Name: an in vitro approach to study mitochondrial dysfunction: a cybrid model
Uploaded: 2022-03-09T14:00:00
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이 연구는 Mariani Foundation이 자금을 지원하는 미토콘드리아 소아 질환 연구 센터 (http://www.mitopedia.org)에서 수행되었습니다. VT는 희귀 신경근 질환에 대한 유럽 참조 네트워크 (ERN EURO-NMD)의 회원입니다.

참고: 인간 섬유아세포의 사용은 윤리적 승인이 필요할 수 있습니다. 이 연구에 사용 된 섬유 아세포는 MD 환자로부터 유래되었으며 윤리적 요구 사항을 준수하여 기관 바이오 뱅크에 보관되었습니다. 세포의 사용을 위해 정보에 입각한 동의가 제공되었다. 모든 세포 배양 절차를 멸균된 층류 캐비닛 하에 실온(RT, 22-25°C)에서 수행한다. 세포 배양 및 멸균 장비에 적합한 멸균 여과 용액을 사용하십...

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	<li>Gorman, G. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+diseases.">Mitochondrial diseases.</a> Nature Reviews. Disease Primers. 2, (2016).</li><li>DiMauro, S., Davidzon, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+DNA+and+disease.">Mitochondrial DNA and disease.</a> Annals of Medicine. 37 (3), 222-232 (2005).</li><li>El-Hattab, A. W., Craigen, W. J., Scaglia, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+DNA+maintenance+defects.">Mitochondrial DNA maintenance defects.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Molecular Basis of Disease. 1863 (6), 1539-1555 (2017).</li><li>Stewart, J. B., Chinnery, P. 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A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cybrid+models+of+pathological+cell+processes+in+different+diseases.">Cybrid models of pathological cell processes in different diseases.</a> Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2018, 4647214 (2018).</li><li>Tarrago-Litvak, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+inhibition+of+mitochondrial+DNA+polymerase+gamma+from+animal+cells+by+intercalating+drugs.">The inhibition of mitochondrial DNA polymerase gamma from animal cells by intercalating drugs.</a> Nucleic Acids Research. 5 (6), 2197-2210 (1978).</li><li>Swerdlow, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondria,+cybrids,+aging,+and+Alzheimer's+disease.">Mitochondria, cybrids, aging, and Alzheimer's disease.</a> Progress in Molecular Biology and Translational Science. 146, 259-302 (2017).</li><li>Ghosh, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+cytoplasmic+hybrid+cell+lines+for+elucidating+the+role+of+mitochondrial+dysfunction+in+Alzheimer's+disease+and+Parkinson's+disease.">Use of cytoplasmic hybrid cell lines for elucidating the role of mitochondrial dysfunction in Alzheimer's disease and Parkinson's disease.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 893, 176-191 (1999).</li><li>Buneeva, O., Fedchenko, V., Kopylov, A., Medvedev, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+dysfunction+in+Parkinson's+disease:+focus+on+mitochondrial+DNA.">Mitochondrial dysfunction in Parkinson's disease: focus on mitochondrial DNA.</a> Biomedicines. 8 (12), 591 (2020).</li><li>Weidling, I. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+DNA+manipulations+affect+tau+oligomerization.">Mitochondrial DNA manipulations affect tau oligomerization.</a> Journal of Alzheimer's disease: JAD. 77 (1), 149-163 (2020).</li><li>Ferreira, I. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioenergetic+dysfunction+in+Huntington's+disease+human+cybrids.">Bioenergetic dysfunction in Huntington's disease human cybrids.</a> Experimental Neurology. 231 (1), 127-134 (2011).</li><li>Cruz-Berm&#250;dez, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spotlight+on+the+relevance+of+mtDNA+in+cancer.">Spotlight on the relevance of mtDNA in cancer.</a> Clinical &amp; Translational Oncology. 19 (4), 409-418 (2017).</li><li>Patel, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=European+mtDNA+variants+are+associated+with+differential+responses+to+cisplatin,+an+anticancer+drug:+implications+for+drug+resistance+and+side+effects.">European mtDNA variants are associated with differential responses to cisplatin, an anticancer drug: implications for drug resistance and side effects.</a> Frontiers in Oncology. 9, 640 (2019).</li></ol>

mtDNA는 보호 히스톤의 부족 및 호흡 사슬에 가까운 그의 위치 때문에 nDNA에 비해 매우 높은 돌연변이율을 가지며, 이는 분자를 복구 시스템(16)에 의해 효율적으로 상쇄되지 않는 손상된 산화 효과에 노출시킨다. 최초의 병원성 mtDNA 돌연변이는 1988 년17,18 년에 확인되었으며, 그 이후로 많은 수의 돌연변이가 설명되었습니다. NGS 기술은 ?...

미토콘드리아 장애 (MDs)는 핵 (nDNA) 또는 미토콘드리아 (mtDNA) DNA1의 돌연변이로 인한 미토콘드리아 기능의 손상으로 인한 다계통 증후군의 그룹입니다. 그들은 가장 흔한 유전 된 대사 질환 중 하나이며 1 : 5,000의 유병률이 있습니다. mtDNA 관련 질병은 미토콘드리아 유전학의 규칙을 따릅니다 : 모성 상속, 이종 혈질 및 역치 효과, 유사분열분리 2. 인간 mtDNA는 복제 및 전사에 필요한 서열, 13개의 단백질 코딩 유전자(호흡 사슬의 모든 서브유닛), 22개의 tRNA 및 2개의 rRNA 유전자를 갖는 짧은 조절 영역을 포함하는 16.6 kb의 이중 가닥 DNA원이다.
건강한 개체에는 하나의 단일 mtDNA 유전자형 (동종 플라스마)이 있지만 병리학 적 조건에서 하나 이상의 유전자형 (헤테로 플라스마)이 공존합니다. 해로운 이질성 돌연변이는 OXPHOS를 방해하고4 세에 모든 장기에 영향을 줄 수있는 질병을 일으키는 중요한 임계 값을 극복해야합니다. OXPHOS의 이중 유전학은 상속을 지시합니다 : 상염색체 열성 또는 우성 및 nDNA 돌연변이에 대한 X 연결, mtDNA 돌연변이에 대한 모성, nDNA 및 mtDNA 모두에 대한 산발적 인 경우.
미토콘드리아 의학 시대가 시작될 때, King과 Attardi5의 획기적인 실험은 mtDNA가 완전히 고갈된 종양 세포주(rho0 cells)와 MD 환자의 미토콘드리아로부터 핵을 포함하는 하이브리드 세포를 만들어 MD를 담당하는 돌연변이의 기원을 이해하는 기초를 확립했습니다. 돌연변이가 핵 또는 미토콘드리아 게놈에 존재하는지 여부를 결정하는 것은 쉽지 않았습니다. 1989 년에 설명 된이 방법은 미 토콘드리아 의학 6,7,8,9 분야에서 일하는 여러 연구자들에 의해 사용되었습니다. 자세한 프로토콜은 최근10 번 게시되었지만 아직 비디오가 제작되지 않았습니다. NGS가 돌연변이가 어디에 있는지 정확하고 신속하게 식별 할 수있을 때 왜 그러한 프로토콜이 요즘 관련이 있어야합니까? 대답은 cybrid 생성이 여전히 새로운 mtDNA 돌연변이의 병원성 역할을 이해하고, 이종 형질의 비율을 질병의 중증도와 상관 관계시키고, 환자의 자가성 핵 배경의 기여가 결여되어있는 균질 핵 시스템에서 생화학 적 조사를 수행하는 최첨단 프로토콜이라는 것입니다11, 12,13년.
이 프로토콜은 35mm 페트리 접시에서 자란 합류성 환자 유래 섬유아세포로부터 세포플라스트를 얻는 방법을 기술한다. 시토칼라신 B의 존재하에 접시를 원심분리하면 enucleated cytoplasts의 분리가 가능하며, 이는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)의 존재하에 rho0 세포와 융합됩니다. 생성 된 cybrids는 클론이 발생할 때까지 선택적 배지에서 배양됩니다. 대표적인 결과 섹션은 mtDNA가 공여체 환자의 섬유아세포의 그것과 동일하고 nDNA가 종양 rho0 세포주의 핵 DNA와 동일하다는 것을 증명하기 위해 생성된 사이브라이드의 분자 특성화의 예를 보여준다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>5-Bromo-2&#39;-Deoxyuridine</td>
			<td>Sigma-Aldrich (Merck)</td>
			<td>B5002-500MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6 well Plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well Plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3596</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood and Cell Culture DNA extraction kit</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>13323</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>Avanti J-25</td>
			<td>7,200 rcf, 37 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge bottles, 250 mL</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>356011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytochalasin B from Drechslera dematioidea</td>
			<td>Sigma-Aldrich (Merck)</td>
			<td>C2743-200UL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialyzed FBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>26400-036 100mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM High Glucose (w/o L-Glutamine W/Sodium Pyruvate)</td>
			<td>EuroClone</td>
			<td>ECB7501L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline - PBS (w/o Calcium w/o Magnesium)</td>
			<td>EuroClone</td>
			<td>ECB4004L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol Absolute Anhydrous</td>
			<td>Carlo Erba</td>
			<td>414601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FetalClone III (Bovine Serum Product)</td>
			<td>Cytiva - HyClone Laboratories</td>
			<td>SH30109.03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass pasteur pipettes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>M4150NO250SP4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted Research Microscope For Live Cell Microscopy</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>ECLIPSE TE200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>JA-14 Fixed-Angle Aluminum Rotor</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>339247</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laboratory autoclave Vapormatic 770</td>
			<td>Labotech</td>
			<td>29960014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine 200 mM (100x)</td>
			<td>EuroClone</td>
			<td>ECB 3000D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minimum Essential Medium MEM</td>
			<td>Euroclone</td>
			<td>ECB2071L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MycoAlert Mycoplasma Detection Kit</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>LT07-318</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PEG (Polyethylene glicol solution)</td>
			<td>Sigma-Aldrich (Merck)</td>
			<td>P7181-5X5ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin (solution 100x)</td>
			<td>EuroClone</td>
			<td>ECB3001D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primo TC Dishes 100 mm</td>
			<td>EuroClone</td>
			<td>ET2100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primo TC Dishes 35 mm</td>
			<td>EuroClone</td>
			<td>ET2035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Pyruvate 100 mM</td>
			<td>EuroClone</td>
			<td>ECM0542D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin 2.5% in HBSS</td>
			<td>EuroClone</td>
			<td>ECB3051D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uridine</td>
			<td>Sigma-Aldrich (Merck)</td>
			<td>U3003-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an in vitro approach to study mitochondrial dysfunction: a cybrid model

산화적 인산화(OXPHOS)를 수행하는 미토콘드리아 호흡 사슬 복합체의 결핍은 인간 미토콘드리아 장애의 생화학적 마커이다. 유전 적 관점에서 볼 때, OXPHOS는 핵 DNA (nDNA)와 미토콘드리아 DNA (mtDNA)의 두 가지 별개의 유전 시스템의 보완으로 인해 발생하기 때문에 독특한 예를 나타냅니다. 따라서, OXPHOS 결함은 핵 및 미토콘드리아 코딩된 유전자에 영향을 미치는 돌연변이에 기인할 수 있다.
1989년에 발표된 King과 Attardi의 획기적인 연구는 mtDNA가 고갈된 인간 세포주(rho0)가 외인성 미토콘드리아에 의해 재채워져 소위 "트랜스미토콘드리아 사이브리드"를 얻을 수 있음을 보여주었다. 미토콘드리아 장애 (MDs) 환자로부터 유래 된 미토콘드리아와 rho0 세포의 핵을 포함하는 이들 사이브리드 덕분에 결함이 mtDNA- 또는 nDNA와 관련이 있는지 여부를 확인할 수 있습니다. 이 사이브리드는 또한 돌연변이의 병원성을 검증하고 생화학 적 수준에서 그 영향을 연구하는 강력한 도구입니다. 이 백서에서는 cybrid 생성, 선택 및 특성화를 설명하는 자세한 프로토콜을 제공합니다.

사이브리드를 생성하려면 3 일간의 실험실 작업과 선택 기간 (~ 2 주)과 클론 성장을위한 추가 1-2 주가 필요합니다. 중요한 단계는 세포 플라스트의 품질과 선택 기간입니다. 사이브리드의 형태학은 rho 0 공여체 세포의 형태와 유사합니다. 사이브리드에서 정확한 mtDNA 및 nDNA의 할당은 세포의 동일성을 확인하기 위해 필수적이다. 그림 2에 예가 나와 있습니다. 이 경우,...

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An In Vitro Approach to Study Mitochondrial Dysfunction: A Cybrid Model

경미토콘드리아 사이브리드는 미토콘드리아 장애에 의해 영향을 받는 환자로부터 유래된 세포플라스트(enucleated cells)와 미토콘드리아 DNA(mtDNA)-고갈 세포(rho0 cells)를 융합시켜 얻은 하이브리드 세포이다. 그들은 질병의 핵 또는 미토콘드리아 기원의 결정, 생화학 적 활성의 평가 및 mtDNA 관련 변이체의 병원성 역할의 확인을 허용합니다.

미토콘드리아 기능 장애를 연구하기위한 체외 접근법 : Cybrid 모델

Deficiency of the mitochondrial respiratory chain complexes that carry out oxidative phosphorylation (OXPHOS) is the biochemical marker of human ...

사이버 생성은 여전히 새로운 미토콘드리아 DNA 돌연변이의 병원성 역할을 이해하고 아트리플라스마의 비율을 질병의 중증도와 연관시키는 최첨단 프로토콜입니다. 이 기술은 환자의 핵 배경의 기여가 결여되어있는 균질 한 핵 시스템에서 생화학 적 조사를 수행 할 수있게합니다. 이 기술은 미토콘드리아 DNA의 돌연변이의 병원성을 검증 할 수 있습니다.생화학 적 수준에서 그 영향을 연구 할 수있게합니다 칼슘과 마그네슘이없는 1X PBS 두 밀리리터를 사용하여 섬유 아세포가 들어있는 35 밀리미터 접시를 두 번 씻으십시오. 70 % 에탄올로 접시의 바깥 표면을 닦고 알코올이 증발 할 때까지 기다리십시오. 접시에서 뚜껑을 제거하고 병에서 나사 캡을 제거하십시오.뚜껑이 없는 각 접시를 거꾸로 뒤집어 놓고 각 250밀리리터 원심분리기 병의 바닥에 놓습니다. 천천히 각 병에 32 밀리리터의 핵 생성 배지를 첨가하여 배지가 접시에 들어가 세포와 접촉하도록하십시오. 긴 유리 목초지 피펫을 사용하여 접시에서 거품을 제거하고 번젠 불꽃으로 팁을 휘어줍니다.나사 캡으로 각 병을 닫고 원심 분리기로 옮깁니다. 섭씨 37도에서 20분 동안 원심분리하고 8, 000 x G.A.Aspirate에서 배지를 병에서 흡인하고 버린다. 이전에 70 % 에탄올을 뿌린 멸균 거즈에 병을 뒤집어 접시를 제거하십시오.70 % 에탄올로 접시와 뚜껑의 바깥 표면을 닦고 에탄올이 증발 한 후 접시를 닫으십시오. 진행하기 전에 살아있는 세포에 대한 반전 현미경을 사용하여 세포플라스트 형성을 점검한다. 시토칼라신에 의해 유도된 핵의 압출로 인해 매우 길쭉한 섬유아세포를 찾으십시오.각 35 밀리미터 접시에 1, 000, 143 행 제로 셀을 추가하십시오. 5%FBS로 보충된 두 밀리리터의 배양 배지에 재현탁하였다. 가습 된 이산화탄소 인큐베이터에 3 시간 동안 접시를 두어 유령에 143 줄 제로 셀을 정착시킵니다.세 시간의 인큐베이션 후, 흡인하고 배지를 버린다. 부착성 세포를 혈청 또는 MEM이 없는 DMEM 고 글루코스 배지 두 밀리리터로 두 번 세척한 다음, 흡인물로 배지를 폐기한다. 500 마이크로리터의 폴리에틸렌 글리콜 용액을 세포에 첨가하고 정확히 1분 동안 배양한다.흡인물은 폴리에틸렌글리콜 용액을 버린다. 혈청 없이 또는 MEM으로 두 밀리리터의 DMEM 고 글루코스로 세포를 세 번 세척하십시오. 두 밀리리터의 융합 배지를 첨가하고, 5% 이산화탄소로 섭씨 37도의 인큐베이터에서 하룻밤 동안 배양한다.나머지 배양 접시에 세포를 트립신화하여 이를 세어 하나 이상의 페트리 접시에 시드하고 클론이 나타날 때까지 보충된 배양물에 접시 당 50 내지 100개의 세포를 첨가한다. 그런 다음 며칠 동안 자라게하십시오. 스테레오 현미경을 사용하여 복제 실린더 또는 피펫 팁이있는 Petri 접시에서 클론을 집어 들으십시오.서로 다른 클론을 풀링하는 것을 피하고 200 마이크로 리터의 보충 된 배양 배지를 포함하는 각 웰 플레이트 인 96 웰 플레이트로 옮기십시오. 사이브리드는 미토콘드리아 근병증, 뇌병증 젖산증, 및 뇌졸중 유사 에피소드와 관련된 가장 흔한 미토콘드리아 DNA 돌연변이 중 하나인 헤테로플라스마 M2343A2G를 운반하는 환자로부터 유래된 섬유아세포로부터 출발하여 생성되었다. 가변 탠덤 반복의 분석은 사이버 DNA가 환자의 사이버 DNA를 143 B 게놈으로 대체하는 것을 확인하는 행 제로 세포와 동일하다는 것을 보여주었다.제한 단편 길이 다형성, 또는 시퀀싱 분석은 미토콘드리아 DNA 돌연변이의 존재 및 헤테로플라스마 백분율을 평가하는데 사용될 수 있다. 이 프로토콜을 시도 할 때 핵과 미토콘드리아 DNA의 정확한 유전 자산뿐만 아니라 재 채워진 사이브리드의 미토콘드리아 DNA 양을 확인하는 것이 중요합니다.

Research

JoVE Journal

Genetics

An In Vitro Approach to Study Mitochondrial Dysfunction: A Cybrid Model

Laser Microirradiation to Study In Vivo Cellular Responses to Simple and Complex DNA Damage

Laser Microirradiation to Study In Vivo Cellular Responses to Simple and Complex DNA Damage

간단 하 고 복잡 한 DNA 손상에 세포질 응답 Vivo에서 공부 레이저 Microirradiation

DNA damage induces specific signaling and repair responses in the cell, which is critical for protection of genome integrity. Laser microirradiation ...

연구

유전학

The Nematode Caenorhabditis Elegans - A Versatile In Vivo Model to Study Host-microbe Interactions

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선 충 꼬마 선 충-모델을 다양 한 비보에 호스트-미생물 상호작용 연구

We demonstrate a method using Caenorhabditis elegans as a model host to study microbial interaction. Microbes are introduced via the diet making the ...

Profiling DNA Replication Timing Using Zebrafish as an In Vivo Model System

Profiling DNA Replication Timing Using Zebrafish as an In Vivo Model System

DNA 복제 타이밍 Zebrafish Vivo에서 모델 시스템으로 사용 하 여 프로 파일링

DNA replication timing is an important cellular characteristic, exhibiting significant relationships with chromatin structure, transcription, and DNA ...

Simultaneous Video-EEG-ECG Monitoring to Identify Neurocardiac Dysfunction in Mouse Models of Epilepsy

동시 비디오-뇌 파-ECG 모니터링 Neurocardiac 부전 간 질 마우스 모델에서을 식별 하

In epilepsy, seizures can evoke cardiac rhythm disturbances such as heart rate changes, conduction blocks, asystoles, and arrhythmias, which can ...

Genome-wide Surveillance of Transcription Errors in Eukaryotic Organisms

진 핵 생물의 전사 오류의 게놈 넓은 감시

Accurate transcription is required for the faithful expression of genetic information. Surprisingly though, little is known about the mechanisms that ...

The Replica Set Method: A High-throughput Approach to Quantitatively Measure Caenorhabditis elegans Lifespan

The Replica Set Method: A High-throughput Approach to Quantitatively Measure Caenorhabditis elegans Lifespan

복제 설정된 방법: 양적 측정 꼬마 선 충 수명에 접근 높은 처리량

The Replica Set method is an approach to quantitatively measure lifespan or survival of Caenorhabditis elegans nematodes in a high-throughput manner, thus ...

High-throughput Identification of Gene Regulatory Sequences Using Next-generation Sequencing of Circular Chromosome Conformation Capture (4C-seq)

High-throughput Identification of Gene Regulatory Sequences Using Next-generation Sequencing of Circular Chromosome Conformation Capture 4C-seq

차세대 시퀀싱의 원형 염색체 구조를 사용 하 여 유전자 규제 시퀀스의 높은 처리량 Id (4 C-seq)를 캡처

The identification of regulatory elements for a given target gene poses a significant technical challenge owing to the variability in the positioning and ...

Using In Vitro and In-cell SHAPE to Investigate Small Molecule Induced Pre-mRNA Structural Changes

작은 분자 조사를 시험관 및 셀 모양을 사용 하 여 사전 mRNA 구조 변화 유도

In the process of drug development of RNA-targeting small molecules, elucidating the structural changes upon their interactions with target RNA sequences ...

A Fluorescence-based Method to Study Bacterial Gene Regulation in Infected Tissues

감염 된 조직에서 세균 유전자 규칙을 공부 하는 형광 기반 방법

Bacterial virulence genes are often regulated at the transcriptional level by multiple factors that respond to different environmental signals. Some ...

The Use of Mouse Mammary Tumor Cells in an In Vitro Invasion Assay as a Measure of Oncogenic Cell Behavior

종양 발생 세포 행동의 척도로 시험관 내 침략 분석에서 마우스 유방 종양 세포의 사용

The in vitro invasion assay uses a protein-rich matrix in a Boyden chamber to measure the ability of cultured cells to pass through the matrix and a ...