+improving+murine+kidney+transplant+outcomes.">Revised arterial anastomosis for improving murine kidney transplant outcomes.</a> Journal of Investigative Surgery. 28 (4), 208-214 (2015).</li><li>Rong, S., Lewis, A. G., Kunter, U., Haller, H., Gueler, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+knotless+technique+for+kidney+transplantation+in+the+mouse.">A knotless technique for kidney transplantation in the mouse.</a> Journal of Transplantation. , 127215 (2012).</li><li>Kreimann, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemia+reperfusion+injury+triggers+CXCL13+release+and+B-cell+recruitment+after+allogenic+kidney+transplantation.">Ischemia reperfusion injury triggers CXCL13 release and B-cell recruitment after allogenic kidney transplantation.</a> Frontiers in Immunology. 11, 1204 (2020).</li><li>Schmidbauer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diffusion-Weighted+imaging+and+mapping+of+T1+and+T2+relaxation+time+for+evaluation+of+chronic+renal+allograft+rejection+in+a+translational+mouse+model.">Diffusion-Weighted imaging and mapping of T1 and T2 relaxation time for evaluation of chronic renal allograft rejection in a translational mouse model.</a> Journal of Clinical Medicine. 10 (19), 4318 (2021).</li><li>Wu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+technique+for+blood+circuit+reconstruction+in+mouse+heart+transplantation+model.">Novel technique for blood circuit reconstruction in mouse heart transplantation model.</a> Microsurgery. 26, 594-598 (2006).</li><li>Haas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+allograft+nephropathy+or+interstitial+fibrosis+and+tubular+atrophy:+what+is+in+a+name.">Chronic allograft nephropathy or interstitial fibrosis and tubular atrophy: what is in a name.</a> Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 23 (3), 245-250 (2014).</li><li>Dang, Z., MacKinnon, A., Marson, L. P., Sethi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tubular+atrophy+and+interstitial+fibrosis+after+renal+transplantation+is+dependent+on+galectin-3.">Tubular atrophy and interstitial fibrosis after renal transplantation is dependent on galectin-3.</a> Transplantation. 93 (5), 477-484 (2012).</li><li>Yin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+circuit+reconstruction+in+an+abdominal+mouse+heart+transplantation+model.">Blood circuit reconstruction in an abdominal mouse heart transplantation model.</a> Journal of Visualized Experiments. (172), e62007 (2021).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+techniques+for+kidney+transplantation+in+mice.">Improved techniques for kidney transplantation in mice.</a> Microsurgery. 16 (2), 103-109 (1995).</li><li>Mannon, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+rejection+of+mouse+kidney+allografts.">Chronic rejection of mouse kidney allografts.</a> Kidney International. 55 (5), 1935-1944 (1999).</li><li>Coffman, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+renal+function+in+mouse+kidney+allografts+lacking+MHC+class+I+antigens.">Improved renal function in mouse kidney allografts lacking MHC class I antigens.</a> Journal of Immunology. 151 (1), 425-435 (1993).</li><li>Martins, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Learning+curve,+surgical+results+and+operative+complications+for+kidney+transplantation+in+mice.">Learning curve, surgical results and operative complications for kidney transplantation in mice.</a> Microsurgery. 26 (8), 590-593 (2006).</li></ol>

בעוד שמודל השתלת העור בעכברים הוא פשוט וקל לביצוע כדי לחקור אירועי דחייה אלואימוניים, הטכניקות הכירורגיות לחקר באופן ספציפי יותר את השינויים הדלקתיים הקשורים לאלואימוניות לאחר לב16 והשתלת כליה10 הוכחו כמורכבת ותובענית מאוד. מנקודת מבטו של הנפרולוג המושתל, להקמת ...

מאז שסקוביץ ואחרים פיתחו מודלים של השתלת כליה בעכברים בשנת 1973 בפעם הראשונה1, הוא הוכיח את עצמו ככלי ניסיוני חשוב לחקר המנגנונים של פגיעה איסכמית בהשתלה ודחייה אלואימונית, כמו גם לפיתוח טיפולים חדשים שמטרתם להאריך את הישרדות האלוגרפט ואולי להשיג סבילות אימונולוגית. עם זאת, הטכניקה הכירורגית הוכחה כמורכבת ותובענית מאוד, לעיתים עם סיבוכים כגון היצרויות אנסטומוטיות של כלי הדם המובילות לאי ספיקת כליה טרום-רנלית שאינה אימונולוגית2, כשל פוסט-פרנאלי הנגרם על ידי איסכמיה ונמק לאחר מכן של השופכן המושתל, היצרויות של האנסטומוזה של השופכן המושתל ו /או שלפוחית השתן של המושתל המובילות להפרעה בזרימת השתן. כל אלה הן סיבות מדוע השתלת כליה בעכברים לא פותחה עוד יותר ולכן אינה בשימוש נרחב. לביסוס מודל השתלת כליה יעיל ויציב לטווח ארוך של עכברים ללא סיבוכים וסקולריים ודרכי שתן עדיין יש משמעות שאין לה תחליף עבור מחקרים רבים בתחום ההשתלות תוך התמקדות במחלות כלייתיות בתיווך חיסוני אך גם זיהומיות3. בנוסף, בהשוואה להשתלות איברים אחרות במודלים של מורין כגון השתלת ריאות, לב ומעיים 4,5, מודל השתלת הכליה של העכבר מציע סיכוי לחקר הישרדות ארוכת טווח גם במסגרת פער אנטיגן היסטו-קומפטבילי גדול 3,6. כמו כן הוכח כי באותה סביבה של שילובי זן תורם-מושתל השתלות איברים שונות כגון לב או כליה מאופיינות בדינמיקה שונה ובהתחלות של דחיית allograft3. יתר על כן, מנקודת מבט נפרולוגית, זהו מודל מתאים יותר לחקר מנגנוני ויסות חיסוני בתיווך פרנכימלי בהקשר של אירועי דחייה חריפים וכרוניים מאשר ניסויים פשוטים בהשתלת עור.
על בסיס דיווחים קודמים על הטכניקה הניתוחית של השתלת כליה בעכברים 3,7,8,9, אנו מדגימים כאן את השיפורים המהימנים הבאים שיושמו בהצלחה במהלך 10 השנים האחרונות בתוך הקבוצה שלנו 10,11,12: ראשית, עורק השופכה נשמר בבטחה כאשר עורק הכליה נחתך באופן גושני יחד עם החלק המתאים של אבי העורקים הבטני. שנית, טכניקה חדשה, פשוטה ומהירה של אנסטומוזה וסקולרית ללא קשרים, שבה התפר הסופי של האנסטומוזיס אינו קשור לקצה העניבה העליונה כמו הגישה המסורתית אלא נשאר חופשי. טכניקה זו מאפשרת להגדיל או להקטין את גודל האנסטומוזיס לאחר ריפרפוזיה כלייתית כדי למנוע היצרות כלי דם ודימום תוך-אבדומינלי. שלישית, מחטי מזרק 21 G ו-30 G שימשו ככלי עזר מנחה לניקוב על מנת להשתיל את השופכן התורם בדופן שלפוחית השתן של המקבל, ובכך להפחית את הנזק לשלפוחית השתן של המקבל ולהקל על היווצרות של אנסטומוזיס ללא היצרות.
בדו"ח זה, השווינו גם את הטכניקה המסורתית, הנמצאת בשימוש נרחב, עם הטכניקה המתוקנת שהוקמה במעבדה שלנו ולא מצאנו הבדל משמעותי במידת ניוון צינוריות הכליה ופיברוזיס של השתלת כליה. במחקרים קודמים, השווינו בנוסף את התוצאות של טכניקה חדשה זו עם השיטה המקובלת במונחים של דימום מקומי, פקקת, זמן לביצוע אנסטומוזיס כלי הדם ושיעור ההישרדות. מצאנו שיפורים כגון הפחתה משמעותית של אירועי פקקת מקומיים (1.1% לעומת 6.6%), זמן מופחת להליך הרסטומוזה, והישרדות ארוכת טווח של השתלת כליות סינגנית הניתנת לשחזור (95% לעומת 84% בגישה הקלאסית)10.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>30G-needles</td>
			<td>Braun</td>
			<td>456300</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>acepromazine</td>
			<td>CP Pharma</td>
			<td>Tranquisol P</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bepanthen eye ointment</td>
			<td>Haus-Apotheke</td>
			<td>PZN 01578675</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bonn Micro Forceps</td>
			<td>FST</td>
			<td>11083-07</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Box for insulation and oxygen supply device</td>
			<td>RUSKINN</td>
			<td>INVIV</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6J&#160; mice</td>
			<td>Charles River. Germany</td>
			<td>no catalog number</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprofen</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>Rimadyl 50 mg/ml</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CATHETER-FEP 26G</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>Surflo-W</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clip Applicator Forceps Style</td>
			<td>FST</td>
			<td>18057-14</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved forceps</td>
			<td>WPI</td>
			<td>14114-G</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cutasept skin disinfection</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BODL980365</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dehydrator</td>
			<td>DIAPATH</td>
			<td>Donatello</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>electrosurgical pen</td>
			<td>Bovie</td>
			<td>CHANGE-A-TIP</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding machine</td>
			<td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td>
			<td>JB-P5</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Sinopharm Group Chemical Reagent Co. LtD</td>
			<td>100092683</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frozen platform</td>
			<td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td>
			<td>JB-L5</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gauze pads, cotton swabs</td>
			<td>Lohmann-Rauscher</td>
			<td>13353</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass slide</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>G6004</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HE dye solution set</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>G1003</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating mat</td>
			<td>THERMO MAT PRO 30W</td>
			<td>HTP-30</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hemostatic sponge</td>
			<td>CuraSpon</td>
			<td>J1276A</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>heparine-solution</td>
			<td>Haus-Apotheke</td>
			<td>PZN 03029820</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ice box</td>
			<td>PETZ</td>
			<td>No Catalog Number available</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaging system</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Nikon DS-U3</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inhalation anesthesia device</td>
			<td>GROPPLER</td>
			<td>BKGM 0616</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isoflurane</td>
			<td>CP Pharma</td>
			<td>Isofluran CP 1 ml/ml</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ketamine</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>no catalog numer</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Masson dye solution set</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>G1006</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>metamizole</td>
			<td>WDT</td>
			<td>no catalog numer</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>15000-00,15000-10</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Serrefine ( Clamp ) Angled / 16 mm</td>
			<td>FST</td>
			<td>18055-06</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>LEICAMZ6</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope light</td>
			<td>SCHOTT</td>
			<td>KL2500LED</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral gum</td>
			<td>SCRC</td>
			<td>10004160</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oven</td>
			<td>Tianjin Laibo Rui Instrument Equipment Co., Ltd</td>
			<td>GFL-230</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pathology slicer</td>
			<td>Shanghai Leica Instrument Co., Ltd</td>
			<td>RM2016</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline solution (NaCl 0.9 %)</td>
			<td>Haus-Apotheke</td>
			<td>PZN 06178437</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>scissors</td>
			<td>Peha Instruments</td>
			<td>991083/4</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slides</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>small Petri dish</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>8,33,900</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>straight forceps</td>
			<td>WPI</td>
			<td>14113-G</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>surgical tape</td>
			<td>BSN</td>
			<td>4120</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture Tying Forceps - 10 cm</td>
			<td>FST</td>
			<td>18025-10</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures(10-0)</td>
			<td>Medtronic</td>
			<td>N2540</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures(4-0)</td>
			<td>ETHILON</td>
			<td>V4940H</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures(7-0)</td>
			<td>ETHILON</td>
			<td>1647H</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe (0,3 mL)</td>
			<td>BD</td>
			<td>324826</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe (1 mL)</td>
			<td>BD</td>
			<td>320801</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue spreader</td>
			<td>Zhejiang Kehua Instrument Co., Ltd</td>
			<td>KD-P</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Upright optical microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Nikon Eclipse E100</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>xylazine</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>Rompun</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Sinopharm Group Chemical Reagent Co. LtD</td>
			<td>10023418</td>
			<td>-</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a modified surgical technique for kidney transplantation in mice

השתלת כליה בעכברים היא הליך ניתוח מסובך ומאתגר. יש מעט מאוד פרסומים המדגימים את השלבים המרכזיים של פעולה זו. לכן, מאמר זה מציג את הטכניקה ומצביע על האזהרות הכירורגיות הקשורות לניתוח זה. בנוסף, מודגמים שינויים חשובים בהשוואה להליך הקונבנציונלי. ראשית, טלאי של אבי העורקים הבטני נחתך ומוכן כך שהביפורקטיונים הפרוקסימליים של עורק הכליה, כולל עורק השופכה עוברים יחד עם הכליה התורמת en bloc. זה מקטין את הסיכון לנמק השופכן ומונע התפתחות של חסימת דרכי השתן. שנית, שיטה חדשה של anastomosis כלי הדם הוא הוכיח המאפשר המפעיל להגדיל באופן גמיש או להקטין את גודל של anastomosis לאחר השתלת הכליה reperfusion כבר יזם. זה מונע את הפיתוח של היצרות כלי הדם ודימום intraabdominal. שלישית, מוצגת טכניקה המאפשרת את הרסטומוזה של השופכן התורם העדין ושל שלפוחית השתן המקבלת שאינה גורמת לטראומה. אימוץ פרוטוקול זה יכול לקצר את זמן הפעולה ולצמצם את הנזק לשלפוחית השתן של הנמען, ובכך להגדיל באופן משמעותי את שיעור ההצלחה של הניתוח עבור העכברים המקבלים.

ארבעה שבועות לאחר ההשתלה, הן הטכניקה המתוקנת והן הטכניקה הקונבנציונלית הראו סימנים מתונים של ניוון צינורי כלייתי14,15 בהשוואה לכליות הקונטרה-צדדיות של המושתלים המקומיים (איור 1). מידת ניוון צינוריות הכליה לא הראתה הבדל משמעותי בין שתי הטכניק?...

Watch this Scientific Journal Video about A Modified Surgical Technique for Kidney Transplantation in Mice at JoVE.com

A Modified Surgical Technique for Kidney Transplantation in Mice

פרוטוקול זה מציג טכניקה כירורגית חדשה של השתלת כליה של עכברים המתמקדת באסטרטגיית אנסטומוזיס עורקית שונה. כמו כן מוצגת טכניקת תפר כלי דם הכוללת שיטת אנסטומוזה פשוטה ובטוחה יותר של השופכן-שלפוחית השתן. שינויים אלה מקצרים את זמן הניתוח ומשפרים את שיעור ההצלחה של הליך השתלת הכליה של העכבר.

טכניקה כירורגית מותאמת להשתלת כליה בעכברים

Kidney transplantation in mice is a complicated and challenging surgery procedure. There are very few publications demonstrating the key steps of this ...

השתלת כליה בעכברים חיונית לחקר מנגנונים של דחיית אלוגרפט חריפה וכרונית. כאן אנו מציגים טכניקה כירורגית חדשה לאנסטומוזיס כלי דם והשתלת השופכה במודל השתלת הכליה הבטני בעכברים. במודלים מסורתיים של השתלת כליה של עכברים, החלק העליון של אבי העורקים קשור בקירוב לעורקי הכליה.וריד הכליה השמאלי של התורם עובר בווריד קאווה ואבי העורקים התורם מחולק שווה בשווה מתחת לעורק הכליה כדי להיות מאוחר יותר אנסטומוז לאבי העורקים הבטני של המקבל. בטכניקה שונה זו של השתלת הכליה של העכבר, וריד הכליה השמאלי התורם עובר גם הוא בווריד קאווה, אך אבי העורקים התורם נחתך מעל צאצאי עורק הכליה והאנסטומוז שלו לאבי העורקים הבטני המקבל. בעוד הקצה התורם של אבי העורקים קשור, עורק השופכה נשמר במכוון.עכשיו אנחנו מתחילים את ההדגמה של ההליך הכירורגי. להרדמה, מניחים את העכבר לתוך הקופסה לשאיפת איזופלורן כ-40 עד 60 שניות על מנת לגרום לחוסר הכרה. לאחר שהעכבר מורדם, שקלו את העכבר.על פי משקל העכבר, הזרקה תוך-צפקית של קטמין, קסילאזין, אקפרומזין ניתנת לעכבר המרדים. כאשר ההרדמה נכנסה לתוקף, קוצצים את פרוות הבטן. לאחר מכן, תקן וחטא את העכבר על שולחן הניתוח.חותכים את העור באמצעות חתך בטן צולב. לחתוך את השרירים של דופן הבטן. לאחר מכן, המכסה הזיז בזהירות את הקרביים עם גזה טבולה מלוחה.חשוף את הכליה השמאלית, אבי העורקים והווריד הנבוב התחתון. תזהו את הוורידים המותניים השמאליים, כולל הענפים שמתחתיהם וכלי דם קטנים אחרים, כולל כלי יותרת הכליה השמאלי, בזהירות. גייסו את אזור אבי העורקים בין עורקי הכליה השמאליים והימניים באורך של כשני מילימטרים.הפרד את הווריד התחתון האינפרא-רנלי קאווה ואת אבי העורקים. ולעבור מלקחיים מעוקלים מתחת לאבי העורקים כדי להניח עניבה רופפת של 7.06 תפר סביב כלי זה. לחצות את האזור של אבי העורקים מתחת לעורק הכליה הימני ואת הווריד הנבוב התחתון באמצעות שני מלחציים מיקרו-וסקולריים של חמישה מילימטרים.העבר את הווריד הכליתי השמאלי מהווריד קאווה. לשטוף את אבי העורקים עם מיליליטר אחד של תמיסת הפרין. הידקו את הליגטורה וחתכו את אבי העורקים מתחת לליגטורה וכן מתחת למהדק הפרוקסימלי.הכן בזהירות, כך עורק השופכה העדין נשמר לחלוטין. לשחרר את הכליה השמאלית ואת כלי הדם הקשורים לחלוטין על ידי זהירות זהירה של כל כלי הדם המקיפים את הרקמה. מוציאים את הכליה ומאחסנים אותה בתמיסת קו התאים בארבע מעלות.שלבי הניתוח הראשוניים דומים לאלה שהוצגו בעבר עבור העכבר התורם, כולל הרדמה וחיטוי. פותחים את הבטן באמצעות חתך חציוני, ואז מכסים את איברי הבטן בגאזה רטובה באמצעות תמיסת מלח. שמרו בזהירות על אבי העורקים האינפרא-רנלי וודאו שכל ענף כלי גדול מצומק.השתמש בצריבה החשמלית כדי לנתח את השופכן השמאלי בזהירות בתנוחה קרובה לאגן הכליות. לאחר מכן, הסר את הכליה השמאלית. חושפים את הווריד הנבוב התחתון ואת אבי העורקים הבטני ומנתקים אותם מרקמת השומן שמסביב באורך של כארבעה מילימטרים.לאחר מכן לחצות מהדק כל אחד עם שני מלחציים מיקרו-וסקולריים בערך ובאופן דיסטלי מהם. השתמש במחזיק מחט מיקרו כדי להנחות מחט תפר מונופילמנטית 10/0, אשר ממוקמת דרך דופן אבי העורקים באופן פרוקסימלי לדיסטלי. עורק אליפטי של כמילימטר אחד מושגת על ידי מתיחה עדינה כלפי מעלה של התפר, תוך חיתוך ישירות מתחת לפנים התחתונות של המחט עם מספריים עדינים ומעוקלים.בצעו את אבי העורקים המקבל-תורם באופן אנסטומוזיס מקצה לקצה. תפר את הקצוות הפרוקסימליים והדיסטליים של האנסטומוזה. תפר אחרון באמצעות שני תפרים נפרדים 10.0.לאחר הקשירה, השאירו את שני התפרים הארוכים, כולל המחט, במקומם. לתפור את הצד השמאלי של דופן אבי העורקים של האנסטומוזיס ברציפות עם שני תפרים במרווחים שווים בכיוון דיסטלי-פרוקסימלי. לאחר התפר האחרון, הובילו את התפר דרך עובי חלקי של דופן הכלי מעל לקשירת תפר השהייה העליונה ובמקביל הפעילו אחיזה עדינה לקצה הקצר של עניבת התפר התחתונה.שים לב, בטכניקה חדשה זו ללא קשר, התפר האחרון אינו קשור לקצה הקצר של העניבה העליונה. להפוך את הכליה המושתלת למקומה הרגיל. כעת לתפור ברציפות את הדופן הימנית של האנסטומוזיס אבי העורקים באופן פרוקסימלי עד דיסטלי באמצעות שלושה תפרים באופן פרוקסימלי עד דיסטלי.שימו לב, בהשוואה לטכניקה הכירורגית הקונבנציונלית, התפר האחרון מתמזג עם הקשר הדיסטלי הסמוך. אין לקשור אותו לקצה התפר התחתון, לחתוך אותו כדי להשאיר אורך חופשי של כשני עד שלושה מילימטרים במקום זאת. חותכים את הווריד הנבוב הנחות קאווה אורכי באורך מספיק של כ-1.5 מילימטרים.מקם חתך זה מעט מתחת למקבילו אבי העורקים. בצע את האנסטומוזה הוורידית באמצעות אותו הליך תפירה כפי שתואר קודם לכן עם ההבדל כי ארבעה עד חמישה תפרים נדרשים עבור כל צד של anastomosis. התפר הסופי נותר כקצה חופשי באורך דומה בדומה לאנסטומוזיס אבי העורקים שתואר לעיל.וטכניקת האנסטומוזיס החדשה ללא קשר, התפר האחרון אינו קשור אלא נותר חופשי. זה מקצר את זמן הניתוח וזה מאפשר למנתח להגדיל או להקטין את גודל האנסטומוזיס. שיפור זה מפחית את הקושי ואת הסיבוכים שלאחר הניתוח של anastomosis כלי הדם.לאחר השלמת שני הרנסטומוזות, השתמש במטוש יבש כדי להפעיל לחץ עדין לכיוון אזור התפירה במשך כ -10 עד 20 שניות. לאחר מכן, ניתן להסיר את שני המהדקים. חודרים דרך שלפוחית השתן של הנמען באמצעות מחט ישרה עם תפר 10.0 ומחדירים אותה לתוך לומן מחט 21 גרם להנחיה.כעת הנחה את המחט 21 G כדי לתפור חור במקום יישום המחט הקודם ולשלוף את המחט. תפרו את קצה השופכן הגזום וחדרו את שלפוחית השתן עם תפר 10.0 זה שוב במקום כניסתו. גררו את חוט ה-10.0 ואת השופכן לתוך שלפוחית השתן דרך החור שנבנה.Anastomose השופכן של התורם לשלפוחית השתן של המקבל. כאן, חברו את הקרום החיצוני של השופכן לממברנה החיצונית של דופן שלפוחית השתן ובצעו תפרים לסירוגין עם שלושה עד ארבעה תפרים. לשלוף את תפר המתיחה.מכניסים את המעיים בחזרה לחלל הבטן. בצע תפרים דו שכבתיים, תחילה שרירי הבטן ואחריהם העור כדי לסגור את פצע הבטן. מכניסים את העכברים המושתלים לחדר מבוקר חמצן וטמפרטורה לצורך התאוששות לאחר הניתוח.תן משכך כאבים הולם לאחר הניתוח ארבעה ימים רצופים לאחר הניתוח. בצע כריתת נפרקציה של העכבר המושתל חמישה ימים לאחר הרדמה השתלה. הרם ותעד את מצב העכבר.השווינו את טכניקות ההשתלה הקונבנציונליות והמשתנות על ידי הערכת השינויים ההיסטולוגיים של כליות האיזוגרפט המושתלות לעומת הכליות הקונטרולטרליות של המושתלים המקומיים. הן מידת הגביע של צינוריות הכליה והן פיברוזיס אינטרסטיציאלי כלייתי לא נמצאו שונים באופן משמעותי ארבעה ו -12 שבועות לאחר ההשתלה בהתאמה. בעבר חקרנו את התוצאות של טכניקה חדשה זו ללא קשר והשווינו אותה לגישה הקלאסית מבחינת ההיבטים הטכניים של הסיבוכים ההדדיים והפוסט-ניתוחיים של ההליך.טכניקה שונה המוצגת כאן נקשרה לתופעה נמוכה יותר של אירועים טרומבוטיים ורידיים עורקיים תוך-עורקיים. הזמן לבצע את היצרות היה נמוך משמעותית והושג איזוגרפט כליות מצוין, הישרדות לטווח ארוך. השתלת הכליה בעכברים היא הליך מסובך ומתקדם.זוהי טכניקה כירורגית חדשה לאנסטומוזיס כלי דם והשתלת כליות המחויבת לשפר את אחוזי ההצלחה הכוללים, מה שהופך אותה לכלי אמין לחקר התגובה האוטואימונית לאחר השתלת כליה.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

הדמיה של multimodality 4D<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; זיהומים בעכברים

This protocol outlines the steps required to  longitudinally monitor a bioluminescent bacterial infection using composite 3D diffuse light imaging ...

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

כרוני לטווח ארוך<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; זיהום דרכי הנשימה בעכברים

A mouse model of chronic airway infection is a key asset in cystic fibrosis (CF) research, although there are a number of concerns regarding the model ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

השתלה של עור זנב לחקר תגובות תא Allogeneic T מסוג CD4 בעכברים

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

In Vitro and In Vivo Assessment of T, B and Myeloid Cells Suppressive Activity and Humoral Responses from Transplant Recipients

In Vitro and In Vivo Assessment of T, B and Myeloid Cells Suppressive Activity and Humoral Responses from Transplant Recipients

במבחנה In Vivo למזהמים סביבתיים T, B והתאים מיאלואידית פעילות מדכא ומענים ההורמונאלית מן המקבלים

The main concern in transplantation is to achieve specific tolerance through induction of regulatory cells. The understanding of tolerance mechanisms ...

Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

אינדוקציה של שיתוק ופציעה מערכת הראייה אצל עכברים מאת T תאים ספציפיים עבור אופטיקה Neuromyelitis Autoantigen Aquaporin-4

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

Measuring Deformability and Red Cell Heterogeneity in Blood by Ektacytometry

מדידת ודפורמביליות והטרוגניות תא אדום בדם על ידי Ektacytometry

Decreased red cell deformability is characteristic of several disorders. In some cases, the extent of defective deformability can predict severity of ...

Printed Glycan Array: A Sensitive Technique for the Analysis of the Repertoire of Circulating Anti-carbohydrate Antibodies in Small Animals

מערך Glycan המודפס: טכניקה רגישה לניתוח של הרפרטואר של מחזורי נוגדנים אנטי-פחמימות בבעלי חיים קטנים

The repertoire of circulating anti-carbohydrate antibodies of a given individual is often associated with its immunological status. Not only the ...

Renal Subcapsular Transplantation of 2'-Deoxyguanosine-Treated Murine Embryonic Thymus in Nude Mice

הכליות Subcapsular ההשתלה של 2 '-Deoxyguanosine-התייחסו מורין מורנה בתימוס בעכברים ערומים

The thymus is an important central immune organ, which plays an essential role in the development and differentiation of T cells. Thymus transplantation ...

An Immunological Model for Heterotopic Heart and Cardiac Muscle Cell Transplantation in Rats

מודל אימונוולוגי עבור הלב הטרוולפית ושריר הלב השתלת תא בחולדות

Heterotopic heart transplantation in rats has been a commonly used model for diverse immunological studies for more than 50 years. Several modifications ...

Optimization of the Cuff Technique for Murine Heart Transplantation

אופטימיזציה של טכניקת השרוול עבור השתלת לב מוריין

Murine cardiac transplantation has been performed for more than 40 years. With advancements in microsurgery, certain new techniques have been used to ...