Name: a modified surgical technique for kidney transplantation in mice
Uploaded: 2022-07-22T13:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Modified Surgical Technique for Kidney Transplantation in Mice at JoVE.com

Vi tackar Dr. Tiantian Bai-teamet för hjälp med voice over, Miss Mian Pao för hennes hjälp med medicinsk illustration. Detta arbete stöddes delvis av den tyska forskningsstiftelsen (DFG) för att främja internationella samarbeten (HO2581/4-1 till AH) och National Science Foundation of China (NSFC; #81760291 till FJ).

Alla djurförsök utfördes enligt riktlinjerna från Europaparlamentets direktiv 2010/63/EU om skydd av djur som används för vetenskapliga ändamål (Djuretiskt kort: Niedersachsens ministerium för livsmedels- och läkemedelssäkerhet, #33.9-42502-04-11/0492). Utför procedurer med sterila kirurgiska instrument och förbrukningsvaror (autoklaverade) och försök att hålla operationsområdet så sterilt som möjligt.
OBS: C57BL /6J hanmöss fungerade som givare och mottagare (syngeneisk tr...

<ol>
	<li>Skoskiewicz, M., Chase, C., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kidney+transplants+between+mice+of+graded+immunogenetic+diversity.">Kidney transplants between mice of graded immunogenetic diversity.</a> Transplantation Proceedings. 5 (1), 721-725 (1973).</li><li>Jiang, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+assessment+of+renal+fibrosis+with+magnetization+transfer+MR+imaging:+Validation+and+evaluation+in+murine+renal+artery+stenosis.">Noninvasive assessment of renal fibrosis with magnetization transfer MR imaging: Validation and evaluation in murine renal artery stenosis.</a> Radiology. 283 (1), 77-86 (2017).</li><li>Tse, G. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+kidney+transplantation:+Models+of+allograft+rejection.">Mouse kidney transplantation: Models of allograft rejection.</a> Journal of Visualized Experiments. (92), e52163 (2014).</li><li>Okazaki, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=et+al.Costimulatory+blockade-mediated+lung+allograft+acceptance+is+abrogated+by+overexpression+of+Bcl-2+in+the+recipient.">et al.Costimulatory blockade-mediated lung allograft acceptance is abrogated by overexpression of Bcl-2 in the recipient.</a> Transplantation Proceedings. 41 (1), 385-387 (2009).</li><li>Chuck, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=et+al.Ultra-short+echo-time+magnetic+resonance+imaging+distinguishes+ischemia/reperfusion+injury+from+acute+rejection+in+a+mouse+lung+transplantation+model.">et al.Ultra-short echo-time magnetic resonance imaging distinguishes ischemia/reperfusion injury from acute rejection in a mouse lung transplantation model.</a> Transplant International. 29 (1), 108-118 (2016).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pattern+of+liver,+kidney,+heart,+and+intestine+allograft+rejection+in+different+mouse+strain+combinations.">Pattern of liver, kidney, heart, and intestine allograft rejection in different mouse strain combinations.</a> Transplantation. 62 (9), 1267-1272 (1996).</li><li>Wang, J., Hockenheimer, S., Bickerstaff, A. A., Hadley, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+renal+transplantation+procedure.">Murine renal transplantation procedure.</a> Journal of Visualized Experiments. (29), e1150 (2009).</li><li>Plenter, R., Jain, S., Ruller, C. M., Nydam, T. L., Jani, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+kidney+transplant+technique.">Murine kidney transplant technique.</a> Journal of Visualized Experiments. (104), e52848 (2015).</li><li>Plenter, R. J., Jain, S., Nydam, T. L., Jani, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revised+arterial+anastomosis+for+improving+murine+kidney+transplant+outcomes.">Revised arterial anastomosis for improving murine kidney transplant outcomes.</a> Journal of Investigative Surgery. 28 (4), 208-214 (2015).</li><li>Rong, S., Lewis, A. G., Kunter, U., Haller, H., Gueler, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+knotless+technique+for+kidney+transplantation+in+the+mouse.">A knotless technique for kidney transplantation in the mouse.</a> Journal of Transplantation. , 127215 (2012).</li><li>Kreimann, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemia+reperfusion+injury+triggers+CXCL13+release+and+B-cell+recruitment+after+allogenic+kidney+transplantation.">Ischemia reperfusion injury triggers CXCL13 release and B-cell recruitment after allogenic kidney transplantation.</a> Frontiers in Immunology. 11, 1204 (2020).</li><li>Schmidbauer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diffusion-Weighted+imaging+and+mapping+of+T1+and+T2+relaxation+time+for+evaluation+of+chronic+renal+allograft+rejection+in+a+translational+mouse+model.">Diffusion-Weighted imaging and mapping of T1 and T2 relaxation time for evaluation of chronic renal allograft rejection in a translational mouse model.</a> Journal of Clinical Medicine. 10 (19), 4318 (2021).</li><li>Wu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+technique+for+blood+circuit+reconstruction+in+mouse+heart+transplantation+model.">Novel technique for blood circuit reconstruction in mouse heart transplantation model.</a> Microsurgery. 26, 594-598 (2006).</li><li>Haas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+allograft+nephropathy+or+interstitial+fibrosis+and+tubular+atrophy:+what+is+in+a+name.">Chronic allograft nephropathy or interstitial fibrosis and tubular atrophy: what is in a name.</a> Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 23 (3), 245-250 (2014).</li><li>Dang, Z., MacKinnon, A., Marson, L. P., Sethi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tubular+atrophy+and+interstitial+fibrosis+after+renal+transplantation+is+dependent+on+galectin-3.">Tubular atrophy and interstitial fibrosis after renal transplantation is dependent on galectin-3.</a> Transplantation. 93 (5), 477-484 (2012).</li><li>Yin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+circuit+reconstruction+in+an+abdominal+mouse+heart+transplantation+model.">Blood circuit reconstruction in an abdominal mouse heart transplantation model.</a> Journal of Visualized Experiments. (172), e62007 (2021).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+techniques+for+kidney+transplantation+in+mice.">Improved techniques for kidney transplantation in mice.</a> Microsurgery. 16 (2), 103-109 (1995).</li><li>Mannon, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+rejection+of+mouse+kidney+allografts.">Chronic rejection of mouse kidney allografts.</a> Kidney International. 55 (5), 1935-1944 (1999).</li><li>Coffman, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+renal+function+in+mouse+kidney+allografts+lacking+MHC+class+I+antigens.">Improved renal function in mouse kidney allografts lacking MHC class I antigens.</a> Journal of Immunology. 151 (1), 425-435 (1993).</li><li>Martins, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Learning+curve,+surgical+results+and+operative+complications+for+kidney+transplantation+in+mice.">Learning curve, surgical results and operative complications for kidney transplantation in mice.</a> Microsurgery. 26 (8), 590-593 (2006).</li></ol>

Medan hudtransplantationsmodellen hos möss är enkel och lätt att utföra för att studera alloimmune avstötningshändelser, har de kirurgiska teknikerna för att undersöka mer specifikt de alloimmune-relaterade inflammatoriska förändringarna efter hjärta16 och njurtransplantation10 visat sig vara komplexa och mycket krävande. Ur transplantationsnefrologens synvinkel har upprättandet av en effektiv och långsiktig stabil mus njurtransplantationsmodell fortfarande e...

utvecklade musmodeller för njurtransplantation 1973 för första gången1, det har visat sig vara ett viktigt experimentellt verktyg för att studera mekanismerna för transplantation ischemisk skada och alloimmune avstötning samt för att utveckla nya behandlingar som syftar till att förlänga allograft överlevnad och eventuellt för att uppnå immunologisk tolerans. Den kirurgiska tekniken har emellertid visat sig vara komplex och mycket krävande, ibland med komplikationer som vaskulär anastomotisk striktur som leder till prerenal icke-immunologisk njurtransplantationssvikt2, postrenalt misslyckande orsakat av ischemi och efterföljande nekros hos den transplanterade urinledaren, strikturer av anastomosen hos den transplanterade urinledaren och / eller mottagarens urinblåsa som leder till en störning av urinutflödet. Allt detta är anledningar till att njurtransplantation hos möss inte har vidareutvecklats och därför inte används i stor utsträckning. Att etablera en effektiv och långsiktig stabil mus njurtransplantationsmodell utan kärl- och urinvägskomplikationer har fortfarande oersättlig betydelse för många studier inom transplantationsområdet med fokus på njurimmunmedierade men även infektionssjukdomar3. Dessutom, jämfört med andra organtransplantationer i murina modeller som lung-, hjärt- och tarmtransplantation 4,5, erbjuder musnjurtransplantationsmodellen en chans att studera långsiktig överlevnad även i inställningen av större histokompatibilitetsantigenskillnad 3,6. Det har också visat sig att i samma miljö av givar-mottagarstamkombinationer kännetecknas olika organtransplantationer som hjärta eller njure av olika dynamik och början av allograftavstötning3. Ur nefrologisk synvinkel är det dessutom en mer lämplig modell för att studera parenkymala medierade immunregleringsmekanismer i samband med akuta och kroniska avstötningshändelser än enkla hudtransplantationsexperiment.
På grundval av tidigare rapporter om den kirurgiska tekniken för njurtransplantation hos möss 3,7,8,9 visar vi här följande tillförlitliga förbättringar som framgångsrikt har tillämpats under de senaste 10 åren inom vår grupp 10,11,12: För det första bevaras urinartären säkert när njurartären resekteras en bloc tillsammans med respektive del av bukaortan. För det andra, en ny, enkel och snabb teknik för en knutlös vaskulär anastomos där den sista sömmen av anastomos inte är bunden med slutet av den övre slipsen som det traditionella tillvägagångssättet utan förblir fri. Denna teknik gör det möjligt att öka eller minska storleken på anastomosen efter njurreperfusion för att undvika kärlförträngning och intraabdominal blödning. För det tredje användes 21 G och 30 G sprutnålar som ett extra punkteringsstyrningsverktyg för att implantera donatorurledaren i mottagarens blåsvägg, vilket minskade skadorna på mottagarens urinblåsa och underlättade bildandet av strikturfri anastomos.
I denna rapport jämförde vi också den traditionella, allmänt använda tekniken med den modifierade som är etablerad i vårt laboratorium och fann ingen signifikant skillnad i graden av renal tubulär atrofi och njurtransplantation interstitiell vävnadsfibros. I tidigare studier jämförde vi dessutom resultaten av denna nya teknik med den konventionella metoden när det gäller lokal blödning, trombos, tid för att utföra kärlanastomos och överlevnad. Vi fann förbättringar som signifikanta minskningar av lokala tromboshändelser (1,1% mot 6,6%), en minskad tid för anastomosproceduren och en mycket reproducerbar njursyngeneisk transplantat långsiktig överlevnad (95% mot 84% med det klassiska tillvägagångssättet)10.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>30G-needles</td>
			<td>Braun</td>
			<td>456300</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>acepromazine</td>
			<td>CP Pharma</td>
			<td>Tranquisol P</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bepanthen eye ointment</td>
			<td>Haus-Apotheke</td>
			<td>PZN 01578675</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bonn Micro Forceps</td>
			<td>FST</td>
			<td>11083-07</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Box for insulation and oxygen supply device</td>
			<td>RUSKINN</td>
			<td>INVIV</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6J&#160; mice</td>
			<td>Charles River. Germany</td>
			<td>no catalog number</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprofen</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>Rimadyl 50 mg/ml</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CATHETER-FEP 26G</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>Surflo-W</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clip Applicator Forceps Style</td>
			<td>FST</td>
			<td>18057-14</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved forceps</td>
			<td>WPI</td>
			<td>14114-G</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cutasept skin disinfection</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BODL980365</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dehydrator</td>
			<td>DIAPATH</td>
			<td>Donatello</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>electrosurgical pen</td>
			<td>Bovie</td>
			<td>CHANGE-A-TIP</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding machine</td>
			<td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td>
			<td>JB-P5</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Sinopharm Group Chemical Reagent Co. LtD</td>
			<td>100092683</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frozen platform</td>
			<td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td>
			<td>JB-L5</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gauze pads, cotton swabs</td>
			<td>Lohmann-Rauscher</td>
			<td>13353</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass slide</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>G6004</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HE dye solution set</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>G1003</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating mat</td>
			<td>THERMO MAT PRO 30W</td>
			<td>HTP-30</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hemostatic sponge</td>
			<td>CuraSpon</td>
			<td>J1276A</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>heparine-solution</td>
			<td>Haus-Apotheke</td>
			<td>PZN 03029820</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ice box</td>
			<td>PETZ</td>
			<td>No Catalog Number available</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaging system</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Nikon DS-U3</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inhalation anesthesia device</td>
			<td>GROPPLER</td>
			<td>BKGM 0616</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isoflurane</td>
			<td>CP Pharma</td>
			<td>Isofluran CP 1 ml/ml</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ketamine</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>no catalog numer</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Masson dye solution set</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>G1006</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>metamizole</td>
			<td>WDT</td>
			<td>no catalog numer</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>15000-00,15000-10</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Serrefine ( Clamp ) Angled / 16 mm</td>
			<td>FST</td>
			<td>18055-06</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>LEICAMZ6</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope light</td>
			<td>SCHOTT</td>
			<td>KL2500LED</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral gum</td>
			<td>SCRC</td>
			<td>10004160</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oven</td>
			<td>Tianjin Laibo Rui Instrument Equipment Co., Ltd</td>
			<td>GFL-230</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pathology slicer</td>
			<td>Shanghai Leica Instrument Co., Ltd</td>
			<td>RM2016</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline solution (NaCl 0.9 %)</td>
			<td>Haus-Apotheke</td>
			<td>PZN 06178437</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>scissors</td>
			<td>Peha Instruments</td>
			<td>991083/4</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slides</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>small Petri dish</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>8,33,900</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>straight forceps</td>
			<td>WPI</td>
			<td>14113-G</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>surgical tape</td>
			<td>BSN</td>
			<td>4120</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture Tying Forceps - 10 cm</td>
			<td>FST</td>
			<td>18025-10</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures(10-0)</td>
			<td>Medtronic</td>
			<td>N2540</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures(4-0)</td>
			<td>ETHILON</td>
			<td>V4940H</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures(7-0)</td>
			<td>ETHILON</td>
			<td>1647H</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe (0,3 mL)</td>
			<td>BD</td>
			<td>324826</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe (1 mL)</td>
			<td>BD</td>
			<td>320801</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue spreader</td>
			<td>Zhejiang Kehua Instrument Co., Ltd</td>
			<td>KD-P</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Upright optical microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Nikon Eclipse E100</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>xylazine</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>Rompun</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Sinopharm Group Chemical Reagent Co. LtD</td>
			<td>10023418</td>
			<td>-</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a modified surgical technique for kidney transplantation in mice

Njurtransplantation hos möss är ett komplicerat och utmanande kirurgiskt ingrepp. Det finns väldigt få publikationer som visar de viktigaste stegen i denna operation. Därför introducerar denna artikel tekniken och påpekar de kirurgiska försiktighetsåtgärderna i samband med denna operation. Dessutom demonstreras viktiga modifieringar jämfört med det konventionella förfarandet. För det första skärs och bereds en lapp av bukaorta så att de proximala bifurkationerna i njurartären, inklusive urinartären, transekteras tillsammans med donatornjuren en bloc. Detta minskar risken för urinledarnekros och undviker utveckling av urinvägsocklusion. För det andra demonstreras en ny metod för vaskulär anastomos som gör det möjligt för operatören att flexibelt öka eller minska storleken på anastomosen efter att njurtransplantationsreperfusion redan har initierats. Detta undviker utveckling av kärlförträngningar och intraabdominal blödning. För det tredje visas en teknik som möjliggör anastomos hos den känsliga donator urinledaren och mottagarblåsan som inte orsakar ett trauma. Att anta detta protokoll kan förkorta operationstiden och minska skadorna på mottagarens urinblåsa, vilket avsevärt ökar operationsframgångsgraden för mottagarmössen.

Fyra veckor efter transplantationen visade både den modifierade tekniken och den konventionella tekniken måttliga tecken på renal tubulär atrofi14,15 jämfört med de infödda mottagarens kontralaterala njurar (figur 1). Graden av renal tubules atrofi visade ingen signifikant skillnad mellan de två olika teknikerna. Masson Goldners trikromfärgning14,15 av njurarna 12 ve...

Watch this Scientific Journal Video about A Modified Surgical Technique for Kidney Transplantation in Mice at JoVE.com

A Modified Surgical Technique for Kidney Transplantation in Mice

Detta protokoll presenterar en ny kirurgisk teknik för njurtransplantation hos möss med fokus på en modifierad arteriell anastomosstrategi. En vaskulär suturteknik inklusive en enkel och säkrare urinledar-urinblåsans anastomosmetod presenteras också. Dessa modifieringar förkortar operationstiden och förbättrar framgångsgraden för musnjurtransplantationsproceduren.

En modifierad kirurgisk teknik för njurtransplantation hos möss

Kidney transplantation in mice is a complicated and challenging surgery procedure. There are very few publications demonstrating the key steps of this ...

Njurtransplantation hos möss är avgörande för studier av mekanismer för akut och kronisk allograftavstötning. Här introducerar vi en ny kirurgisk teknik för kärlannastomos och ureteral implantation i buknjurtransplantationsmodellen hos möss. I traditionella njurtransplantationsmodeller för mössligeras den övre delen av kroppspulsådern ungefär till njurartärerna.Donatorns vänstra njurven transekteras vid vena cava och donatoraorta delas lika under njurartären för att senare anastomos till mottagarens bukaorta. I denna modifierade teknik för njurtransplantation hos mus transekteras också donatorns vänstra njurven vid vena cava, men donatoraorta skärs ovanför njurartärens avkomma och dess anastomos till mottagarens bukaorta. Medan donatoränden av aorta är ligerad, bevaras ureteralartären medvetet.Nu börjar vi demonstrationen av det kirurgiska ingreppet. För anestesi, placera musen i lådan för inandning av isofluran cirka 40 till 60 sekunder för att inducera medvetslöshet. När musen är sövd väger du musen.Enligt musvikten ges intraperitoneal injektion av ketamin, xylazin, acepromazin till den sövda musen. När anestesi har trätt i kraft, klipp bukpälsen. Fixa och desinficera sedan musen på operationsbordet.Skär huden med korsbuksnittet. Skär musklerna i bukväggen. Därefter täcker försiktigt bort inälvorna med en saltlösning imbibed gasbindning.Exponera vänster njure, aorta och sämre vena cava. Cauterize vänster ländryggsvener, inklusive deras underliggande grenar och andra små kärl inklusive vänster binjurekärl noggrant. Mobilisera aortaområdet mellan vänster och höger njurartärer ungefär två millimeter långa.Separera den infraröda underlägsna vena cava och aorta. Och passera böjda pincett under aortan för att placera en lös slips på 7,06 sutur runt detta kärl. Korsklämma området av aortan under den högra njurartären och den underlägsna vena cava med två fem millimeter mikrovaskulära klämmor.Transekt den vänstra njurvenen från vena cava. Spola aortan med en milliliter heparinlösning. Dra åt ligaturen och skär aortan under ligaturen samt under den proximala klämman.Förbered dig noggrant så att den känsliga ureterala artären är helt bevarad. frigör vänster njure och tillhörande kärl helt genom att försiktigt cauterisera alla kärl som omger vävnad. Ta bort njuren och förvara den i cellinjelösning vid fyra grader.De inledande operationsstegen liknar de som tidigare visats för donatormusen, inklusive anestesi och desinfektion. Öppna buken via mediansnitt och täck sedan bukorganen med en våt gasbind med saltlösning. Bevara försiktigt den infraröda aortan och se till att varje stor kärlgren är cauterized.Använd den elektriska cautery för att dissekera den vänstra urinledaren försiktigt i ett läge som är proximalt mot njurbäckenet. Ta sedan bort den vänstra njuren. Exponera den underlägsna vena cava och bukaorta och lossa dem från den omgivande fettvävnaden ungefär över fyra millimeter lång.Korsa sedan var och en med två mikrovaskulära klämmor ungefär och distalt av dem. Använd en mikronålhållare för att styra en 10/0 monofilament suturnål, som placeras genom aortaväggen från proximalt till distalt sätt. En elliptisk arteriotomi på ungefär en millimeter uppnås genom försiktig uppåtgående dragkraft av suturen, medan den skärs direkt under nålens nedre yta med fin, krökt sax.Utför givar-mottagaraortanastomos på ett end-to-side-sätt. Sy de proximala och distala ändarna av anastomosen. Sista sömmen med två separata 10,0 suturer.Efter bindning, lämna de två långa suturerna, inklusive nålen, på plats. Sy den vänstra sidan av anastomosens aortavägg kontinuerligt med två jämnt fördelade stygn i en distal-proximal riktning. Efter den sista sömmen, styr suturen genom en partiell tjocklek på kärlväggen ovanför den övre vistelsesuturbindningen och samtidigt utöva försiktig dragkraft till den korta änden av den nedre suturbindningen.Observera att i denna nya knutlösa teknik är den sista sömmen inte knuten till den korta änden av den övre slipsen. Vänd över den transplanterade njuren till sin normala position. Sy nu kontinuerligt den högra väggen i aortanastomosen på ett proximalt till distalt sätt med tre stygn på ett proximalt till distalt sätt.Observera att jämfört med den konventionella kirurgiska tekniken slås den sista suturen samman med den distala slipsen i närheten. Bind den inte till slutet av den nedre suturen, skär den för att lämna en fri längd på cirka två till tre millimeter istället. Skär den underlägsna vena cava längsgående med tillräcklig längd på cirka 1,5 millimeter.Placera detta snitt något under dess aorta motsvarighet. Utför venös anastomos med samma sutureringsförfarande som tidigare beskrivits med skillnaden att fyra till fem stygn behövs för varje sida av anastomosen. Den slutliga sömmen lämnas som en fri ände av liknande längd som liknar den aortalanastomos som beskrivs ovan.Och den nya knutlösa anastomostekniken, den sista sömmen är inte bunden utan lämnas fri. Detta förkortar operationstiden och det låter kirurgen öka eller minska storleken på anastomosen. Denna förbättring minskar svårigheten och komplikationerna efter operationen av vaskulär anastomos.Efter att ha slutfört båda anastomoserna, använd en torr vattpinne för att utöva försiktigt tryck mot det suturerade området i cirka 10 till 20 sekunder. Därefter kan båda klämmorna tas bort. Penetrera genom mottagarens urinblåsa med en rak nål med 10,0 sutur och sätt in den i en 21 G nållumen för vägledning.Styr nu 21 G-nålen för att sy ett hål på platsen för den tidigare nålapplikationen och dra ut nålen. Sy den trimmade urinledaren och perforera blåsan med denna 10,0 sutur igen på platsen för dess inträde. Dra in 10.0-glödtråden och urinledaren i urinblåsan genom det konstruerade hålet.Anastomos donatorns urinledare till mottagarens urinblåsa. Anslut här urinledarens yttre membran till blåsväggens yttre membran och utför intermittenta suturer med tre till fyra stygn. Dra ut dragsuturen.Placera tarmarna tillbaka i bukhålan. Utför tvåskikts suturer, först magmusklerna följt av huden för att stänga buksåret. Placera de transplanterade mössen i en syre- och temperaturkontrollerad kammare för återhämtning efter operationen.Ge adekvat postoperativ analgesi fyra dagar i rad efter operationen. Utför kontralateral nefrektomi av mottagarmusen fem dagar efter transplantationsanestesi. Höj och spela in musens tillstånd.Vi jämförde de konventionella och modifierade transplantationsteknikerna genom att bedöma histologiska förändringar av de transplanterade isograftnjurarna jämfört med de infödda mottagarens kontralaterala njurar. Både graden av trofé hos njurrören och renal interstitiell fibros visade sig inte vara signifikant olika fyra respektive 12 veckor efter transplantation. Vi har tidigare undersökt utfallet av denna nya knutlösa teknik och jämfört den med det klassiska tillvägagångssättet när det gäller tekniska aspekter av proceduren interoperativa och postoperativa komplikationer.Modifierad teknik som visas här var associerad med en lägre förekomst av intragraft arteriella venösa trombotiska händelser. Tiden för att utföra stenosen var betydligt mindre och en utmärkt njure isograft, långsiktig överlevnad uppnåddes. Njurtransplantationen hos möss är ett komplicerat och banbrytande förfarande.Detta är en ny kirurgisk teknik för en kärlannastomos och njurimplantation som är engagerad i att förbättra den totala framgångsgraden, vilket gör den till ett pålitligt verktyg för att studera det autoimmuna svaret efter njurtransplantation.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

4D Multimodalitet Imaging av<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Infektioner hos möss

This protocol outlines the steps required to  longitudinally monitor a bioluminescent bacterial infection using composite 3D diffuse light imaging ...

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

Långsiktig Kronisk<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; Airway infektion hos möss

A mouse model of chronic airway infection is a key asset in cystic fibrosis (CF) research, although there are a number of concerns regarding the model ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

Transplantation av Tail Hud att Studera Allogen CD4 T-cellsvar hos möss

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

In Vitro and In Vivo Assessment of T, B and Myeloid Cells Suppressive Activity and Humoral Responses from Transplant Recipients

In Vitro and In Vivo Assessment of T, B and Myeloid Cells Suppressive Activity and Humoral Responses from Transplant Recipients

In Vitro och In Vivo bedömning av T, B och myeloida celler suppressiv aktivitet och humorala svar från transplantation mottagare

The main concern in transplantation is to achieve specific tolerance through induction of regulatory cells. The understanding of tolerance mechanisms ...

Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

Induktion av förlamning och visuella systemet skada hos möss av T celler specifika för Neuromyelitis Optica Autoantigen akvaporin-4

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

Measuring Deformability and Red Cell Heterogeneity in Blood by Ektacytometry

Mäta Deformability och Red Cell heterogenitet i blod av Ektacytometry

Decreased red cell deformability is characteristic of several disorders. In some cases, the extent of defective deformability can predict severity of ...

Printed Glycan Array: A Sensitive Technique for the Analysis of the Repertoire of Circulating Anti-carbohydrate Antibodies in Small Animals

Tryckta Glycan Array: En känslig teknik för analys av repertoaren av cirkulerande anti kolhydrat antikroppar i små djur

The repertoire of circulating anti-carbohydrate antibodies of a given individual is often associated with its immunological status. Not only the ...

Renal Subcapsular Transplantation of 2'-Deoxyguanosine-Treated Murine Embryonic Thymus in Nude Mice

Renal subkapsulär transplantation av 2 '-Deoxyguanosinbehandlade murina embryonala bräss hos nakna möss

The thymus is an important central immune organ, which plays an essential role in the development and differentiation of T cells. Thymus transplantation ...

An Immunological Model for Heterotopic Heart and Cardiac Muscle Cell Transplantation in Rats

En immunologisk modell för heterotopic hjärta och hjärtmuskelcelltransplantation hos råttor

Heterotopic heart transplantation in rats has been a commonly used model for diverse immunological studies for more than 50 years. Several modifications ...

Optimization of the Cuff Technique for Murine Heart Transplantation

Optimering av manschettteknik för Murine Heart Transplantation

Murine cardiac transplantation has been performed for more than 40 years. With advancements in microsurgery, certain new techniques have been used to ...