Name: repetitive blood sampling from the subclavian vein of conscious rat
Uploaded: 2022-02-09T15:00:00
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Esta investigación fue financiada por el Laboratorio Provincial Clave de Evaluación e Investigación No Clínica de Medicamentos de Guangdong (No.2018B030323024) y el Programa Clave "Creación de Nuevos Medicamentos" del Plan de Investigación y Desarrollo Clave de Guangdong (No.2019B020202001), Proyecto de Investigación de la Fundación Fundamental y de Aplicación de Guangzhou (No.202002030249 y No.202002030156).

Todos los experimentos con animales descritos fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales (IACUC) de Guangdong Lewwin Pharmaceutical Research Institute Co., Ltd. Se utilizaron ratas Sprague Dawley (SD) machos y hembras, ~ 6-11 semanas para los experimentos. Las ratas fueron criadas siguiendo las directrices para el cuidado y uso de animales de laboratorio13.
1. Preparación de animales
NOTA: Todas...

<ol>
	<li>Shravya, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+conference+on+harmonization+of+technical+requirements+for+registration+of+pharmaceuticals+for+human+use.+ICH+M2+EWG.">International conference on harmonization of technical requirements for registration of pharmaceuticals for human use. ICH M2 EWG.</a> Electronic common technical document. , (2014).</li><li>Tan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The China Food and Drug Administration (CFDA). , (2015).</li><li>McGuill, M. W., Andrew, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+effects+of+blood+loss:+Implications+for+sampling+volumes+and+techniques.">Biological effects of blood loss: Implications for sampling volumes and techniques.</a> ILAR Journal. 31 (4), 5-20 (1989).</li><li>Aguilar-Mariscal, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+pharmacokinetics+of+meloxicam+in+the+rat+using+a+high-performance+liquid+chromatography+method+in+micro-whole-blood+samples.">Oral pharmacokinetics of meloxicam in the rat using a high-performance liquid chromatography method in micro-whole-blood samples.</a> Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology. 29 (9), 587-592 (2007).</li><li>Korfmacher, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utility+of+capillary+microsampling+for+rat+pharmacokinetic+studies:+Comparison+of+tail-vein+bleed+to+jugular+vein+cannula+sampling.">Utility of capillary microsampling for rat pharmacokinetic studies: Comparison of tail-vein bleed to jugular vein cannula sampling.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 76, 7-14 (2015).</li><li>JoVE. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=JoVE+Science+Education+Database.+Blood+Withdrawal+I.">JoVE Science Education Database. Blood Withdrawal I.</a> JoVE. , (2021).</li><li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subclavian+vein+puncture+as+an+alternative+method+of+blood+sample+collection+in+rats.">Subclavian vein puncture as an alternative method of blood sample collection in rats.</a> Journal of Visualized Experiments. (141), e58499 (2018).</li><li>Zou, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repeated+blood+collection+from+tail+vein+of+non-anesthetized+rats+with+a+vacuum+blood+collection+system.">Repeated blood collection from tail vein of non-anesthetized rats with a vacuum blood collection system.</a> Journal of Visualized Experiments. (130), e55852 (2017).</li><li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals.">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> Journal of Pharmacology &amp; Pharmacotherapeutics. 1 (2), 87-93 (2010).</li><li>Itziar, F., Arantza, P., Nahia, D., Virginia, P., Juan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+biochemistry+parameters+in+C57BL/6J+mice+after+blood+collection+from+the+submandibular+vein+and+retroorbital+plexus.">Clinical biochemistry parameters in C57BL/6J mice after blood collection from the submandibular vein and retroorbital plexus.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 49 (2), 202-206 (2010).</li><li>Heimann, M., Roth, D. R., Ledieu, D., Pfister, R., Classen, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sublingual+and+submandibular+blood+collection+in+mice:+A+comparison+of+effects+on+body+weight,+food+consumption+and+tissue+damage.">Sublingual and submandibular blood collection in mice: A comparison of effects on body weight, food consumption and tissue damage.</a> Laboratory Animals. 44 (4), 352-358 (2010).</li><li>Wren-Dail, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+isoflurane+anesthesia+on+circadian+metabolism+and+physiology+in+rats.">Effect of isoflurane anesthesia on circadian metabolism and physiology in rats.</a> Comparative Medicine. 67 (2), 138-146 (2017).</li><li>National Institute of Health. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. 8th edition. , (2011).</li><li>Lee, G., Goosens, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sampling+blood+from+the+lateral+tail+vein+of+the+rat.">Sampling blood from the lateral tail vein of the rat.</a> Journal of Visualized Experiments. (99), e52766 (2015).</li><li>Diehl, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+good+practice+guide+to+the+administration+of+substances+and+removal+of+blood,+including+routes+and+volumes.">A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes.</a> Journal of Applied Toxicology. 21 (1), 15-23 (2001).</li><li>Casal, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+and+physiological+methods+of+evaluating+median+nerve+regeneration+in+the+rat.">Functional and physiological methods of evaluating median nerve regeneration in the rat.</a> Journal of Visualized Experiments. (158), e59767 (2020).</li></ol>

Hay ciertos beneficios de recolectar sangre de las venas subclavias. (1) Como el sitio de la recolección de sangre se disocia fácilmente, y el plexo venoso no es regular debido a las diferentes posturas de las ratas, el método descrito puede localizar fácilmente la posición del plexo venoso mientras mantiene las posturas estables y cómodas de las ratas. (2) La operación es fácil y favorable para el rápido desarrollo de las habilidades de los técnicos y menos dolor para los animales. (3) Un modo de funcionamient...

De acuerdo con las directrices 1 de la Conferencia Internacional sobre la Armonización de los Requisitos Técnicos para el Registro de Productos Farmacéuticos de Uso Humano (ICH) ylas directrices 2 de la Administración Nacional de Productos Médicos (NMPA), el número de puntos de tiempo de extracción de sangre de ratas en el estudio toxicocinético (CC.TT.) debe cumplir los requisitos de la evaluación dinámica de la exposición al fármaco. El volumen sanguíneo total aproximado de una rata es de 55-70 mL/kg de peso corporal3. Los puntos de tiempo de recolección son generalmente intensivos dentro de los 30 minutos después de la dosificación y disminuyen después de eso, y se deben recolectar más de diez muestras de sangre dentro de las 48 h en las pruebas de rutina4. Por ejemplo, las muestras de sangre se recogen en 12 puntos de tiempo (0 min, 5 min, 10 min, 15 min, 30 min, 45 min, 1 h, 2 h, 3 h, 4 h, 8 h y 12 h) en el estudio de conocimientos tradicionales de fármacos administrados por vía oral. Los investigadores deben recolectar repetidamente 200-250 μL de sangre en ratas para obtener plasma de alta calidad para la prueba de conocimientos tradicionales5.
Los sitios de recolección de sangre en ratas incluyen vasos sanguíneos de la cola, vena del plexo retroorbital, vena submandibular, corazón, aorta abdominal6, etc. Entre ellos, la recolección de sangre de la vena caudal de ratas es un método de uso frecuente, que requiere operadores experimentados y capacitados 7,8. Recolectar sangre de la vena del plexo retroorbitario es menos complicado; Sin embargo, este método no se recomienda ya que puede dañar la vista de las ratas9, y la sangre del corazón y la aorta abdominal sólo es apropiada para el muestreo final de sangre10. Otro método de recolección de sangre de la vena submandibular en una rata consciente ha demostrado resultar en más complicaciones y reveló una calidad insuficiente de la muestra de sangre11. Por lo tanto, los investigadores pueden anestesiar al animal para reducir la dificultad del muestreo. Aún así, la anestesia también aumenta el costo del experimento y, lo que es más grave, afectará el estado metabólico de las ratas12. El presente protocolo utiliza un método rápido y sencillo de recolección de sangre en las venas subclavias de ratas sin anestesia, lo que permite un posicionamiento preciso y una recolección de sangre alterna bilateral para obtener muestras de alta calidad de manera oportuna y repetida.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.0 mL syringe (with needle, 26 G, 0.45 mm x 15.5 mm)</td>
			<td>Jiangxi Hongda Medical Equipment Group LTD.(Nanchang, Jiangxi Province, China)</td>
			<td>20210629</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75% alcohol</td>
			<td>Shandong Lierkang Medical Technology Co., Ltd. (Dezhou, Shandong Province, China)</td>
			<td>210717</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal source</td>
			<td>Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd.</td>
			<td>grade: SPF</td>
			<td>laboratory animal production license number: SCXK (Hunan) 2019-0004, laboratory animal quality certificate number: 4307272101972847</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swab</td>
			<td>Caoxian Hualu Sanitary Materials Co., Ltd.(Heze, Shandong Province, China)</td>
			<td>20210301</td>
			<td>Need to be sterilized.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric shaver</td>
			<td>Shenzhen Codos Electric Appliance Co. , Ltd.(Shenzhen, Guangdong Province, China)</td>
			<td>CP-6800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EP tube, 1.5 mL</td>
			<td>Genetimes ExCell Technology,Inc.(Shanghai, China)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin sodium (2 mL:12500 IU)</td>
			<td>Tianjin biochem pharmaceutical Co.,Ltd(Tianjing, China)</td>
			<td>51200702</td>
			<td>Prepare 1250 IU/mL heparin sodium solution. Add heparin sodium solution into the EP tube in advance and make it evenly distributed on the wall of the EP tube, and dry it at 60&#176;C for use.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labtip (volume range 5-200 &#956;L)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Oy</td>
			<td>94300120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low speed refrigerated centrifuge</td>
			<td>Hunan Xiangyi Laboratory Instrument Development Co., Ltd.(Changsha, Hunan Province, China)</td>
			<td>L535R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette gun (20-200 &#956;L)</td>
			<td>BRAND</td>
			<td>12N92305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rats (SD)</td>
			<td>Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd. (Changsha, Hunan Province, China)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sharp tool container</td>
			<td>Taizhou Huangyan Yikang Plastic Factory (Taizhou, Zhejiang Province, China)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye drop</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>This reagent is not a commodity and the manufacturer requires it to be tested. In the principle of confidentiality, the manufacturer and model cannot be provided.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

repetitive blood sampling from the subclavian vein of conscious rat

Las ratas se utilizan ampliamente en estudios farmacocinéticos (PK) y toxicocinéticos (TK) que necesitan recolectar una cierta cantidad de sangre en puntos de tiempo específicos para detectar la exposición al medicamento. El método de muestreo de sangre de rata determina la calidad del plasma y afecta aún más la precisión de los resultados de la prueba. El método de recolección de sangre de la vena subclavia descrito en este protocolo recoge muestras de sangre repetidamente en el estado consciente de los animales para satisfacer las necesidades de las pruebas farmacocinéticas y tradicionales. Las habilidades de manejo de la restricción y el procedimiento apropiado de incisión con aguja aseguran la tasa de éxito de la recolección de sangre. Es fácil de operar al tiempo que garantiza la calidad del plasma y, al mismo tiempo, atiende al bienestar animal. Sin embargo, este método requiere una operación experta, y una inadecuada puede causar debilidad animal, dolor, cojera e incluso mortalidad. El método actual se ha utilizado en el centro de pruebas para un estudio de toxicidad oral de 4 semanas en ratas Sprague Dawley (SD) con CC.TT. La cantidad máxima de sangre recolectada dentro de las 24 h no excedió el 20% de la sangre total del animal. El peso corporal de los animales era de más de 200 g para machos y hembras. Los datos mostraron que el peso corporal de los animales aumentó constantemente cada semana, y la observación clínica fue normal después de la recolección repetitiva de muestras.

Las buenas muestras de plasma de la vena subclavia fueron de color amarillo pálido translúcido (Figura 4, el tubo izquierdo). La recolección o manipulación inadecuada de sangre resultó en hemólisis (Figura 4, el tubo derecho).
Los datos de la instalación de prueba mostraron que en un estudio de toxicidad oral de 4 semanas de un colirio en ratas SD con TK, se recolectaron muestras de sangre dos veces en 9 puntos de tiempo (0 h, ...

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Repetitive Blood Sampling from the Subclavian Vein of Conscious Rat

El presente protocolo describe un método simple y eficiente para recolectar sangre de la vena subclavia en ratas. Permite un muestreo rápido, oportuno y fácilmente identificable sin anestesia y obtiene sangre de alta calidad a través de la recolección repetitiva de muestras.

Muestreo repetitivo de sangre de la vena subclavia de rata consciente

Rats are widely used in pharmacokinetics (PK) and toxicokinetic (TK) studies that need to collect a certain amount of blood at specific time points to ...

En los estudios farmacocinéticos y toxicocinéticos, necesitamos recolectar una cierta cantidad de sangre en puntos de tiempo específicos en ratas para detectar la exposición al medicamento. Este estudio describe un método simple y eficiente para recolectar sangre de la vena subclavia en ratas en este protocolo. Esta técnica permite un muestreo repetido, oportuno y fácilmente identificable sin anestesia, y obtiene sangre de alta calidad a través de la recolección repetitiva de muestras.Debe conocer la anatomía de la vena subclavia, la restricción capaz de la rata y la punta de la aguja. El método es arriesgado y requiere un profesional calificado. Para comenzar, encuentre el punto más bajo de la fosa triangular subclavia entre el cuello y la extremidad anterior en una rata.Muévase aproximadamente de dos a tres milímetros hacia la cabeza y alcance el punto de la aguja en el sitio de recolección de sangre. Retire el vello con una afeitadora eléctrica. Para mantener la cabeza, el cuello y el pecho de la rata erguidos, agarre la piel de la parte posterior del cuello con una mano y exponga el sitio de inyección.Enderezar la extremidad anterior en el lado del sitio de inyección para mantener su nivel. Mantenga la jeringa paralela a la cabeza de la rata con la otra mano e incline la jeringa hacia afuera de cinco a 10 grados, de modo que la punta esté inclinada hacia la dirección ventral. Inserte la aguja completamente en la cavidad anterior.Retraiga la jeringa para mantener la presión negativa con el tubo. Mueva lentamente la aguja de profunda a poco profunda y retroceda por el mismo camino. Cuando la sangre haya entrado en la aguja de la jeringa, fije la posición de la aguja.Dependiendo del peso y la salud de las ratas, controlar la cantidad máxima de sangre que se extraerá de acuerdo con las normas establecidas por el comité de cuidado y uso de animales de la institución. En ausencia de otros requisitos, no elimine más del 20% del volumen total de sangre del animal dentro de las 24 horas. Cuando se recoja suficiente muestra de sangre, retire inmediatamente la jeringa y prepárese para el tratamiento de sangre.Presurice el sitio de inyección de la rata durante uno o dos minutos para detener el sangrado. Dado que el sitio de recolección está en la parte inferior del cuello, pellizque la piel de la vena subclavia para detener el sangrado presionándola. Retire la aguja de la jeringa y deséchela en el recipiente afilado para herramientas.Transfiera lentamente la sangre de la jeringa a un tubo de 1.5 mililitros. Presione la jeringa contra la pared para evitar la formación de burbujas. Cierre la tapa del tubo de microcentrífuga y muévalo suavemente.Mezcle bien la sangre con el anticoagulante dándole la vuelta al menos cinco veces. Dentro de los 120 minutos posteriores a la recolección del plasma, centrifugar la muestra de sangre entera a 2, 000 RCF durante 10 a 15 minutos a temperatura ambiente. Utilice una pistola de pipeta para transferir el plasma superior a un tubo de microcentrífuga nuevo.No toque la cabeza de la pipeta con la parte inferior de la sangre entera. Deseche o vuelva a centrifugar el plasma contaminado con los glóbulos rojos. Las muestras de plasma recolectadas con precisión de la vena subclavia eran de color amarillo pálido translúcido.La recolección inadecuada de sangre o la manipulación resultaron en hemólisis. Durante el primer muestreo, el peso corporal del animal macho fue de entre 268 y 297 gramos, y alrededor de 214 a 239 gramos para las hembras. Durante el último muestreo, el peso corporal del animal macho fue de entre 376 y 462 gramos, y alrededor de 254 a 300 gramos para las hembras.Hubo un intervalo de 28 días entre la recolección de sangre toxicocinética. El peso corporal del animal aumentó constantemente cada semana, y la observación clínica fue normal. El método preciso de inserción de la aguja y el ángulo pueden garantizar una recolección de sangre sin problemas y evitar riesgos.Esta operación requiere práctica repetida.

Research

JoVE Journal

Medicine

Hyperinsulinemic-Euglycemic Clamp in the Conscious Rat

Hiperinsulinémico euglucémico pinza en la rata consciente

Type 2 diabetes (T2D) is rapidly rising in prevalence. Characterized by either inadequate insulin production or the inability to utilize insulin produced, ...

Investigación

Medicina

Femoral Arterial and Venous Catheterization for Blood Sampling, Drug Administration and Conscious Blood Pressure and Heart Rate Measurements

El cateterismo femoral arterial y venosa para muestras de sangre, la Administración de Drogas y la presión arterial consciente y mediciones del ritmo cardíaco

In multiple fields of study, access to the circulatory system in laboratory studies is necessary. Pharmacological studies in rats using chronically ...

Catheterization of the Carotid Artery and Jugular Vein to Perform Hemodynamic Measures, Infusions and Blood Sampling in a Conscious Rat Model

La cateterización de la arteria carótida y la vena yugular para realizar mediciones hemodinámicas, Infusiones y muestras de sangre en un modelo de rata Consciente

The success of a small animal model to study critical illness is, in part, dependent on the ability of the model to simulate the human condition. ...

Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System

Repetidos de muestras de sangre de vena de la cola de las ratas no anestesiados con un sistema de colección de sangre vacío

Blood can be collected from rats in a number of sampling locations. For instance, the tail vein is a superior location for blood sampling. However, the ...

Subclavian Vein Puncture As an Alternative Method of Blood Sample Collection in Rats

Punción de la vena subclavia como método alternativo de recogida de muestras de sangre en las ratas

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful ...

Blood Collection Through Subclavian Vein Puncture in Mice

Recolección de sangre a través de punción venosa Subclaviana en ratones

The mouse is the foremost mammalian model for studying human disease and human health. However, blood sample collection from mice is challenging in ...

Microsurgical Skills of Establishing Permanent Jugular Vein Cannulation in Rats for Serial Blood Sampling of Orally Administered Drug

Habilidades microquirúrgicas para establecer la canulación permanente de la vena yugular en ratas para el muestreo de sangre en serie del medicamento administrado por vía oral

Blood sampling in small laboratory animals is necessary for pharmaceutical lead optimization but can cause great harm and stress to experimental animals, ...

Long-Term Continuous Measurement of Renal Blood Flow in Conscious Rats

Medición continua a largo plazo del flujo sanguíneo renal en ratas conscientes

The kidneys play a crucial role in maintaining the homeostasis of body fluids. The regulation of renal blood flow (RBF) is essential to the vital ...

Dynamic Continuous Blood Extraction from Rat Heart via Noninvasive Microdialysis Technique

Dynamic Continuous Blood Extraction from Rat Heart via Noninvasive Microdialysis Technique

Extracción dinámica continua de sangre del corazón de rata mediante una técnica de microdiálisis no invasiva

Dynamic analysis of blood components is of great importance in understanding cardiovascular diseases and their related diseases, such as myocardial ...

Comparative Study of Blood Collection Techniques in Rats

Modified Tail Vein and Penile Vein Puncture for Blood Sampling in the Rat Model

Context Dependent Blood Collection Methods in Rats (Video) | JoVE

Punción modificada de la vena de la cola y la vena del pene para el muestreo de sangre en el modelo de rata

Blood samples are required in most experimental animal designs to assess various hematological parameters. This paper presents two procedures for blood ...