Name: mechanical conflict-avoidance assay to measure pain behavior in mice
Uploaded: 2022-02-18T14:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mechanical Conflict-Avoidance Assay to Measure Pain Behavior in Mice at JoVE.com

GM støttes af et NDSEG Graduate Fellowship. VLT er støttet af NIH NIGMS grant #GM137906 og Rita Allen Foundation. AJS er støttet af Forsvarsministeriets bevillinger W81XWH-20-1-0277, W81XWH-21-1-0197 og Rita Allen Foundation. Vi er taknemmelige for Dr. Alexxai Kravitz ved Washington University School of Medicine for at designe og gøre 3D-printerfilerne til kammeret 2 etage og sondeplade frit tilgængelige.

Alle forsøg, der involverede brug af mus og de procedurer, der blev fulgt deri, blev godkendt af Institutional Animal Care and Use Committees of MD Anderson Cancer Center og Stanford University i nøje overensstemmelse med National Institutes of Health's Guide for the Care and Use of Laboratory Animals.
1. MCA-konstruktion
<ol><li>Byg kammer 1 med følgende dimensioner: 125 mm x 125 mm x 125 mm (bredde x dybde x højde) fra uigennemsigtig hvid 3 mm tyk akryl, der a...

<ol>
	<li>Hargreaves, K., Dubner, R., Brown, F., Flores, C., Joris, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+and+sensitive+method+for+measuring+thermal+nociception+in+cutaneous+hyperalgesia.">A new and sensitive method for measuring thermal nociception in cutaneous hyperalgesia.</a> Pain. 32 (1), 77-88 (1988).</li><li>Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assessment+of+tactile+allodynia+in+the+rat+paw.">Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw.</a> Journal of Neuroscience Methods. 53 (1), 55-63 (1994).</li><li>Sheahan, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+and+nerve+injury+minimally+affect+mouse+voluntary+behaviors+proposed+as+indicators+of+pain.">Inflammation and nerve injury minimally affect mouse voluntary behaviors proposed as indicators of pain.</a> Neurobiology of Pain. 2, 1-12 (2017).</li><li>Wodarski, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-centre+replication+of+suppressed+burrowing+behaviour+as+an+ethologically+relevant+pain+outcome+measure+in+the+rat:+a+prospective+multicentre+study.">Cross-centre replication of suppressed burrowing behaviour as an ethologically relevant pain outcome measure in the rat: a prospective multicentre study.</a> Pain. 157 (10), 2350-2365 (2016).</li><li>King, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unmasking+the+tonic-aversive+state+in+neuropathic+pain.">Unmasking the tonic-aversive state in neuropathic pain.</a> Nature Neuroscience. 12 (11), 1364-1366 (2009).</li><li>Harte, S. E., Meyers, J. B., Donahue, R. R., Taylor, B. K., Morrow, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+Conflict+System:+A+Novel+Operant+Method+for+the+Assessment+of+Nociceptive+Behavior.">Mechanical Conflict System: A Novel Operant Method for the Assessment of Nociceptive Behavior.</a> PLoS One. 11 (2), 0150164 (2016).</li><li>Pahng, A. R., Edwards, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+Pain+Avoidance-Like+Behavior+in+Drug-Dependent+Rats.">Measuring Pain Avoidance-Like Behavior in Drug-Dependent Rats.</a> Current Protocols in Neuroscience. 85 (1), 53 (2018).</li><li>Odem, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sham+surgeries+for+central+and+peripheral+neural+injuries+persistently+enhance+pain-avoidance+behavior+as+revealed+by+an+operant+conflict+test.">Sham surgeries for central and peripheral neural injuries persistently enhance pain-avoidance behavior as revealed by an operant conflict test.</a> Pain. 160 (11), 2440-2455 (2019).</li><li>LaBuda, C. J., Fuchs, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+behavioral+test+paradigm+to+measure+the+aversive+quality+of+inflammatory+and+neuropathic+pain+in+rats.">A behavioral test paradigm to measure the aversive quality of inflammatory and neuropathic pain in rats.</a> Experimental Neurology. 163 (2), 490-494 (2000).</li><li>LaBuda, C. J., Fuchs, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphine+and+gabapentin+decrease+mechanical+hyperalgesia+and+escape/avoidance+behavior+in+a+rat+model+of+neuropathic+pain.">Morphine and gabapentin decrease mechanical hyperalgesia and escape/avoidance behavior in a rat model of neuropathic pain.</a> Neuroscience Letters. 290 (2), 137-140 (2000).</li><li>Vichaya, E. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motivational+changes+that+develop+in+a+mouse+model+of+inflammation-induced+depression+are+independent+of+indoleamine+2,3+dioxygenase.">Motivational changes that develop in a mouse model of inflammation-induced depression are independent of indoleamine 2,3 dioxygenase.</a> Neuropsychopharmacology. 44 (2), 364-371 (2019).</li><li>Hasco&#235;t, M., Bourin, M., Nic Dhonnchadha, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mouse+light-dark+paradigm:+a+review.">The mouse light-dark paradigm: a review.</a> Progress in Neuropsychopharmacology &amp; Biological Psychiatry. 25 (1), 141-166 (2001).</li><li>Shepherd, A. J., Mohapatra, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+validation+of+voluntary+gait+and+mechanical+sensitivity+assays+associated+with+inflammatory+and+neuropathic+pain+in+mice.">Pharmacological validation of voluntary gait and mechanical sensitivity assays associated with inflammatory and neuropathic pain in mice.</a> Neuropharmacology. 130, 18-29 (2018).</li><li>Huck, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+Contribution+of+Myeloid-Lineage+TLR4+to+the+Transition+to+Chronic+Pain:+A+Focus+on+Sex+Differences.">Temporal Contribution of Myeloid-Lineage TLR4 to the Transition to Chronic Pain: A Focus on Sex Differences.</a> Journal of Neuroscience. 41 (19), 4349-4365 (2021).</li><li>Pitzer, C., La Porta, C., Treede, R. D., Tappe-Theodor, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+and+neuropathic+pain+conditions+do+not+primarily+evoke+anxiety-like+behaviours+in+C57BL/6+mice.">Inflammatory and neuropathic pain conditions do not primarily evoke anxiety-like behaviours in C57BL/6 mice.</a> European Journal of Pain. 23 (2), 285-306 (2019).</li><li>Sieberg, C. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuropathic+pain+drives+anxiety+behavior+in+mice,+results+consistent+with+anxiety+levels+in+diabetic+neuropathy+patients.">Neuropathic pain drives anxiety behavior in mice, results consistent with anxiety levels in diabetic neuropathy patients.</a> Pain Reports. 3 (3), 651 (2018).</li><li>Meuwissen, K. P. V., van Beek, M., Joosten, E. A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Burst+and+Tonic+Spinal+Cord+Stimulation+in+the+Mechanical+Conflict-Avoidance+System:+Cognitive-Motivational+Aspects.">Burst and Tonic Spinal Cord Stimulation in the Mechanical Conflict-Avoidance System: Cognitive-Motivational Aspects.</a> Neuromodulation. 23 (5), 605-612 (2020).</li></ol>

Som med alle adfærdsmæssige tests er korrekt håndtering, randomisering og blinding for behandling af dyr afgørende hele vejen igennem. I betragtning af de multifaktorielle input til kompleks adfærd og beslutningstagning er det bydende nødvendigt, at dyr håndteres, vænnes og testes så konsekvent som muligt, samtidig med at nød minimeres. Der skal også sørges for at gengive tidspunktet for museplacering i kammer 1, tænde LED-lysene og fjerne barrieren, da forskelle her kan påvirke efterfølgende adfærd. ...

Smerte er en kompleks oplevelse med sensoriske og affektive komponenter. En reduktion i tærsklen for smerteopfattelse og overfølsomhed over for termiske og / eller mekaniske stimuli er nøglefunktioner i denne oplevelse, som stimulus-fremkaldte smerteadfærdstest kan fange (som Hargreaves 'test af varmefølsomhed og von Frey-testen af mekanisk følsomhed)1,2. Selvom sådanne tests giver robuste og reproducerbare resultater, er de begrænset af deres afhængighed af refleksiv tilbagetrækning fra en opfattet skadelig stimulus. Dette har sat spørgsmålstegn ved en løbende afhængighed af smerteforskning på disse tests alene. Til det formål har smerteforskere i flere år undersøgt alternative / komplementære adfærdstest til brug i gnaversmertemodeller i et forsøg på at fange flere af de affektive og / eller motiverende komponenter i smerte. Disse ikke-fremkaldte, frivillige eller ikke-refleksive foranstaltninger (f.eks. Hjulløb, graveaktivitet, betinget stedpræference 3,4,5) implementeres i et forsøg på at forbedre oversætteligheden af præklinisk smerteforskning.
Det mekaniske konfliktundgåelsesassay (MCA) blev oprindeligt beskrevet af Harte et al. i 20166, bruges overvejende i rotter 7,8 og repræsenterer en ændring af en tidligere tilgang - stedet flugt-undgåelse paradigme. I denne tilgang udføres en skadelig stimulus af bagpoten i et ellers ønskeligt (mørkt) kammer for at drive dyrets målbevidste adfærd for at undslippe / undgå en sådan stimulering 9,10. I stedet for at stole på manuel skadelig stimulering af bagpoten af en observatør, tvinger MCA-analysen mus til at forhandle en potentielt skadelig stimulus for at undslippe et aversivt miljø og nå det mørke kammer. Konflikten / undgåelsen, der giver analysen sit navn, stammer fra disse to konkurrerende motivationer: undslippe stærkt oplyste områder og undgå skadelig stimulering af poterne. MCA-analysen deler også funktioner med betinget stedpræferencetest, hvor parring af smertelindring med miljømæssige signaler driver ændringer i adfærd, der afspejler en præference for den smertelindrende / givende kontekst11.
Grundlæggende set deler alle disse assays en lignende tilgang: Brug af et skift i et dyrs præference for et aversivt miljø frem for et andet som en indikator for deres affektive / motiverende tilstand. MCA-analysen er et 3-kammerparadigme bestående af et stærkt oplyst kammer efterfulgt af et mørkt mellemkammer med justerbare højdesonder og et mørkt tredje kammer uden aversive stimuli. En uskadt mus er typisk motiveret til at flygte til et mørkt kammer i betragtning af gnaveres medfødte modvilje mod stærkt lys12. I dette eksempel overvinder den naturlige motivation til at undslippe et stærkt oplyst miljø ulyst tilbøjeligheden til at støde på bagpotestimulering (de justerbare højdesonder), som udelukkende forekommer i det mørkede miljø. I modsætning hertil kan en mus, der oplever smerte (f.eks. På grund af betændelse eller neuropati) vælge at tilbringe mere tid i det stærkt oplyste miljø, da der er motivation til at undgå den ubehagelige taktile oplevelse af de mekaniske sonder i indstillingen af løbende taktil overfølsomhed.
I denne artikel beskrives en ændret version af MCA-analysen. Vi har tilpasset den oprindelige metode (som blev udført i rotter6) til brug i mus. Vi har også reduceret antallet af testede sondehøjder fra seks til tre (0, 2 og 5 mm over gulvhøjde) for at strømline dataindsamlingen. Denne tilgang er blevet testet på tværs af flere smertemodeller og valideret med kendte analgetika, hvilket indikerer, at smerteoverfølsomhed og / eller de tilhørende affektive og motiverende ændringer driver disse ændringer i adfærd. Denne tilgang er relativt hurtig at gennemføre og tilpasningsdygtig sammenlignet med andre ikke-refleksive foranstaltninger, som kan tage mange dages tilvænning og træning 1,2. I samspil med andre målinger af smerte kan MCA generere værdifuld indsigt i de affektive og motiverende aspekter af smerte.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>32.8ft 3000K-6000K Tunable White LED Strip Lights, Dimmable Super Bright LED Tape Lights with 600 SMD 2835 LEDs</td>
			<td>Lepro</td>
			<td>SKU: 410087-DWW-US</td>
			<td>For lighting chamber 1. https://www.lepro.com/32ft-dimmable-tunable-white-led-strip-lights.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3D printed &#39;spike bed&#39; and &#39;chamber 2 floor&#39;</td>
			<td>Shapeways</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Optional, for mechanical probes as an alternative to blunted map pins.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To clean MCA between mice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acryl-Hinge 2</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>N/A</td>
			<td>for attaching chamber lids to rear walls. https://www.tapplastics.com/product/plastics/handles_hinges_latches/acryl_hinge_2/122</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemcast Cast Acrylic Sheet, Clear</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>N/A</td>
			<td>3mm thick. For front wall of chamber 1. https://www.tapplastics.com/product/plastics/cut_to_size_plastic/acrylic_sheets_cast_clear/510</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemcast Cast Transparent Colored Acrylic, Transparent Dark Red - 50%</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>N/A</td>
			<td>3mm thick. 50% light transmission. For walls and lids of chambers 2 and 3. https://www.tapplastics.com/product/plastics/cut_to_size_plastic/acrylic_sheets_transparent_colors/519</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemcast Translucent &#38; Opaque Colored Cast Acrylic, Sign Opaque White - 0.1%</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>N/A</td>
			<td>3mm thick. For side walls and lid of chamber 1. https://www.tapplastics.com/product/plastics/cut_to_size_plastic/acrylic_sheets_color/341</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disinfectant (e.g. Quatricide)</td>
			<td>Pharmacal Research Laboratories, Inc.</td>
			<td>65020F</td>
			<td>To disinfect MCA at the end of a testing session.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dry-erase markers and board</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To add experimental info to the beginning of video footage.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Map pins</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Optional, for mechanical probes. Use sandpaper to blunt sharp points before use. Can be used in place of 3D-printed parts.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paper towels</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To clean/disinfect MCA.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SCIGRIP Weld-On #3 Acrylic Cement</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For assembling acrylic sheets into chambers and affixing hinges. https://www.tapplastics.com/product/repair_products/plastic_adhesives/weld_on_3_cement/131</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stopwatch</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To record escape latencies/dwell times in real-time or from recorded video.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Timer</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To ensure LED turn-on, barrier removal and test completion are timed consistently.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Video camera</td>
			<td>Various</td>
			<td>HDRCX405 Handycam Camcorder</td>
			<td>To record mouse behavior in the MCA device. Can be substituted with any consumer-grade video camera capable of 1080p resolution.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tripod</td>
			<td>Famall</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Any tripod that can hold the camera at bench height for recording MCA footage is acceptable.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mechanical conflict-avoidance assay to measure pain behavior in mice

Smerte består af både sensoriske (nociceptive) og affektive (ubehagelige) dimensioner. I prækliniske modeller er smerte traditionelt blevet vurderet ved hjælp af refleksive tests, der tillader slutninger vedrørende smertens nociceptive komponent, men giver lidt information om den affektive eller motiverende komponent i smerte. Udvikling af tests, der fanger disse komponenter af smerte, er derfor translationelt vigtige. Derfor er forskere nødt til at bruge ikke-refleksive adfærdsmæssige assays til at studere smerteopfattelse på dette niveau. Mekanisk konfliktundgåelse (MCA) er et etableret frivilligt ikke-refleksivt adfærdsassay til at studere motiverende reaktioner på en skadelig mekanisk stimulus i et 3-kammerparadigme. En ændring i en muss placeringspræference, når den står over for konkurrerende skadelige stimuli, bruges til at udlede den opfattede ubehagelighed ved stærkt lys versus taktil stimulering af poterne. Denne protokol skitserer en modificeret version af MCA-analysen, som smerteforskere kan bruge til at forstå affektive-motiverende reaktioner i en række musesmertermodeller. Selvom det ikke er specifikt beskrevet her, bruger vores eksempel MCA-data intraplantar complete Freunds adjuvans (CFA), sparet nerveskade (SNI) og en brud/ støbemodel som smertemodeller til at illustrere MCA-proceduren.

MCA-assayet er blevet brugt med succes med flere mekanisk forskellige musesmertemodeller. Figur 2 viser data, hvor det valgte resultatmål krydsede midtpunktet i kammer 2 (figur 2A). De data, der opnås ved at bruge halvvejspunktet versus flugt ind i kammer 3, er meget ens, ~ 40 s for halvvejs versus ~ 45 s for kammer 3 flugt i den sparede nerveskade (SNI) model af neuropatisk smerte med 5 mm sondehøjde13.
I C...

Watch this Scientific Journal Video about Mechanical Conflict-Avoidance Assay to Measure Pain Behavior in Mice at JoVE.com

Mechanical Conflict-Avoidance Assay to Measure Pain Behavior in Mice

Det mekaniske konflikt-undgåelsesassay bruges som en ikke-refleksiv aflæsning af smertefølsomhed hos mus, som kan bruges til bedre at forstå affektive-motiverende reaktioner i en række musesmertemodeller.

Mekanisk konflikt-undgåelsesassay til måling af smerteadfærd hos mus

Pain comprises of both sensory (nociceptive) and affective (unpleasant) dimensions. In preclinical models, pain has traditionally been assessed using ...

Denne metode kan hjælpe med at besvare spørgsmål om dyrs effektive eller motiverende tilstand under forskellige smerteforhold. Det er et vigtigt skridt i retning af at forbedre oversættelsen af præklinisk forskning. Den største fordel ved denne teknik er, at den er relativt hurtig og nem at udføre, men alligevel vurderer komplekse motivationer, der påvirker smerterelateret adfærd.Begynd med at konstruere sidevægge, gulv og loft i kammer et ved hjælp af en uigennemsigtig hvid tre millimeter tyk akryl. Til den forreste væg skal du bruge en klar tre millimeter tyk akryl. Fastgør låget på kammer et med et hængsel, så mus let kan placeres i og hentes fra kammeret.Fastgør derefter selvklæbende lysemitterende diodetape til lågets indre overflade for at give belysning på omkring 4.800 lux. Skub et uigennemsigtigt akrylark ind og ud af position for at lukke kammer et fra resten af MCA-enheden. Dernæst konstruere et 270 millimeter langt uoplyst kammer to, MCA-testkammeret, ved hjælp af gennemskinnelig mørkerød akryl på alle sider med et hængslet låg på toppen.Placer derefter et 13 x 31 gitter med to millimeter huller på gulvet i kammeret, hvorigennem en række stumpe sonder med 0,5 millimeter diameter spidser kan stikke ud. Juster sondernes højde ved at placere yderligere akrylplader under sondens byggeplade. Brug denne fremgangsmåde til at konfigurere enheden med nul-, to- og fem millimeter sondehøjder.Som et alternativ til afstumpede kortstifter eller lignende materialer kan du bruge 3D-printerfilerne til at udskrive gulvet i kammer to og sondepladen med et vaskbart og biokompatibelt materiale såsom nylon 12-plast. Til sidst konstrueres et mørkt kammer tre ved hjælp af gennemsigtig mørkerød akryl på alle sider med et hængslet låg svarende til kammer et og to. Placer det i den modsatte ende af kammer et for at tjene som et mørkt flugtområde fra de mekaniske sonder i kammer to.En dag før planlægningen af baseline-testen skal musene akklimatiseres til MCA-enheden i 5 til 15 minutter med deres burkammerater for at lette social udforskning af hele enheden. Sørg for, at lysdioderne i kammer et er slukket, barrieren mellem kammer et og to holdes åben, og sonderne stikker ikke ud gennem gulvet i kammer to. Opsæt derefter et videokamera, der er i stand til at optage 1080 pixel optagelser på et stativ med en sidevendt visning af hele MCA-enheden.Juster synsfeltet, så MCA'en udfylder det optagede billede. Når optagelsen begynder, skal du holde et håndholdt tørt slettebræt i kameraets feltvisning for at mærke starten af videoen med identificerende oplysninger om dyrets testkørsel. I den første kørsel skal du indstille sondehøjden til nul og overføre musen, der skal testes, fra sit hjemmebur til kammer et med barrieredøren på plads.Start en timer, der er synlig i de optagede optagelser. Efter 10 sekunder skal du tænde for kammerets ene lysdioder. Når musen har været i det oplyste kammer i 20 sekunder, skal du trække barrieren mellem kammer et og to tilbage.Overhold dyret i to minutter og mål ventetider eller opholdstider med et stopur, mens testen pågår. Registrer latenstiden til den første indgang til kammer to, latenstid til at krydse mere end halvvejs over kammer to, den samlede opholdstid i kammer to, latenstiden for at nå kammer tre og den samlede opholdstid i hvert kammer inden for to minutter, og konverter dem til proportioner. Når testen er afsluttet, skal du returnere musen til sit hjemmebur.Rengør MCA-kamrene med 70% ethanol, og lad det tørre helt. Efter at have kørt alle mus i kohorten med sondehøjden indstillet til nul, skal du indsætte et tre millimeter ark akryl under den mekaniske sondebundplade og gentage kørslen med en sondehøjde på to millimeter. Efter at have kørt alle mus med sondehøjden indstillet til to millimeter, skal du indsætte et andet tre millimeter ark akryl under sondens byggeplade og gentage kørslen med en sondehøjde på fem millimeter.Udfør en slutrengøring med et desinfektionsmiddel i slutningen af testsessionen. I den komplette Freunds adjuvansinducerede inflammatoriske smertemodel ændrer en saltvandsinjektion ikke flugtens latenstid sammenlignet med baseline. Mus injiceret med adjuvansen viste en signifikant stigning i flugt latenstid fire dage efter injektion, men kun når sondehøjden blev hævet til fem millimeter.Denne øgede latenstid blev ikke set hos mus, der modtog carprofen 90 minutter før testens begyndelse. Den sparede nerveskademodel af neuropatisk smerte øgede signifikant latenstiden for at undslippe i forhold til baseline, når sondehøjden blev indstillet til fem millimeter. Denne stigning blev forhindret ved administration af det opioide smertestillende middel buprenorphin 90 minutter før testning.Øget flugt latenstid blev også observeret hos mus, der ikke gennemgik en baseline runde af MCA-test før nerveskade. Den øgede flugt latenstid hos sparede nerveskademus på fem millimeter blev forhindret af gabapentin administreret 90 minutter før testning. I brud- eller støbemodellen steg latenstiden for at undslippe fra kammer et proportionalt med sondehøjden før skade.Efter skaden forblev latenstiden uændret på nul millimeter, men steg signifikant ved to millimeter og fem millimeter sondehøjde for mænd og fem millimeter sondehøjde for kvinder sammenlignet med baseline. Den vigtigste ting at huske, når du forsøger denne procedure, er at sikre, at alle mus er vant til MCA-enheden, og at opretholde korrekt randomisering og blinding gennem hele undersøgelsen. Denne metode kan bruges sammen med andre mål for smertefølsomhed, herunder von Frey eller betinget stedpræference.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Methods to Assay Drosophila Behavior

Methods to Assay Drosophila Behavior

Fremgangsmåder til assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular ...

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

A Single-fly Assay til fourageringsadfærd i<em&gt; Drosophila</em

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video ...

Membrane Potential Dye Imaging of Ventromedial Hypothalamus Neurons From Adult Mice to Study Glucose Sensing

Membranpotentialet Dye Imaging af ventromedial Hypothalamus neuroner fra voksne mus til Study Glucose Sensing

Studies of neuronal activity are often performed using neurons from rodents less than 2 months of age due to the technical difficulties associated with ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

En enkel og billig metode til bestemmelse Kolde Følsomhed og tilpasning i mus

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Assays to Detect UV-reflecting Structures and Determine their Importance in Mate Preference using the Sailfin Molly Poecilia latipinna

Assays to Detect UV-reflecting Structures and Determine their Importance in Mate Preference using the Sailfin Molly Poecilia latipinna

Analyser til Detect UV-reflekterende strukturer og bestemme deres betydning i Mate Preference bruge Sailfin Molly<em&gt; Poecilia latipinna</em

Many organisms use cues and signals beyond human sensitivity during social interactions. It is important to take into account how organisms perceive their ...

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

En simpel måde at måle Ændringer i Reward-søger Behavior Brug<em&gt; Drosophila melanogaster</em

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We ...

Assay to Measure Nucleocytoplasmic Transport in Real Time within Motor Neuron-like NSC-34 Cells

Analyse til måling af nukleocytoplasmisk transport i realtid inden for motor neuronlignende NSC-34 celler

Nucleocytoplasmic transport refers to the import and export of large molecules from the cell nucleus. Recently, a number of studies have shown a ...

High-throughput Analysis of Locomotor Behavior in the Drosophila Island Assay

High-throughput Analysis of Locomotor Behavior in the Drosophila Island Assay

Høj overførselshastighed analyse af bevægeapparatet adfærd i Drosophila ø Assay

Advances in next-generation sequencing technologies contribute to the identification of (candidate) disease genes for movement disorders and other ...

Optogenetic Entrainment of Hippocampal Theta Oscillations in Behaving Mice

Optogenetic medrivning af hippocampus Theta svingninger i opfører sig mus

Extensive data on relationships of neural network oscillations to behavior and organization of neuronal discharge across brain regions call for new tools ...