Name: using a cyclic ion mobility spectrometer for tandem ion mobility experiments
Uploaded: 2022-01-20T15:00:00
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S.O. dankt der französischen National Research Agency für die Finanzierung seines Ph.D. (Grant ANR-18-CE29-0006).

HINWEIS: Eine Übersicht über das Protokoll finden Sie in Abbildung 1. Die Parameter, die für die im vorliegenden Protokoll beschriebenen Experimente verwendet werden, finden Sie in der Ergänzungstabelle S1 und der Ergänzungstabelle S2. 
1. Vorbereitung der Probenlösung
HINWEIS: Das Protokoll wird anhand eines Arabinoxylanpentasaccharids (23-α-L-Arabinofuranosyl-xylotetraose oder<su...

Das zyklische IMS der SELECT-SERIE ist ein leistungsstarkes Werkzeug, mit dem eine definierte Ionenpopulation – einer gegebenen m/z- und Ionenmobilität – ausgewählt werden kann, ohne dass eine chromatographische Trennung im Vorfeld erforderlich ist. Das Instrument bietet die Möglichkeit, eine zweidimensionale Fragmentierungskarte dieser Ionenpopulation zu erzeugen, aus der sowohl MS/MS- als auch IMS/IMS-Spektren extrahiert werden können. Der Benutzer muss jedoch mehrere kritische Punkte beachten, die wä...

Die vollständige chemische Charakterisierung von Biomolekülen ist der Schlüssel zum Verständnis ihrer zugrunde liegenden biologischen und funktionellen Eigenschaften. Zu diesem Zweck haben sich in den letzten Jahren "Omics"-Wissenschaften entwickelt, die auf die großflächige Charakterisierung chemischer Strukturen in biologischen Konzentrationen abzielen. In der Proteomik und Metabolomik ist MS zu einem Kerninstrument geworden, um die strukturelle Heterogenität in biologischen Medien zu entschlüsseln - insbesondere dank ihrer Empfindlichkeit und Fähigkeit, strukturelle Informationen durch Tandem-MS (MS/MS) bereitzustellen. In MS / MS-Strategien wird ein Ion entsprechend seiner Masse ausgewählt, dann fragmentiert und schließlich werden die Massen seiner Fragmente erfasst, um einen Fingerabdruck des Moleküls zu erstellen. MS/MS-Spektren können insbesondere verwendet werden, um Spektraldatenbanken1,2 abzugleichen oder die übergeordneten Strukturen vorläufig zu rekonstruieren3,4. Unter der Annahme, dass ähnliche Spektren zu ähnlichen Verbindungen gehören, können MS/MS-Daten auch verwendet werden, um molekulare Netzwerke (MNs) aufzubauen, die verwandte Spezies durch einen Ähnlichkeitswert verbinden5,6.
Aufgrund der inhärenten Eigenschaft von MS, das Masse-zu-Ladungs-Verhältnis (m/z) von Ionen zu erkennen, ist die Technik jedoch blind für eine Reihe von strukturellen Merkmalen, die in den Bereich der (Stereo-)Isomerie fallen. Zum Beispiel bestehen Kohlenhydrate aus mehreren Monosaccharid-Untereinheiten, von denen viele Stereoisomere oder sogar Epimere sind (z. B. Glc vs. Gal oder Glc vs. Man). Diese Untereinheiten sind durch glykosidische Bindungen verbunden, die sich durch die Position der Verknüpfung (Regioisomerie) und die sterische Konfiguration des anomeren Kohlenstoffs (Anomere) unterscheiden können. Diese Eigenschaften erschweren es für eigenständige MS, zwischen Kohlenhydratisomeren zu unterscheiden7, und nur die Regioisomerie kann mit hochenergetischen Aktivierungsmethoden behandelt werden8,9,10. Obwohl die Derivatisierung eine Option ist, um die Äquivalenz stereoisomerer Gruppen zu stören11, erfordert sie eine umfangreiche Probenvorbereitung. Eine weitere, einfachere Option besteht darin, MS mit einer analytischen Dimension zu koppeln, die empfindlich auf Isomerie reagiert, wie z. B. IMS.
Da dieses Protokoll für Benutzer gedacht ist, die bereits mit den grundlegenden Konzepten von IMS vertraut sind, und weil detaillierte Überprüfungen an anderer Stelle verfügbar sind12,13, wird hier nur ein kurzer Überblick über die Prinzipien von IMS gegeben. IMS ist ein Gasphasen-Trennverfahren, das auf der Wechselwirkung von Ionen mit einem Puffergas und einem elektrischen Feld beruht und letztendlich Ionen gemäß ihren Gasphasenkonformationen trennt. Verschiedene Prinzipien von IMS, die an MS gekoppelt sind, finden sich auf kommerziellen Instrumenten: Einige arbeiten bei abwechselnd hohen und niedrigen elektrischen Feldern (feldasymmetrisches IMS, FAIMS), während die meisten innerhalb der niedrigen Feldgrenze arbeiten - insbesondere Driftröhren-IMS (DTIMS, linear abnehmendes elektrisches Feld), Wanderwellen-IMS (TWIMS, symmetrische Potentialwellen) und gefangenes IMS (TIMS, hoher Durchfluss von Puffergas-Einfangionen gegen elektrische Felder)13 . Die Low-Field-Verfahren ermöglichen den Zugang zu einem sogenannten CCS, einer Eigenschaft des Ion-Gas-Paares, die die Oberfläche (in Å2 oder nm2) des Ions darstellt, das während der Trennung mit dem Puffergas interagiert. CCS ist theoretisch instrumentenunabhängig und somit nützlich, um Daten zu generieren, die zwischen verschiedenen Labors reproduziert werden können14. Ionenmobilitätstrennungen können durch verschiedene Parameter und insbesondere durch Schwankungen des Gasdrucks und der Gastemperatur in der Mobilitätszelle beeinflusst werden. Die CCS-Kalibrierung ist eine Möglichkeit, hier Abhilfe zu schaffen, da sowohl das Kalibrant als auch die interessierende Spezies in ähnlicher Weise betroffen sein werden13. Es ist jedoch zwingend erforderlich, das Gerät in einem temperaturgeführten Raum zu installieren und über ein zuverlässiges Gasdruckregelsystem zu verfügen.
Eine interessante Weiterentwicklung von IMS ist IMS/IMS, das erstmals 2006 von Clemmers Gruppe als Analogon zu MS/MS15,16 eingeführt wurde. In IMS/IMS wird ein Ion von Interesse selektiv aufgrund seiner Ionenmobilität isoliert; es wird dann aktiviert (bis zur möglichen Fragmentierung), und eine neue IMS-Analyse des aktivierten Ions oder der aktivierten Fragmente wird durchgeführt. Im ersten Instrumententwurf wurden zwei IMS-Zellen in Reihe geschaltet, getrennt durch einen Ionentrichter, in dem die Aktivierung stand. Obwohl seitdem eine Reihe von IMS/IMS-Setups vorgeschlagen wurden (für eine Überprüfung siehe Eldrid und Thalassinos17), wurde das erste kommerzielle Massenspektrometer mit IMS/IMS-Fähigkeit erst 201918 verfügbar. Dieses Instrument verbesserte das ursprüngliche Konzept erheblich, indem es mit einem anderen technologischen Durchbruch kombiniert wurde: einem zyklischen Design der IMS-Zelle.
Die zyklische IMS-Zelle erlaubt es theoretisch, die Driftweglänge und damit das Auflösungsvermögen des Instruments19 nahezu unendlich zu erhöhen. Dies wurde durch eine spezielle Instrumentengeometrie erreicht, bei der die zyklische TWIMS-Zelle orthogonal zur optischen Hauptachse der Ionen platziert wird. Ein Multifunktions-Array-Bereich am Eingang der IMS-Zelle ermöglicht die Steuerung der Richtung des Ionenpfads: (i) Senden von Ionen seitwärts für die IMS-Trennung, (ii) vorwärts für die MS-Detektion oder (iii) rückwärts von der IMS-Zelle, die in einer Prearray-Zelle gespeichert werden soll. Von dieser Prearray-Speicherzelle aus können die Ionen aktiviert und die Fragmente in die IMS-Zelle zur Messung der Ionenmobilität reinjiziert werden, ein Ansatz, der erfolgreich zur Charakterisierung von Stereoisomeren verwendet wurde20. Letztendlich enthalten die gesammelten Daten Ionenmobilität und m/z-Informationen für den Vorläufer und seine Fragmente.
In einer kürzlich erschienenen Publikation, die dieses zyklische Design für Glykananalysen verwendete (Ollivier et al.21), zeigten wir, dass das Mobilitätsprofil der in solchen IMS / IMS-Daten enthaltenen Fragmente als Fingerabdruck eines Biomoleküls fungiert, das in einer molekularen Netzwerkstrategie verwendet werden kann. Das daraus resultierende Netzwerk, IM-MN genannt, führte zur strukturell relevanten Organisation von Glykomik-Datensätzen, während das ausschließlich aus MS/MS-Daten (MS-MN) aufgebaute Netzwerk wenig Informationen preisgab. Um diese Veröffentlichung zu ergänzen und Cyclic IMS-Benutzern bei der Implementierung dieses Workflows zu helfen, enthält dieses Protokoll eine vollständige Beschreibung des Protokolls, das zum Sammeln der Daten verwendet wird. Dieses Protokoll konzentriert sich nur auf die Generierung der IMS/IMS-Daten, die Benutzer dann zum Aufbau von IM-MN-Netzwerken (siehe 21) oder für eine andere Anwendung ihrer Wahl verwenden können. Der Aufbau von IM-MN wird hierin nicht berücksichtigt, da Protokolle für die molekulare Vernetzung bereits verfügbar sind22. Die entscheidenden Punkte, die befolgt werden müssen, um wertvolle und reproduzierbare IMS/IMS-Akquisitionen zu generieren, werden hervorgehoben. Am Beispiel eines der von Ollivier et al. untersuchten Oligosaccharide 21 werden die folgenden Schritte detailliert beschrieben: (i) Probenvorbereitung, (ii) Abstimmung des zyklischen IMS-Instruments, (iii) automatisierte Peak-Picking der Daten und (iv) CCS-Kalibrierung.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>33-&#945;-L- plus 23-&#945;-L-Arabinofuranosyl-xylotetraose (XA3XX/XA2XX) mixture</td>
			<td>Megazyme Ltd., Wicklow, Ireland</td>
			<td>O-XAXXMIX</td>
			<td>XA2XX + XA3XX mixture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>33-&#945;-L-Arabinofuranosyl-xylotetraose (XA3XX)</td>
			<td>Megazyme Ltd., Wicklow, Ireland</td>
			<td>O-XA3XX</td>
			<td>Pure XA3XX standard</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Safe-Lock Tubes, 1.5 mL, Eppendorf Quality, colorless, 1,000 tubes</td>
			<td>Eppendorf, Hamburg, Germany</td>
			<td>0030120086</td>
			<td>Used to prepare the carbohydrate stock solution and dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FALCON 50 mL Polypropylene Conical Tube 30 x 115 mm</td>
			<td>Corning Science M&#233;xico S.A. de C.V., Reynosa, Tamaulipas, Mexico</td>
			<td>352070</td>
			<td>Used to prepare the aqueous stock solution of 100 mM LiCl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lithium Chloride (ACS reagent, &#8805;99 %)</td>
			<td>Sigma-Aldrich Inc., Saint Quentin Fallavier, France</td>
			<td>310468</td>
			<td>Used to dope the sample with lithium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Major Mix IMS/Tof Calibration Kit</td>
			<td>Waters Corp., Wilmslow, UK</td>
			<td>186008113</td>
			<td>Calibration solution for MS and IMS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MassLynx 4.2 SCN1016 Release 6 (Waters Embedded Analyser Platform for Cyclic IMS 2.9.1 Release 9)</td>
			<td>Waters Corp., Wilmslow, UK</td>
			<td>721022377</td>
			<td>Cyclic IMS vendor software for instrument control and data processing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol for HPLC PLUS Gradient grade</td>
			<td>Carlo-Erba Reagents, Val de Reuil, France</td>
			<td>412383</td>
			<td>High-purity solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MS Leucine Enkephaline Kit</td>
			<td>Waters Corp., Wilmslow, UK</td>
			<td>700002456</td>
			<td>Reference compound used for tuning of the mass spectrometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SCHOTT DURAN 100 mL borosilicate glass bottle</td>
			<td>VWR INTERNATIONAL, Radnor, Pennsylvania, US</td>
			<td>218012458</td>
			<td>Used to prepare the solution of 500 &#181;M LiCl in 50:50 MeOH/Water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SELECT SERIES Cyclic IMS</td>
			<td>Waters Corp., Wilmslow, UK</td>
			<td>186009432</td>
			<td>Ion mobility-mass spectrometer equipped with a cylic IMS cell</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Website: http://mzmine.github.io/</td>
			<td>MZmine Development Team</td>
			<td>-</td>
			<td>Link to download the MZmine software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Website: https://github.com/siollivier/IM-MN</td>
			<td>INRAE, UR BIA, BIBS Facility, Nantes, France</td>
			<td>-</td>
			<td>Link to an in-house R script containing a CCS calibration function</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using a cyclic ion mobility spectrometer for tandem ion mobility experiments

Eine genaue Charakterisierung chemischer Strukturen ist wichtig, um ihre zugrunde liegenden biologischen Mechanismen und funktionellen Eigenschaften zu verstehen. Die Massenspektrometrie (MS) ist ein beliebtes Werkzeug, reicht aber nicht immer aus, um alle strukturellen Merkmale vollständig zu enthüllen. Zum Beispiel, obwohl Kohlenhydrate biologisch relevant sind, wird ihre Charakterisierung durch zahlreiche Ebenen der Isomerie erschwert. Die Ionenmobilitätsspektrometrie (IMS) ist eine interessante Ergänzung, da sie empfindlich auf Ionenkonformationen und damit auf Isomerie reagiert. 
Darüber hinaus haben die jüngsten Fortschritte die Technik erheblich verbessert: Die letzte Generation von Cyclic IMS-Instrumenten bietet im Vergleich zu linearen IMS-Instrumenten zusätzliche Fähigkeiten, wie z.B. ein erhöhtes Auflösungsvermögen oder die Möglichkeit, Tandemionenmobilitätsexperimente (IMS/IMS) durchzuführen. Während IMS/IMS wird ein Ion basierend auf seiner Ionenmobilität ausgewählt, fragmentiert und erneut analysiert, um Informationen zur Ionenmobilität über seine Fragmente zu erhalten. Jüngste Arbeiten zeigten, dass die Mobilitätsprofile der in solchen IMS/IMS-Daten enthaltenen Fragmente als Fingerabdruck eines bestimmten Glykans fungieren und in einer molekularen Netzwerkstrategie verwendet werden können, um Glykomik-Datensätze strukturell relevant zu organisieren. 
Das Ziel dieses Protokolls ist es daher, zu beschreiben, wie IMS/IMS-Daten generiert werden, von der Probenvorbereitung bis zur endgültigen CCS-Kalibrierung (Collision Cross Section) der Ionenmobilitätsdimension, die reproduzierbare Spektren liefert. Am Beispiel eines repräsentativen Glykans zeigt dieses Protokoll, wie eine IMS/IMS-Kontrollsequenz auf einem zyklischen IMS-Instrument aufgebaut wird, wie diese Kontrollsequenz berücksichtigt werden kann, um die IMS-Ankunftszeit in die Driftzeit (d. h. die effektive Trennungszeit, die auf die Ionen angewendet wird) zu übersetzen und wie die relevanten Mobilitätsinformationen aus den Rohdaten extrahiert werden können. Dieses Protokoll wurde entwickelt, um die kritischen Punkte eines IMS/IMS-Experiments klar zu erklären und so neuen zyklischen IMS-Anwendern zu helfen, einfache und reproduzierbare Akquisitionen durchzuführen.

Ein Arabinoxylanpentasaccharid, XA2XX, wurde als Beispiel ausgewählt, um dieses Protokoll zu veranschaulichen. Diese Verbindung ist im Handel erhältlich, jedoch nur als Mischung mit einem anderen Arabinoxylanpentasaccharid, XA3XX (reines XA3XX ist auch im Handel erhältlich). Die Strukturen von XA2XX und XA3XX sind in Ergänzender Abbildung S1 dargestellt. Da das Verhältnis von XA2XX und XA3XX in der kommerziellen Mischung ~50:50 beträ...

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Using a Cyclic Ion Mobility Spectrometer for Tandem Ion Mobility Experiments

Die Ionenmobilitätsspektrometrie (IMS) ist eine interessante Ergänzung zur Massenspektrometrie zur Charakterisierung von Biomolekülen, insbesondere weil sie empfindlich auf Isomerie reagiert. Dieses Protokoll beschreibt ein Tandem-IMS-EXPERIMENT (IMS/IMS), das die Isolierung eines Moleküls und die Generierung der Mobilitätsprofile seiner Fragmente ermöglicht.

Verwendung eines zyklischen Ionenmobilitätsspektrometers für Tandemionen-Mobilitätsexperimente

Accurate characterization of chemical structures is important to understand their underlying biological mechanisms and functional properties. Mass ...

Das Protokoll beschreibt, wie ein Ionenmobilitätsprofil für die Fragmente, die bei der Aktivierung eines Moleküls im Massenspektrometer erzeugt werden, aufgezeichnet und zwischen isomeren Strukturen unterschieden wird. Das Protokoll ermöglicht es, Glykane in Bezug auf einige ihrer wichtigsten strukturellen Merkmale in 11 Gruppen einzuteilen und somit eine Information bereitzustellen, die sonst schwer zu erhalten ist. Es kann dazu dienen, molekulare Netzwerke aufzubauen, die extrem generisch sind und für viele molekulare Familien geeignet sind, wie Metaboliten oder Medikamente, die in vielen Forschungsbereichen von Interesse sind.Der Ansatz nutzt ein neues Konzept in der Ionenmobilitätsspektrometrie und wird dort nützlich sein, wo die Massenspektrometrie allein nicht zwischen zwei Strukturen unterscheiden kann. Das Experiment erfordert eine gute Beherrschung der Massenspektrometrie und der Ionenmobilität. Der Experimentator sollte jedoch bei der Implementierung der Methode erfolgreich sein, wenn man jeden der Schritte sorgfältig befolgt.Das Verfahren wird Simon Ollivier, ein Doktorand aus meinem Labor, demonstrieren. Richten Sie zunächst eine Single-Pass-IMS-Sequenz auf der Seite Melodie ein, versetzen Sie das Instrument in den Mobilitätsmodus und öffnen Sie das Fenster Steuerung zyklischer Sequenzen. Wählen Sie in diesem neuen Fenster auf der Registerkarte Zyklische Funktionen den erweiterten Modus aus, wählen Sie Bundle hinzufügen und dann Single/Multipass aus.Warten Sie, bis eine Abfolge von Mobilitätsereignissen auf der Registerkarte Sequenz desselben Fensters angezeigt wird. Passen Sie die Reihenfolge so an, dass alle Kalibrantenionen einen einzigen Durchgang um die zyklische IMS-Rennstrecke machen. Ändern Sie nicht die Einspritzzeit oder die Auswurf- und Erfassungszeit, sondern senken Sie die Trennungszeit auf eine Millisekunde.Wenn einige Ionen der Kalibriermischung nicht in das angezeigte Ankunftszeitfenster passen, ändern Sie die Synchronisation des IMS mit dem Pusher des orthogonalen Beschleunigungs-TOF-Analysators, indem Sie die Anzahl der Pushes pro Bin auf der Registerkarte ADC-Einstellungen erhöhen. Um eine zweiminütige Aufnahme im Fenster Steuerung zyklischer Sequenzen aufzuzeichnen, klicken Sie auf Erfassen, um das Popup-Fenster Erfassungseinstellungen zu öffnen, geben Sie den Dateinamen, die Beschreibung und die Länge der Erfassung, Minuten ein und klicken Sie auf Speichern. Schalten Sie das Gerät von der MS Tune-Seite in den TOF-Modus, um die Stabilität des Signals zu überprüfen.Zeichnen Sie eine vollständige MS-Aufnahme der Probe für eine Minute auf, die nützlich ist, um das Isotopenmuster und das Vorhandensein potenzieller Verunreinigungen zu überprüfen. Versetzen Sie das Instrument über die Registerkarte Quad/MS-Profil der Hauptseite Tune in den MSMS-Modus. Wählen Sie die Masse des Zieleisens im MSMS-Massenfeld für die Isolierung im Quadrupol.Zeichnen Sie eine einminütige Erfassung auf, um die Vorläuferisolation bei der Verarbeitung der Daten zu überprüfen. Um eine mobilitätsbasierte Auswahl des gewünschten Isomers durchzuführen, schalten Sie das Gerät im Fenster Steuerung zyklischer Sequenzen in den Mobilitätsmodus, wählen Sie auf der Registerkarte Zyklische Funktionen die Option Bundle hinzufügen und dann Slicing aus. Warten Sie, bis auf der Registerkarte Sequenz eine komplexe Abfolge von Mobilitätsereignissen angezeigt wird.Positionieren Sie das Ereignis Auswerfen und Erwerben direkt nach dem ersten Separate-Ereignis, und klicken Sie dann auf Ausführen. Achten Sie darauf, dass die Ergebnisse der anfänglichen Trennung in Echtzeit angezeigt werden. Erhöhen Sie die Dauer des ersten separaten Ereignisses für eine Multipass-Trennung, indem Sie den Zeitwert für dieses Ereignis in der Sequenz ändern, bis die Auflösung der IMS-Spitzen zufriedenstellend ist.Notieren Sie eine einminütige Akquisition als Referenz. Klicken Sie auf Pause, und positionieren Sie das Ereignis Auswerfen und Erfassen unter den Ereignissen Auswerfen, Auswerfen in Vorspeicher und Halten und Auswerfen. Passen Sie die Dauer der Ereignisse so an, dass sich der angestrebte Peak im Bereich Auswerfen in den Vorspeicherbereich und jedes andere Ion entweder im Auswurf- oder im Halte- und Auswurfbereich befindet.Positionieren Sie das Ereignis Auswerfen und Erfassen am Ende der Sequenz unter dem Ereignis Reinject from Pre-Store und dem zweiten Separate-Ereignis. Klicken Sie auf Ausführen, um die ausgewählte Grundgesamtheit anzuzeigen. Überprüfen Sie die Qualität der Isolierung.Notieren Sie eine einminütige Akquisition als Referenz. Suchen Sie auf der Registerkarte Sequenz in der Spalte neben den benutzerdefinierten Ereigniszeiten nach den summierten Zeiten aller Ereignisse. Beachten Sie die Time Abs, die auf der Linie des Reinject from Pre-Store-Ereignisses für die Durchführung der CCS-Kalibrierung zu finden sind.Legen Sie die Dauer des Separate-Ereignisses fest, das direkt mit dem Auswerfen und Erfassen fortfährt, auf eine Millisekunde. Aktivieren Sie in der Zeile Reinject from Pre-Store das Kontrollkästchen Aktivierung aktivieren, und optimieren Sie die Fragmentierung mit dem integrierten Steuerelement. Wenn die Fragmentierung mit der integrierten Steuerung nicht zufriedenstellend ist, deaktivieren Sie das Kontrollkästchen Aktivierung aktivieren und fahren Sie fort, die Reinjektionsspannungen manuell zu optimieren, den Pre-Array-Gradienten zu erhöhen und die Array-Offset-Spannung zu senken, bis die Ergebnisse zufriedenstellend sind.Um eine zweiminütige Aufnahme im Popup-Fenster "Erfassung" aufzuzeichnen, aktivieren Sie die Option "Driftzeit beibehalten", um eine Datei zu generieren, die nur die Ankunftszeiten enthält, im Gegensatz zu M über Z, das als _dt.raw gekennzeichnet ist. Nach Durchführung der MS-Analyse des Arabinoxylan-Pentasaccharid-Gemisches zeigte das Spektrum ein Isotopenmuster mit einem einzigen Peak bei M über Z 685,24, was darauf hindeutet, dass die beiden Verbindungen isomerer Natur sind. Die Addukte der Pentasaccharide wurden durch die zyklische IMS-Zelle getrennt, und drei Peaks wurden mit unterschiedlichen Ankunftszeiten getrennt.Der reine XA3XX zeigt die Spitzen bei 83 und 90 Millisekunden, während der XA2XX einen Peak bei 94 Millisekunden aufweist. Nach der ersten Stufe der IMS-Trennung wurden zu XA3XX gehörende Ionen ausgestoßen und der Peak bei 94 Millisekunden für die IMS-IMS-Analyse ausgewählt. Eine Drei-Gang-Trennung wurde durchgeführt, nachdem das Ion ohne Aktivierung wieder injiziert wurde, und ein Peak für XA2XX wurde bei 199 Millisekunden erhalten.Die generierten IMS-IMS MS-Daten wurden unter Verwendung der Ankunftszeit und der Dimensionen M über Z entwickelt, wodurch die IMS-IMS-Spektren erzeugt wurden. Die Spitzen über 0,2% relativer Intensität wurden für die CCS-Kalibrierung exportiert, was zu einem zentrierten CCS-kalibrierten IMS-IMS-Spektrum führte. Es ist immer wichtig, die Isolierung des Vorläufers zu überprüfen, da sonst das Spektrum aus einer Mischung der interessierenden Verbindung und der Verunreinigungen stammen kann.Wir haben bisher IMS-IMS-Spektren verwendet, um Netzwerke aufzubauen und Verbindungen zu klassifizieren, aber sie könnten auch verwendet werden, um Datenbanken nach Verbindungsidentifikationen zu durchsuchen. Diese Technik ist sehr neu, aber wir erwarten, dass sie sowohl in Glycomics als auch in jedem Kontext, in dem Analytiker mit isomeren Molekülen konfrontiert werden, äußerst nützlich sein wird.

Research

JoVE Journal

Chemistry

Characterization, Quantification and Compound-specific Isotopic Analysis of Pyrogenic Carbon Using Benzene Polycarboxylic Acids (BPCA)

Characterization, Quantification and Compound-specific Isotopic Analysis of Pyrogenic Carbon Using Benzene Polycarboxylic Acids BPCA

Charakterisierung, Quantifizierung und substanzspezifische Isotopenanalyse von Pyrogene Kohle Benzolpolycarbonsäuren (BPCA)

Fire-derived, pyrogenic carbon (PyC), sometimes called black carbon (BC), is the carbonaceous solid residue of biomass and fossil fuel combustion, such as ...

Forschung

Chemie

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Site-Directed Spin Labeling und EPR-spektroskopischen Untersuchungen von pentamerem liganden-gesteuerten Ionenkanäle

Ion channel gating is a stimulus-driven orchestration of protein motions that leads to transitions between closed, open, and desensitized states. ...

Analyzing the Photo-oxidation of 2-propanol at Indoor Air Level Concentrations Using Field Asymmetric Ion Mobility Spectrometry

Die Foto-Oxidation von 2-Propanol bei Raumluft Ebene Konzentrationen mit Feld asymmetrische Ion Mobility Spectrometry Analyse

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Eine neue Technik für die Raman-Analyse von hochradioaktivem Proben jeden Standard Micro-Raman-Spektrometers

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Ein HS-MRM-Assay für die Quantifizierung der Wirtszelle Proteine in Protein Biopharmazeutika durch flüssige Chromatographie Ion Mobility QTOF Massenspektrometrie

The analysis of low-level (1-100 ppm) protein impurities (e.g., host-cell proteins (HCPs)) in protein biotherapeutics is a challenging assay requiring ...

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Imaging Corrosion at the Metal-Paint Interface Using Time-of-Flight Secondary Ion Mass Spectrometry

Bildkorrosion an der Metal-Paint-Schnittstelle mit zeitweiliger Ionenmassenspektrometrie

Corrosion developed at the paint and aluminum (Al) metal-paint interface of an aluminum alloy is analyzed using time-of-flight secondary ion mass ...

Ion Mobility-Mass Spectrometry Techniques for Determining the Structure and Mechanisms of Metal Ion Recognition and Redox Activity of Metal Binding Oligopeptides

Ionen-Mobilitäts-Massenspektrometrie-Techniken zur Bestimmung der Struktur und Mechanismen der Metallionenerkennung und Redox-Aktivität von Metallbindungsoligopeptiden