Name: mechanical conflict-avoidance assay to measure pain behavior in mice
Uploaded: 2022-02-18T14:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mechanical Conflict-Avoidance Assay to Measure Pain Behavior in Mice at JoVE.com

يتم دعم جنرال موتورز من قبل زمالة الدراسات العليا NDSEG. يتم دعم VLT من قبل #GM137906 منحة NIGMS NIGMS ومؤسسة ريتا ألين. يتم دعم AJS من خلال منح وزارة الدفاع W81XWH-20-1-0277 و W81XWH-21-1-0197 ومؤسسة ريتا ألين. نحن ممتنون للدكتور أليكساي كرافيتز في كلية الطب بجامعة واشنطن لتصميم وإتاحة ملفات الطابعة ثلاثية الأبعاد مجانا لأرضية الغرفة 2 ولوحة التحقيق.

تمت الموافقة على جميع التجارب التي تنطوي على استخدام الفئران والإجراءات المتبعة فيها من قبل اللجان المؤسسية لرعاية واستخدام الحيوانات في مركز إم دي أندرسون للسرطان وجامعة ستانفورد ، بما يتفق تماما مع دليل المعاهد الوطنية للصحة لرعاية واستخدام المختبر.
1. بناء MCA</str...

<ol>
	<li>Hargreaves, K., Dubner, R., Brown, F., Flores, C., Joris, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+and+sensitive+method+for+measuring+thermal+nociception+in+cutaneous+hyperalgesia.">A new and sensitive method for measuring thermal nociception in cutaneous hyperalgesia.</a> Pain. 32 (1), 77-88 (1988).</li><li>Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assessment+of+tactile+allodynia+in+the+rat+paw.">Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw.</a> Journal of Neuroscience Methods. 53 (1), 55-63 (1994).</li><li>Sheahan, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+and+nerve+injury+minimally+affect+mouse+voluntary+behaviors+proposed+as+indicators+of+pain.">Inflammation and nerve injury minimally affect mouse voluntary behaviors proposed as indicators of pain.</a> Neurobiology of Pain. 2, 1-12 (2017).</li><li>Wodarski, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-centre+replication+of+suppressed+burrowing+behaviour+as+an+ethologically+relevant+pain+outcome+measure+in+the+rat:+a+prospective+multicentre+study.">Cross-centre replication of suppressed burrowing behaviour as an ethologically relevant pain outcome measure in the rat: a prospective multicentre study.</a> Pain. 157 (10), 2350-2365 (2016).</li><li>King, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unmasking+the+tonic-aversive+state+in+neuropathic+pain.">Unmasking the tonic-aversive state in neuropathic pain.</a> Nature Neuroscience. 12 (11), 1364-1366 (2009).</li><li>Harte, S. E., Meyers, J. B., Donahue, R. R., Taylor, B. K., Morrow, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+Conflict+System:+A+Novel+Operant+Method+for+the+Assessment+of+Nociceptive+Behavior.">Mechanical Conflict System: A Novel Operant Method for the Assessment of Nociceptive Behavior.</a> PLoS One. 11 (2), 0150164 (2016).</li><li>Pahng, A. R., Edwards, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+Pain+Avoidance-Like+Behavior+in+Drug-Dependent+Rats.">Measuring Pain Avoidance-Like Behavior in Drug-Dependent Rats.</a> Current Protocols in Neuroscience. 85 (1), 53 (2018).</li><li>Odem, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sham+surgeries+for+central+and+peripheral+neural+injuries+persistently+enhance+pain-avoidance+behavior+as+revealed+by+an+operant+conflict+test.">Sham surgeries for central and peripheral neural injuries persistently enhance pain-avoidance behavior as revealed by an operant conflict test.</a> Pain. 160 (11), 2440-2455 (2019).</li><li>LaBuda, C. J., Fuchs, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+behavioral+test+paradigm+to+measure+the+aversive+quality+of+inflammatory+and+neuropathic+pain+in+rats.">A behavioral test paradigm to measure the aversive quality of inflammatory and neuropathic pain in rats.</a> Experimental Neurology. 163 (2), 490-494 (2000).</li><li>LaBuda, C. J., Fuchs, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphine+and+gabapentin+decrease+mechanical+hyperalgesia+and+escape/avoidance+behavior+in+a+rat+model+of+neuropathic+pain.">Morphine and gabapentin decrease mechanical hyperalgesia and escape/avoidance behavior in a rat model of neuropathic pain.</a> Neuroscience Letters. 290 (2), 137-140 (2000).</li><li>Vichaya, E. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motivational+changes+that+develop+in+a+mouse+model+of+inflammation-induced+depression+are+independent+of+indoleamine+2,3+dioxygenase.">Motivational changes that develop in a mouse model of inflammation-induced depression are independent of indoleamine 2,3 dioxygenase.</a> Neuropsychopharmacology. 44 (2), 364-371 (2019).</li><li>Hasco&#235;t, M., Bourin, M., Nic Dhonnchadha, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mouse+light-dark+paradigm:+a+review.">The mouse light-dark paradigm: a review.</a> Progress in Neuropsychopharmacology &amp; Biological Psychiatry. 25 (1), 141-166 (2001).</li><li>Shepherd, A. J., Mohapatra, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+validation+of+voluntary+gait+and+mechanical+sensitivity+assays+associated+with+inflammatory+and+neuropathic+pain+in+mice.">Pharmacological validation of voluntary gait and mechanical sensitivity assays associated with inflammatory and neuropathic pain in mice.</a> Neuropharmacology. 130, 18-29 (2018).</li><li>Huck, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+Contribution+of+Myeloid-Lineage+TLR4+to+the+Transition+to+Chronic+Pain:+A+Focus+on+Sex+Differences.">Temporal Contribution of Myeloid-Lineage TLR4 to the Transition to Chronic Pain: A Focus on Sex Differences.</a> Journal of Neuroscience. 41 (19), 4349-4365 (2021).</li><li>Pitzer, C., La Porta, C., Treede, R. D., Tappe-Theodor, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+and+neuropathic+pain+conditions+do+not+primarily+evoke+anxiety-like+behaviours+in+C57BL/6+mice.">Inflammatory and neuropathic pain conditions do not primarily evoke anxiety-like behaviours in C57BL/6 mice.</a> European Journal of Pain. 23 (2), 285-306 (2019).</li><li>Sieberg, C. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuropathic+pain+drives+anxiety+behavior+in+mice,+results+consistent+with+anxiety+levels+in+diabetic+neuropathy+patients.">Neuropathic pain drives anxiety behavior in mice, results consistent with anxiety levels in diabetic neuropathy patients.</a> Pain Reports. 3 (3), 651 (2018).</li><li>Meuwissen, K. P. V., van Beek, M., Joosten, E. A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Burst+and+Tonic+Spinal+Cord+Stimulation+in+the+Mechanical+Conflict-Avoidance+System:+Cognitive-Motivational+Aspects.">Burst and Tonic Spinal Cord Stimulation in the Mechanical Conflict-Avoidance System: Cognitive-Motivational Aspects.</a> Neuromodulation. 23 (5), 605-612 (2020).</li></ol>

كما هو الحال مع جميع الاختبارات السلوكية ، فإن التعامل السليم والعشوائية والعمى عن علاج الحيوانات أمر ضروري طوال الوقت. بالنظر إلى المدخلات متعددة العوامل في السلوكيات المعقدة وصنع القرار ، من الضروري التعامل مع الحيوانات وتعويدها واختبارها بأكبر قدر ممكن من الاتساق مع تقليل الضيق. يجب ?...

الألم هو تجربة معقدة مع المكونات الحسية والعاطفية. يعد انخفاض عتبة إدراك الألم وفرط الحساسية للمحفزات الحرارية و / أو الميكانيكية من السمات الرئيسية لهذه التجربة ، والتي يمكن أن تلتقطها اختبارات سلوك الألم التي يستحدثها التحفيز (مثل اختبار هارجريفز للحساسية الحرارية واختبار فون فراي للحساسية الميكانيكية) 1،2. على الرغم من أن مثل هذه الاختبارات تعطي نتائج قوية وقابلة للتكرار ، إلا أنها محدودة بسبب اعتمادها على الانسحاب الانعكاسي من الحافز الضار المتصور. وقد أثار هذا تساؤلات حول الاعتماد المستمر لأبحاث الألم على هذه الاختبارات وحدها. تحقيقا لهذه الغاية ، كان باحثو الألم لعدة سنوات يستكشفون اختبارات سلوكية بديلة / تكميلية لاستخدامها في نماذج آلام القوارض في محاولة لالتقاط المزيد من المكونات العاطفية و / أو التحفيزية للألم. يتم تنفيذ هذه التدابير غير المستحضرة أو الطوعية أو غير الانعكاسية (على سبيل المثال ، تشغيل العجلات ، ونشاط الحفر ، وتفضيل المكان المشروط3،4،5) في محاولة لتحسين قابلية ترجمة أبحاث الألم قبل السريرية.
تم وصف اختبار تجنب الصراع الميكانيكي (MCA) في الأصل من قبل Harte et al. في عام 20166 ، ويستخدم في الغالب في الفئران 7,8 ، ويمثل تعديلا لنهج سابق - نموذج الهروب وتجنب المكان. في هذا النهج ، يتم إجراء حافز ضار للمخلب الخلفي في غرفة مرغوب فيها (مظلمة) لدفع السلوك الهادف للحيوان للهروب / تجنب مثل هذا التحفيز 9,10. بدلا من الاعتماد على التحفيز اليدوي الضار للمخلب الخلفي من قبل مراقب ، فإن فحص MCA يجبر الفئران على التفاوض على حافز ضار محتمل للهروب من بيئة مترددة والوصول إلى الغرفة المظلمة. ينشأ الصراع / التجنب الذي يعطي الفحص اسمه من هذين الدوافع المتنافسة: الهروب من المناطق المضاءة بشكل ساطع وتجنب التحفيز الضار للمخالب. يشارك فحص MCA أيضا ميزات مع اختبار تفضيل المكان المشروط ، حيث يؤدي اقتران تخفيف الألم بالإشارات البيئية إلى تغييرات في السلوك تعكس تفضيلا للسياق المخفف للألم / المجزي11.
بشكل أساسي ، تشترك جميع هذه الفحوصات في نهج مماثل: استخدام تحول في تفضيل لبيئة مترددة على أخرى كمؤشر على حالته العاطفية / التحفيزية. فحص MCA هو نموذج من 3 غرف يتكون من غرفة مضاءة بشكل ساطع تليها غرفة وسطى مظلمة مع مجسات ارتفاع قابلة للتعديل وغرفة ثالثة مظلمة دون أي محفزات مترددة. عادة ما يكون الدافع وراء الفأر غير المصاب هو الهروب إلى غرفة مظلمة ، نظرا للنفور الفطري للقوارض من الضوء الساطع12. في هذا المثال ، يتغلب الدافع الطبيعي للهروب من بيئة مضاءة بشكل ساطع على عدم الرغبة في مواجهة تحفيز المخلب الخلفي (مجسات الارتفاع القابلة للتعديل) ، والذي يحدث حصريا في البيئة المظلمة. في المقابل ، قد يختار الفأر الذي يعاني من الألم (بسبب الالتهاب أو الاعتلال العصبي ، على سبيل المثال) قضاء المزيد من الوقت في البيئة المضاءة بشكل ساطع ، حيث يوجد دافع لتجنب التجربة اللمسية غير السارة للمجسات الميكانيكية في إعداد فرط الحساسية اللمسية المستمر.
توضح هذه المقالة نسخة معدلة من فحص MCA. لقد قمنا بتكييف الطريقة الأصلية (التي تم إجراؤها في الفئران6) لاستخدامها في الفئران. كما قمنا بتخفيض عدد ارتفاعات المسبار التي تم اختبارها من ستة إلى ثلاثة (0 و 2 و 5 مم فوق ارتفاع الأرض) من أجل تبسيط الحصول على البيانات. تم اختبار هذا النهج عبر نماذج الألم المتعددة ، وتم التحقق من صحته باستخدام المسكنات المعروفة ، مما يشير إلى أن فرط الحساسية للألم و / أو التغيرات العاطفية والتحفيزية المرتبطة به هي التي تقود هذه التغييرات في السلوك. هذا النهج سريع نسبيا في السلوك وقابل للتكيف عند مقارنته بالتدابير غير الانعكاسية الأخرى ، والتي يمكن أن تستغرق عدة أيام من التعود والتدريب 1,2. بالتنسيق مع مقاييس الألم الأخرى ، يمكن أن تولد MCA رؤى قيمة في الجوانب العاطفية والتحفيزية للألم.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>32.8ft 3000K-6000K Tunable White LED Strip Lights, Dimmable Super Bright LED Tape Lights with 600 SMD 2835 LEDs</td>
			<td>Lepro</td>
			<td>SKU: 410087-DWW-US</td>
			<td>For lighting chamber 1. https://www.lepro.com/32ft-dimmable-tunable-white-led-strip-lights.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3D printed &#39;spike bed&#39; and &#39;chamber 2 floor&#39;</td>
			<td>Shapeways</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Optional, for mechanical probes as an alternative to blunted map pins.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To clean MCA between mice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acryl-Hinge 2</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>N/A</td>
			<td>for attaching chamber lids to rear walls. https://www.tapplastics.com/product/plastics/handles_hinges_latches/acryl_hinge_2/122</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemcast Cast Acrylic Sheet, Clear</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>N/A</td>
			<td>3mm thick. For front wall of chamber 1. https://www.tapplastics.com/product/plastics/cut_to_size_plastic/acrylic_sheets_cast_clear/510</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemcast Cast Transparent Colored Acrylic, Transparent Dark Red - 50%</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>N/A</td>
			<td>3mm thick. 50% light transmission. For walls and lids of chambers 2 and 3. https://www.tapplastics.com/product/plastics/cut_to_size_plastic/acrylic_sheets_transparent_colors/519</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemcast Translucent &#38; Opaque Colored Cast Acrylic, Sign Opaque White - 0.1%</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>N/A</td>
			<td>3mm thick. For side walls and lid of chamber 1. https://www.tapplastics.com/product/plastics/cut_to_size_plastic/acrylic_sheets_color/341</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disinfectant (e.g. Quatricide)</td>
			<td>Pharmacal Research Laboratories, Inc.</td>
			<td>65020F</td>
			<td>To disinfect MCA at the end of a testing session.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dry-erase markers and board</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To add experimental info to the beginning of video footage.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Map pins</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Optional, for mechanical probes. Use sandpaper to blunt sharp points before use. Can be used in place of 3D-printed parts.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paper towels</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To clean/disinfect MCA.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SCIGRIP Weld-On #3 Acrylic Cement</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For assembling acrylic sheets into chambers and affixing hinges. https://www.tapplastics.com/product/repair_products/plastic_adhesives/weld_on_3_cement/131</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stopwatch</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To record escape latencies/dwell times in real-time or from recorded video.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Timer</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To ensure LED turn-on, barrier removal and test completion are timed consistently.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Video camera</td>
			<td>Various</td>
			<td>HDRCX405 Handycam Camcorder</td>
			<td>To record mouse behavior in the MCA device. Can be substituted with any consumer-grade video camera capable of 1080p resolution.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tripod</td>
			<td>Famall</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Any tripod that can hold the camera at bench height for recording MCA footage is acceptable.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mechanical conflict-avoidance assay to measure pain behavior in mice

يتكون الألم من أبعاد حسية (مسببة للألم) وعاطفية (غير سارة). في النماذج قبل السريرية ، تم تقييم الألم تقليديا باستخدام اختبارات انعكاسية تسمح بالاستدلالات المتعلقة بالمكون المسبب للألم ولكنها توفر القليل من المعلومات حول المكون العاطفي أو التحفيزي للألم. وبالتالي فإن تطوير الاختبارات التي تلتقط مكونات الألم هذه مهم من الناحية الترجمية. وبالتالي ، يحتاج الباحثون إلى استخدام الفحوصات السلوكية غير الانعكاسية لدراسة إدراك الألم على هذا المستوى. تجنب الصراع الميكانيكي (MCA) هو اختبار سلوك طوعي غير انعكاسي راسخ ، لدراسة الاستجابات التحفيزية لحافز ميكانيكي ضار في نموذج من 3 غرف. يستخدم التغيير في تفضيل موقع الفأر ، عندما يواجه محفزات ضارة منافسة ، لاستنتاج عدم الرضا المتصور للضوء الساطع مقابل التحفيز اللمسي للمخالب. يحدد هذا البروتوكول نسخة معدلة من فحص MCA الذي يمكن للباحثين استخدامه لفهم الاستجابات العاطفية التحفيزية في مجموعة متنوعة من نماذج آلام الفئران. على الرغم من عدم وصفها على وجه التحديد هنا ، إلا أن بيانات MCA الخاصة بنا تستخدم مساعد فرويند الكامل داخل الأخمص (CFA) ، وإصابة الأعصاب المنقذة (SNI) ، ونموذج الكسر / الصب كنماذج ألم لتوضيح إجراء MCA.

تم استخدام فحص MCA بنجاح مع العديد من نماذج آلام الماوس المتميزة ميكانيكيا. ويبين الشكل 2 البيانات التي كان فيها مقياس النتيجة للاختيار يعبر نقطة الوسط في الغرفة 2 (الشكل 2 ألف). البيانات التي تم الحصول عليها باستخدام نقطة منتصف الطريق مقابل الهروب إلى الغرفة 3...

Watch this Scientific Journal Video about Mechanical Conflict-Avoidance Assay to Measure Pain Behavior in Mice at JoVE.com

Mechanical Conflict-Avoidance Assay to Measure Pain Behavior in Mice

يستخدم الفحص الميكانيكي لتجنب الصراع كقراءة غير انعكاسية لحساسية الألم لدى الفئران والتي يمكن استخدامها لفهم الاستجابات العاطفية التحفيزية بشكل أفضل في مجموعة متنوعة من نماذج آلام الفئران.

فحص ميكانيكي لتجنب الصراع لقياس سلوك الألم في الفئران

Pain comprises of both sensory (nociceptive) and affective (unpleasant) dimensions. In preclinical models, pain has traditionally been assessed using ...

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة حول الحالة الفعالة أو التحفيزية للحيوانات في ظل ظروف الألم المختلفة. إنها خطوة مهمة في تحسين ترجمة البحوث قبل السريرية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها سريعة نسبيا وسهلة الأداء ، ولكنها لا تزال تقيم الدوافع المعقدة التي تؤثر على السلوك المرتبط بالألم.ابدأ ببناء الجدران الجانبية والأرضية والسقف للغرفة الأولى باستخدام أكريليك أبيض غير شفاف بسمك ثلاثة ملليمترات. بالنسبة للجدار الأمامي المواجه ، استخدم أكريليك شفاف بسمك ثلاثة ملليمترات. قم بإرفاق غطاء الغرفة الأولى بمفصلة بحيث يمكن وضع الفئران بسهولة في الغرفة واستعادتها منها.ثم قم بتوصيل شريط الصمام الثنائي الباعث للضوء ذاتي اللصق بالسطح الداخلي للغطاء لتوفير إضاءة تبلغ حوالي 4،800 لوكس. حرك ورقة أكريليك معتمة داخل وخارج موضعها لإغلاق الحجرة الأولى عن بقية جهاز MCA. بعد ذلك ، قم ببناء غرفة غير مضاءة بطول 270 ملم ، غرفة اختبار MCA ، باستخدام الأكريليك الأحمر الداكن الشفاف من جميع الجوانب مع غطاء مفصلي في الأعلى.ثم ضع شبكة 13 × 31 بها ثقبان ملليمتريان على أرضية الغرفة يمكن من خلالها أن تبرز مجموعة من المجسات الحادة ذات الأطراف التي يبلغ قطرها 0.5 ملم. اضبط ارتفاع المجسات عن طريق وضع صفائح أكريليك إضافية أسفل صفيحة المسبار. باستخدام هذا النهج ، قم بتكوين الجهاز بارتفاعات مسبار صفر واثنين وخمسة ملليمترات.كبديل لدبابيس الخريطة المخففة أو المواد المماثلة ، استخدم ملفات الطابعة ثلاثية الأبعاد لطباعة أرضية الغرفة الثانية ولوحة المسبار بمادة قابلة للغسل ومتوافقة حيويا مثل بلاستيك النايلون 12. أخيرا ، قم ببناء غرفة مظلمة ثلاثة باستخدام الأكريليك الأحمر الداكن الشفاف من جميع الجوانب مع غطاء مفصلي مشابه للغرفتين الأولى والثانية. ضعه في الطرف الآخر من الغرفة الأولى ليكون بمثابة منطقة هروب مظلمة من المجسات الميكانيكية في الغرفة الثانية.قبل يوم واحد من جدولة الاختبار الأساسي ، تأقلم الفئران مع وحدة MCA لمدة 5 إلى 15 دقيقة مع زملائها في القفص لتسهيل الاستكشاف الاجتماعي للجهاز بأكمله. تأكد من إيقاف تشغيل مصابيح LED في الغرفة الأولى ، وإبقاء الحاجز بين الغرفتين الأولى والثانية مفتوحا وعدم بروز المجسات عبر أرضية الغرفة الثانية. بعد ذلك ، قم بإعداد كاميرا فيديو قادرة على تسجيل لقطات بدقة 1080 بكسل على حامل ثلاثي القوائم مع عرض جانبي لجهاز MCA بأكمله.اضبط مجال الرؤية بحيث يملأ MCA الصورة المسجلة. بمجرد بدء التسجيل ، أمسك بلوحة مسح جافة محمولة باليد في العرض الميداني للكاميرا لتسمية بداية الفيديو بمعلومات تعريف عن تشغيل اختبار الحيوان. بالنسبة للتشغيل الأول ، اضبط ارتفاع المسبار على الصفر وانقل الماوس ليتم اختباره من قفصه المنزلي إلى الحجرة الأولى مع وجود باب الحاجز في مكانه.ابدأ تشغيل مؤقت مرئي في اللقطات المسجلة. بعد 10 ثوان ، قم بتشغيل غرفة LED واحدة. بعد أن يكون الماوس في الغرفة المضاءة لمدة 20 ثانية ، اسحب الحاجز بين الغرفتين الأولى والثانية.راقب الحيوان لمدة دقيقتين وقم بقياس زمن الوصول أو أوقات الإقامة باستخدام ساعة توقيت أثناء استمرار الاختبار. سجل زمن الوصول إلى المدخل الأول إلى الغرفة الثانية ، والكمون للعبور أكثر من منتصف الطريق عبر الغرفة الثانية ، وإجمالي وقت الإقامة في الغرفة الثانية ، والكمون للوصول إلى الغرفة الثالثة ، وإجمالي وقت الإقامة في كل غرفة في غضون دقيقتين وتحويلها إلى نسب. بمجرد اكتمال الاختبار ، أعد الماوس إلى قفصه المنزلي.نظف غرف MCA ب 70٪ من الإيثانول واتركها تجف تماما. بعد تشغيل جميع الفئران في المجموعة مع ضبط ارتفاع المسبار على الصفر ، أدخل ورقة ثلاثة ملليمترات من الأكريليك أسفل الصفيحة الأساسية للمسبار الميكانيكي وكرر الجري بارتفاع مسبار يبلغ مليمترين. بعد تشغيل جميع الفئران مع ضبط ارتفاع المسبار على مليمترين ، أدخل ورقة أخرى من الأكريليك بثلاثة ملليمترات أسفل الصفيحة الأساسية للمسبار وكرر الجري بارتفاع مسبار يبلغ خمسة ملليمترات.قم بإجراء تنظيف نهائي باستخدام مطهر في نهاية جلسة الاختبار. في نموذج الألم الالتهابي الكامل الناجم عن المساعد من Freund ، لا يغير الحقن الملحي زمن انتقال الهروب مقارنة بخط الأساس. أظهرت الفئران التي تم حقنها بالمادة المساعدة زيادة كبيرة في زمن انتقال الهروب بعد أربعة أيام من الحقن ، ولكن فقط عندما تم رفع ارتفاع المسبار إلى خمسة ملليمترات.لم يلاحظ هذا الكمون المتزايد في الفئران التي تلقت كاربروفين قبل 90 دقيقة من بداية الاختبار. زاد نموذج إصابة الأعصاب المنقذ من آلام الأعصاب بشكل كبير من زمن الوصول للهروب مقابل خط الأساس عندما تم تعيين ارتفاع المسبار على خمسة ملليمترات. تم منع هذه الزيادة عن طريق إعطاء البوبرينورفين المسكن الأفيوني قبل 90 دقيقة من الاختبار.كما لوحظ زيادة زمن انتقال الهروب في الفئران التي لم تخضع لجولة أساسية من اختبار MCA قبل إصابة الأعصاب. تم منع زيادة زمن الهروب في الفئران المجنبة من إصابة الأعصاب عند خمسة ملليمترات عن طريق جابابنتين الذي تم إعطاؤه قبل 90 دقيقة من الاختبار. في نموذج الكسر أو الصب ، زاد زمن الوصول للهروب من الغرفة الأولى بشكل متناسب مع ارتفاع المسبار قبل الإصابة.وبعد الإصابة، ظل زمن الوصول دون تغيير عند صفر ملليمتر، ولكنه زاد بشكل كبير عند ارتفاع المسبار البالغ مليمترين وخمسة ملليمترات للذكور وارتفاع المسبار البالغ خمسة ملليمترات للإناث عند مقارنته بخط الأساس. أهم شيء يجب تذكره عند محاولة هذا الإجراء هو التأكد من أن جميع الفئران معتادة على جهاز MCA ، والحفاظ على التوزيع العشوائي السليم والعمى طوال فترة الدراسة. يمكن استخدام هذه الطريقة جنبا إلى جنب مع مقاييس أخرى لحساسية الألم بما في ذلك فون فراي أو تفضيل المكان الشرطي.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Methods to Assay Drosophila Behavior

Methods to Assay Drosophila Behavior

طرق الفحص ذبابة الفاكهة سلوك

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular ...

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

واحدة ذبابة الفحص لسلوك البحث عن الطعام في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video ...

Membrane Potential Dye Imaging of Ventromedial Hypothalamus Neurons From Adult Mice to Study Glucose Sensing

غشاء المحتملة صبغ التصوير من بطني إنسي المهاد الخلايا العصبية من الفئران الكبار لدراسة الجلوكوز الاستشعار

Studies of neuronal activity are often performed using neurons from rodents less than 2 months of age due to the technical difficulties associated with ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

طريقة بسيطة وغير مكلفة لتحديد الباردة الحساسية والتكيف في الفئران

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Assays to Detect UV-reflecting Structures and Determine their Importance in Mate Preference using the Sailfin Molly Poecilia latipinna

Assays to Detect UV-reflecting Structures and Determine their Importance in Mate Preference using the Sailfin Molly Poecilia latipinna

فحوصات لكشف الهياكل التي تعكس الأشعة فوق البنفسجية، وتحديد أهميتها في تفضيل ماتي باستخدام مولي شراعية الزعانف<em&gt; البكيللية latipinna</em

Many organisms use cues and signals beyond human sensitivity during social interactions. It is important to take into account how organisms perceive their ...

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

طريقة بسيطة لقياس التغيرات في السلوك المكافأة التماس طريق<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We ...

Assay to Measure Nucleocytoplasmic Transport in Real Time within Motor Neuron-like NSC-34 Cells

فحص لقياس نوكلوسيتوبلاسميك النقل في الوقت الحقيقي داخل موتور الخلايا العصبية مثل نسك-34 الخلايا

Nucleocytoplasmic transport refers to the import and export of large molecules from the cell nucleus. Recently, a number of studies have shown a ...

High-throughput Analysis of Locomotor Behavior in the Drosophila Island Assay

High-throughput Analysis of Locomotor Behavior in the Drosophila Island Assay

تحليل الفائق للسلوك الحركي في مقايسة الجزيرة المورفولوجية

Advances in next-generation sequencing technologies contribute to the identification of (candidate) disease genes for movement disorders and other ...

Optogenetic Entrainment of Hippocampal Theta Oscillations in Behaving Mice

أوبتوجينيتيك الرائعة للذبذبات ثيتا هيبوكامبال في التصرف الفئران

Extensive data on relationships of neural network oscillations to behavior and organization of neuronal discharge across brain regions call for new tools ...