Name: mechanical conflict-avoidance assay to measure pain behavior in mice
Uploaded: 2022-02-18T14:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mechanical Conflict-Avoidance Assay to Measure Pain Behavior in Mice at JoVE.com

GM wordt ondersteund door een NDSEG Graduate Fellowship. VLT wordt ondersteund door NIH NIGMS grant #GM137906 en de Rita Allen Foundation. AJS wordt ondersteund door subsidies van het Ministerie van Defensie W81XWH-20-1-0277, W81XWH-21-1-0197 en de Rita Allen Foundation. We zijn Dr. Alexxai Kravitz van de Washington University School of Medicine dankbaar voor het ontwerpen en vrij beschikbaar stellen van de 3D-printerbestanden voor de kamer 2-vloer en sondeplaat.

Alle experimenten met het gebruik van muizen en de daarin gevolgde procedures werden goedgekeurd door de Institutional Animal Care and Use Committees van MD Anderson Cancer Center en Stanford University, in strikte overeenstemming met de National Institutes of Health's Guide for the Care and Use of Laboratory Animals.
1. MCA-constructie
<ol><li>Constructiekamer 1 met de volgende afmetingen: 125 mm x 125 mm x 125 mm (breedte x diepte x hoogte) van ondoorzichtig wit 3...

<ol>
	<li>Hargreaves, K., Dubner, R., Brown, F., Flores, C., Joris, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+and+sensitive+method+for+measuring+thermal+nociception+in+cutaneous+hyperalgesia.">A new and sensitive method for measuring thermal nociception in cutaneous hyperalgesia.</a> Pain. 32 (1), 77-88 (1988).</li><li>Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assessment+of+tactile+allodynia+in+the+rat+paw.">Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw.</a> Journal of Neuroscience Methods. 53 (1), 55-63 (1994).</li><li>Sheahan, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+and+nerve+injury+minimally+affect+mouse+voluntary+behaviors+proposed+as+indicators+of+pain.">Inflammation and nerve injury minimally affect mouse voluntary behaviors proposed as indicators of pain.</a> Neurobiology of Pain. 2, 1-12 (2017).</li><li>Wodarski, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-centre+replication+of+suppressed+burrowing+behaviour+as+an+ethologically+relevant+pain+outcome+measure+in+the+rat:+a+prospective+multicentre+study.">Cross-centre replication of suppressed burrowing behaviour as an ethologically relevant pain outcome measure in the rat: a prospective multicentre study.</a> Pain. 157 (10), 2350-2365 (2016).</li><li>King, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unmasking+the+tonic-aversive+state+in+neuropathic+pain.">Unmasking the tonic-aversive state in neuropathic pain.</a> Nature Neuroscience. 12 (11), 1364-1366 (2009).</li><li>Harte, S. E., Meyers, J. B., Donahue, R. R., Taylor, B. K., Morrow, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+Conflict+System:+A+Novel+Operant+Method+for+the+Assessment+of+Nociceptive+Behavior.">Mechanical Conflict System: A Novel Operant Method for the Assessment of Nociceptive Behavior.</a> PLoS One. 11 (2), 0150164 (2016).</li><li>Pahng, A. R., Edwards, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+Pain+Avoidance-Like+Behavior+in+Drug-Dependent+Rats.">Measuring Pain Avoidance-Like Behavior in Drug-Dependent Rats.</a> Current Protocols in Neuroscience. 85 (1), 53 (2018).</li><li>Odem, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sham+surgeries+for+central+and+peripheral+neural+injuries+persistently+enhance+pain-avoidance+behavior+as+revealed+by+an+operant+conflict+test.">Sham surgeries for central and peripheral neural injuries persistently enhance pain-avoidance behavior as revealed by an operant conflict test.</a> Pain. 160 (11), 2440-2455 (2019).</li><li>LaBuda, C. J., Fuchs, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+behavioral+test+paradigm+to+measure+the+aversive+quality+of+inflammatory+and+neuropathic+pain+in+rats.">A behavioral test paradigm to measure the aversive quality of inflammatory and neuropathic pain in rats.</a> Experimental Neurology. 163 (2), 490-494 (2000).</li><li>LaBuda, C. J., Fuchs, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphine+and+gabapentin+decrease+mechanical+hyperalgesia+and+escape/avoidance+behavior+in+a+rat+model+of+neuropathic+pain.">Morphine and gabapentin decrease mechanical hyperalgesia and escape/avoidance behavior in a rat model of neuropathic pain.</a> Neuroscience Letters. 290 (2), 137-140 (2000).</li><li>Vichaya, E. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motivational+changes+that+develop+in+a+mouse+model+of+inflammation-induced+depression+are+independent+of+indoleamine+2,3+dioxygenase.">Motivational changes that develop in a mouse model of inflammation-induced depression are independent of indoleamine 2,3 dioxygenase.</a> Neuropsychopharmacology. 44 (2), 364-371 (2019).</li><li>Hasco&#235;t, M., Bourin, M., Nic Dhonnchadha, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mouse+light-dark+paradigm:+a+review.">The mouse light-dark paradigm: a review.</a> Progress in Neuropsychopharmacology &amp; Biological Psychiatry. 25 (1), 141-166 (2001).</li><li>Shepherd, A. J., Mohapatra, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+validation+of+voluntary+gait+and+mechanical+sensitivity+assays+associated+with+inflammatory+and+neuropathic+pain+in+mice.">Pharmacological validation of voluntary gait and mechanical sensitivity assays associated with inflammatory and neuropathic pain in mice.</a> Neuropharmacology. 130, 18-29 (2018).</li><li>Huck, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+Contribution+of+Myeloid-Lineage+TLR4+to+the+Transition+to+Chronic+Pain:+A+Focus+on+Sex+Differences.">Temporal Contribution of Myeloid-Lineage TLR4 to the Transition to Chronic Pain: A Focus on Sex Differences.</a> Journal of Neuroscience. 41 (19), 4349-4365 (2021).</li><li>Pitzer, C., La Porta, C., Treede, R. D., Tappe-Theodor, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+and+neuropathic+pain+conditions+do+not+primarily+evoke+anxiety-like+behaviours+in+C57BL/6+mice.">Inflammatory and neuropathic pain conditions do not primarily evoke anxiety-like behaviours in C57BL/6 mice.</a> European Journal of Pain. 23 (2), 285-306 (2019).</li><li>Sieberg, C. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuropathic+pain+drives+anxiety+behavior+in+mice,+results+consistent+with+anxiety+levels+in+diabetic+neuropathy+patients.">Neuropathic pain drives anxiety behavior in mice, results consistent with anxiety levels in diabetic neuropathy patients.</a> Pain Reports. 3 (3), 651 (2018).</li><li>Meuwissen, K. P. V., van Beek, M., Joosten, E. A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Burst+and+Tonic+Spinal+Cord+Stimulation+in+the+Mechanical+Conflict-Avoidance+System:+Cognitive-Motivational+Aspects.">Burst and Tonic Spinal Cord Stimulation in the Mechanical Conflict-Avoidance System: Cognitive-Motivational Aspects.</a> Neuromodulation. 23 (5), 605-612 (2020).</li></ol>

Zoals met alle gedragstests, is een goede behandeling, randomisatie en blindering voor de behandeling van dieren overal essentieel. Gezien de multifactoriële input in complex gedrag en besluitvorming, is het noodzakelijk dat dieren zo consistent mogelijk worden behandeld, gewenning en getest, terwijl de nood wordt geminimaliseerd. Er moet ook voor worden gezorgd dat de timing van de muisplaatsing in kamer 1 wordt gereproduceerd, de LED-verlichting wordt ingeschakeld en de barrière wordt verwijderd, omdat verschillen hi...

Pijn is een complexe ervaring met zintuiglijke en affectieve componenten. Een verlaging van de drempel van pijnperceptie en overgevoeligheid voor thermische en/of mechanische stimuli zijn belangrijke kenmerken van deze ervaring, die stimulus-opgeroepen pijngedragstests kunnen vastleggen (zoals Hargreaves' test van warmtegevoeligheid en de von Frey-test van mechanische gevoeligheid)1,2. Hoewel dergelijke tests robuuste en reproduceerbare resultaten geven, worden ze beperkt door hun afhankelijkheid van reflexieve terugtrekking uit een waargenomen schadelijke stimulus. Dit heeft een voortdurende afhankelijkheid van pijnonderzoek op deze tests alleen in twijfel getrokken. Daartoe onderzoeken pijnonderzoekers al enkele jaren alternatieve / complementaire gedragstests voor gebruik in knaagdierpijnmodellen in een poging om meer van de affectieve en / of motiverende componenten van pijn vast te leggen. Deze niet-opgeroepen, vrijwillige of niet-reflexieve maatregelen (bijv. wielrennen, graafactiviteit, geconditioneerde plaatsvoorkeur 3,4,5) worden geïmplementeerd in een poging om de vertaalbaarheid van preklinisch pijnonderzoek te verbeteren.
De mechanische conflictvermijdingstest (MCA) werd oorspronkelijk beschreven door Harte et al. in 20166, wordt voornamelijk gebruikt bij ratten 7,8 en vertegenwoordigt een wijziging van een eerdere benadering - het plaatsvlucht-vermijdingsparadigma. Bij deze benadering wordt een schadelijke stimulus van de achterpoot uitgevoerd in een anders wenselijke (donkere) kamer om doelgericht gedrag van het dier te stimuleren om aan een dergelijke stimulatie te ontsnappen / vermijden 9,10. In plaats van te vertrouwen op handmatige schadelijke stimulatie van de achterpoot door een waarnemer, dwingt de MCA-test muizen om te onderhandelen over een potentieel schadelijke stimulus om te ontsnappen aan een aversieve omgeving en de donkere kamer te bereiken. Het conflict /vermijding dat de test zijn naam geeft, komt voort uit deze twee concurrerende motivaties: ontsnap aan fel verlichte gebieden en vermijd schadelijke stimulatie van de poten. De MCA-test deelt ook kenmerken met geconditioneerde plaatsvoorkeurtests, waarbij de combinatie van pijnverlichting met omgevingssignalen veranderingen in gedrag veroorzaakt die een voorkeur weerspiegelen voor de pijnstillende / lonende context11.
Fundamenteel gesproken delen al deze testen een vergelijkbare benadering: het gebruik van een verschuiving in de voorkeur van een dier voor de ene aversieve omgeving boven de andere als een indicator van hun affectieve / motiverende toestand. De MCA-test is een 3-kamerparadigma bestaande uit een helder verlichte kamer gevolgd door een donkere middenkamer met in hoogte verstelbare sondes en een donkere derde kamer zonder aversieve stimuli. Een ongedeerde muis is meestal gemotiveerd om te ontsnappen naar een verduisterde kamer, gezien de aangeboren afkeer van knaagdieren voor fel licht12. In dit voorbeeld overwint de natuurlijke motivatie om te ontsnappen aan een fel verlichte omgeving de desinclinatie om achterpootstimulatie (de instelbare hoogtesondes) tegen te komen, die uitsluitend in de verduisterde omgeving voorkomt. Daarentegen kan een muis die pijn ervaart (bijvoorbeeld als gevolg van ontsteking of neuropathie) ervoor kiezen om meer tijd door te brengen in de helder verlichte omgeving, omdat er motivatie is om de onaangename tactiele ervaring van de mechanische sondes te vermijden in de setting van voortdurende tactiele overgevoeligheid.
In dit artikel wordt een aangepaste versie van de MCA-test beschreven. We hebben de oorspronkelijke methode (die werd uitgevoerd bij ratten6) aangepast voor gebruik bij muizen. We hebben ook het aantal geteste sondehoogtes teruggebracht van zes naar drie (0, 2 en 5 mm boven vloerhoogte) om de gegevensverzameling te stroomlijnen. Deze aanpak is getest in meerdere pijnmodellen en gevalideerd met bekende analgetica, wat aangeeft dat pijnovergevoeligheid en / of de bijbehorende affectieve en motiverende veranderingen deze gedragsveranderingen veroorzaken. Deze aanpak is relatief snel uit te voeren en aanpasbaar in vergelijking met andere niet-reflexieve maatregelen, die vele dagen van gewenning en training kunnen vergen 1,2. In combinatie met andere pijnmetingen kan MCA waardevolle inzichten genereren in de affectieve en motiverende aspecten van pijn.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>32.8ft 3000K-6000K Tunable White LED Strip Lights, Dimmable Super Bright LED Tape Lights with 600 SMD 2835 LEDs</td>
			<td>Lepro</td>
			<td>SKU: 410087-DWW-US</td>
			<td>For lighting chamber 1. https://www.lepro.com/32ft-dimmable-tunable-white-led-strip-lights.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3D printed &#39;spike bed&#39; and &#39;chamber 2 floor&#39;</td>
			<td>Shapeways</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Optional, for mechanical probes as an alternative to blunted map pins.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To clean MCA between mice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acryl-Hinge 2</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>N/A</td>
			<td>for attaching chamber lids to rear walls. https://www.tapplastics.com/product/plastics/handles_hinges_latches/acryl_hinge_2/122</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemcast Cast Acrylic Sheet, Clear</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>N/A</td>
			<td>3mm thick. For front wall of chamber 1. https://www.tapplastics.com/product/plastics/cut_to_size_plastic/acrylic_sheets_cast_clear/510</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemcast Cast Transparent Colored Acrylic, Transparent Dark Red - 50%</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>N/A</td>
			<td>3mm thick. 50% light transmission. For walls and lids of chambers 2 and 3. https://www.tapplastics.com/product/plastics/cut_to_size_plastic/acrylic_sheets_transparent_colors/519</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemcast Translucent &#38; Opaque Colored Cast Acrylic, Sign Opaque White - 0.1%</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>N/A</td>
			<td>3mm thick. For side walls and lid of chamber 1. https://www.tapplastics.com/product/plastics/cut_to_size_plastic/acrylic_sheets_color/341</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disinfectant (e.g. Quatricide)</td>
			<td>Pharmacal Research Laboratories, Inc.</td>
			<td>65020F</td>
			<td>To disinfect MCA at the end of a testing session.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dry-erase markers and board</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To add experimental info to the beginning of video footage.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Map pins</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Optional, for mechanical probes. Use sandpaper to blunt sharp points before use. Can be used in place of 3D-printed parts.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paper towels</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To clean/disinfect MCA.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SCIGRIP Weld-On #3 Acrylic Cement</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For assembling acrylic sheets into chambers and affixing hinges. https://www.tapplastics.com/product/repair_products/plastic_adhesives/weld_on_3_cement/131</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stopwatch</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To record escape latencies/dwell times in real-time or from recorded video.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Timer</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To ensure LED turn-on, barrier removal and test completion are timed consistently.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Video camera</td>
			<td>Various</td>
			<td>HDRCX405 Handycam Camcorder</td>
			<td>To record mouse behavior in the MCA device. Can be substituted with any consumer-grade video camera capable of 1080p resolution.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tripod</td>
			<td>Famall</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Any tripod that can hold the camera at bench height for recording MCA footage is acceptable.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mechanical conflict-avoidance assay to measure pain behavior in mice

Pijn bestaat uit zowel zintuiglijke (nociceptieve) als affectieve (onaangename) dimensies. In preklinische modellen wordt pijn traditioneel beoordeeld met behulp van reflexieve tests die gevolgtrekkingen mogelijk maken met betrekking tot de nociceptieve component van pijn, maar weinig informatie geven over de affectieve of motiverende component van pijn. Het ontwikkelen van tests die deze componenten van pijn vastleggen, zijn daarom translationeel belangrijk. Daarom moeten onderzoekers niet-reflexieve gedragstests gebruiken om pijnperceptie op dat niveau te bestuderen. Mechanische conflictvermijding (MCA) is een gevestigde vrijwillige niet-reflexieve gedragstest, voor het bestuderen van motiverende reacties op een schadelijke mechanische stimulus in een 3-kamerparadigma. Een verandering in de locatievoorkeur van een muis, wanneer geconfronteerd met concurrerende schadelijke stimuli, wordt gebruikt om de waargenomen onaangenaamheid van fel licht versus tactiele stimulatie van de poten af te leiden. Dit protocol schetst een aangepaste versie van de MCA-test die pijnonderzoekers kunnen gebruiken om affectief-motiverende reacties in verschillende muispijnmodellen te begrijpen. Hoewel hier niet specifiek beschreven, gebruiken onze voorbeeld MCA-gegevens het intraplantaire complete Freund's adjuvans (CFA), gespaard zenuwletsel (SNI) en een fractuur / gietmodel als pijnmodellen om de MCA-procedure te illustreren.

De MCA-test is met succes gebruikt met verschillende mechanistisch verschillende muispijnmodellen. Figuur 2 toont gegevens waarbij de uitkomstmaat van keuze het middelpunt van kamer 2 overschreed (figuur 2A). De gegevens verkregen door het gebruik van het halverwege punt versus ontsnapping in kamer 3 zijn zeer vergelijkbaar, ~ 40 s voor halverwege versus ~ 45 s voor kamer 3 ontsnapping in het gespaarde zenuwletsel (SNI) model van neuropathische pijn met 5 mm son...

Watch this Scientific Journal Video about Mechanical Conflict-Avoidance Assay to Measure Pain Behavior in Mice at JoVE.com

Mechanical Conflict-Avoidance Assay to Measure Pain Behavior in Mice

De mechanische conflictvermijdingstest wordt gebruikt als een niet-reflexieve uitlezing van pijngevoeligheid bij muizen die kan worden gebruikt om affectieve-motiverende reacties in verschillende muispijnmodellen beter te begrijpen.

Mechanische conflictvermijdingstest om pijngedrag bij muizen te meten

Pain comprises of both sensory (nociceptive) and affective (unpleasant) dimensions. In preclinical models, pain has traditionally been assessed using ...

Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van vragen over de effectieve of motiverende toestand van dieren onder verschillende pijnomstandigheden. Het is een belangrijke stap in het verbeteren van de vertaling van preklinisch onderzoek. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het relatief snel en gemakkelijk uit te voeren is, maar toch complexe motivaties beoordeelt die pijngerelateerd gedrag beïnvloeden.Begin met het construeren van de zijwanden, vloer en plafond van kamer één met behulp van een ondoorzichtig wit acrylaat van drie millimeter dik. Gebruik voor de voorgevel een helder acrylaat van drie millimeter dik. Bevestig het deksel van kamer één met een scharnier, zodat muizen gemakkelijk in de kamer kunnen worden geplaatst en uit de kamer kunnen worden gehaald.Bevestig vervolgens zelfklevende lichtgevende diodetape aan het binnenoppervlak van het deksel voor een verlichting van ongeveer 4.800 lux. Schuif een ondoorzichtige acrylplaat in en uit positie om kamer één van de rest van het MCA-apparaat te sluiten. Construeer vervolgens een 270 millimeter lange onverlichte kamer twee, de MCA-testkamer, met aan alle zijden doorschijnend donkerrood acryl met een scharnierend deksel erop.Plaats vervolgens een raster van 13 x 31 met gaten van twee millimeter op de vloer van de kamer waardoor een reeks stompe sondes met tips met een diameter van 0,5 millimeter kunnen uitsteken. Pas de hoogte van de sondes aan door extra acrylplaten onder de bodemplaat van de sonde te plaatsen. Configureer met deze aanpak het apparaat met nul-, twee- en vijf millimeter tasterhoogten.Als alternatief voor stompe kaartpennen of soortgelijke materialen, gebruikt u de 3D-printerbestanden om de vloer van kamer twee en de sondeplaat te printen met een wasbaar en biocompatibel materiaal zoals nylon 12-plastic. Bouw ten slotte een donkere kamer drie met behulp van doorschijnend donkerrood acryl aan alle zijden met een scharnierend deksel vergelijkbaar met kamer één en twee. Plaats het aan de andere kant van kamer één om te dienen als een verduisterd ontsnappingsgebied van de mechanische sondes in kamer twee.Een dag voordat u de basislijntest plant, acclimatiseert u de muizen gedurende 5 tot 15 minuten aan de MCA-eenheid met hun kooigenoten om sociale verkenning van het hele apparaat te vergemakkelijken. Zorg ervoor dat de LED's in kamer één zijn uitgeschakeld, de barrière tussen kamer één en twee open wordt gehouden en de sondes niet door de vloer van kamer twee steken. Stel vervolgens een videocamera in die beelden van 1080 pixels kan opnemen op een statief met een zijaanzicht van het hele MCA-apparaat.Pas het gezichtsveld zodanig aan dat de MCA het opgenomen beeld vult. Zodra de opname begint, houdt u een handheld droog wisbord in het gezichtsveld van de camera om het begin van de video te labelen met identificerende informatie over de testrun van het dier. Stel voor de eerste run de sondehoogte in op nul en breng de te testen muis over van zijn thuiskooi naar kamer één met de barrièredeur op zijn plaats.Start een timer die zichtbaar is in de opgenomen beelden. Schakel na 10 seconden de leds van de kamer in. Nadat de muis 20 seconden in de verlichte kamer heeft gestaan, trekt u de barrière tussen kamer één en twee terug.Observeer het dier gedurende twee minuten en meet latenties of verblijftijden met een stopwatch terwijl de test aan de gang is. Registreer de latentie tot de eerste ingang tot kamer twee, latentie tot meer dan halverwege kamer twee, de totale verblijftijd in kamer twee, de latentie om kamer drie te bereiken en de totale verblijftijd in elke kamer binnen twee minuten en converteer ze in verhoudingen. Zodra het testen is voltooid, brengt u de muis terug naar zijn thuiskooi.Reinig de MCA-kamers met 70% ethanol en laat deze volledig drogen. Nadat u alle muizen in het cohort hebt uitgevoerd met de sondehoogte ingesteld op nul, plaatst u een acrylplaat van drie millimeter onder de mechanische sondebasisplaat en herhaalt u de run met een sondehoogte van twee millimeter. Nadat u alle muizen hebt uitgevoerd met de sondehoogte ingesteld op twee millimeter, plaatst u nog een vel acryl van drie millimeter onder de bodemplaat van de sonde en herhaalt u de run met een sondehoogte van vijf millimeter.Voer aan het einde van de testsessie een laatste reiniging uit met een ontsmettingsmiddel. In het complete Freund's adjuvant-geïnduceerde inflammatoire pijnmodel verandert een zoutoplossinginjectie de ontsnappingslatentie niet in vergelijking met baseline. Muizen geïnjecteerd met het adjuvans vertoonden een significante toename van de ontsnappingslatentie vier dagen na injectie, maar alleen wanneer de sondehoogte werd verhoogd tot vijf millimeter.Deze verhoogde latentie werd niet gezien bij muizen die 90 minuten voor het begin van de test carprofen kregen. Het gespaarde zenuwletselmodel van neuropathische pijn verhoogde de latentie om te ontsnappen aanzienlijk ten opzichte van de uitgangswaarde wanneer de sondehoogte werd ingesteld op vijf millimeter. Deze toename werd voorkomen door toediening van het opioïde analgetische middel buprenorfine 90 minuten voor het testen.Verhoogde ontsnappingslatentie werd ook waargenomen bij muizen die geen baselineronde van MCA-testen ondergingen vóór zenuwletsel. De verhoogde ontsnappingslatentie bij gespaarde zenuwletselmuizen op vijf millimeter werd voorkomen door gabapentine dat 90 minuten voor het testen werd toegediend. In het fractuur- of gietmodel nam de latentie om uit kamer één te ontsnappen evenredig toe met de sondehoogte vóór het letsel.Na het letsel bleef de latentie onveranderd op nul millimeter, maar nam aanzienlijk toe bij de sondehoogte van twee millimeter en vijf millimeter voor mannen en de sondehoogte van vijf millimeter voor vrouwen in vergelijking met de basislijn. Het belangrijkste om te onthouden bij het proberen van deze procedure is om ervoor te zorgen dat alle muizen gewend zijn aan het MCA-apparaat en om de juiste randomisatie en verblinding gedurende het onderzoek te behouden. Deze methode kan worden gebruikt naast andere metingen van pijngevoeligheid, waaronder von Frey of voorwaardelijke plaatsvoorkeur.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Methods to Assay Drosophila Behavior

Methods to Assay Drosophila Behavior

Methoden om Assay Drosophila Gedrag

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular ...

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

A Single-fly test voor foerageergedrag in<em&gt; Drosophila</em

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video ...

Membrane Potential Dye Imaging of Ventromedial Hypothalamus Neurons From Adult Mice to Study Glucose Sensing

Membraanpotentiaal Dye beeldvorming van ventromedial hypothalamus neuronen van volwassen muizen om te studeren Glucose Sensing

Studies of neuronal activity are often performed using neurons from rodents less than 2 months of age due to the technical difficulties associated with ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

Een eenvoudige en goedkope methode voor het bepalen Koude Gevoeligheid en aanpassing in Muizen

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Assays to Detect UV-reflecting Structures and Determine their Importance in Mate Preference using the Sailfin Molly Poecilia latipinna

Assays to Detect UV-reflecting Structures and Determine their Importance in Mate Preference using the Sailfin Molly Poecilia latipinna

Testen om UV-reflecterende structuren detecteren en bepalen hun belang in Mate voorkeur met behulp van de Sailfin Molly<em&gt; Poecilia latipinna</em

Many organisms use cues and signals beyond human sensitivity during social interactions. It is important to take into account how organisms perceive their ...

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

Een eenvoudige manier om Veranderingen Meet in Reward-zoekend gedrag Met behulp<em&gt; Drosophila melanogaster</em

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We ...

Assay to Measure Nucleocytoplasmic Transport in Real Time within Motor Neuron-like NSC-34 Cells

Assay voor het meten van nucleocytoplasmisch transport in realtime binnen motor neuronachtige NSC-34 cellen

Nucleocytoplasmic transport refers to the import and export of large molecules from the cell nucleus. Recently, a number of studies have shown a ...

High-throughput Analysis of Locomotor Behavior in the Drosophila Island Assay

High-throughput Analysis of Locomotor Behavior in the Drosophila Island Assay

High-throughput analyse van Locomotor gedrag in de Drosophila eiland Assay

Advances in next-generation sequencing technologies contribute to the identification of (candidate) disease genes for movement disorders and other ...

Optogenetic Entrainment of Hippocampal Theta Oscillations in Behaving Mice

Optogenetic meevoeren van Hippocampal Theta oscillaties in het gedrag van muizen

Extensive data on relationships of neural network oscillations to behavior and organization of neuronal discharge across brain regions call for new tools ...