Name: repetitive blood sampling from the subclavian vein of conscious rat
Uploaded: 2022-02-09T15:00:00
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Cette recherche a été financée par le Guangdong Provincial Key Laboratory of Drug Non-clinical Evaluation and Research (No.2018B030323024) et le Key Program « New Drug Creation » du Guangdong Key Research and Development Plan (No.2019B020202001), Guangzhou Fundamental and Application Foundation Research Project (No.202002030249 et No.202002030156).

Toutes les expériences sur les animaux décrites ont été approuvées par le Comité institutionnel de soin et d’utilisation des animaux (IACUC) de Guangdong Lewwin Pharmaceutical Research Institute Co., Ltd. Des rats Sprague Dawley (SD) mâles et femelles, ~ 6-11 semaines ont été utilisés pour les expériences. Les rats ont été élevés conformément aux directives relatives au soin et à l’utilisation des animaux de laboratoire13.
1. Préparation des ...

<ol>
	<li>Shravya, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+conference+on+harmonization+of+technical+requirements+for+registration+of+pharmaceuticals+for+human+use.+ICH+M2+EWG.">International conference on harmonization of technical requirements for registration of pharmaceuticals for human use. ICH M2 EWG.</a> Electronic common technical document. , (2014).</li><li>Tan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The China Food and Drug Administration (CFDA). , (2015).</li><li>McGuill, M. W., Andrew, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+effects+of+blood+loss:+Implications+for+sampling+volumes+and+techniques.">Biological effects of blood loss: Implications for sampling volumes and techniques.</a> ILAR Journal. 31 (4), 5-20 (1989).</li><li>Aguilar-Mariscal, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+pharmacokinetics+of+meloxicam+in+the+rat+using+a+high-performance+liquid+chromatography+method+in+micro-whole-blood+samples.">Oral pharmacokinetics of meloxicam in the rat using a high-performance liquid chromatography method in micro-whole-blood samples.</a> Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology. 29 (9), 587-592 (2007).</li><li>Korfmacher, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utility+of+capillary+microsampling+for+rat+pharmacokinetic+studies:+Comparison+of+tail-vein+bleed+to+jugular+vein+cannula+sampling.">Utility of capillary microsampling for rat pharmacokinetic studies: Comparison of tail-vein bleed to jugular vein cannula sampling.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 76, 7-14 (2015).</li><li>JoVE. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=JoVE+Science+Education+Database.+Blood+Withdrawal+I.">JoVE Science Education Database. Blood Withdrawal I.</a> JoVE. , (2021).</li><li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subclavian+vein+puncture+as+an+alternative+method+of+blood+sample+collection+in+rats.">Subclavian vein puncture as an alternative method of blood sample collection in rats.</a> Journal of Visualized Experiments. (141), e58499 (2018).</li><li>Zou, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repeated+blood+collection+from+tail+vein+of+non-anesthetized+rats+with+a+vacuum+blood+collection+system.">Repeated blood collection from tail vein of non-anesthetized rats with a vacuum blood collection system.</a> Journal of Visualized Experiments. (130), e55852 (2017).</li><li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals.">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> Journal of Pharmacology &amp; Pharmacotherapeutics. 1 (2), 87-93 (2010).</li><li>Itziar, F., Arantza, P., Nahia, D., Virginia, P., Juan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+biochemistry+parameters+in+C57BL/6J+mice+after+blood+collection+from+the+submandibular+vein+and+retroorbital+plexus.">Clinical biochemistry parameters in C57BL/6J mice after blood collection from the submandibular vein and retroorbital plexus.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 49 (2), 202-206 (2010).</li><li>Heimann, M., Roth, D. R., Ledieu, D., Pfister, R., Classen, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sublingual+and+submandibular+blood+collection+in+mice:+A+comparison+of+effects+on+body+weight,+food+consumption+and+tissue+damage.">Sublingual and submandibular blood collection in mice: A comparison of effects on body weight, food consumption and tissue damage.</a> Laboratory Animals. 44 (4), 352-358 (2010).</li><li>Wren-Dail, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+isoflurane+anesthesia+on+circadian+metabolism+and+physiology+in+rats.">Effect of isoflurane anesthesia on circadian metabolism and physiology in rats.</a> Comparative Medicine. 67 (2), 138-146 (2017).</li><li>National Institute of Health. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. 8th edition. , (2011).</li><li>Lee, G., Goosens, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sampling+blood+from+the+lateral+tail+vein+of+the+rat.">Sampling blood from the lateral tail vein of the rat.</a> Journal of Visualized Experiments. (99), e52766 (2015).</li><li>Diehl, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+good+practice+guide+to+the+administration+of+substances+and+removal+of+blood,+including+routes+and+volumes.">A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes.</a> Journal of Applied Toxicology. 21 (1), 15-23 (2001).</li><li>Casal, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+and+physiological+methods+of+evaluating+median+nerve+regeneration+in+the+rat.">Functional and physiological methods of evaluating median nerve regeneration in the rat.</a> Journal of Visualized Experiments. (158), e59767 (2020).</li></ol>

Il y a certains avantages à recueillir du sang dans les veines sous-clavières. (1) Comme le site de prélèvement sanguin est facilement dissocié et que le plexus veineux n’est pas régulier en raison des différentes postures des rats, la méthode décrite peut facilement localiser la position du plexus veineux tout en maintenant les postures stables et confortables des rats. (2) L’opération est facile et favorable au développement rapide des compétences des techniciens et moins de douleur pour les animaux. (3...

Selon les lignes directrices1 de la Conférence internationale sur l’harmonisation des exigences techniques pour l’enregistrement des produits pharmaceutiques à usage humain (ICH) et les lignes directrices2 de la National Medical Products Administration (NMPA), le nombre de points temporels de prélèvement sanguin des rats dans l’étude toxicocinétique (TK) doit répondre aux exigences de l’évaluation dynamique de l’exposition aux médicaments. Le volume sanguin total approximatif d’un rat est de 55 à 70 mL/kg de poids corporel3. Les points de temps de collecte sont généralement intensifs dans les 30 minutes suivant l’administration et diminuent par la suite, et plus de dix échantillons de sang doivent être prélevés dans les 48 heures dans les tests de routine4. Par exemple, des échantillons de sang sont prélevés à 12 moments (0 min, 5 min, 10 min, 15 min, 30 min, 45 min, 1 h, 2 h, 3 h, 4 h, 8 h et 12 h) dans l’étude des savoirs traditionnels sur les drogues administrées par voie orale. Les chercheurs doivent prélever à plusieurs reprises de 200 à 250 μL de sang chez le rat afin d’obtenir du plasma de haute qualité pour le test TK5.
Les sites de collecte de sang chez les rats comprennent les vaisseaux sanguins de la queue, la veine du plexus rétro-orbitaire, la veine sous-maxillaire, le cœur, l’aorte abdominale6, etc. Parmi eux, la collecte de sang dans la veine caudale des rats est une méthode fréquemment utilisée, qui nécessite des opérateurs expérimentés et qualifiés 7,8. Recueillir du sang dans la veine rétro-orbitaire du plexus est moins compliqué; Cependant, cette méthode n’est pas recommandée car elle peut endommager la vue des rats9, et le sang du cœur et de l’aorte abdominale ne convient que pour le prélèvement sanguin final10. Une autre méthode de prélèvement de sang dans la veine sous-maxillaire chez un rat conscient s’est avérée entraîner plus de complications et a révélé une qualité d’échantillon de sang insuffisante11. Par conséquent, les chercheurs peuvent anesthésier l’animal pour réduire la difficulté d’échantillonnage. Pourtant, l’anesthésie augmente également le coût de l’expérience, et plus sérieusement, elle affectera l’état métabolique des rats12. Le présent protocole utilise une méthode rapide et simple de prélèvement de sang dans les veines sous-clavières de rats sans anesthésie, permettant un positionnement précis et une collecte de sang alternée bilatérale pour obtenir des échantillons de haute qualité en temps opportun et de manière répétée.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.0 mL syringe (with needle, 26 G, 0.45 mm x 15.5 mm)</td>
			<td>Jiangxi Hongda Medical Equipment Group LTD.(Nanchang, Jiangxi Province, China)</td>
			<td>20210629</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75% alcohol</td>
			<td>Shandong Lierkang Medical Technology Co., Ltd. (Dezhou, Shandong Province, China)</td>
			<td>210717</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal source</td>
			<td>Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd.</td>
			<td>grade: SPF</td>
			<td>laboratory animal production license number: SCXK (Hunan) 2019-0004, laboratory animal quality certificate number: 4307272101972847</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swab</td>
			<td>Caoxian Hualu Sanitary Materials Co., Ltd.(Heze, Shandong Province, China)</td>
			<td>20210301</td>
			<td>Need to be sterilized.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric shaver</td>
			<td>Shenzhen Codos Electric Appliance Co. , Ltd.(Shenzhen, Guangdong Province, China)</td>
			<td>CP-6800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EP tube, 1.5 mL</td>
			<td>Genetimes ExCell Technology,Inc.(Shanghai, China)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin sodium (2 mL:12500 IU)</td>
			<td>Tianjin biochem pharmaceutical Co.,Ltd(Tianjing, China)</td>
			<td>51200702</td>
			<td>Prepare 1250 IU/mL heparin sodium solution. Add heparin sodium solution into the EP tube in advance and make it evenly distributed on the wall of the EP tube, and dry it at 60&#176;C for use.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labtip (volume range 5-200 &#956;L)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Oy</td>
			<td>94300120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low speed refrigerated centrifuge</td>
			<td>Hunan Xiangyi Laboratory Instrument Development Co., Ltd.(Changsha, Hunan Province, China)</td>
			<td>L535R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette gun (20-200 &#956;L)</td>
			<td>BRAND</td>
			<td>12N92305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rats (SD)</td>
			<td>Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd. (Changsha, Hunan Province, China)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sharp tool container</td>
			<td>Taizhou Huangyan Yikang Plastic Factory (Taizhou, Zhejiang Province, China)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye drop</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>This reagent is not a commodity and the manufacturer requires it to be tested. In the principle of confidentiality, the manufacturer and model cannot be provided.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

repetitive blood sampling from the subclavian vein of conscious rat

Les rats sont largement utilisés dans les études pharmacocinétiques (PK) et toxicocinétiques (TK) qui doivent recueillir une certaine quantité de sang à des moments précis pour détecter l’exposition aux médicaments. La méthode d’échantillonnage du sang de rat détermine la qualité du plasma et affecte davantage la précision des résultats des tests. La méthode de prélèvement sanguin dans les veines sous-clavières décrite dans ce protocole prélève des échantillons de sang à plusieurs reprises dans l’état conscient des animaux pour répondre aux besoins des tests pharmacocinétique et TK. Les compétences de manipulation de contention et la procédure appropriée d’incision de l’aiguille assurent le taux de réussite de la collecte de sang. Il est facile à utiliser tout en assurant la qualité du plasma et en même temps en veillant au bien-être animal. Cependant, cette méthode nécessite une opération habile, et une mauvaise méthode peut causer la faiblesse, la douleur, la boiterie et même la mortalité des animaux. La méthode actuelle a été utilisée dans l’installation d’essai pour une étude de toxicité orale de 4 semaines chez des rats Sprague Dawley (SD) avec TK. La quantité maximale de sang prélevée dans les 24 heures ne dépassait pas 20 % du sang total de l’animal. Le poids corporel des animaux était supérieur à 200 g pour les mâles et les femelles. Les données ont montré que le poids corporel des animaux augmentait régulièrement chaque semaine et que l’observation clinique était normale après un prélèvement répétitif d’échantillons.

Les bons échantillons de plasma de la veine sous-clavière étaient jaune pâle translucides (figure 4, tube gauche). Une mauvaise collecte ou manipulation de sang a entraîné une hémolyse (figure 4, le tube droit).
Les données de l’installation d’essai ont montré que dans une étude de toxicité orale de 4 semaines d’un collyre chez des rats SD atteints de TK, des échantillons de sang ont été prélevés deux fois à 9 m...

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Repetitive Blood Sampling from the Subclavian Vein of Conscious Rat

Le présent protocole décrit une méthode simple et efficace pour prélever du sang dans la veine sous-clavière chez le rat. Il permet un prélèvement rapide, rapide et facilement identifiable sans anesthésie et permet d’obtenir du sang de haute qualité grâce à des prélèvements répétitifs d’échantillons.

Prélèvement sanguin répétitif dans la veine sous-clavière d’un rat conscient

Rats are widely used in pharmacokinetics (PK) and toxicokinetic (TK) studies that need to collect a certain amount of blood at specific time points to ...

Dans les études pharmacocinétiques et toxicocinétiques, nous devons prélever une certaine quantité de sang à des moments précis chez les rats pour détecter l’exposition aux médicaments. Cette étude décrit une méthode simple et efficace pour prélever du sang de la veine sous-clavière chez le rat dans ce protocole. Cette technique permet un prélèvement répété, opportun et facilement identifiable sans anesthésie, et permet d’obtenir du sang de haute qualité grâce à des prélèvements répétitifs d’échantillons.Vous devez connaître l’anatomie de la veine sous-clavière, la contention du rat capable et le point de l’aiguille. La méthode est risquée et nécessite un professionnel qualifié. Pour commencer, trouvez le point le plus bas de la fosse triangulaire sous-clavière entre le cou et le membre antérieur chez un rat.Déplacez-vous d’environ deux à trois millimètres vers la tête et atteignez le point d’aiguille au site de prélèvement sanguin. Enlevez les poils à l’aide d’un rasoir électrique. Pour garder la tête, le cou et la poitrine du rat debout, saisissez la peau à l’arrière du cou d’une main et exposez le site d’injection.Redressez le membre antérieur sur le côté du site d’injection pour maintenir son niveau. Gardez la seringue parallèle à la tête du rat avec l’autre main et inclinez la seringue vers l’extérieur de cinq à 10 degrés, de sorte que l’extrémité soit inclinée vers la direction ventrale. Insérez complètement l’aiguille dans la cavité antérieure.Retirez la seringue pour maintenir une pression négative avec le tube. Déplacez lentement l’aiguille de profonde à peu profonde et remontez le même chemin. Lorsque du sang est entré dans l’aiguille de la seringue, fixez la position de l’aiguille.Selon le poids et la santé des rats, surveiller la quantité maximale de sang à prélever conformément aux normes établies par le comité de soin et d’utilisation des animaux de l’établissement. En l’absence d’autres exigences, ne prélevez pas plus de 20 % du volume sanguin total de l’animal dans les 24 heures. Lorsque suffisamment d’échantillons de sang sont prélevés, retirez immédiatement la seringue et préparez-vous au traitement sanguin.Pressurisez le site d’injection du rat pendant une à deux minutes pour arrêter le saignement. Puisque le site de prélèvement se trouve dans la partie inférieure du cou, pincez la peau de la veine sous-clavière pour arrêter le saignement en appuyant dessus. Retirez l’aiguille de la seringue et jetez-la dans le récipient à outils tranchant.Transférez lentement le sang de la seringue vers un tube de 1,5 millilitre. Pressez la seringue contre le mur pour éviter la formation de bulles. Fermez le couvercle du tube de microcentrifugeuse et effleurez-le doucement.Mélangez soigneusement le sang avec l’anticoagulant en le retournant au moins cinq fois. Dans les 120 minutes suivant le prélèvement du plasma, centrifuger l’échantillon de sang total à 2 000 RCF pendant 10 à 15 minutes à température ambiante. Utilisez un pistolet à pipette pour transférer le plasma supérieur dans un tube microcentrifuge frais.Ne touchez pas la tête de la pipette avec le sang total inférieur. Éliminer ou recentrifuger le plasma contaminé par les globules rouges. Les échantillons de plasma prélevés avec précision dans la veine sous-clavière étaient jaune pâle translucides.Une mauvaise collecte de sang ou une manipulation inadéquate a entraîné une hémolyse. Lors du premier échantillonnage, le poids corporel de l’animal mâle était compris entre 268 et 297 grammes, et environ 214 à 239 grammes pour les femelles. Lors du dernier échantillonnage, le poids corporel de l’animal mâle était compris entre 376 et 462 grammes, et environ 254 à 300 grammes pour les femelles.Il y avait un intervalle de 28 jours entre le prélèvement sanguin toxicocinétique. Le poids corporel de l’animal augmentait régulièrement chaque semaine et l’observation clinique était normale. La méthode précise d’insertion de l’aiguille et l’angle peuvent assurer une collecte de sang fluide et éviter les risques.Cette opération nécessite une pratique répétée.

Research

JoVE Journal

Medicine

Hyperinsulinemic-Euglycemic Clamp in the Conscious Rat

Hyperinsulinémique euglycémique-Clamp chez le rat conscient

Type 2 diabetes (T2D) is rapidly rising in prevalence. Characterized by either inadequate insulin production or the inability to utilize insulin produced, ...

Recherche

Médecine

Femoral Arterial and Venous Catheterization for Blood Sampling, Drug Administration and Conscious Blood Pressure and Heart Rate Measurements

Fémorale cathétérisme artériel et veineux pour le prélèvement sanguin, Drug Administration et la pression artérielle Conscient et Mesures du rythme cardiaque

In multiple fields of study, access to the circulatory system in laboratory studies is necessary. Pharmacological studies in rats using chronically ...

Catheterization of the Carotid Artery and Jugular Vein to Perform Hemodynamic Measures, Infusions and Blood Sampling in a Conscious Rat Model

Cathétérisme de l&#39;artère carotide et Veine jugulaire faire pour effectuer des mesures hémodynamiques, Infusions et prélèvement sanguin dans un modèle de rat Conscients

The success of a small animal model to study critical illness is, in part, dependent on the ability of the model to simulate the human condition. ...

Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System

Répété de collecte de sang de la veine caudale des Rats Non anesthésiés avec un système de collecte de sang de vide

Blood can be collected from rats in a number of sampling locations. For instance, the tail vein is a superior location for blood sampling. However, the ...

Subclavian Vein Puncture As an Alternative Method of Blood Sample Collection in Rats

Ponction de la veine sous-clavière comme méthode Alternative de prélèvement d’échantillons de sang chez les Rats

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful ...

Blood Collection Through Subclavian Vein Puncture in Mice

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The mouse is the foremost mammalian model for studying human disease and human health. However, blood sample collection from mice is challenging in ...

Microsurgical Skills of Establishing Permanent Jugular Vein Cannulation in Rats for Serial Blood Sampling of Orally Administered Drug

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Comparative Study of Blood Collection Techniques in Rats

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