Name: repetitive blood sampling from the subclavian vein of conscious rat
Uploaded: 2022-02-09T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Repetitive Blood Sampling from the Subclavian Vein of Conscious Rat at JoVE.com

Denne forskningen ble finansiert av Guangdong Provincial Key Laboratory of Drug Non-clinical Evaluation and Research (No.2018B030323024) og Key Program "New Drug Creation" av Guangdong Key Research and Development Plan (No.2019B02020202001), Guangzhou Fundamental and Application Foundation Research Project (No.202002030249 og No.202002030156).

Alle beskrevne dyreforsøk ble godkjent av Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) i Guangdong Lewwin Pharmaceutical Research Institute Co., Ltd. Mannlige og kvinnelige Sprague Dawley (SD) rotter, ~ 6-11 uker ble brukt til forsøkene. Rottene ble oppdrettet etter retningslinjene for stell og bruk av forsøksdyr13.
1. Dyr forberedelse
MERK: Alle SD-rottene som ble brukt i denne studien var våkne og ble ikke bedøvet...

<ol>
	<li>Shravya, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+conference+on+harmonization+of+technical+requirements+for+registration+of+pharmaceuticals+for+human+use.+ICH+M2+EWG.">International conference on harmonization of technical requirements for registration of pharmaceuticals for human use. ICH M2 EWG.</a> Electronic common technical document. , (2014).</li><li>Tan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The China Food and Drug Administration (CFDA). , (2015).</li><li>McGuill, M. W., Andrew, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+effects+of+blood+loss:+Implications+for+sampling+volumes+and+techniques.">Biological effects of blood loss: Implications for sampling volumes and techniques.</a> ILAR Journal. 31 (4), 5-20 (1989).</li><li>Aguilar-Mariscal, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+pharmacokinetics+of+meloxicam+in+the+rat+using+a+high-performance+liquid+chromatography+method+in+micro-whole-blood+samples.">Oral pharmacokinetics of meloxicam in the rat using a high-performance liquid chromatography method in micro-whole-blood samples.</a> Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology. 29 (9), 587-592 (2007).</li><li>Korfmacher, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utility+of+capillary+microsampling+for+rat+pharmacokinetic+studies:+Comparison+of+tail-vein+bleed+to+jugular+vein+cannula+sampling.">Utility of capillary microsampling for rat pharmacokinetic studies: Comparison of tail-vein bleed to jugular vein cannula sampling.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 76, 7-14 (2015).</li><li>JoVE. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=JoVE+Science+Education+Database.+Blood+Withdrawal+I.">JoVE Science Education Database. Blood Withdrawal I.</a> JoVE. , (2021).</li><li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subclavian+vein+puncture+as+an+alternative+method+of+blood+sample+collection+in+rats.">Subclavian vein puncture as an alternative method of blood sample collection in rats.</a> Journal of Visualized Experiments. (141), e58499 (2018).</li><li>Zou, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repeated+blood+collection+from+tail+vein+of+non-anesthetized+rats+with+a+vacuum+blood+collection+system.">Repeated blood collection from tail vein of non-anesthetized rats with a vacuum blood collection system.</a> Journal of Visualized Experiments. (130), e55852 (2017).</li><li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals.">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> Journal of Pharmacology &amp; Pharmacotherapeutics. 1 (2), 87-93 (2010).</li><li>Itziar, F., Arantza, P., Nahia, D., Virginia, P., Juan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+biochemistry+parameters+in+C57BL/6J+mice+after+blood+collection+from+the+submandibular+vein+and+retroorbital+plexus.">Clinical biochemistry parameters in C57BL/6J mice after blood collection from the submandibular vein and retroorbital plexus.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 49 (2), 202-206 (2010).</li><li>Heimann, M., Roth, D. R., Ledieu, D., Pfister, R., Classen, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sublingual+and+submandibular+blood+collection+in+mice:+A+comparison+of+effects+on+body+weight,+food+consumption+and+tissue+damage.">Sublingual and submandibular blood collection in mice: A comparison of effects on body weight, food consumption and tissue damage.</a> Laboratory Animals. 44 (4), 352-358 (2010).</li><li>Wren-Dail, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+isoflurane+anesthesia+on+circadian+metabolism+and+physiology+in+rats.">Effect of isoflurane anesthesia on circadian metabolism and physiology in rats.</a> Comparative Medicine. 67 (2), 138-146 (2017).</li><li>National Institute of Health. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. 8th edition. , (2011).</li><li>Lee, G., Goosens, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sampling+blood+from+the+lateral+tail+vein+of+the+rat.">Sampling blood from the lateral tail vein of the rat.</a> Journal of Visualized Experiments. (99), e52766 (2015).</li><li>Diehl, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+good+practice+guide+to+the+administration+of+substances+and+removal+of+blood,+including+routes+and+volumes.">A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes.</a> Journal of Applied Toxicology. 21 (1), 15-23 (2001).</li><li>Casal, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+and+physiological+methods+of+evaluating+median+nerve+regeneration+in+the+rat.">Functional and physiological methods of evaluating median nerve regeneration in the rat.</a> Journal of Visualized Experiments. (158), e59767 (2020).</li></ol>

Det er visse fordeler med å samle blod fra de subklaviske venene. (1) Siden stedet for blodsamlingen lett dissosieres, og den venøse plexus ikke er vanlig på grunn av rotternes forskjellige stillinger, kan den beskrevne metoden lett lokalisere posisjonen til venøs plexus samtidig som rotternes stabile og komfortable stillinger opprettholdes. (2) Operasjonen er enkel og gunstig for den raske utviklingen av teknikernes ferdigheter og mindre smerte for dyr. (3) En driftsmodus for å gjøre dyret komfortabelt reduserer r...

I henhold til International Conference on Harmonization of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use (ICH) guidelines1 og National Medical Products Administration (NMPA) guidelines2, må antall blodinnsamlingstidspunkter for rotter i den toksikokinetiske (TK) studien oppfylle kravene i den dynamiske legemiddeleksponeringsvurderingen. Det omtrentlige totale blodvolumet til en rotte er 55-70 ml / kg kroppsvekt3. Innsamlingstidspunktene er generelt intensive innen 30 minutter etter dosering og reduseres etter det, og mer enn ti blodprøver må samles inn innen 48 timer i rutinemessig testing4. For eksempel samles blodprøver ved 12-tidspunkter (0 min, 5 min, 10 min, 15 min, 30 min, 45 min, 1 t, 2 t, 3 timer, 4 timer, 8 timer og 12 timer) i TK-studie av oralt administrerte legemidler. Forskere må gjentatte ganger samle 200-250 μL blod hos rotter for å oppnå høyverdig plasma for TK-testingen5.
Blodinnsamlingsstedene hos rotter inkluderer haleblodkar, retro-orbital plexusvene, submandibulær vene, hjerte, abdominal aorta6 og så videre. Blant dem er blodinnsamling fra rottens kaudale vene en ofte brukt metode, som krever erfarne og dyktige operatører 7,8. Å samle blod fra retro-orbital plexusvenen er mindre komplisert; Denne metoden anbefales imidlertid ikke, da den kan skade rottenes syn9, og blod fra hjertet og abdominalaorta er kun egnet for endelig blodprøvetaking10. En annen metode for å samle blod fra submandibulær vene i en bevisst rotte har vist seg å resultere i flere komplikasjoner og avslørt utilstrekkelig blodprøvekvalitet11. Derfor kan forskere bedøve dyret for å redusere vanskeligheten med prøvetaking. Likevel øker anestesien også kostnaden for forsøket, og mer alvorlig, det vil påvirke metabolsk tilstand av rotter12. Den nåværende protokollen bruker en rask og grei metode for å samle blod i de subklaviske venene hos rotter uten anestesi, noe som muliggjør nøyaktig posisjonering og bilateral vekslende blodinnsamling for å oppnå prøver av høy kvalitet på en rettidig og gjentatt måte.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.0 mL syringe (with needle, 26 G, 0.45 mm x 15.5 mm)</td>
			<td>Jiangxi Hongda Medical Equipment Group LTD.(Nanchang, Jiangxi Province, China)</td>
			<td>20210629</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75% alcohol</td>
			<td>Shandong Lierkang Medical Technology Co., Ltd. (Dezhou, Shandong Province, China)</td>
			<td>210717</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal source</td>
			<td>Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd.</td>
			<td>grade: SPF</td>
			<td>laboratory animal production license number: SCXK (Hunan) 2019-0004, laboratory animal quality certificate number: 4307272101972847</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swab</td>
			<td>Caoxian Hualu Sanitary Materials Co., Ltd.(Heze, Shandong Province, China)</td>
			<td>20210301</td>
			<td>Need to be sterilized.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric shaver</td>
			<td>Shenzhen Codos Electric Appliance Co. , Ltd.(Shenzhen, Guangdong Province, China)</td>
			<td>CP-6800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EP tube, 1.5 mL</td>
			<td>Genetimes ExCell Technology,Inc.(Shanghai, China)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin sodium (2 mL:12500 IU)</td>
			<td>Tianjin biochem pharmaceutical Co.,Ltd(Tianjing, China)</td>
			<td>51200702</td>
			<td>Prepare 1250 IU/mL heparin sodium solution. Add heparin sodium solution into the EP tube in advance and make it evenly distributed on the wall of the EP tube, and dry it at 60&#176;C for use.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labtip (volume range 5-200 &#956;L)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Oy</td>
			<td>94300120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low speed refrigerated centrifuge</td>
			<td>Hunan Xiangyi Laboratory Instrument Development Co., Ltd.(Changsha, Hunan Province, China)</td>
			<td>L535R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette gun (20-200 &#956;L)</td>
			<td>BRAND</td>
			<td>12N92305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rats (SD)</td>
			<td>Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd. (Changsha, Hunan Province, China)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sharp tool container</td>
			<td>Taizhou Huangyan Yikang Plastic Factory (Taizhou, Zhejiang Province, China)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye drop</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>This reagent is not a commodity and the manufacturer requires it to be tested. In the principle of confidentiality, the manufacturer and model cannot be provided.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

repetitive blood sampling from the subclavian vein of conscious rat

Rotter er mye brukt i farmakokinetikk (PK) og toksikokinetiske (TK) studier som trenger å samle en viss mengde blod på bestemte tidspunkter for å oppdage legemiddeleksponering. Prøvetakingsmetoden for rotteblod bestemmer plasmakvaliteten og påvirker presisjonen av testresultatene ytterligere. Den subklaviske veneblodinnsamlingsmetoden beskrevet i denne protokollen samler blodprøver gjentatte ganger i bevisst tilstand hos dyr for å møte behovene til PK- og TK-tester. Ferdighetene til fastholdelseshåndtering og passende prosedyre for nålsnitt sikrer suksessraten for blodinnsamling. Det er enkelt å betjene samtidig som det sikrer kvaliteten på plasma og samtidig ivaretar dyrevelferden. Imidlertid krever denne metoden dyktig drift, og en feil kan forårsake svakhet hos dyr, smerte, lameness og til og med dødelighet. Den nåværende metoden har blitt brukt i testanlegget for en 4-ukers oral toksisitetsstudie i Sprague Dawley (SD) rotter med TK. Maksimal mengde blod samlet innen 24 timer oversteg ikke 20% av dyrets totale blod. Dyrenes kroppsvekt var mer enn 200 g for menn og kvinner. Dataene viste at dyrenes kroppsvekt økte jevnt hver uke, og den kliniske observasjonen var normal etter repeterende prøvetaking.

Gode plasmaprøver fra vena subclavia var gjennomskinnelig svakt gule (figur 4, venstre tube). Feil blodansamling eller manipulasjon resulterte i hemolyse (figur 4, høyre rør).
Dataene fra testanlegget viste at i en 4-ukers oral toksisitetsstudie av øyedråper hos SD-rotter med TK, ble blodprøver samlet to ganger ved 9-tidspunkter (0 timer, 0,167 timer, 0,5 timer, 1 time, 2 timer, 4 timer, 8 timer, 12 timer og 24 timer) mellom den...

Watch this Scientific Journal Video about Repetitive Blood Sampling from the Subclavian Vein of Conscious Rat at JoVE.com

Repetitive Blood Sampling from the Subclavian Vein of Conscious Rat

Denne protokollen beskriver en enkel og effektiv metode for å samle blod fra vena subclavia hos rotter. Det muliggjør rask, rettidig og lett identifiserbar prøvetaking uten anestesi og oppnår blod av høy kvalitet gjennom repeterende prøveinnsamling.

Repeterende blodprøvetaking fra den subklaviske venen hos bevisst rotte

Rats are widely used in pharmacokinetics (PK) and toxicokinetic (TK) studies that need to collect a certain amount of blood at specific time points to ...

I farmakokinetikk- og toksikokinetiske studier må vi samle en viss mengde blod på bestemte tidspunkter hos rotter for å oppdage legemiddeleksponering. Denne studien beskriver en enkel og effektiv metode for å samle blod fra vena subclavia hos rotter i denne protokollen. Denne teknikken muliggjør gjentatt, rettidig og lett identifiserbar prøvetaking uten anestesi, og oppnår blod av høy kvalitet gjennom repeterende prøveinnsamling.Du bør kjenne anatomien til den subklaviske venen, kapabel rottestøtte og nålepunktet. Metoden er risikabel, og den krever en kvalifisert fagperson. For å begynne, finn det laveste punktet på den subklaviske trekantede fossa mellom nakken og forbenet i en rotte.Beveg deg omtrent to til tre millimeter mot hodet og nå nålepunktet på blodinnsamlingsstedet. Fjern håret med en barbermaskin. For å holde rottens hode, nakke og bryst oppreist, ta tak i huden på baksiden av nakken med en hånd og blottlegg injeksjonsstedet.Rett forbenet på siden av injeksjonsstedet for å opprettholde nivået. Hold sprøyten parallelt med rottehodet med den andre hånden og vipp sprøyten utover fem til 10 grader, slik at spissen vippes mot ventralretningen. Stikk nålen helt inn i fremre hulrom.Trekk sprøyten tilbake for å opprettholde undertrykket med slangen. Beveg nålen sakte fra dyp til grunn og opp igjen i samme bane. Når blod har kommet inn i sprøytenålen, fest nålens posisjon.Avhengig av rottenes vekt og helse, må du overvåke den maksimale blodmengden som skal trekkes i samsvar med standardene fastsatt av institusjonens dyrepleie- og brukskomité. I fravær av andre krav må du ikke fjerne mer enn 20% av dyrets totale blodvolum innen 24 timer. Når tilstrekkelig blodprøve er samlet, trekk straks sprøyten ut og forbered deg på blodbehandling.Trykk på rottens injeksjonssted i ett til to minutter for å stoppe blødningen. Siden oppsamlingsstedet er i den nedre delen av nakken, klem huden på den subklaviske venen for å stoppe blødningen ved å trykke på den. Fjern kanylen fra sprøyten og kast den i beholderen for skarpe verktøy.Overfør blodet sakte fra sprøyten til et 1,5 milliliter rør. Trykk sprøyten mot veggen for å unngå bobledannelser. Lukk lokket på mikrosentrifugerøret og knips det forsiktig.Bland blodet med antikoagulanten grundig ved å snu det opp ned minst fem ganger. Innen 120 minutter etter oppsamling av plasmaet, sentrifuger hele blodprøven ved 2.000 RCF i 10 til 15 minutter ved romtemperatur. Bruk en pipettepistol til å overføre det øvre plasmaet til et nytt mikrosentrifugerør.Ikke berør pipettehodet med det nedre helblodet. Kast eller sentrifuge plasmaet forurenset med de røde blodcellene. Plasmaprøver nøyaktig innsamlet fra vena subclavia var gjennomskinnelige, svakt gule.Feil blodinnsamling, eller manipulasjon resulterte i hemolyse. Under den første prøvetakingen var kroppsvekten til hanndyret mellom 268 og 297 gram, og rundt 214 til 239 gram for hunnene. Under den siste prøvetakingen var kroppsvekten til hanndyret mellom 376 og 462 gram, og rundt 254 til 300 gram for hunnene.Det var et gap på 28 dager mellom den toksikokinetiske blodsamlingen. Dyrets kroppsvekt økte jevnt hver uke, og den kliniske observasjonen var normal. Den nøyaktige nålinnsettingsmetoden og vinkelen kan sikre jevn blodoppsamling og unngå risiko.Denne operasjonen krever gjentatt praksis.

Research

JoVE Journal

Medicine

Hyperinsulinemic-Euglycemic Clamp in the Conscious Rat

Type 2 diabetes (T2D) is rapidly rising in prevalence. Characterized by either inadequate insulin production or the inability to utilize insulin produced, ...

Femoral Arterial and Venous Catheterization for Blood Sampling, Drug Administration and Conscious Blood Pressure and Heart Rate Measurements

Femoral arterielle og venøse Kateterisering for blodprøvetaking, Drug Administration og bevisst blodtrykk og hjertefrekvens målinger

In multiple fields of study, access to the circulatory system in laboratory studies is necessary. Pharmacological studies in rats using chronically ...

Catheterization of the Carotid Artery and Jugular Vein to Perform Hemodynamic Measures, Infusions and Blood Sampling in a Conscious Rat Model

Kateterisering av halspulsåren og halsvenen å utføre Hemodynamiske Tiltak, infusjoner og blodprøvetaking i en bevisst Rat Modell

The success of a small animal model to study critical illness is, in part, dependent on the ability of the model to simulate the human condition. ...

Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System

Gjentatt blod samling fra halen fotsporene til ikke-Anesthetized rotter med vakuum blod samling System

Blood can be collected from rats in a number of sampling locations. For instance, the tail vein is a superior location for blood sampling. However, the ...

Subclavian Vein Puncture As an Alternative Method of Blood Sample Collection in Rats

Vena subclavia punktering som en alternativ for eksempel blodgivning i rotter

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful ...

Blood Collection Through Subclavian Vein Puncture in Mice

Blood Collection gjennom arteria vene punktering i mus

The mouse is the foremost mammalian model for studying human disease and human health. However, blood sample collection from mice is challenging in ...

Microsurgical Skills of Establishing Permanent Jugular Vein Cannulation in Rats for Serial Blood Sampling of Orally Administered Drug

Mikrokirurgiske ferdigheter i å etablere permanent jugularvenekannasjon hos rotter for seriell blodprøvetaking av oralt administrert legemiddel

Blood sampling in small laboratory animals is necessary for pharmaceutical lead optimization but can cause great harm and stress to experimental animals, ...

Long-Term Continuous Measurement of Renal Blood Flow in Conscious Rats

Langsiktig kontinuerlig måling av nyreblodstrøm hos bevisste rotter

The kidneys play a crucial role in maintaining the homeostasis of body fluids. The regulation of renal blood flow (RBF) is essential to the vital ...

Dynamic Continuous Blood Extraction from Rat Heart via Noninvasive Microdialysis Technique

Dynamic Continuous Blood Extraction from Rat Heart via Noninvasive Microdialysis Technique

Dynamisk kontinuerlig blodekstraksjon fra rottehjerte via ikke-invasiv mikrodialyseteknikk

Dynamic analysis of blood components is of great importance in understanding cardiovascular diseases and their related diseases, such as myocardial ...

Comparative Study of Blood Collection Techniques in Rats

Modified Tail Vein and Penile Vein Puncture for Blood Sampling in the Rat Model

Context Dependent Blood Collection Methods in Rats (Video) | JoVE

Modifisert punktering i halevene og penisvene for blodprøvetaking i rottemodellen

Blood samples are required in most experimental animal designs to assess various hematological parameters. This paper presents two procedures for blood ...