Name: using a cyclic ion mobility spectrometer for tandem ion mobility experiments
Uploaded: 2022-01-20T15:00:00
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एस.ओ. अपने पीएचडी (अनुदान ANR-18-CE29-0006) वित्त पोषण के लिए फ्रांसीसी राष्ट्रीय अनुसंधान एजेंसी के लिए आभारी है।

नोट:: प्रोटोकॉल का एक सिंहावलोकन चित्र 1 में प्रदान किया गया है। वर्तमान प्रोटोकॉल में वर्णित प्रयोगों के लिए उपयोग किए जाने वाले पैरामीटर पूरक तालिका S1 और पूरक तालिका S2 में पाए ?...

SELECT SERIES Cyclic IMS एक शक्तिशाली उपकरण है जो एक परिभाषित आयन आबादी का चयन करने की अनुमति देता है - किसी दिए गए m / z और आयन गतिशीलता का - अपस्ट्रीम क्रोमैटोग्राफिक अलगाव की आवश्यकता के बिना। उपकरण इस आयन आबादी के ए...

बायोमोलेक्यूल्स का पूरा रासायनिक लक्षण वर्णन उनके अंतर्निहित जैविक और कार्यात्मक गुणों को समझने के लिए महत्वपूर्ण है। इस अंत तक, "ओमिक्स" विज्ञान हाल के वर्षों में विकसित हुए हैं, जैविक सांद्रता में रासायनिक संरचनाओं के बड़े पैमाने पर लक्षण वर्णन के लिए लक्ष्य। प्रोटिओमिक्स और मेटाबोलोमिक्स में, एमएस जैविक मीडिया में पाए जाने वाले संरचनात्मक विषमता को उजागर करने के लिए एक मुख्य उपकरण बन गया है- विशेष रूप से इसकी संवेदनशीलता और अग्रानुक्रम एमएस (एमएस / एमएस) के माध्यम से संरचनात्मक जानकारी प्रदान करने की क्षमता के लिए धन्यवाद। एमएस / एमएस रणनीतियों में, एक आयन को इसके द्रव्यमान के अनुसार चुना जाता है, फिर खंडित किया जाता है, और अंत में, अणु के फिंगरप्रिंट को स्थापित करने के लिए इसके टुकड़ों के द्रव्यमान का अधिग्रहण किया जाता है। एमएस / एमएस स्पेक्ट्रा, विशेष रूप से, वर्णक्रमीय डेटाबेस 1, 2 से मेल खाने के लिए उपयोग किया जा सकता है, या अस्थायी रूप से मूल संरचनाओं 3,4 का पुनर्निर्माण किया जा सकता है। इस धारणा के तहत कि समान स्पेक्ट्रा समान यौगिकों से संबंधित हैं, एमएस / एमएस डेटा का उपयोग आणविक नेटवर्क (एमएन) बनाने के लिए भी किया जा सकता है जो एक समानता स्कोर 5,6 के माध्यम से संबंधित प्रजातियों को जोड़ता है।
हालांकि, आयनों के द्रव्यमान-से-चार्ज अनुपात (एम / जेड) का पता लगाने के लिए एमएस की अंतर्निहित संपत्ति के कारण, तकनीक कई संरचनात्मक विशेषताओं के लिए अंधा है जो (स्टीरियो) आइसोमेरिज्म की सीमा के भीतर आते हैं। उदाहरण के लिए, कार्बोहाइड्रेट कई मोनोसेकेराइड सबयूनिट्स से बने होते हैं, जिनमें से कई स्टीरियोआइसोमर्स या यहां तक कि एपिमर (उदाहरण के लिए, जीएलसी बनाम गैल या जीएलसी बनाम मैन) हैं। ये सबयूनिट्स ग्लाइकोसिडिक बांड से जुड़े होते हैं, जो लिंकेज (रीजियोआइसोमेरिज्म) की स्थिति और एनोमेरिक कार्बन (एनोमेरिज्म) के स्टेरिक कॉन्फ़िगरेशन से भिन्न हो सकते हैं। ये विशेषताएं स्टैंडअलोन एमएस के लिए कार्बोहाइड्रेट आइसोमर्स 7 के बीच अंतर करना मुश्किल बनाती हैं, और उच्च ऊर्जा सक्रियण विधियों 8,9,10 का उपयोग करके केवल रेजियोआइसोमेरिज्म को संबोधित किया जा सकता है। यद्यपि व्युत्पत्तिकरण स्टीरियोआइसोमेरिक समूह 11 की तुल्यता को बाधित करने का एक विकल्प है, इसके लिए व्यापक नमूना तैयारी की आवश्यकता होती है। एक और, अधिक सीधा विकल्प आईएमएस को आइसोमेरिज्म के प्रति संवेदनशील एक विश्लेषणात्मक आयाम के साथ जोड़ना है, जैसे कि आईएमएस।
क्योंकि यह प्रोटोकॉल उन उपयोगकर्ताओं के लिए डिज़ाइन किया गया है जो पहले से ही आईएमएस की मूल अवधारणाओं से परिचित हैं, और क्योंकि विस्तृत समीक्षाएं कहीं और उपलब्ध हैं12,13, केवल आईएमएस के सिद्धांतों का एक संक्षिप्त अवलोकन यहां दिया गया है। आईएमएस एक गैस-चरण पृथक्करण विधि है जो एक बफर गैस और एक विद्युत क्षेत्र के साथ आयनों की बातचीत पर निर्भर करती है, अंततः आयनों को उनके गैस-चरण संरचनाओं के अनुसार अलग करती है। एमएस के लिए युग्मित आईएमएस के विभिन्न सिद्धांतों को वाणिज्यिक उपकरणों पर पाया जा सकता है: कुछ वैकल्पिक उच्च और निम्न विद्युत क्षेत्रों (क्षेत्र असममित आईएमएस, एफएआईएमएस) पर काम करते हैं, जबकि अधिकांश कम क्षेत्र सीमा के भीतर काम करते हैं - विशेष रूप से बहाव ट्यूब आईएमएस (डीटीआईएमएस, रैखिक रूप से कम बिजली के क्षेत्र), यात्रा तरंग आईएमएस (टीडब्ल्यूआईएमएस, सममित संभावित तरंगें), और फंसे हुए आईएमएस (टीआईएमएस, विद्युत क्षेत्रों के खिलाफ बफर गैस ट्रैपिंग आयनों का उच्च प्रवाह) 13 . कम क्षेत्र के तरीके एक तथाकथित सीसीएस तक पहुंच की अनुमति देते हैं, आयन-गैस जोड़ी की एक संपत्ति जो आयन की सतह (Å2 या nm2 में) का प्रतिनिधित्व करती है जो अलगाव के दौरान बफर गैस के साथ बातचीत करती है। सीसीएस सैद्धांतिक रूप से साधन-स्वतंत्र है और इस प्रकार डेटा उत्पन्न करने के लिए उपयोगी है जिसे विभिन्न प्रयोगशालाओं के बीच पुन: पेश किया जा सकता है। आयन गतिशीलता पृथक्करण को विभिन्न मापदंडों से प्रभावित किया जा सकता है और, विशेष रूप से, गतिशीलता सेल में गैस दबाव और गैस के तापमान के उतार-चढ़ाव से। सीसीएस अंशांकन इसे ठीक करने का एक तरीका है, क्योंकि कैलिब्रेंट और ब्याज की प्रजातियां दोनों समान रूप से प्रभावित होंगी। हालांकि, तापमान-नियंत्रित कमरे में उपकरण स्थापित करना और एक विश्वसनीय गैस दबाव नियंत्रण प्रणाली होना अनिवार्य है।
आईएमएस का एक दिलचस्प विकास आईएमएस / आईएमएस है, जिसे पहली बार 2006 में क्लेमर के समूह द्वारा एमएस / एमएस 15,16 के एनालॉग के रूप में पेश किया गया था। आईएमएस / आईएमएस में, ब्याज के एक आयन को इसकी आयन गतिशीलता के आधार पर चुनिंदा रूप से अलग किया जाता है; यह तब सक्रिय है (संभव विखंडन तक), और सक्रिय आयन या टुकड़ों का एक नया आईएमएस विश्लेषण किया जाता है। पहले वाद्य डिजाइन में, दो आईएमएस कोशिकाओं को श्रृंखला में रखा गया था, जो एक आयन फ़नल द्वारा अलग किया गया था जहां सक्रियण खड़ा था। तब से, हालांकि कई आईएमएस / आईएमएस सेटअप प्रस्तावित किए गए थे (समीक्षा के लिए, एल्ड्रिड और थैलेसिनोस 17 देखें), आईएमएस / आईएमएस क्षमता के साथ पहला वाणिज्यिक द्रव्यमान स्पेक्ट्रोमीटर केवल 201918 में उपलब्ध हुआ। इस उपकरण ने एक और तकनीकी सफलता के साथ संयोजन करके प्रारंभिक अवधारणा में काफी सुधार किया: आईएमएस सेल का एक चक्रीय डिजाइन।
चक्रीय आईएमएस सेल सैद्धांतिक रूप से बहाव पथ की लंबाई को बढ़ाने की अनुमति देता है और इस प्रकार, साधन 19 की समाधान शक्ति। यह एक विशेष उपकरण ज्यामिति के माध्यम से प्राप्त किया गया था, जहां चक्रीय TWIMS सेल को मुख्य आयन ऑप्टिकल अक्ष पर ऑर्थोगोनल रूप से रखा जाता है। आईएमएस सेल के प्रवेश द्वार पर एक मल्टीफंक्शन सरणी क्षेत्र आयन पथ की दिशा को नियंत्रित करने की अनुमति देता है: (i) आईएमएस पृथक्करण के लिए आयनों को बग़ल में भेजना, (ii) एमएस डिटेक्शन के लिए आगे, या (iii) आईएमएस सेल से पीछे की ओर एक प्रीएरे सेल में संग्रहीत किया जाना है। इस प्रीएरे स्टोर सेल से, आयनों को सक्रिय किया जा सकता है और आयन गतिशीलता माप के लिए आईएमएस सेल में टुकड़ों को फिर से इंजेक्ट किया जा सकता है, एक दृष्टिकोण जिसका उपयोग स्टीरियोआइसोमर्स 20 को चिह्नित करने के लिए सफलतापूर्वक किया गया है। आखिरकार, एकत्र किए गए डेटा में अग्रदूत और इसके टुकड़ों के लिए आयन गतिशीलता और एम / जेड जानकारी होती है।
हाल के एक प्रकाशन में जिसने ग्लाइकन विश्लेषण (Ollivier et al.21) के लिए इस चक्रीय डिजाइन का उपयोग किया, हमने दिखाया कि इस तरह के आईएमएस / आईएमएस डेटा में निहित टुकड़ों की गतिशीलता प्रोफ़ाइल एक बायोमोलेक्यूल के फिंगरप्रिंट के रूप में कार्य करती है जिसका उपयोग आणविक नेटवर्किंग रणनीति में किया जा सकता है। परिणामी नेटवर्क, जिसे आईएम-एमएन कहा जाता है, ने संरचनात्मक रूप से प्रासंगिक तरीके से ग्लाइकोमिक्स डेटासेट के संगठन का नेतृत्व किया, जबकि एमएस / एमएस डेटा (एमएस-एमएन) से पूरी तरह से निर्मित नेटवर्क ने बहुत कम जानकारी का खुलासा किया। इस प्रकाशन के पूरक और चक्रीय IMS उपयोगकर्ताओं को इस वर्कफ़्लो को कार्यान्वित करने में मदद करने के लिए, यह प्रोटोकॉल डेटा एकत्र करने के लिए उपयोग किए जाने वाले प्रोटोकॉल का पूर्ण विवरण प्रदान करता है. यह प्रोटोकॉल केवल IMS/IMS डेटा की पीढ़ी पर केंद्रित है जिसका उपयोग उपयोगकर्ता तब IM-MN नेटवर्क (see21) बनाने के लिए कर सकते हैं - या उनकी पसंद के किसी भी अन्य अनुप्रयोग के लिए। IM-MN के निर्माण पर यहां विचार नहीं किया जाएगा, क्योंकि आणविक नेटवर्किंग के लिए प्रोटोकॉल पहले से ही उपलब्ध हैं22। मूल्यवान और पुनरुत्पादक आईएमएस /आईएमएस अधिग्रहण उत्पन्न करने के लिए जिन महत्वपूर्ण बिंदुओं का पालन किया जाना चाहिए, उन्हें हाइलाइट किया गया है। ओलिवियर एट अल द्वारा अध्ययन किए गए ओलिगोसेकेराइड्स में से एक का उदाहरण लेते हुए। 21, निम्नलिखित चरणों को विस्तृत किया गया है: (i) नमूना तैयारी, (ii) चक्रीय आईएमएस साधन की ट्यूनिंग, (iii) डेटा का स्वचालित पीक-पिकिंग, और (iv) सीसीएस अंशांकन।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>33-&#945;-L- plus 23-&#945;-L-Arabinofuranosyl-xylotetraose (XA3XX/XA2XX) mixture</td>
			<td>Megazyme Ltd., Wicklow, Ireland</td>
			<td>O-XAXXMIX</td>
			<td>XA2XX + XA3XX mixture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>33-&#945;-L-Arabinofuranosyl-xylotetraose (XA3XX)</td>
			<td>Megazyme Ltd., Wicklow, Ireland</td>
			<td>O-XA3XX</td>
			<td>Pure XA3XX standard</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Safe-Lock Tubes, 1.5 mL, Eppendorf Quality, colorless, 1,000 tubes</td>
			<td>Eppendorf, Hamburg, Germany</td>
			<td>0030120086</td>
			<td>Used to prepare the carbohydrate stock solution and dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FALCON 50 mL Polypropylene Conical Tube 30 x 115 mm</td>
			<td>Corning Science M&#233;xico S.A. de C.V., Reynosa, Tamaulipas, Mexico</td>
			<td>352070</td>
			<td>Used to prepare the aqueous stock solution of 100 mM LiCl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lithium Chloride (ACS reagent, &#8805;99 %)</td>
			<td>Sigma-Aldrich Inc., Saint Quentin Fallavier, France</td>
			<td>310468</td>
			<td>Used to dope the sample with lithium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Major Mix IMS/Tof Calibration Kit</td>
			<td>Waters Corp., Wilmslow, UK</td>
			<td>186008113</td>
			<td>Calibration solution for MS and IMS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MassLynx 4.2 SCN1016 Release 6 (Waters Embedded Analyser Platform for Cyclic IMS 2.9.1 Release 9)</td>
			<td>Waters Corp., Wilmslow, UK</td>
			<td>721022377</td>
			<td>Cyclic IMS vendor software for instrument control and data processing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol for HPLC PLUS Gradient grade</td>
			<td>Carlo-Erba Reagents, Val de Reuil, France</td>
			<td>412383</td>
			<td>High-purity solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MS Leucine Enkephaline Kit</td>
			<td>Waters Corp., Wilmslow, UK</td>
			<td>700002456</td>
			<td>Reference compound used for tuning of the mass spectrometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SCHOTT DURAN 100 mL borosilicate glass bottle</td>
			<td>VWR INTERNATIONAL, Radnor, Pennsylvania, US</td>
			<td>218012458</td>
			<td>Used to prepare the solution of 500 &#181;M LiCl in 50:50 MeOH/Water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SELECT SERIES Cyclic IMS</td>
			<td>Waters Corp., Wilmslow, UK</td>
			<td>186009432</td>
			<td>Ion mobility-mass spectrometer equipped with a cylic IMS cell</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Website: http://mzmine.github.io/</td>
			<td>MZmine Development Team</td>
			<td>-</td>
			<td>Link to download the MZmine software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Website: https://github.com/siollivier/IM-MN</td>
			<td>INRAE, UR BIA, BIBS Facility, Nantes, France</td>
			<td>-</td>
			<td>Link to an in-house R script containing a CCS calibration function</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using a cyclic ion mobility spectrometer for tandem ion mobility experiments

रासायनिक संरचनाओं का सटीक लक्षण वर्णन उनके अंतर्निहित जैविक तंत्र और कार्यात्मक गुणों को समझने के लिए महत्वपूर्ण है। मास स्पेक्ट्रोमेट्री (एमएस) एक लोकप्रिय उपकरण है लेकिन हमेशा सभी संरचनात्मक विशेषताओं को पूरी तरह से अनावरण करने के लिए पर्याप्त नहीं होता है। उदाहरण के लिए, हालांकि कार्बोहाइड्रेट जैविक रूप से प्रासंगिक हैं, उनका लक्षण वर्णन आइसोमेरिज्म के कई स्तरों से जटिल है। आयन गतिशीलता स्पेक्ट्रोमेट्री (आईएमएस) एक दिलचस्प पूरक है क्योंकि यह आयन संरचनाओं के प्रति संवेदनशील है और इस प्रकार, आइसोमेरिज्म के लिए। 
इसके अलावा, हाल की प्रगति ने तकनीक में काफी सुधार किया है: चक्रीय आईएमएस उपकरणों की अंतिम पीढ़ी रैखिक आईएमएस उपकरणों की तुलना में अतिरिक्त क्षमताएं प्रदान करती है, जैसे कि बढ़ी हुई समाधान शक्ति या अग्रानुक्रम आयन गतिशीलता (आईएमएस / आईएमएस) प्रयोगकरने की संभावना। आईएमएस / आईएमएस के दौरान, एक आयन को इसकी आयन गतिशीलता के आधार पर चुना जाता है, खंडित किया जाता है, और इसके टुकड़ों के बारे में आयन गतिशीलता जानकारी प्राप्त करने के लिए पुन: विश्लेषण किया जाता है। हाल के काम से पता चला है कि इस तरह के आईएमएस / आईएमएस डेटा में निहित टुकड़ों की गतिशीलता प्रोफाइल एक विशेष ग्लाइकन के फिंगरप्रिंट के रूप में कार्य कर सकती है और इसका उपयोग संरचनात्मक रूप से प्रासंगिक तरीके से ग्लाइकोमिक्स डेटासेट को व्यवस्थित करने के लिए आणविक नेटवर्किंग रणनीति में किया जा सकता है। 
इस प्रोटोकॉल का लक्ष्य इस प्रकार यह वर्णन करना है कि आईएमएस / आईएमएस डेटा कैसे उत्पन्न किया जाए, नमूना तैयारी से आयन गतिशीलता आयाम के अंतिम टकराव क्रॉस सेक्शन (सीसीएस) अंशांकन तक जो पुनरुत्पादक स्पेक्ट्रा उत्पन्न करता है। एक प्रतिनिधि ग्लाइकन का उदाहरण लेते हुए, यह प्रोटोकॉल दिखाएगा कि चक्रीय आईएमएस उपकरण पर एक आईएमएस / आईएमएस नियंत्रण अनुक्रम कैसे बनाया जाए, आईएमएस आगमन समय को बहाव समय में अनुवाद करने के लिए इस नियंत्रण अनुक्रम के लिए कैसे खाता है (यानी, आयनों पर लागू प्रभावी पृथक्करण समय), और कच्चे डेटा से प्रासंगिक गतिशीलता जानकारी कैसे निकाली जाए। यह प्रोटोकॉल स्पष्ट रूप से एक आईएमएस / आईएमएस प्रयोग के महत्वपूर्ण बिंदुओं को समझाने के लिए डिज़ाइन किया गया है और इस प्रकार नए चक्रीय आईएमएस उपयोगकर्ताओं को सीधे और पुन: प्रस्तुत करने योग्य अधिग्रहण करने में मदद करता है।

एक arabinoxylan pentasaccharide, XA2XX, इस प्रोटोकॉल को स्पष्ट करने के लिए एक उदाहरण के रूप में चुना गया था। यह यौगिक व्यावसायिक रूप से उपलब्ध है, लेकिन केवल एक अन्य arabinoxylan pentasaccharide, XA3XX (शुद्ध XA3XX भी व्यावसायिक रूप से उपल?...

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Using a Cyclic Ion Mobility Spectrometer for Tandem Ion Mobility Experiments

आयन गतिशीलता स्पेक्ट्रोमेट्री (आईएमएस) बायोमोलेक्यूल्स के लक्षण वर्णन के लिए मास स्पेक्ट्रोमेट्री के लिए एक दिलचस्प पूरक है, विशेष रूप से क्योंकि यह आइसोमेरिज्म के प्रति संवेदनशील है। यह प्रोटोकॉल एक अग्रानुक्रम आईएमएस (आईएमएस / आईएमएस) प्रयोग का वर्णन करता है, जो एक अणु के अलगाव और इसके टुकड़ों की गतिशीलता प्रोफाइल की पीढ़ी की अनुमति देता है।

अग्रानुक्रम आयन गतिशीलता प्रयोगों के लिए एक चक्रीय आयन गतिशीलता स्पेक्ट्रोमीटर का उपयोग करना

Accurate characterization of chemical structures is important to understand their underlying biological mechanisms and functional properties. Mass ...

प्रोटोकॉल का वर्णन करता है कि द्रव्यमान स्पेक्ट्रोमीटर में एक अणु के सक्रियण पर उत्पादित टुकड़ों के लिए आयन गतिशीलता प्रोफ़ाइल को कैसे रिकॉर्ड किया जाए, और आइसोमेरिक संरचनाओं के बीच भेदभाव किया जाए। प्रोटोकॉल ग्लाइकन को उनकी कुछ प्रमुख संरचनात्मक विशेषताओं के बारे में 11 समूहों में वर्गीकृत करने की अनुमति देता है, और इस प्रकार एक ऐसी जानकारी प्रदान करता है जिसे प्राप्त करना अन्यथा मुश्किल है। यह आणविक नेटवर्क बनाने के लिए काम कर सकता है जो बेहद सामान्य हैं और कई आणविक परिवारों के लिए अनुकूल हैं, जैसे कि मेटाबोलाइट्स या कई शोध क्षेत्रों में रुचि की दवाएं।दृष्टिकोण आयन गतिशीलता स्पेक्ट्रोमेट्री में एक नई अवधारणा का सबसे अधिक बनाता है, और उपयोगी होगा जहां अकेले मास स्पेक्ट्रोमेट्री दो संरचनाओं के बीच भेदभाव करने में विफल रहेगा। प्रयोग को मास स्पेक्ट्रोमेट्री और आयन गतिशीलता की एक अच्छी कमान की आवश्यकता होती है। हालांकि, प्रयोगकर्ता को विधि को लागू करने में सफल होना चाहिए यदि कोई प्रत्येक चरण का सावधानीपूर्वक पालन करता है।प्रक्रिया का प्रदर्शन साइमन Ollivier, मेरी प्रयोगशाला से एक पीएचडी छात्र होगा. प्रारंभ करने के लिए, ट्यून पृष्ठ से एक एकल-पास IMS अनुक्रम सेट करें, इंस्ट्रूमेंट को गतिशीलता मोड में रखें, और चक्रीय अनुक्रम नियंत्रण विंडो खोलें. इस नई विंडो के चक्रीय फ़ंक्शंस टैब से उन्नत मोड का चयन करें, बंडल जोड़ें का चयन करें, फिर एकल/एक ही विंडो के अनुक्रम टैब में प्रकट होने के लिए गतिशीलता ईवेंट के अनुक्रम के लिए प्रतीक्षा करें। अनुक्रम को अनुकूलित करें ताकि सभी कैलिब्रेंट आयन चक्रीय आईएमएस रेसट्रैक के चारों ओर एक ही पास बना सकें। इंजेक्ट समय या निकालें और समय प्राप्त करें परिवर्तित न करें, हालांकि, अलग समय को एक मिलीसेकंड तक कम करें।अंशांकन मिश्रण के कुछ आयनप्रदर्शित आगमन समय विंडो में फिट नहीं होते हैं, तो ADC सेटिंग्स टैब में प्रति बिन पुश की संख्या बढ़ाकर ओर्थोगोनल त्वरण TOF विश्लेषक के पुशर के साथ IMS का सिंक्रनाइज़ेशन परिवर्तित करें। चक्रीय अनुक्रम नियंत्रण विंडो में दो-मिनट का अधिग्रहण रिकॉर्ड करने के लिए, अधिग्रहण सेटिंग्स पॉपअप विंडो खोलने के लिए प्राप्त करें पर क्लिक करें, फ़ाइल नाम, विवरण, और अधिग्रहण की लंबाई, मिनट इनपुट करें, और सहेजें क्लिक करें. सिग्नल की स्थिरता की जांच करने के लिए एमएस ट्यून पृष्ठ से उपकरण को TOF मोड में स्विच करें।एक मिनट के लिए नमूने का एक पूर्ण एमएस अधिग्रहण रिकॉर्ड करें, जो आइसोटोपिक पैटर्न और संभावित संदूषकों की उपस्थिति की जांच करने के लिए उपयोगी होगा। मुख्य ट्यून पृष्ठ के क्वाड/एमएस प्रोफ़ाइल टैब से MSMS मोड में इंस्ट्रूमेंट रखें। चतुर्भुज में अलगाव के लिए MSMS मास क्षेत्र में लक्षित लोहे के द्रव्यमान का चयन करें।डेटा संसाधित करते समय अग्रदूत अलगाव की जांच करने के लिए एक मिनट का अधिग्रहण रिकॉर्ड करें। ब्याज के आइसोमर का गतिशीलता-आधारित चयन करने के लिए, उपकरण को चक्रीय अनुक्रम नियंत्रण विंडो में गतिशीलता मोड पर स्विच करें, चक्रीय फ़ंक्शन टैब से, बंडल जोड़ें का चयन करें, और फिर स्लाइसिंग करें। अनुक्रम टैब में प्रकट होने के लिए गतिशीलता ईवेंट्स के एक जटिल अनुक्रम के लिए प्रतीक्षा करें।पहले अलग ईवेंट के ठीक बाद बाहर निकालें और इवेंट प्राप्त करें की स्थिति, और उसके बाद चलाएँक्लिक करें। वास्तविक समय में प्रदर्शित होने वाले प्रारंभिक पृथक्करण के परिणामों की तलाश करें। जब तक कि IMS चोटियों का रिज़ॉल्यूशन संतोषजनक न हो, तब तक अनुक्रम में इस ईवेंट के लिए समय मान परिवर्तित करके मल्टीपास पृथक्करण के लिए पहले अलग ईवेंट की अवधि बढ़ाएँ.संदर्भ के लिए एक मिनट का अधिग्रहण रिकॉर्ड करें. रोकेंक्लिक करें, निकालें और इवेंट प्राप्त करें को बाहर निकालें के नीचे रखें, पूर्व-संग्रह करने के लिए निकालें, और ईवेंट को पकड़ो और निकालें. ईवेंट की अवधि को समायोजित करें ताकि लक्षित चोटी पूर्व-स्टोर क्षेत्र में बाहर निकालें में हो, और कोई भी अन्य आयन या तो Eject या होल्ड और इजेक्ट क्षेत्र में हो।पूर्व-संग्रह और दूसरी अलग-अलग ईवेंट से Reinject के नीचे अनुक्रम के अंत में निकालें और प्राप्त ईवेंट की स्थिति। चयनित जनसंख्या प्रदर्शित करने के लिए चलाएँ क्लिक करें. अलगाव की गुणवत्ता की जांच करें।संदर्भ के लिए एक मिनट का अधिग्रहण रिकॉर्ड करें. अनुक्रम टैब में, उपयोगकर्ता-निर्धारित ईवेंट समय के बगल वाले स्तंभ में, सभी ईवेंट्स के summed-up समय के लिए देखें. CCS अंशांकन करने के लिए पूर्व-संग्रह ईवेंट से Reinject की पंक्ति पर पाए गए समय Abs का ध्यान रखें।अलग ईवेंट की अवधि सीधे Eject और प्राप्त करने के लिए एक मिलीसेकंड के लिए आगे बढ़ रहा है सेट करें। पूर्व-संग्रह पंक्ति से पुन: इंजेक्ट करें पर, सक्रियण सक्षम करें बॉक्स पर टिक करें और अंतर्निहित नियंत्रण के साथ फ़्रेग्मेंटेशन ऑप्टिमाइज़ करें। यदि फ़्रेग्मेंटेशन अंतर्निहित नियंत्रण के साथ संतोषजनक नहीं है, तो सक्रियण सक्षम करें बॉक्स को अनचेक करें और मैन्युअल रूप से reinjection voltages को ऑप्टिमाइज़ करने के लिए आगे बढ़ें, प्री-एरे ग्रेडिएंट को बढ़ाएँ, और परिणाम संतोषजनक होने तक सरणी ऑफ़सेट वोल्टेज को कम करें।अधिग्रहण पॉपअप विंडो में दो मिनट के अधिग्रहण को रिकॉर्ड करने के लिए, केवल आगमन समय वाली फ़ाइल उत्पन्न करने के लिए रिटेन ड्रिफ्ट टाइम विकल्प पर टिक करें, बनाम M पर Z लेबल किया गया _dt.raw। Arabinoxylan pentasaccharide मिश्रण के एमएस विश्लेषण करने के बाद, स्पेक्ट्रम ने Z 685.24 पर M पर एक एकल चोटी के साथ एक आइसोटोपिक पैटर्न प्रदर्शित किया, यह सुझाव देते हुए कि दो यौगिक प्रकृति में आइसोमेरिक हैं। पेंटासैकेराइड्स के adducts चक्रीय आईएमएस सेल के माध्यम से अलग किए गए थे, और तीन चोटियों को अलग-अलग आगमन समय के साथ अलग किया गया था।शुद्ध XA3XX 83 और 90 मिलीसेकंड पर चोटियों को दिखाता है, जबकि XA2XX 94 मिलीसेकंड पर एक चोटी प्रदर्शित करता है। आईएमएस पृथक्करण के पहले चरण के बाद, XA3XX से संबंधित आयनों को बाहर निकाल दिया गया था, और 94 मिलीसेकंड पर चोटी को आईएमएस-आईएमएस विश्लेषण के लिए चुना गया था। सक्रियण के बिना आयन को फिर से इंजेक्ट करने के बाद एक तीन-पास पृथक्करण किया गया था, और XA2XX के लिए एक चोटी 199 मिलीसेकंड पर प्राप्त की गई थी।उत्पन्न IMS-IMS MS डेटा को आगमन समय और Z आयामों पर M का उपयोग करके de-convolved किया गया था, जिससे IMS-IMS स्पेक्ट्रा उत्पन्न होता है। 0.2% सापेक्ष तीव्रता से ऊपर की चोटियों को सीसीएस अंशांकन के लिए निर्यात किया गया था, जिसके परिणामस्वरूप एक केंद्रीकृत सीसीएस-कैलिब्रेटेड आईएमएस-आईएमएस स्पेक्ट्रम होता है। अग्रदूत आयन के अलगाव की जांच करना हमेशा महत्वपूर्ण होता है, अन्यथा, स्पेक्ट्रम ब्याज के यौगिक और संदूषकों के मिश्रण से आ सकता है।हमने पहले आईएमएस-आईएमएस स्पेक्ट्रा का उपयोग नेटवर्क बनाने और यौगिकों को वर्गीकृत करने के लिए किया था, लेकिन उनका उपयोग यौगिक पहचान के लिए डेटाबेस के खिलाफ खोज करने के लिए भी किया जा सकता था। यह तकनीक बहुत हाल ही में है, लेकिन हम उम्मीद करते हैं कि यह ग्लाइकोमिक्स के साथ-साथ किसी भी संदर्भ में बेहद उपयोगी होगा जहां विश्लेषकों को आइसोमेरिक अणुओं का सामना करना पड़ता है।

Research

JoVE Journal

Chemistry

Characterization, Quantification and Compound-specific Isotopic Analysis of Pyrogenic Carbon Using Benzene Polycarboxylic Acids (BPCA)

Characterization, Quantification and Compound-specific Isotopic Analysis of Pyrogenic Carbon Using Benzene Polycarboxylic Acids BPCA

लक्षण वर्णन, ज्वरकारक कार्बन बेंजीन polycarboxylic एसिड का उपयोग कर की मात्रा और यौगिक-विशिष्ट विश्लेषण समस्थानिक (BPCA)

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Analyzing the Photo-oxidation of 2-propanol at Indoor Air Level Concentrations Using Field Asymmetric Ion Mobility Spectrometry

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Real-time Breath Analysis by Using Secondary Nanoelectrospray Ionization Coupled to High Resolution Mass Spectrometry

उच्च संकल्प जन स्पेक्ट्रोमेट्री के लिए युग्मित माध्यमिक Nanoelectrospray Ionization का उपयोग करके वास्तविक समय सांस विश्लेषण

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Imaging Corrosion at the Metal-Paint Interface Using Time-of-Flight Secondary Ion Mass Spectrometry

इमेजिंग धातु पर जंग-पेंट इंटरफ़ेस समय का उपयोग उड़ान माध्यमिक आयन मास स्पेक्ट्रोमेट्री

Corrosion developed at the paint and aluminum (Al) metal-paint interface of an aluminum alloy is analyzed using time-of-flight secondary ion mass ...

Ion Mobility-Mass Spectrometry Techniques for Determining the Structure and Mechanisms of Metal Ion Recognition and Redox Activity of Metal Binding Oligopeptides