Name: a modified surgical technique for kidney transplantation in mice
Uploaded: 2022-07-22T13:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Modified Surgical Technique for Kidney Transplantation in Mice at JoVE.com

Vi takker Dr. Tiantian Bai team for hjelp med voice over, Miss Mian Pao for hennes hjelp i medisinsk illustrasjon. Dette arbeidet ble delvis støttet av Den tyske forskningsstiftelsen (DFG) for å fremme internasjonalt samarbeid (HO2581/4-1 til AH) og National Science Foundation of China (NSFC; #81760291 til FJ).

Alle dyreforsøk ble utført i henhold til retningslinjene fra Europaparlamentets direktiv 2010/63/EU om beskyttelse av dyr som brukes til vitenskapelige formål (Animalsk etikkkort: Niedersachsens mat- og narkotikadepartement, #33.9-42502-04-11/0492). Utfør prosedyrer ved hjelp av sterile kirurgiske instrumenter og forbruksvarer (autoklavert) og prøv å holde operasjonsområdet så sterilt som mulig.
MERK: C57BL/6J mannlige mus fungerte som donorer og mottakere (syngeneisk transplantasjonsm...

<ol>
	<li>Skoskiewicz, M., Chase, C., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kidney+transplants+between+mice+of+graded+immunogenetic+diversity.">Kidney transplants between mice of graded immunogenetic diversity.</a> Transplantation Proceedings. 5 (1), 721-725 (1973).</li><li>Jiang, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+assessment+of+renal+fibrosis+with+magnetization+transfer+MR+imaging:+Validation+and+evaluation+in+murine+renal+artery+stenosis.">Noninvasive assessment of renal fibrosis with magnetization transfer MR imaging: Validation and evaluation in murine renal artery stenosis.</a> Radiology. 283 (1), 77-86 (2017).</li><li>Tse, G. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+kidney+transplantation:+Models+of+allograft+rejection.">Mouse kidney transplantation: Models of allograft rejection.</a> Journal of Visualized Experiments. (92), e52163 (2014).</li><li>Okazaki, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=et+al.Costimulatory+blockade-mediated+lung+allograft+acceptance+is+abrogated+by+overexpression+of+Bcl-2+in+the+recipient.">et al.Costimulatory blockade-mediated lung allograft acceptance is abrogated by overexpression of Bcl-2 in the recipient.</a> Transplantation Proceedings. 41 (1), 385-387 (2009).</li><li>Chuck, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=et+al.Ultra-short+echo-time+magnetic+resonance+imaging+distinguishes+ischemia/reperfusion+injury+from+acute+rejection+in+a+mouse+lung+transplantation+model.">et al.Ultra-short echo-time magnetic resonance imaging distinguishes ischemia/reperfusion injury from acute rejection in a mouse lung transplantation model.</a> Transplant International. 29 (1), 108-118 (2016).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pattern+of+liver,+kidney,+heart,+and+intestine+allograft+rejection+in+different+mouse+strain+combinations.">Pattern of liver, kidney, heart, and intestine allograft rejection in different mouse strain combinations.</a> Transplantation. 62 (9), 1267-1272 (1996).</li><li>Wang, J., Hockenheimer, S., Bickerstaff, A. A., Hadley, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+renal+transplantation+procedure.">Murine renal transplantation procedure.</a> Journal of Visualized Experiments. (29), e1150 (2009).</li><li>Plenter, R., Jain, S., Ruller, C. M., Nydam, T. L., Jani, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+kidney+transplant+technique.">Murine kidney transplant technique.</a> Journal of Visualized Experiments. (104), e52848 (2015).</li><li>Plenter, R. J., Jain, S., Nydam, T. L., Jani, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revised+arterial+anastomosis+for+improving+murine+kidney+transplant+outcomes.">Revised arterial anastomosis for improving murine kidney transplant outcomes.</a> Journal of Investigative Surgery. 28 (4), 208-214 (2015).</li><li>Rong, S., Lewis, A. G., Kunter, U., Haller, H., Gueler, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+knotless+technique+for+kidney+transplantation+in+the+mouse.">A knotless technique for kidney transplantation in the mouse.</a> Journal of Transplantation. , 127215 (2012).</li><li>Kreimann, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemia+reperfusion+injury+triggers+CXCL13+release+and+B-cell+recruitment+after+allogenic+kidney+transplantation.">Ischemia reperfusion injury triggers CXCL13 release and B-cell recruitment after allogenic kidney transplantation.</a> Frontiers in Immunology. 11, 1204 (2020).</li><li>Schmidbauer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diffusion-Weighted+imaging+and+mapping+of+T1+and+T2+relaxation+time+for+evaluation+of+chronic+renal+allograft+rejection+in+a+translational+mouse+model.">Diffusion-Weighted imaging and mapping of T1 and T2 relaxation time for evaluation of chronic renal allograft rejection in a translational mouse model.</a> Journal of Clinical Medicine. 10 (19), 4318 (2021).</li><li>Wu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+technique+for+blood+circuit+reconstruction+in+mouse+heart+transplantation+model.">Novel technique for blood circuit reconstruction in mouse heart transplantation model.</a> Microsurgery. 26, 594-598 (2006).</li><li>Haas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+allograft+nephropathy+or+interstitial+fibrosis+and+tubular+atrophy:+what+is+in+a+name.">Chronic allograft nephropathy or interstitial fibrosis and tubular atrophy: what is in a name.</a> Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 23 (3), 245-250 (2014).</li><li>Dang, Z., MacKinnon, A., Marson, L. P., Sethi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tubular+atrophy+and+interstitial+fibrosis+after+renal+transplantation+is+dependent+on+galectin-3.">Tubular atrophy and interstitial fibrosis after renal transplantation is dependent on galectin-3.</a> Transplantation. 93 (5), 477-484 (2012).</li><li>Yin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+circuit+reconstruction+in+an+abdominal+mouse+heart+transplantation+model.">Blood circuit reconstruction in an abdominal mouse heart transplantation model.</a> Journal of Visualized Experiments. (172), e62007 (2021).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+techniques+for+kidney+transplantation+in+mice.">Improved techniques for kidney transplantation in mice.</a> Microsurgery. 16 (2), 103-109 (1995).</li><li>Mannon, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+rejection+of+mouse+kidney+allografts.">Chronic rejection of mouse kidney allografts.</a> Kidney International. 55 (5), 1935-1944 (1999).</li><li>Coffman, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+renal+function+in+mouse+kidney+allografts+lacking+MHC+class+I+antigens.">Improved renal function in mouse kidney allografts lacking MHC class I antigens.</a> Journal of Immunology. 151 (1), 425-435 (1993).</li><li>Martins, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Learning+curve,+surgical+results+and+operative+complications+for+kidney+transplantation+in+mice.">Learning curve, surgical results and operative complications for kidney transplantation in mice.</a> Microsurgery. 26 (8), 590-593 (2006).</li></ol>

Mens hudtransplantasjonsmodellen hos mus er enkel og enkel å utføre for å studere alloimmune avvisningshendelser, har de kirurgiske teknikkene for å undersøke mer spesifikt de alloimmune-relaterte inflammatoriske endringene etter hjerte16 og nyretransplantasjon10 vist seg å være komplekse og svært krevende. Fra transplantasjonsnefrologens synspunkt har etableringen av en effektiv og langsiktig stabil nyretransplantasjonsmodell fortsatt en uerstattelig betydning for ...

Siden Sakowitz et al. utviklet musemodeller for nyretransplantasjon i 1973 for første gang1, har det vist seg som et viktig eksperimentelt verktøy for å studere mekanismene for transplantasjons iskemisk skade og alloimmun avvisning, samt for å utvikle nye behandlinger med sikte på å forlenge allograft overlevelse og muligens for å oppnå immunologisk toleranse. Imidlertid har den kirurgiske teknikken vist seg å være kompleks og svært krevende, noen ganger har komplikasjoner som vaskulære anastomotiske striktur som fører til prerenal ikke-immunologisk nyretransplantasjonssvikt2, postrenal svikt forårsaket av iskemi og etterfølgende nekrose av den transplanterte urinblæren, strikturene av anastomose av den transplanterte urinlederen og / eller mottakerens urinblære som fører til en forstyrrelse av urinutløpet. Alle disse er grunner til at nyretransplantasjon hos mus ikke er videreutviklet og derfor ikke er mye brukt. Etablering av en effektiv og langsiktig stabil muse nyretransplantasjonsmodell uten vaskulære og urinveiskomplikasjoner har fortsatt uerstattelig betydning for mange studier i transplantasjonsfeltet med fokus på nyreimmunnmedierte, men også smittsomme sykdommer3. I tillegg, sammenlignet med andre organtransplantasjoner i murinmodeller som lunge-, hjerte- og tarmtransplantasjon 4,5, gir musen nyretransplantasjonsmodellen en sjanse til å studere langsiktig overlevelse selv i innstillingen av store histokompatibilitetsantigenforskjeller 3,6. Det har også vist seg at i samme setting av donormottakerstammekombinasjoner er forskjellige organtransplantasjoner som hjerte eller nyre preget av forskjellig dynamikk og utbrudd av allograft avvisning3. Videre, fra det nephrologiske synspunktet, er det en mer egnet modell for å studere parenchymale medierte immunregulatoriske mekanismer i sammenheng med akutte og kroniske avvisningshendelser enn enkle hudtransplantasjonsforsøk.
På grunnlag av tidligere rapporter om den kirurgiske teknikken for nyretransplantasjon hos mus 3,7,8,9, demonstrerer vi her følgende pålitelige forbedringer som har blitt brukt i løpet av de siste 10 årene i vår gruppe 10,11,12: For det første er ureteral arterien trygt bevart når nyrearterien blir resected en bloc sammen med den respektive delen av abdominal aorta. For det andre, en ny, enkel og rask teknikk av en knuteløs vaskulær anastomose der den endelige masken av anastomose ikke er bundet med slutten av det øvre slipset som den tradisjonelle tilnærmingen, men forblir fri. Denne teknikken gjør det mulig å øke eller redusere størrelsen på anastomose etter nyrereperfusjon for å unngå karstraff og intraabdominal blødning. For det tredje ble 21 G og 30 G sprøytenåler brukt som et hjelpepunkteringsguideverktøy for å implantere donorureteren i mottakerens blærevegg og redusere skaden på mottakerens blære og lette dannelsen av strengfri anastomose.
I denne rapporten sammenlignet vi også den tradisjonelle, mye brukte teknikken med den modifiserte som er etablert i vårt laboratorium og fant ingen signifikant forskjell i graden av nyrerørformet atrofi og nyretransplantasjon interstitiell vevsfibrose. I tidligere studier sammenlignet vi i tillegg resultatene av denne nye teknikken med den konvensjonelle metoden når det gjelder lokal blødning, trombose, tid for å utføre fartøyets anastomose og overlevelsesrate. Vi fant forbedringer som betydelige reduksjoner av lokale trombosehendelser (1,1 % versus 6,6 %), redusert tid for anastomoseprosedyren og en svært reproduserbar nyretransplanttisk transplantat langtidsoverlevelse (95 % versus 84 % med den klassiske tilnærmingen)10.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>30G-needles</td>
			<td>Braun</td>
			<td>456300</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>acepromazine</td>
			<td>CP Pharma</td>
			<td>Tranquisol P</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bepanthen eye ointment</td>
			<td>Haus-Apotheke</td>
			<td>PZN 01578675</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bonn Micro Forceps</td>
			<td>FST</td>
			<td>11083-07</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Box for insulation and oxygen supply device</td>
			<td>RUSKINN</td>
			<td>INVIV</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6J&#160; mice</td>
			<td>Charles River. Germany</td>
			<td>no catalog number</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprofen</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>Rimadyl 50 mg/ml</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CATHETER-FEP 26G</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>Surflo-W</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clip Applicator Forceps Style</td>
			<td>FST</td>
			<td>18057-14</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved forceps</td>
			<td>WPI</td>
			<td>14114-G</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cutasept skin disinfection</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BODL980365</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dehydrator</td>
			<td>DIAPATH</td>
			<td>Donatello</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>electrosurgical pen</td>
			<td>Bovie</td>
			<td>CHANGE-A-TIP</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding machine</td>
			<td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td>
			<td>JB-P5</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Sinopharm Group Chemical Reagent Co. LtD</td>
			<td>100092683</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frozen platform</td>
			<td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td>
			<td>JB-L5</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gauze pads, cotton swabs</td>
			<td>Lohmann-Rauscher</td>
			<td>13353</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass slide</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>G6004</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HE dye solution set</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>G1003</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating mat</td>
			<td>THERMO MAT PRO 30W</td>
			<td>HTP-30</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hemostatic sponge</td>
			<td>CuraSpon</td>
			<td>J1276A</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>heparine-solution</td>
			<td>Haus-Apotheke</td>
			<td>PZN 03029820</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ice box</td>
			<td>PETZ</td>
			<td>No Catalog Number available</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaging system</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Nikon DS-U3</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inhalation anesthesia device</td>
			<td>GROPPLER</td>
			<td>BKGM 0616</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isoflurane</td>
			<td>CP Pharma</td>
			<td>Isofluran CP 1 ml/ml</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ketamine</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>no catalog numer</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Masson dye solution set</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>G1006</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>metamizole</td>
			<td>WDT</td>
			<td>no catalog numer</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>15000-00,15000-10</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Serrefine ( Clamp ) Angled / 16 mm</td>
			<td>FST</td>
			<td>18055-06</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>LEICAMZ6</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope light</td>
			<td>SCHOTT</td>
			<td>KL2500LED</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral gum</td>
			<td>SCRC</td>
			<td>10004160</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oven</td>
			<td>Tianjin Laibo Rui Instrument Equipment Co., Ltd</td>
			<td>GFL-230</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pathology slicer</td>
			<td>Shanghai Leica Instrument Co., Ltd</td>
			<td>RM2016</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline solution (NaCl 0.9 %)</td>
			<td>Haus-Apotheke</td>
			<td>PZN 06178437</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>scissors</td>
			<td>Peha Instruments</td>
			<td>991083/4</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slides</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>small Petri dish</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>8,33,900</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>straight forceps</td>
			<td>WPI</td>
			<td>14113-G</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>surgical tape</td>
			<td>BSN</td>
			<td>4120</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture Tying Forceps - 10 cm</td>
			<td>FST</td>
			<td>18025-10</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures(10-0)</td>
			<td>Medtronic</td>
			<td>N2540</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures(4-0)</td>
			<td>ETHILON</td>
			<td>V4940H</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures(7-0)</td>
			<td>ETHILON</td>
			<td>1647H</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe (0,3 mL)</td>
			<td>BD</td>
			<td>324826</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe (1 mL)</td>
			<td>BD</td>
			<td>320801</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue spreader</td>
			<td>Zhejiang Kehua Instrument Co., Ltd</td>
			<td>KD-P</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Upright optical microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Nikon Eclipse E100</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>xylazine</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>Rompun</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Sinopharm Group Chemical Reagent Co. LtD</td>
			<td>10023418</td>
			<td>-</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a modified surgical technique for kidney transplantation in mice

Nyretransplantasjon hos mus er en komplisert og utfordrende kirurgiprosedyre. Det er svært få publikasjoner som demonstrerer de viktigste trinnene i denne operasjonen. Derfor introduserer denne artikkelen teknikken og påpeker de kirurgiske forbeholdene knyttet til denne operasjonen. I tillegg er viktige modifikasjoner i forhold til den konvensjonelle prosedyren demonstrert. For det første blir en flekk av bukaorta kuttet og forberedt slik at de proksimale bifurkasjonene i nyrearterien, inkludert ureteral arterien, blir transektert sammen med donor nyre en blokk. Dette reduserer risikoen for en urinrørnekrose og unngår utviklingen av en urinveis okklusjon. For det andre er det demonstrert en ny metode for vaskulær anastomose som gjør at operatøren fleksibelt kan øke eller redusere størrelsen på anastomose etter at nyretransplantasjonsreperfusjon allerede er igangsatt. Dette unngår utvikling av fartøyets striktur og intraabdominal blødning. For det tredje vises en teknikk som muliggjør anastomose av den delikate donorureteren og mottakerblæren som ikke forårsaker traumer. Ved å ta i bruk denne protokollen kan operasjonstiden forkortes og skaden på mottakerens blære reduseres, og dermed øke driftssuksessraten for mottakermusene betydelig.

Fire uker etter transplantasjon viste både den modifiserte teknikken og den konvensjonelle teknikken moderate tegn på nyrerøratrofi14,15 sammenlignet med den innfødte mottakeren kontralaterale nyrer (figur 1). Graden av nyre tubules atrofi viste ingen signifikant forskjell mellom de to forskjellige teknikkene. Masson Goldners trichrome farging14,15 av nyrene 12 uker etter...

Watch this Scientific Journal Video about A Modified Surgical Technique for Kidney Transplantation in Mice at JoVE.com

A Modified Surgical Technique for Kidney Transplantation in Mice

Denne protokollen presenterer en ny kirurgisk teknikk for nyretransplantasjon med fokus på en modifisert arteriell anastomosestrategi. En vaskulær suturteknikk inkludert en enkel og sikrere anastomosemetode for urinblære presenteres også. Disse modifikasjonene forkorter operasjonstiden og forbedrer suksessraten for musens nyretransplantasjonsprosedyre.

En modifisert kirurgisk teknikk for nyretransplantasjon hos mus

Kidney transplantation in mice is a complicated and challenging surgery procedure. There are very few publications demonstrating the key steps of this ...

Nyretransplantasjon hos mus er avgjørende for studie av mekanismer for akutt og kronisk allograft avvisning. Her introduserer vi en ny kirurgisk teknikk for karanastomose og ureteral implantasjon i abdominal nyretransplantasjonsmodell hos mus. I tradisjonelle muse nyretransplantasjonsmodeller er den øvre delen av aorta ligated tilnærming til nyrearteriene.Donorens venstre nyreåre er transektert på vena cava og donor aorta er delt like under nyrearterien for senere å være anastomose til mottakerens abdominal aorta. I denne modifiserte teknikken for nyretransplantasjon av mus blir donoren venstre nyreåre også transektert ved vena cava, men donoraorta er kuttet over avkom av nyrearterien og dens anastomose til mottakeren abdominal aorta. Mens donorenden av aorta er ligatert, blir urinrørsarterien bevisst bevart.Nå starter vi demonstrasjonen av den kirurgiske prosedyren. For anestesi, plasser musen i esken for innånding av isofluran ca 40 til 60 sekunder for å indusere bevisstløshet. Når musen er bedøvet, vei musen.I henhold til musevekten er intraperitoneal injeksjon av ketamin, xylazin, acepromazin gitt til den bedøvede musen. Når anestesi har trer i kraft, klipp bukpelsen. Fest deretter og desinfiser musen på operasjonsbordet.Klipp huden ved hjelp av tverr abdominal snitt. Klipp musklene i bukveggen. Deretter flytter du forsiktig viscera med en saltvanns imbibed gasbind.Eksponer venstre nyre, aorta og dårligere vena cava. Cauterize venstre lumbale årer, inkludert deres underliggende grener og andre små fartøy, inkludert venstre binyrefartøy nøye. Mobiliser aortaområdet mellom venstre og høyre nyrearteri ca. to millimeter.Skill den infrarenale dårligere finna cava og aorta. Og pass buede tang under aorta for å plassere et løst slips på 7,06 sutur rundt dette fartøyet. Kryss klemme området av aorta under høyre nyrearterie og dårligere vena cava ved hjelp av to fem millimeter mikrovaskulære klemmer.Transekt venstre nyreåre fra vena cava. Skyll aorta med en milliliter heparinoppløsning. Stram ligaturen og kutt aorta under ligaturen så vel som under den proksimale klemmen.Forbered forsiktig, slik at den delikate urinrørsarterien er helt bevart. frigjøre venstre nyre og tilhørende kar helt ved forsiktig cauterizing alle fartøy rundt vev. Fjern nyrene og lagre den i cellelinjeløsning ved fire grader.De første operasjonstrinnene ligner de som tidligere ble vist for donormusen, inkludert anestesi og desinfeksjon. Åpne magen via median snitt, og dekk deretter bukorganene med en våt gasbind ved hjelp av saltoppløsning. Ta forsiktig vare på den infrarenale aortaen og sørg for at alle store fartøygrener er cauterized.Bruk den elektriske cautery å dissekere venstre urinlederen forsiktig i en posisjon proksimal til nyre bekkenet. Fjern deretter venstre nyre. Utsett den dårligere vena cava og abdominal aorta og løsne dem fra det omkringliggende fettvevet omtrent over fire millimeter i lengden.Kryss deretter klemme hver med to mikrovaskulære klemmer omtrent og distally av dem. Bruk en mikronålholder til å lede en 10/0 monofilament suturnål, som plasseres gjennom aortaveggen fra proksimal til distal måte. En elliptisk arteriotomi på omtrent en millimeter oppnås ved forsiktig oppover trekkraft av suturen, mens du skjærer rett under nålens nedre ansikt med fin, buet saks.Utfør donormottaker aorta anastomose på en ende-til-side måte. Sy de proksimale og distale endene av anastomose. Siste sømmer med to separate 10,0 suturer.Etter binding, la de to lange suturene, inkludert nålen, være på plass. Sy venstre side av anastomosens aortale vegg kontinuerlig med to jevnt fordelte masker i en distal-proksimal retning. Etter den siste masken, før suturen gjennom en delvis tykkelse på karveggen over det øvre oppholdssugebåndet og utøv samtidig forsiktig trekkraft til den korte enden av det nedre suturbåndet.Legg merke til at i denne nye knuteløse teknikken er den siste masken ikke bundet til den korte enden av det øvre slipset. Snu den transplanterte nyren til sin normale posisjon. Sy nå kontinuerlig høyre vegg av aortal anastomose på en proksimal til distal måte ved hjelp av tre masker på en proksimal til distal måte.Merk, sammenlignet med den konvensjonelle kirurgiske teknikken, slås den siste suturen sammen med det distale slipset i nærheten. Ikke bind den til enden av den nedre suturen, kutt den for å legge en fri lengde på rundt to til tre millimeter i stedet. Klipp den dårligere vena cava langsgående med tilstrekkelig lengde på ca. 1,5 millimeter.Plasser dette snittet litt under den aortaiske motparten. Utfør venøs anastomose ved hjelp av samme suturing prosedyre som tidligere beskrevet med forskjellen at fire til fem masker er nødvendig for hver side av anastomose. Den endelige masken er igjen som en fri ende av lignende lengde som ligner den aortale anastomose beskrevet ovenfor.Og den nye knuteløse anastomoseteknikken, den siste masken er ikke bundet, men igjen fri. Dette forkorter operasjonstiden, og det lar kirurgen øke eller redusere størrelsen på anastomose. Denne forbedringen reduserer vanskeligheten og etteroperasjonen komplikasjoner av vaskulær anastomose.Etter å ha fullført begge anastomosene, bruk en tørr vattpinne for å utøve forsiktig trykk mot det suturerte området i ca. 10 til 20 sekunder. Deretter kan begge klemmene fjernes. Penetrer gjennom mottakerens urinblære ved hjelp av en rett nål med 10,0 sutur og sett den inn i en 21 G nållumen for veiledning.Før nålen 21 G for å sy et hull på stedet for den forrige nåleapplikasjonen og trekk ut nålen. Sy den trimmede urinlederenden og perforer blæren med denne 10,0 suturen igjen på stedet for oppføringen. Slepe 10.0 filament og urinlederen inn i urinblæren gjennom det konstruerte hullet.Anastomose donorens urinblær til mottakerens urinblære. Her kobler du urinlederens ytre membran til den ytre membranen på blæreveggen og utfører periodiske suturer med tre til fire masker. Trekk ut trekkraft suturen.Plasser tarmene tilbake i bukhulen. Utfør to-lags suturer, først magemusklene etterfulgt av huden for å lukke magesåret. Plasser de transplanterte musene i et oksygen- og temperaturkontrollert kammer for å gjenopprette etter operasjonen.Gi tilstrekkelig postoperativ analgesi fire påfølgende dager etter operasjonen. Utfør kontralateral nephrektomi av mottakermusen fem dager etter transplantasjon anestesi. Hev og registrer musens tilstand.Vi sammenlignet konvensjonelle og modifiserte transplantasjonsteknikker ved å vurdere histologiske endringer i de transplanterte isograft nyrene kontra de innfødte mottakerens kontralaterale nyrer. Både graden av troféet til nyreknollene og nyreinterstitiell fibrose ble ikke funnet å være signifikant forskjellig henholdsvis fire og 12 uker etter transplantasjon. Vi har tidligere undersøkt utfallet av denne nye knuteløse teknikken og sammenlignet den med den klassiske tilnærmingen når det gjelder tekniske aspekter ved prosedyren interoperative og postoperative komplikasjoner.Modifisert teknikk som er vist her var forbundet med en lavere forekomst av intragraft arterielle venøse trombotiske hendelser. Tiden for å utføre stenosen var betydelig mindre og en utmerket nyreisograft, langsiktig overlevelse ble oppnådd. Nyretransplantasjonen hos mus er en komplisert og banebrytende prosedyre.Dette er en ny kirurgisk teknikk for et kar anastomose og nyreimplantasjon forpliktet til å forbedre den totale suksessraten, noe som gjør det til et pålitelig verktøy for å studere autoimmun respons etter nyretransplantasjon.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

4D Multimodalitet Imaging av<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Infeksjoner i Mus

This protocol outlines the steps required to  longitudinally monitor a bioluminescent bacterial infection using composite 3D diffuse light imaging ...

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

Long Term Kronisk<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; Luftveisinfeksjon i Mus

A mouse model of chronic airway infection is a key asset in cystic fibrosis (CF) research, although there are a number of concerns regarding the model ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

Transplantasjon av Tail Skin Study Cell Responses Allogen CD4 T i Mus

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

In Vitro and In Vivo Assessment of T, B and Myeloid Cells Suppressive Activity and Humoral Responses from Transplant Recipients

In Vitro and In Vivo Assessment of T, B and Myeloid Cells Suppressive Activity and Humoral Responses from Transplant Recipients

In Vitro og i Vivo vurdering av T, B og myeloide celler undertrykkende aktivitet og humorale svar fra transplantasjon mottakere

The main concern in transplantation is to achieve specific tolerance through induction of regulatory cells. The understanding of tolerance mechanisms ...

Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

Induksjon av lammelse og visuelle systemet skade i mus ved T-celler spesifikke for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

Measuring Deformability and Red Cell Heterogeneity in Blood by Ektacytometry

Måle Deformability og Red Cell heterogenitet i blodet av Ektacytometry

Decreased red cell deformability is characteristic of several disorders. In some cases, the extent of defective deformability can predict severity of ...

Printed Glycan Array: A Sensitive Technique for the Analysis of the Repertoire of Circulating Anti-carbohydrate Antibodies in Small Animals

Utskrevne Glycan matrise: En følsom teknikk for analyse av repertoaret av sirkulerende anti-karbohydrater antistoffer i små dyr

The repertoire of circulating anti-carbohydrate antibodies of a given individual is often associated with its immunological status. Not only the ...

Renal Subcapsular Transplantation of 2'-Deoxyguanosine-Treated Murine Embryonic Thymus in Nude Mice

Renal Subcapsular transplantasjon av 2 '-Deoxyguanosine-behandlet murine embryonale thymus i Nude mus

The thymus is an important central immune organ, which plays an essential role in the development and differentiation of T cells. Thymus transplantation ...

An Immunological Model for Heterotopic Heart and Cardiac Muscle Cell Transplantation in Rats

En immunologisk modell for heterotopisk hjerte og hjerte muskel celle transplantasjon i rotter

Heterotopic heart transplantation in rats has been a commonly used model for diverse immunological studies for more than 50 years. Several modifications ...

Optimization of the Cuff Technique for Murine Heart Transplantation

Optimalisering av mansjettteknikken for Murine hjertetransplantasjon

Murine cardiac transplantation has been performed for more than 40 years. With advancements in microsurgery, certain new techniques have been used to ...