Name: a modified surgical technique for kidney transplantation in mice
Uploaded: 2022-07-22T13:15:00
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私たちは、ナレーションの助けをくれたTiantian Bai博士チーム、医療イラストレーションの彼女の助けのためにミスMian Paoに感謝します。この研究は、国際協力を促進するためのドイツ研究財団(DFG)(HO2581/4-1からAH)と中国国家科学財団(NSFC; #81760291 to FJ)によって部分的に支援されました。

すべての動物実験は、科学的目的で使用される動物の保護に関する欧州議会の指令2010/63/EUのガイドラインに従って実施されました(動物倫理カード:ニーダーザクセン州食品医薬品安全省、#33.9-42502-04-11/0492)。滅菌手術器具および消耗品(オートクレーブ処理)を使用して処置を行い、手術領域をできるだけ無菌に保つようにしてください。
注:C57BL/6J雄マウスはドナーおよび?...

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	<li>Skoskiewicz, M., Chase, C., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kidney+transplants+between+mice+of+graded+immunogenetic+diversity.">Kidney transplants between mice of graded immunogenetic diversity.</a> Transplantation Proceedings. 5 (1), 721-725 (1973).</li><li>Jiang, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+assessment+of+renal+fibrosis+with+magnetization+transfer+MR+imaging:+Validation+and+evaluation+in+murine+renal+artery+stenosis.">Noninvasive assessment of renal fibrosis with magnetization transfer MR imaging: Validation and evaluation in murine renal artery stenosis.</a> Radiology. 283 (1), 77-86 (2017).</li><li>Tse, G. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+kidney+transplantation:+Models+of+allograft+rejection.">Mouse kidney transplantation: Models of allograft rejection.</a> Journal of Visualized Experiments. (92), e52163 (2014).</li><li>Okazaki, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=et+al.Costimulatory+blockade-mediated+lung+allograft+acceptance+is+abrogated+by+overexpression+of+Bcl-2+in+the+recipient.">et al.Costimulatory blockade-mediated lung allograft acceptance is abrogated by overexpression of Bcl-2 in the recipient.</a> Transplantation Proceedings. 41 (1), 385-387 (2009).</li><li>Chuck, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=et+al.Ultra-short+echo-time+magnetic+resonance+imaging+distinguishes+ischemia/reperfusion+injury+from+acute+rejection+in+a+mouse+lung+transplantation+model.">et al.Ultra-short echo-time magnetic resonance imaging distinguishes ischemia/reperfusion injury from acute rejection in a mouse lung transplantation model.</a> Transplant International. 29 (1), 108-118 (2016).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pattern+of+liver,+kidney,+heart,+and+intestine+allograft+rejection+in+different+mouse+strain+combinations.">Pattern of liver, kidney, heart, and intestine allograft rejection in different mouse strain combinations.</a> Transplantation. 62 (9), 1267-1272 (1996).</li><li>Wang, J., Hockenheimer, S., Bickerstaff, A. A., Hadley, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+renal+transplantation+procedure.">Murine renal transplantation procedure.</a> Journal of Visualized Experiments. (29), e1150 (2009).</li><li>Plenter, R., Jain, S., Ruller, C. M., Nydam, T. L., Jani, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+kidney+transplant+technique.">Murine kidney transplant technique.</a> Journal of Visualized Experiments. (104), e52848 (2015).</li><li>Plenter, R. J., Jain, S., Nydam, T. L., Jani, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revised+arterial+anastomosis+for+improving+murine+kidney+transplant+outcomes.">Revised arterial anastomosis for improving murine kidney transplant outcomes.</a> Journal of Investigative Surgery. 28 (4), 208-214 (2015).</li><li>Rong, S., Lewis, A. G., Kunter, U., Haller, H., Gueler, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+knotless+technique+for+kidney+transplantation+in+the+mouse.">A knotless technique for kidney transplantation in the mouse.</a> Journal of Transplantation. , 127215 (2012).</li><li>Kreimann, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemia+reperfusion+injury+triggers+CXCL13+release+and+B-cell+recruitment+after+allogenic+kidney+transplantation.">Ischemia reperfusion injury triggers CXCL13 release and B-cell recruitment after allogenic kidney transplantation.</a> Frontiers in Immunology. 11, 1204 (2020).</li><li>Schmidbauer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diffusion-Weighted+imaging+and+mapping+of+T1+and+T2+relaxation+time+for+evaluation+of+chronic+renal+allograft+rejection+in+a+translational+mouse+model.">Diffusion-Weighted imaging and mapping of T1 and T2 relaxation time for evaluation of chronic renal allograft rejection in a translational mouse model.</a> Journal of Clinical Medicine. 10 (19), 4318 (2021).</li><li>Wu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+technique+for+blood+circuit+reconstruction+in+mouse+heart+transplantation+model.">Novel technique for blood circuit reconstruction in mouse heart transplantation model.</a> Microsurgery. 26, 594-598 (2006).</li><li>Haas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+allograft+nephropathy+or+interstitial+fibrosis+and+tubular+atrophy:+what+is+in+a+name.">Chronic allograft nephropathy or interstitial fibrosis and tubular atrophy: what is in a name.</a> Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 23 (3), 245-250 (2014).</li><li>Dang, Z., MacKinnon, A., Marson, L. P., Sethi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tubular+atrophy+and+interstitial+fibrosis+after+renal+transplantation+is+dependent+on+galectin-3.">Tubular atrophy and interstitial fibrosis after renal transplantation is dependent on galectin-3.</a> Transplantation. 93 (5), 477-484 (2012).</li><li>Yin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+circuit+reconstruction+in+an+abdominal+mouse+heart+transplantation+model.">Blood circuit reconstruction in an abdominal mouse heart transplantation model.</a> Journal of Visualized Experiments. (172), e62007 (2021).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+techniques+for+kidney+transplantation+in+mice.">Improved techniques for kidney transplantation in mice.</a> Microsurgery. 16 (2), 103-109 (1995).</li><li>Mannon, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+rejection+of+mouse+kidney+allografts.">Chronic rejection of mouse kidney allografts.</a> Kidney International. 55 (5), 1935-1944 (1999).</li><li>Coffman, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+renal+function+in+mouse+kidney+allografts+lacking+MHC+class+I+antigens.">Improved renal function in mouse kidney allografts lacking MHC class I antigens.</a> Journal of Immunology. 151 (1), 425-435 (1993).</li><li>Martins, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Learning+curve,+surgical+results+and+operative+complications+for+kidney+transplantation+in+mice.">Learning curve, surgical results and operative complications for kidney transplantation in mice.</a> Microsurgery. 26 (8), 590-593 (2006).</li></ol>

マウスにおける皮膚移植モデルは、同種免疫拒絶反応事象を研究するために単純かつ容易に実施できるが、心臓16 および腎臓移植10 後の同種免疫関連炎症性変化をより具体的に調査するための外科的技術は、複雑かつ非常に要求が厳しいことが証明されている。移植腎臓内科医の視点から見ると、効果的で長期的に安定したマウス腎移植モデルの確立は、?...

Sakowitzらが1973年に腎臓移植のマウスモデルを初めて開発して以来1、移植虚血傷害および同種免疫拒絶反応のメカニズムを研究し、同種移植生存を延長し、おそらく免疫学的耐性を達成することを目的とした新しい治療法を開発するための重要な実験ツールであることが証明されている。しかし、外科的技術は複雑で非常に要求が厳しく、時には腎前非免疫学的腎臓移植不全2につながる血管吻合狭窄、虚血およびその後の移植尿管の壊死によって引き起こされる腎後不全、移植尿管の吻合の狭窄および/または尿流出の破壊につながるレシピエントの尿膀胱などの合併症を有することが証明されている。これらはすべて、マウスにおける腎移植がさらに開発されておらず、したがって広く使用されていない理由である。血管および尿路合併症のない効果的かつ長期的に安定したマウス腎臓移植モデルを確立することは、腎免疫媒介性だけでなく感染症にも焦点を当てた移植分野の多くの研究にとって、依然としてかけがえのない意義を有する3。さらに、肺、心臓、腸移植などのマウスモデルにおける他の臓器移植と比較して4,5、マウス腎臓移植モデルは、主要な組織適合性抗原格差3,6の設定においても長期生存を研究する機会を提供する。また、ドナー−レシピエント株の組み合わせの同じ設定において、心臓または腎臓などの異なる臓器移植は、異なる動態および同種移植片拒絶反応の発症によって特徴付けられることも示されている3。さらに、腎臓学的観点からは、単純な皮膚移植実験よりも急性および慢性拒絶反応事象の文脈における実質媒介性免疫調節機構を研究するためのより適切なモデルである。
マウス3,7,8,9における腎臓移植の外科的技術に関する以前の報告に基づいて、我々はここで、我々のグループ10,11,12内で過去10年間に首尾よく適用された以下の信頼できる改善を実証する:まず、腎動脈がブロックで切除されるので、尿管動脈は安全に保存されている 腹部大動脈のそれぞれの部分と一緒に。第二に、吻合の最終ステッチが伝統的なアプローチのように上部の結び目の端と結ばれず、自由なままである結び目のない血管吻合の新しい、シンプルで迅速な技術。この技術は、血管狭窄および腹腔内出血を避けるために、腎再灌流後の吻合のサイズを増減することを可能にする。第三に、ドナー尿管をレシピエントの膀胱壁に移植し、レシピエントの膀胱への損傷を軽減し、狭窄のない吻合の形成を容易にするために、21Gおよび30Gのシリンジ針を補助穿刺ガイドツールとして使用した。
この報告では、従来広く用いられている技術と、当研究室で確立されている改変技術とを比較したところ、腎尿細管萎縮や腎臓移植間質組織線維化の程度に有意差は認められませんでした。以前の研究では、局所出血、血栓症、血管吻合を行う時間および生存率の観点から、この新しい技術の結果を従来の方法とさらに比較した。局所血栓症イベントの有意な減少(1.1%対6.6%)、吻合手順の短縮、再現性の高い腎臓同系移植片の長期生存(古典的なアプローチでは95%対84%)などの改善が見出されました10。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>30G-needles</td>
			<td>Braun</td>
			<td>456300</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>acepromazine</td>
			<td>CP Pharma</td>
			<td>Tranquisol P</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bepanthen eye ointment</td>
			<td>Haus-Apotheke</td>
			<td>PZN 01578675</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bonn Micro Forceps</td>
			<td>FST</td>
			<td>11083-07</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Box for insulation and oxygen supply device</td>
			<td>RUSKINN</td>
			<td>INVIV</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6J&#160; mice</td>
			<td>Charles River. Germany</td>
			<td>no catalog number</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprofen</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>Rimadyl 50 mg/ml</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CATHETER-FEP 26G</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>Surflo-W</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clip Applicator Forceps Style</td>
			<td>FST</td>
			<td>18057-14</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved forceps</td>
			<td>WPI</td>
			<td>14114-G</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cutasept skin disinfection</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BODL980365</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dehydrator</td>
			<td>DIAPATH</td>
			<td>Donatello</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>electrosurgical pen</td>
			<td>Bovie</td>
			<td>CHANGE-A-TIP</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding machine</td>
			<td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td>
			<td>JB-P5</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Sinopharm Group Chemical Reagent Co. LtD</td>
			<td>100092683</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frozen platform</td>
			<td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td>
			<td>JB-L5</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gauze pads, cotton swabs</td>
			<td>Lohmann-Rauscher</td>
			<td>13353</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass slide</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>G6004</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HE dye solution set</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>G1003</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating mat</td>
			<td>THERMO MAT PRO 30W</td>
			<td>HTP-30</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hemostatic sponge</td>
			<td>CuraSpon</td>
			<td>J1276A</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>heparine-solution</td>
			<td>Haus-Apotheke</td>
			<td>PZN 03029820</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ice box</td>
			<td>PETZ</td>
			<td>No Catalog Number available</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaging system</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Nikon DS-U3</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inhalation anesthesia device</td>
			<td>GROPPLER</td>
			<td>BKGM 0616</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isoflurane</td>
			<td>CP Pharma</td>
			<td>Isofluran CP 1 ml/ml</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ketamine</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>no catalog numer</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Masson dye solution set</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>G1006</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>metamizole</td>
			<td>WDT</td>
			<td>no catalog numer</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>15000-00,15000-10</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Serrefine ( Clamp ) Angled / 16 mm</td>
			<td>FST</td>
			<td>18055-06</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>LEICAMZ6</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope light</td>
			<td>SCHOTT</td>
			<td>KL2500LED</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral gum</td>
			<td>SCRC</td>
			<td>10004160</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oven</td>
			<td>Tianjin Laibo Rui Instrument Equipment Co., Ltd</td>
			<td>GFL-230</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pathology slicer</td>
			<td>Shanghai Leica Instrument Co., Ltd</td>
			<td>RM2016</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline solution (NaCl 0.9 %)</td>
			<td>Haus-Apotheke</td>
			<td>PZN 06178437</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>scissors</td>
			<td>Peha Instruments</td>
			<td>991083/4</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slides</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>small Petri dish</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>8,33,900</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>straight forceps</td>
			<td>WPI</td>
			<td>14113-G</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>surgical tape</td>
			<td>BSN</td>
			<td>4120</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture Tying Forceps - 10 cm</td>
			<td>FST</td>
			<td>18025-10</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures(10-0)</td>
			<td>Medtronic</td>
			<td>N2540</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures(4-0)</td>
			<td>ETHILON</td>
			<td>V4940H</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures(7-0)</td>
			<td>ETHILON</td>
			<td>1647H</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe (0,3 mL)</td>
			<td>BD</td>
			<td>324826</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe (1 mL)</td>
			<td>BD</td>
			<td>320801</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue spreader</td>
			<td>Zhejiang Kehua Instrument Co., Ltd</td>
			<td>KD-P</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Upright optical microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Nikon Eclipse E100</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>xylazine</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>Rompun</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Sinopharm Group Chemical Reagent Co. LtD</td>
			<td>10023418</td>
			<td>-</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a modified surgical technique for kidney transplantation in mice

マウスの腎臓移植は、複雑で困難な手術手順です。この操作の主要な手順を示す出版物はほとんどありません。したがって、この記事では、この技術を紹介し、この操作に関連する外科的警告を指摘します。加えて、従来の手順と比較して重要な修正が実証される。まず、腹部大動脈のパッチを切断し、尿管動脈を含む腎動脈の近位分岐部がドナー腎臓 エンブロック と共にトランステクトされるように調製する。これは、尿管壊死のリスクを軽減し、尿路閉塞の発症を回避します。第二に、血管吻合の新しい方法は、腎移植再灌流が既に開始された後にオペレータが吻合のサイズを柔軟に増減することを可能にすることが実証される。これにより、血管狭窄および腹腔内出血の発症が回避される。第三に、外傷を引き起こさない繊細なドナー尿管およびレシピエント膀胱の吻合を可能にする技術が示されている。このプロトコルを採用することで、手術時間を短縮し、レシピエントの膀胱への損傷を軽減し、レシピエントマウスの手術成功率を大幅に高めることができる。

移植後4週間後、改変された技術および従来の技術の両方が、天然のレシピエント対側腎臓と比較した場合、腎尿細管萎縮14,15の中等度の徴候を示した(図1)。腎尿細管萎縮の程度は、2つの異なる技術の間に有意差を示さなかった。移植後12週間の腎臓のマッソン・ゴールドナーのトリクローム染色14,15<...

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A Modified Surgical Technique for Kidney Transplantation in Mice

このプロトコルは、修正された動脈吻合戦略に焦点を当てたマウス腎臓移植の新しい外科的技術を提示する。簡便で安全な尿管・膀胱吻合法を含む血管縫合技術も提示される。これらの改変は、手術時間を短縮し、マウス腎臓移植手順の成功率を向上させる。

マウスの腎臓移植のための修正外科的技術

Kidney transplantation in mice is a complicated and challenging surgery procedure. There are very few publications demonstrating the key steps of this ...

マウスにおける腎臓移植は、急性および慢性同種移植片拒絶反応のメカニズムの研究に不可欠である。ここでは、マウスの腹部腎臓移植モデルにおける血管吻合と尿管移植のための新しい手術技術を紹介します。従来のマウス腎臓移植モデルでは、大動脈の上部は腎動脈に近似して結紮される。ドナーの左腎静脈は大静脈でトランスジェクトされ、ドナー大動脈は腎動脈の下に均等に分割され、後にレシピエントの腹部大動脈に吻合される。マウス腎臓移植のこの改変技術では、ドナー左腎静脈も大静脈でトランステクトされるが、ドナー大動脈は腎動脈の子孫の上に切断され、その吻合はレシピエント腹部大動脈に切除される。大動脈のドナー末端が結紮されている間、尿管動脈は意図的に保存される。今、私たちは外科的処置のデモンストレーションを開始します。麻酔のために、無意識を誘発するために約40〜60秒間イソフルランを吸入するための箱にマウスを置く。マウスを麻酔したら、マウスの重量を量ります。マウス重量に応じて、ケタミン、キシラジン、アセプロマジンの腹腔内注射が麻酔されたマウスに与えられる。麻酔が効いたら、腹部の毛皮をクリップで留めます。次に、操作テーブル上のマウスを固定して消毒します。十字腹部切開部を用いて皮膚を切断する。腹壁の筋肉を切断する。次に、生理食塩水を吸収したガーゼで内臓を慎重に動かして覆います。左腎臓、大動脈、下大静脈を露出させる。左腰椎静脈を焼灼し、その根底にある枝や左副腎血管を含む他の小さな血管を慎重に灼する。長さ約2ミリメートルの左右腎動脈の間の大動脈領域を動員する。下大静脈と大動脈を分離する。そして、大動脈の下に湾曲した鉗子を通し、この血管の周りに7.06縫合糸の緩いネクタイを置きます。2つの5ミリメートルの微小血管クランプを使用して、右腎動脈および下大静脈の下の大動脈の領域をクロスクランプする。大静脈から左腎静脈をトランセクトする。大動脈を1ミリリットルのヘパリン溶液で洗い流す。結紮を締め、結紮の下と近位クランプの下大動脈を切断します。繊細な尿管動脈が完全に保存されるように、慎重に準備してください。組織を取り囲むすべての血管を慎重に焼灼することによって、左腎臓および関連する血管を完全に解放する。腎臓を取り出し、細胞株溶液に4度保存する。最初の操作ステップは、麻酔および消毒を含むドナーマウスについて以前に示されたものと同様である。中央切開を介して腹部を開き、次いで生理食塩水を使用して湿ったガーゼで腹部器官を覆う。内膜大動脈を慎重に保存し、すべての大きな血管枝が焼灼されていることを確認してください。電気焼灼を使用して、腎臓骨盤に近い位置で左尿管を慎重に解剖する。その後、左腎臓を取り除きます。下大静脈と腹部大動脈を露出させ、長さ約4ミリメートル以上の周囲の脂肪組織から剥離する。次に、2つの微小血管クランプでそれぞれをクロスクランプし、それらの約および遠位にクランプします。マイクロニードルホルダーを使用して、大動脈壁を通って近位から遠位まで配置される10/0モノフィラメント縫合針をガイドします。約1ミリメートルの楕円形動脈切除術は、縫合糸の穏やかな上向きの牽引によって達成され、針の下面の真下を細かい湾曲したはさみで切断する。ドナー-レシピエント大動脈吻合をエンドツーサイド方式で行う。吻合の近位端と遠位端をステッチする。最後のステッチは、2つの別々の10.0縫合糸を使用した。結んだ後、針を含む2つの長い縫合糸を所定の位置に置きます。吻合の大動脈壁の左側を、遠位 - 近位方向に等間隔に2本のステッチで連続的に縫い付ける。最後の縫合の後、上部のステイ縫合糸タイの上の血管壁の部分的な厚さを通して縫合糸を導き、同時に下部縫合糸タイの短い端に穏やかな牽引力を発揮する。この新しい結び目のないテクニックでは、最後のステッチは上部のネクタイの短い端に結び付けられていないことに注意してください。移植した腎臓を正常な位置にひっくり返します。次に、近位から遠位までの方法で3本のステッチを用いて大動脈吻合の右壁を近位から遠位まで連続的に縫い付ける。なお、従来の外科的技術と比較して、最後の縫合糸は、近くの遠位結びと合体される。下の縫合糸の端に縛らず、代わりに約2〜3ミリメートルの自由長を残すようにカットしてください。下大静脈を縦方向に約1.5ミリメートルの十分な長さで切断する。この切開部を大動脈の対応する部分の少し下に置きます。吻合の両側に4〜5本の縫合が必要であるという違いを伴って、前述ののと同じ縫合手順を使用して静脈吻合を行う。最終的なステッチは、上述の大動脈吻合に類似した長さの自由端として残される。そして新しい結び目のない吻合技術、最後のステッチは結ばれていませんが、自由に残されます。これにより、手術時間が短縮され、外科医は吻合のサイズを増減することができます。この改善は、血管吻合の困難さおよび手術後の合併症を軽減する。両方の吻合を完了した後、乾燥綿棒を使用して、縫合された領域に向かって約10〜20秒間穏やかな圧力をかける。その後、両方のクランプを取り外すことができます。10.0本の縫合糸でまっすぐな針を使ってレシピエントの尿膀胱を貫通し、21Gの針の内腔に挿入して指導します。次に、21 G針をガイドして、前の針塗布の場所に穴をあけ、針を引き抜きます。トリミングされた尿管端をステッチし、この10.0縫合糸で膀胱をその入り口の場所に再び穿孔する。10.0フィラメントと尿管を、構築された穴を通って尿膀胱に牽引する。ドナーの尿管をレシピエントの尿膀胱にアナストモースする。ここでは、尿管の外膜を膀胱壁の外膜に接続し、3~4本の縫合で断続的な縫合を行う。牽引縫合糸を引き抜きます。腸を腹腔に戻します。2層の縫合を行い、最初に腹筋に続いて皮膚を腹部創傷を閉じる。移植したマウスを酸素および温度制御されたチャンバーに入れ、手術後に回復させる。術後4日連続で十分な術後鎮痛を行う。移植麻酔の5日後にレシピエントマウスの対側腎摘出術を行う。マウスの状態を上げて記録します。我々は、移植された等移植片腎臓と天然のレシピエント対側腎臓の組織学的変化を評価することによって、従来の移植技術および改変移植技術を比較した。腎尿細管および腎間質線維症のトロフィーの程度はいずれも、移植後4週目および12週目でそれぞれ有意に異なることは見出されなかった。我々は以前、この新しい結び目のない技術の結果を調査し、術間および術後の合併症の手順の技術的側面の観点から古典的なアプローチと比較した。ここに示されている改変された技術は、移植片内動脈静脈血栓イベントの発生の低減と関連していた。狭窄を行う時間が有意に少なく、優れた腎臓等移植片であり、長期生存率を達成した。マウスの腎臓移植は複雑で最先端の手順です。これは、全体的な成功率を向上させることを約束した血管吻合および腎移植のための新しい外科的技術であり、腎臓移植後の自己免疫応答を研究するための信頼できるツールとなっている。

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

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